CAPITULO 5 Funcion de las proteinas Hay hesramientas disponibles on-tne, paraelauto-estudio aue le ayudarén a practicarlo que han aprendido y que rforzarén Jos conceptos del capitulo, Vaya a weww.mnacmilanlearing.com/LehningerBiochemistry7e. 5.1. Unién reversible de una proteins a un ligando: proteinas de unién a oxigeno 158 5.2. Interacciones complementarias entre proteinas y ligandos: el sistema inne y las lnmunoglobulinas 174 5.3. Interacciones proteicas moduladas por energia ‘quimica:actina, miosina y motores molecuares 179 as protetnas funcionan mediante interaccién con otras moléculas. El conocimiento de la estructura ridimensional es un paso importante para poder entender c6mo funciona una proteina por lo que la bio- Jogia estructural moderna incluye a menudo el conoci- miento de las irteracciones moleculares. Sin embargo, Ja estructura bidimensional estética que se rwestra, sobre una pégina tiene poco que ver con la realidad. Las protefnas son moléculas dinamicas Estas interacciones se ven afectadas por cambios, a veces espectaculares ¥ otras sutiles, de la conformacion proteica que pueden desencadenar importantes efectos fisiolégicos. En este capitulo y en el préximo estudiaremos cémo interaccio- nan las proteinas con otras moléculas y eémno se rela- cionan estas inveracciones con la estructura dinémica de las proteinas. Aqui dividimos estas interacciones en dos tipos. En algunas interacciones el resultado es una reaccién que altera la configaracién @ composicién quimnica de la molécula con la que interactia, un caso en el que la proteina actilt como catalizador de una reaccién, 0 enaima; los enwimas y sus reacciones se discuten en el Capitulo 6, Bn otras interacciones, no ‘cambia ni la configuracién nila composicién de la molé- ‘cula interactuante; tales interacciones se discuten en este capitulo. Puede parecer contradictorio que la interaceién de una protefna con otra molécula pueda ser importante si no altera a la molécula asociada. Sin embargo, interac- ones efimeras de este tipe son la base de procesos, {isiologicos complejo tales como el transporte de oxige- ro, a funci6n inmune y la contraccién muscular, temas ‘que se tratan aquf. Las proteinas que evan a cabo estos procesos ilustran los principios fundamentales de la funcién proteica, algunos de los cuales resultarén fami liares cel Capftulo 4: Las funciones de muchas protesnas implican la unién reversible de otras moléculas. Una molécula unida de manera reversible por una proteina se conoce con el nombre de ligatdo. Un ligando puede ser cualquier tipo de molécula, inciuidas otras proteinas. La naturaleza transitoria de ls inte racciones proteina-ligando es erttica para la vida, ya que permiten al organismo responder de manera répida y reversible al medio ambiente cambiante y a Jas circunstancias metabolicas. Un ligando se une a un lugar de la proteina Uamacio sitio de Mactén, que es complementaro a igan- do en tamaro, forma, carga earscterhidrofobico 0 hidroflico. Adem, in inveraccin es especie: la proveina puede discrminar entre las miles de molé- cus diferentes de su entomo y unr selectivamente slo una 0 unas yocas, Una proteina deverminada puede tener diferentes de fijacién para dife- rentes ligandos. Estas interacciones moleculares especificas son cruciales para mantener el alto. grado de orden de un sistema vivo. Esta discusin excluye la unin de agua, que puede interaccionar ‘ébilmente y de manera no especifica con diferen- tes partes de una proteina, Fn el Capitulo 6 conside- raremos el agua como un ligando especifco para ‘muchos enzimas) ‘Las protefnas son flexibles. Los cambios en su con- ormacién pueden eer suiles, reflejo de vibraciones moleculares y pequefos movimientos de los resi- duos de aminodcidos a lo largo de la proteina. De una protetna que se flexiona de este modo se dice a ‘veces que “respira”, Los cambios en la conformacién pueden ser también muy grandes, con segmentos ‘importantes de la estructura de la proteina despla- ‘ndose incluso varios nanémetros. Ciertos casnbios ‘especificos de la conformacion acostumbran a ser ‘esenciales para la funci6n proteica. ‘La unién de una protein con un ligando esté asocla- dda, a menudo, con wn cambio conformacional que hhace que el sitio de fijaciOn sea mas complement al ligando, lo que permite una unién més fuerte. La adaptacién estructural que se produce entre la pro- ‘teina y el ligando se llama encaje inducido. 157158 Fanci deta poteinas En una protefna con varias subunidades, un cambio de conformacién en una subunidad afecta a menudo ala conformacién de las otras subunidades. Las interacciones entre ligandos y proteinas pueden ser reguladas, habitualmente mediante interzcciones ‘especificas con uno o mds ligands adicionales. Estos ‘otros liganuios pueden provocar carubios conforma cionales que afecten a la union de! primer ligando, Los enaimas representan un caso especial en la fun- ion proteica. Los enimas unen y transforman quimica- mente otras moléculas. Las moléculas sobre las que actian los enzimas se lartan sustratos de la reaccién, cen hugar de ligandos, y el sitio de fijacién del ligando se ama sitio catalitico o sitio activo. Veremos como el tratamiento de los temas de este capitulo (unién, espe- cificidad y cambios de conformacién) continian en el Capitulo 6, con el elemento attacido de que las proteinas ‘ctuarin en transformaciones quimicas. 5.7 Uni6n reversible de una proteina a un ligando: proteinas de unién a oxigeno La micglobina y la hemoglobina son posiblemente las ‘dos proteinas mas estudiadas y mejor conocidas. Fue- ron las primeras de las que se determin6 su estructura tridimensional, y con estas dos moléculas se ilustran asi todos ls sspectas de uno de los procesos bioquimi- cos més importantes: b unin reversible de un ligando a tuna proteina. Este modelo clasico de la funciin proteica nos daré una gran cantidad de inforacién sobre como trabajan las proteinas. El oxigeno ouede unirse a un grupo prostético hemo, El oxigeno no es muy soluble en el agua (véase la Tabla 2.8) y no puede transportarse a los tejidos en cantidad suficiente por simple disolucion en el suero sanguineo, La dlifusién del oxigeno a través de los tejidos es también insuficiente a Jo largo de distancias superiores a unos pocos milimetros. La evolueién de animales multicsiula- Tes grandes dependio de la evolucién de proteinas que @ x FFIGURA 5-1 £1 grupe hemo. srupo here esd resent e a ri sobre, emagatina y en muchas oasprceras damades proteinas hemo o hemoproeinas El grupe here caste en un anil ogre complejo. potoortng 1 eal se une un tome de Her en Si estado leraso ("2 as porfrnas, de ls quel protopotn x 10 un wemes, coasiton on cu alos per! enidos por pues pudiesen transportar y almacenar oxigeno Sin embers, ninguna de las cadenas laterales de los aminocidos pro: teicos es adecuada para a unin reversible de molécuas de oxigeno. Este papel es desempefiado por cirtos metals de transiiin, entre ello el hieroy el cobre, que ‘tienen una fuerte tendencia @unir oxigeno. Los onganis- ‘mas muiticelulares explotan las propiedades de los meta- Jes, normalmente del hierr, para el transporte de oxige- no. Sin embargo, el hirro bre provoca la formacién de especies atamente reactivas del oxigen, tales como los radicales hidroxle, que pueden dafar el DNA v otras macromoléenias. Por lo tanto, el hierro utilizado en las ius esté presente en formas que lo secuestran, 10 hacen menos reactivo 0 las dos cOsas a la vez. En los organisms multiclulares,eopecialmente en aquélos en Jos que el hierro, en su calidad de transportador de ox dono, debe ser transportado alo largo de grandes distan- clas, e!hirro suele estar incorporado aun grupo prosié- tico unio a una proteina, lamado grupo hemo. (Recuer- de que en el Capttul 3 vimess que un grupo prostético es un compuesto asociada permanenternentea una proteina xy que contribuye a au funcin). Bl grupo hemo tiene una estructura de anillo org- nico complejo, a protoforpirina, a la que esté unio lun nico tomo de hierro en su estado ferroso (Fe) (Fig. 5-1). Bl domo de hier tiene seis enlaces de coordingcién, cuatro con stomos de nitrégeno que for- ‘man parte del sistema plano del anillo de porfirina y os perpendiculares @ Is porfirina. Los atomos de nitré- ‘geno coordinados (que tienen carécter de dadores de elecirones) ayudan a evitar la conversién del hierro hhemo al estado férrico (Fe). El hierro en estado Fe** une oxigeno de manera reversible, mientras que en el estaio Fe no une oxigeno. El grupo hemo se encuen- tra en muchas proteinas transportadoras de oxigeno, y también en algunas proteinas, como los itecromos, que participan en reacciones de oxidacin-reduveidn (tans ferencia de electrones) (Capitulo 18). ‘Las moléculas de hemo libres (hemo no unido a pro- teinas), dejan el Fe con dos enlaces de coordinacion “abies” La reaccion simulténea de una moléeala de O, cco das moléeulas de hemo libres (0 con dos Fe Hbres) © o rmetena, con susltucnes en una © mis de las posciones marcas camo X tb €) Se muesron dos represerciones dl giupo hem. El Aomo de hero dl srupo here pose scs erlces Ge coronacin: ‘to de alo unis! anit plano de x portinayaneus memo plan, 9 ( ovos dos pependiculares 3 este plara{Funte:() Heme extaido 4ePOBIDICCR, H Oehiet a J Mo! Bit 155-407, 0635.1 Uni everible de una proteina aun gando:potelnas de unin aaxigeno 159) stl de portine FIGURA 5-2 Vista lateral de! grupo emo. Esa perspectva musta es dos enlaces de cordewrién del Fe" perpendhuares assem dl srilo oortrina. Uno de ests dos enaces ests acypado gor un residue is, a vees Kamada Hs péxima, Hs ea mogobina, también don ‘rina Hi F8 (ora residvo en ance a, vesela Fig 5-3) ot sel tio de Fai dl xigeno. 05 cuatro enlaces de coorcnacn rs: tune estén uridon al istema de anil gofviac y se encuertan en svismo aro puede dar hugar a la conversin irreversible del Fe™ a ‘Fe’. En las proteinas que contienen hemo, esta reaccion ‘se evita secuestrando cada hemo en un lugar suficiente- ‘mente profundo dentro dela estructura proteica. As, el acceso a los dos enlaces de coordinacién abierins esta restringido, En las globinas uno de esos dos enlaces de coordinacién esta ocupado por el nitrgeno de la cadena lateral de un residuo His muy conservado conocido como ‘His préxima, El otto es el stio de fijacién del oxigeno nelecular (0) (Fig. 5-2). Las propiedades electrénicas > Comvencién dave: Las constantes de ecquilibrio se repre~ sentan mediante una K maydscula y las constantes de velocidad mediante una k mindscula. «€ La redistribucion dela primera parte de ls ecuscion 5.2 muestra que la relaciGn entre proteina unida y pro- teina libre es directamente proporcional a la concentra- cig de ligand libre: PL Py Cuando la concentracién de ligando es mucho mayor aque la concentracin de sitios de fjacién de ligando, Ia unin de ligando por parte de la proteina no afecta de ‘manera signifcativa ala concentracién de lgando libre KqlLd 63) (no unido), con lo que [L] permanece constante. Bsta situaciGn es aplicable en general ala mayoria de ligan- dos que se unen a las protefnas en las células y simplif- ca nuestra descripeién del equilibrio de unién, Podlemos ahora considerar la constante de equilibrio cen funcién de la fraccin,¥, de sitios de fjacion de ligan do de la protefna que estan ocupados por elligando: sitios de fiacién ocupados ___[PL1 ¥= "Silos de Gjacion ttales ~ TPL) + (Pp) Sustituyendo K,ILIP] por [PL] (wéase la ecuacién 5-3) y reordenando los términos tenemos: ASIP) _ lL Ad KALYP) + (PIL +1 a 1h) + 5 BI valor de K, se puede determinar a partir de una representacién de ¥ frente a la concentracién de ligan- do libre, {L] (Fig. 6-4a). Cualquler ecuacion de la forma x = w/'y+2) describe una hipérbole, por lo que ¥ resulta ser una funcién hiperbdlica de (LL fraccion de sitios de fijacién de ligando ocupados tiende a la saturacién de manera asintotica a medida que aumenta {L). La {L] a la que la mitad de los sitios de fjacién de ligando disponibles estén ocupados (es decir, ¥ = 0,5) corresponde a 1/ Ky Sin embargo, a veces es més frecuente ( intuitiva- mente més sencillo) considerar la constante de Y 5) 10) @ 1 unidades aeitrras) 0 Feo 5 o po,(kPa) FIGURA 5-4 Representaciones gifcas de ix unin de igando. Se reoreserta la proprcién de cetros de urién a ligando ocupaces, ¥ freee 39 concenraisn de igando lire. Arba cura ton hipdrbalas rectangles. (@) Cave hottie de ue 2 un ganda LL LJ nece ‘sip ocupar la rita de fos cents de unin a Hondo dtnibles esequvalntea1/K 0 Ke La cava tiene una asin erzetal en Y= 7 Yura aso verte (oo mostra) en (L1= 4/ XK, (6) Cana represen tatya del rin de onigeno as mogiobina. La presi prc dO; en e score la solu est epresad en pascal (Pa) oxi ‘se unefueriementea la iagsina con ura Pe des 0.26 KPa5.1 Us eesible de una protein aun igande: proeinas deuniénaexigeno 161 set beta a 1m ‘Avidina (clara de huevo) Biotina Receptor de insulina (humano) Insuina rai TInmunoglobulina AnU-VIN{ (hustana)* — gp4l (Proteina de superficie 4x 10°” ie! VIH-1) Proteina de unién a niawel(E. cols) Ni* 1107 Calrmosinlina (rata) cat ax10* | tneraconsecept-nand os eter ote DNA eectes de seers sai a 7 a woe we OF OT we 04 wr te, fein Koo om was slate as pat ofan eft to devon a vccne agahst HV inmunojobulns(acrbed ler nthe chapter re gh varath and Ke eprted here shouts not be cone Surat o al mnogo *Cammedsn nas tour being sas or calun.Thevluns Shown eect te highest: lowest tnt bing ses cbnerved i oe st of disociacién, K,, que es el recfproco de K, (Ks = UK) y que se expresa en unidades de concentracién molar (1). Kes la constante de equilibrio para la lberacién del ligando, Las ecuaciones cambian a: wu) TPL oo vey = Eee oD 1h) m+ oo y Cuando {Les igual a Kyla mitad de ls sitios de fjacion de ligand estan ocupados. Cuando [L)desciende por ebajo de Ki, cada vez hay menos proteina con ligando ‘unido, Para que un 90% de los sitios de faci de ligan do disponibles estén ocupads, [L] debe ser mueve veces mayor que Ky En la préctica, Kye wilca mucho més a menudo que AK, para expresar i afindad de una proteina por su igan- 4o. Observe que un valor mis bajo de Ky corresponde a ‘una nuayor afinided del igando por la proteira. Las opera- ele ba ent sun (Fort: tnd FFOB ID GA R Lise SSgion et al. 1 Mot Bol 28:51, 192 . ado: POB 1D TBD, MB ‘Shae Jal Chere 26717248, 1992)166 Funcin de as prtenas (eae sinidad Nae ata atesdad Estado de tari ® 7% 15 0, (Pa) FIGURA 5-12 Curva de unin sigmoides(cooperativ). Uns cura de unin sigmoidea puede contre como una cuna Nba que rea la rans de un esta de baa aiid oun estado deat afiod usin coopera, tl coma se manieste pur la carve de uni 5 maida, hace qu is hemogotina sea més serie a pequtas dere an en'sconcenvacién de O; ete ls tes y ls pumanes, lo que permite cue la hemogibina una oxigen en os pumones (donde lO, ‘esata libre en staid ode 0; eb) en los tejidos. Si la proteina uniese oxgeno con una afi- nidad suficlentemente bala para liberarlo en tos tes, no recogerfa demasiado oxigeno en los pulmones, La hemoglobina resuelve este problema mediante una transicién de un estado de baja afinidad (el estado T) a un estado de alta afinidad (e! estado R) a medida ‘que se le unen mas moléculas de 02. EI resultado es que la hemogiobina tiene una curva de unin a oxigeno ibrida, en forma de $ 0 curva sigmoidea (Fig. 5-12). Una protefna de una sola subunidad con un tnico sitio de fjacion de sustrato no puede tener una curva de uunién sigmoidea (ni siquiera si la union provocase un cambio conformacional) debido a que cada molécula de ligando se une independientemente y no podria afectar ala unién de otra moléeula. Por el contrario, la unién del , # las subunidades individuales de la hemogiobia puede alterar la afinidad para el O, de las subunidades adyacentes. La primera molécula de O, que interacciona con la desoxihemoglobina se une débilmente, debido a ‘que se une a una subunidad en el estado T. Sin embargo, esta unién conduce a unos cambios conformacionales que se comunican a las subunidades adyacentes, hacien- do més fécil la union de moléculas de Q, adicionales. En efecto, la transicion T — R se produce més ripidamente en la segunda subunidad una vez que el O, se ha unido la primera subunidad. La ultima molécula de 0, (a cuarta) que se une al hemo lo hace a una subunidad que -ya-esté en el estado Ry por tanto se une con una afini- dad mucho mayor que la de la primera molécula, Una proteina alostériea es aquélla en la cual la unin de un figando a un sitio afecta a las propiedades de uuniGn de otro sitio de a misma protefna. El términ “alos- térico” proviene del griego alos, “otro” y stereos, “sdtido” o “forma”. Las proteinas alostéricas son aquélias que tie- nen “otras formas” o conformaciones inducidas por Ia lunién de ligancos conocidos como moduladores. Los cambios conformacionales inducidos por eVios modula- dor(es) interconvierten formas més activas y menos activas de la proteina. Los moduladores de las protesnas alostéricas pueden ser tanto inhibidores como activado- res. Cuando el ligando normal y el modulador som idénti- os la interaccion se denomina homotrépica. Cuando cl modulador es una molécula diferente del ligando normal la interaccién es heterotrépica. Algunas proteins tie- nen dos o més moduladores y por lo tanto pueden tener interacciones homotr6picas y heterotrépicas La unin cooperativa de un ligando a una proteina ‘multimérica, tal como la que se produce con la unién del 0, a la hemoglobina, es una forma de unién alostérica. La unin de un ligando afecta a las afinidades de cual- ‘quiera de los restantes sitios de fijacién no ocupades, ¥ 1 0, puede ser considerado tanto un ligando normal como un madulador homotropico activador. Hay solo un sitio de fijacién para el O; en cada subunidad, de modo ue los efectos alostéricos que dan lugar a la cooperati- vidad estin mediados por cambios conformacionales transmitides de una subunidad a otra por interacciones subunidad-subunidad. Una curva de unién sigmoidea es diagnéstico de una unin cooperativa. Permite una res~ puesta mucho més sensible a las concentraciones de ligando y es importante para la funcién de muchas pro- teinas multiméricas. El principio del efecto alostérico puede extenderse fécilmente al caso de los enzimas reguladores, tal como veremos en el Capitulo 6, Los cambios conformacionales cooperativos depen- den de variaciones en la estabilidad estructural de partes diferentes de la protefna, como se vio en el Capitulo 4, Los sitios de fjacicn de una proteina alostérica suelent cconsistir en segmentos estables proximos a segmentos relativamente inestables, siendo éstas ttimos capaces de sufrir cambios frecuentes en su conformacié 0 de llevar a cabo movimientos desorganizados (Fig. 5-13). Cuando se produce la union de un ligand, las partes méviles del sitio de fijacién de una protefna pueden que- dar estabilizadas en una conformaciin determinada que afecta a la conformacisn de las subunidades de polipép- ‘ido adyacentes. Sila totalidad del sitio de NjaciGn tuvie~ a una gran estabilidad, al unirse en él un ligando tan solo serian posibles cambios estructurales limitados que se propagan a otras partes de la proteina. Al igual que ocurre con la mioglobina, la hemoglobi- nna puede unir ligandos diferentes al oxigeno. Un ejem- plo importante es el monéxido de earbono, que se une a Ja hemoglobina con una eficiencia unas 250 veces supe- ror a la del oxigeno (el enlace de hidrégeno critico entre el Oyy la His distal no es tan fuerte en la hemog- Jobina humana como lo es en la mayoria de mioglobinas de mamfferos, por lo que la unién del Op en compara- cién a la del CO no aumenta tanto). La exposicion de mumanos al CO puede tener consecuencias tragicas (Recuadro 5-1), La unién cooperativa de ligando puede ser descrita ‘uantitativamente La union eooperativa del oxigeno por la hemogiobina fue analizada por primera vez por Archibald Hill en 1910. A partir de su trabajo se enuncié un método gene- ral para el estudio de la unién cooperativa de lgandos a protetnas multisubunitarias5.1 Un eel de una protein un igande: proteins de unin aexigeno 167 Sitio de faci sitode | Raigsttae shoes tne S—- tree eee oat gan est unio 9 ns ‘iburdad a in| faba ura contormasidn ‘ta feided Lamar Date dea estructarses stable az yada es Iresabie (rose) Beste 2 polpetdeadoota una ‘narmacion de ata ‘Sidady ena ora Subsniad se etablza ‘Sma cenformacon ‘mediate ateaccones Protea pos Una segunda molecu A Feed st rida ate ‘Segunda subunide. Eto Unt tan ugar ean aver nda oe de gers tmoleula dando ay a Sevopentinged posta, FIGURA 5-13 Cambio extracturals en un proteins con varie abu nidades que se une cooperatvaments 2 un Tigande > csiabiléad ‘stractral oe unlorme en una meee depot, Acul se maesa uns grtina dca tiga fxs por eons de estaba > (eas), esa (ere) Daa (0. Ls sts ce acne ligand estan compuestos de sagmertos Je 2 y baa estabidad, or Te aut afnicad ore ganda ex relatharerte bj. Los cambio cvformaconles o> hucidos lorie anda hacen ula potia ase desde un estado ot boa anidad sure de ata frida nara desea indudo Para una proteina con m sitios de fjacion et equll- brio de la Bouacién 5-1 se convierte en Pi nl = Ply la expresién para la constante de asociacién pasa a ser {Plal 13 (P}IL\" io” La ecuacién para ¥ (véase la Ec, 5-8) es 12) K, y mu" i" Ke Reordenando los términos y ealculando el logartmo de ambos lados obtenernos y yum ke G5) ow ) = meg (L) tog Ka donde K, = [LBs G16) La ecuacién 5-16 es Ia ecuacién de Hill, y una representacién del log{¥/(1-¥)] frente al log{L] se deno- mina representacién de Hill. Baséritose en la ecua~ cién, la representacin de Hill deberfa tener una pen- diente igual an. Sin embargo, la pendiente determinada experimentalmente no refleja el numero de sitios de ‘jacion sino el grado de interaccién entre ellos. La pen- diente para una curva de Hill se indica por tanto como ‘ny cleoeficiente de Hill, que es uns medida del grado de cooperatividad. Si es igual 1, Ia unin del Kigando no es cooperativa, una situacién que puede producirse Ineluso en una proteina multimérica si las subunidades ro se comunican. Un my mayor que 1 indica que hay una ‘cooperatividad poeitiva en la unidn del ligando. Esta es la situacin que se observa en la hemoglobina, en la que Ja unin de una molécula de ligando facilita la unién de Jas otras. El limite superior tesrico para ny se aleanza ‘cuando my =". En este caso la unin seria completa- mente cooperativa: todos los sitios de fijacién en una proteina unirfan el Iigando simulténeamente, y no habris moléculas de protefna parcialmente saturadas de ligando en ningsin caso. Este limite nunca se alcanza en la préctica, y el valor medido de my es siempre menor ue el mimero de sitios de fMjacion de ligando de la rotefna. ‘Un my menor que 1 indica cooperatividad negativa, en la que la uni6n de una molécula de ligando dificulia, la unién de otras. Hay pocos casos bien documentados de cooperatividad negativa. Para adaplar Is ecuacién de Hill ala unidn de oxige- ro por parte de la hemoglobina debernos sustituir de nuevo {L] por pO: ¥ Kg por Pa ¥y woe( ;) = 1 108 POs — og Pso 1D Las tepresentaciones de Hill para la mioglobina y la hemoglobina se preserian en la Figura 5-14, e500, FFIGURA 5-14 Gratcar eit praia uni dl xigano 3a mioglbina Yale bemoglbing Cuondo 14" Tro este congeratiad evident. Irdsimo grado de copertvided cbserado pare I heroglbin comes ‘onde aprcnimadamente a n,= 3. Cosérese gu, mientras est incca ln ato nie de cooperavcad. es mor quent sendo ne nimero estos de cin de O; de hemoglobin Est es enema para una ‘oes que presenta comportamiento asics168 Funciénde as proteinas Daa Lake Powell, Arizona agosto de 2000. Una familia se fencontraba de vacaciones en una casa flotante arren- dada. Pusieron en marcha el generador de electricidad para poder conectar un aparato de aire acondicionado yun televisor. Aproximadamente 15 minutos después, {dos hermanes de 8 y 11 afios saltaron desde la cubier- ta de popa, Inmediatamente debajo de la cublerta estaba situado el tubo de escape del generador. En el lapso de dos minutos, os dos hermanos quedaron ren. | didos causa de la inhalacion de! mondxido de carbo- no del tubo de escape, que haba quedado concentrado fen el espacio de debajo de la cubierta. Ambos se aho- garon. Estas muertes, junto con otras més que ocurrie. ron en la década de 1900 y que estaban relacionadas | con casas flotantes de disefio similar, hicieron que se roconsiderara y redisefiara el montaje de los tubos de escape de los gencradores. Bl mondxido de carbono (00), un gas incoloro Inoduro, es responsable de més de la mitad de las | muertes anuales por enveneramiento en todo el mundo. E00 tiene una afinidad por la hemoglobina unas 250 veces mayor que la del oxigeno. En conse- cuencia, niveles relativamente bajos de CO pueden tener importantes y tragicos efectos. Cuando el CO se ‘combina con la hemoglobina, el complejo resultante se ‘denomina carboxihemoglobina o COHD. “Algunos procesos naturales generan cierta cant- «dad de CO, pero los niveles elevados localizados suelen || ser el resultado de la actividad humana. Los tubos de || escape de motores y estulas constituyen fuentes {importantes de CO, al ser éste un producto secundario cde la combusti6n incompleta de combustibles foses. Tan solo en los Estados Unidos, casi 4.000 personas -mueren cada afio a causa de envenenamniento por CO, 7a sea accidental o intencionadamente. Muchas de las Imuertes accidentales se producen por un aumento no detectadlo de CO en espacios cerrados, como el que se produce cuando una estufa doméstica no funciona bien o tiene pérdidas e insufla CO dentro de la casa Sin embargo, también es posible la intoxicacién por 00 een espacios abiertos, en los que personas despre- ‘venidas pueden inhalar los gases de escape de genera- dores, motores fuera borda, motores de tractor, vehi: clos recreativos 0 cortadoras de césped. Bs poco frecuente que Jos niveles de monéxido || de carbono en la atmésfera sean peligrosos, ya que |, oscilan entire menos de 0,05 partes por millén (ppm) cen dreas remotas e inhabitadas y 3 2 4 ppm en algu- nas ciudades de! hemisferio norte, En los Estados || Unidos el iimite impuesto por ef gobierno (por la |jOrupatona Saoty and Health Administra, Existen dos modelos que explican los mecanismos de la unin cooperatva Los bioquimicos tienen actualmente una gran cantidad de informacién sobre los estados T y R de la hemoglobi- na, pero queda mucho por aprender sobre cémo se produce la transicion T — R, Existen dos modelos para la unién cooperativa de ligandos a las protefnas con (OSHA) para las cantidades de CO en lugares de tra~ bajo es de 50 ppm para personas que trabajen en ‘uumos de ocho Roras. La fuerte unidn del CO a la hhemoglobina implica que la COHD se puede acumnular 4 lo largo de! tiempo si las personas se exponen a una fuente de tajo, pero constante, nivel de CO En un individuo sano, el 1% 0 menos de la hemog- Jobina total forma complejo en forma de COHD. Al ser ‘e1CO un producto dei humo del tabaco, muchos fuma- dores tienen niveles de COHb en un intervalo del 3% al 8% de su hemoglobina ‘otal, pudiendo aumentar ‘hasta el 15% en fumadores cormpulsivos. Los niveles de CON se equilibran al 50% en las personas que aspiran aire que contiene 670 ppin de CO durante varias horas. Se han desarrollado métodos fiables para relacionar el contenido de CO en la atmésfera con los niveles de COND en sangre (Fig. 1) En pruebas efectuadas con generadores de casas flotantes como el responsabie de las muertes de Lake Powel, los niveles de CO subieron hhasta 6,000 0 80.000 ppm bajo cubierta, y los niveles de Oy atmosférico bajaron desde un 21% a un 12%, Incluso por encima de la cubierta se detectaron niveles, de CO de hasta 7.200 ppm, suficientes para provocar ia muerte en pocos minutos. De qué manera afecta al orgarsmo humano la COHb? Raramente se observan sintomas a niveles ce ‘menos del 10% de la hemoglabina total. Al 15% se ‘empieza a experimentar ligeros dolores de cabeza Entre el 20% y el 30%, el dolor de cabeza es muy Cont en sere) oe 3 Monde decarbona ppm) FFIGURA 1 Relscin etre 1 ives de COMD en sangre y acon cera de CO ene ae ccundonte. Se mnsran custo condico- es de eosin dieretes, comparande las eel de une expos cen cora con otra ms prolongade y und expos en repose con una exposed orate rc. (Fuente: Datos de RF Cabuen et 9.1 Clin vest 441899, 1965.) riitiples sitios de fjacién que han influenciado en gran ‘medida las ideas que se Lienen sobre este problems. El primer modelo fue el propuesto por Jacques Monod, Jesfries Wyman y Jean-Pierre Changeux en 19665, 2 el llamado modelo MWC 0 modelo concertado (Fig. 5-16a). En el modelo concertado se considera que Jas subunidades de una proteina con unién cooperativa som funcionalmente idénticas, que cada subunidad puede5.1 Uni reversible de unaprotena an igando: proteins de unién acrigeno 169 agudo y suele estar acompattado de néuseas, vértigo, ‘confusidn, desorientacion y algunos trastomos visua- Jes; estas s{ntomias suelen desaparecer si se trata al {ndividuo con oxgeno. A niveles de COtiD det 30% al 550%, los sintomas neurciégicos se hacen més graves ¥y aniveles proximos al 5OW se plerde la conciencia y ‘se corre el peligro de caer en coma. Seguitamente ‘puede producirse una parada respiratoria. Sila expo- sicion ha sido prolongada pueden producirse daftos permanentes. Niveles superiores al 60% suelen ser ‘mortales. La autopsia de los nifios que murieron en. Lake Powell revelo que sus niveles de COHD eran del 50% y del 52%. La unién de CO a la hemoglobina est afectada por ‘muchos factores, entre los que se incluye el ejercicio (Fig. 1) y los cambios en la prosién de aire relaciona- dos con ia alltud. Al tener los fumadores niveles basar les ms elevados de COM, los que se exponen a una uente de CO suelen presentar s{ntomas més répida- ‘mente que los no furadores. Las personas afectadas de enfermedades cardiacas, pulmonares 0 sangufneas ‘que reducen la disponibilidad del oxigeno a los teidos también experimentan los sintomas a niveles més bajos de exposicion. Los fetos corren un riesgo elevadio de envenenamiento por CO porque la hemoglobina {etal tiene una afinidad ligeramente mds elevada por el CO que la adulta. Se han registraco casos en los que el {eto ha muerto pero la madre ha sobrevivido. Puede parecer chocante que ta pérdida de la ritad de la hemoglobina en forma de COHb resulte fatal, puesto que sabemos que personas con diversos tipos de anemia suelen vivir razonablemente bien con Ja mitad de la cantidad total de hemoglobina. Sin ‘embargo, la unién de CO a la hemoglobina tiene efec- ‘os mais allé del de eliminar parte de proteina del total disponible para la unidn del oxigeno. También afecta le afindad del resto de subunidades de la hemoglo- bina para con el oxigeno. Al unirse CO a una o dos subunidades de un tetrésmero de hemoglobin, la afl- nidad hacia el O, se incrementa sustancialmente en. las restantes subunidades (Fig. 2). De este modo, un tetramero de hemoglobina con dos moléculas de CC Unidas puede fjar 0; de modo eficiente en los pulmo- nes pero liberario con poca eficiencia en los tejidos. Con ello, os tajidos eufren pronto una privacién de ‘oxigeno. El problema se acentiia porque los efectos del CO no se limitan a su interferencia con la funcién de la hemoglobina. El CO se une a otras protefnas con ‘grupos heino y a una variedad de metaloprotefnas. ‘Todaria no se conocen bien los efectos de estas inte- racciones, pero pueden ser responsables de algunos existir en (como minimo) dos conformaciones, ¥ que todas ls subunidades sufren la transiciGn de una confor- macién a otra de manera simulténea En este modelo ‘ninguna proteina tiene subunidades individuales con ‘conformaciones diferentes. Las dos conformaciones estan en equilibrio. Ei igando puede unirse a cualquiera de ellas aunque de una manera mucho més fuerte al estado R. La unin sucesiva de moléculas de ligando als poser posen los tnios [explana 109) 7 | aa | eral hemo dun in edz co toe SO de heme finda hembra de indo cone 50% de sus sibs de emotes scarps con CO. Sind a 70, en pumas Yipee anos (hae Dai oF W Ro fvony RC Oar, / Phyi 071944.) de los efectos a largo plazo del envenenamiento gud pero no mortal por CO. ‘Cuando se sospecha un envenenamiento por CO, resulta esencial una répida evacuacién de la persona afectada de la fuente de CO, aunque esto no siempre sarantiza una recuperacién répida. Cuando se produ- ‘ce el traslad desde un lugar contaminado con CO a ‘una atmésfera exterior normal, el O, empieza a sust- tuir el 00 de la hemoglobins. Sin erabargo, los niveles e CON} descienden lentamente; el tiempo medio es e 2 6,5 horas, en funcién del individuo y de fac: tores amblentales. Si se administra oxigero al 100% a través de una méscara, la velocidad de recambio ‘puede aumentar hasta cuatro veces; e tiempo medio del interoarabio O-CO puede reducirse a decenas de ‘minutos si se administra oxigeno al 100% a una pre- sign de 3 atm (909 kPa). De este modo, resulta cftico tratamiento a cargo de un equipo médico compe- tente y bien equipado. std aliamente recomendada la instalacin de etectores de monéxido de carbano en las casas. Se trata de una medida simple y barata que puede evitar tuna posible tragedia. Al terminar de recoplar ie Gatos para este recuadro, adquirimos inmediatamen. te detectores de CO nuevos para nuestras casas. | ee eee | | | | | | cconformacién de baja afinidad (la cual es més estable en ‘ausencia de ligando) hace que la transicién a la confor- ‘macién de alta afinidad sea més probable. En el segundo modelo, el modelo secuencial (Fig, 5-16) propuesto en 1966 por Daniel Koshland y cola- boradores, la unién del ligando puede inducir un cambio de conformacién en una subunidad individual. Un cam- bio de conformacién en una subunidad hace que tanto170 Func des proteins Todo & 1 8&8 4 & 1 88 1 Toto] ee l 1s N 1 l — — o ‘un cambio simiar en la subunidad adyacente como la unién de una segunda molécula de ligando sean més probables. Hay mas estados intermedios potenciales en este modelo que en el modelo concertado. Los dos modelos no son mutuamente excluyentes: el modelo concertado puede considerarse como un caso limite de “todo 0 nada” del modelo secuencial. En el Capitulo 6 Uublizaremos estos modelos para la discusi6n sobre los cenaimas alostéricos. Lahemoglobina también transporta Hy COp Ademis de transportar pricticamente todo el oxigeno necesario para las células desde los pulmones a los tejidos, la hemoglobina transporta dos productos fina- Jes de la respiracion celular (H” y CO;) de los tejidos a Jos pulmones y los rifiones, donde son excretados. El 00s producido por la oxidaci6n de combustibles orgé- nicos en Ia mitocondra, se hidrata para formar bicar- Donato: C0, + HO == H* + HOOS Esta reaccién esté catalizada por la earbénico anhi- rasa, un enzima especialmente abundante en los eri- trocitos. El didxido de carbono no es demasiado soluble fen sohucién acuosa, y, de no ser convertido en bicarbo- nato, se formarian burbujas de CO, en los tefidos y en la sangre, Tal como puede verse en la reacci6n catalizada por la carbénico anhidrasa, la hidratacién del CO. pro- vyoca un aumento de la concentracion de H* (un descen- 80 del pH) en los tefidos. La unién de oxigen a la hemoglobina se ve muy afectada por el pH y la concen- tracién de CO;, por lo que la interconversiOn de CO, ¥ bicarbonato es de gran importaneia para la regulncién de i unién de oxigeno y su liberacion en la sangre. La hemoglobina transporta alrededor del 40% del total de H* y del 15% al 20% del CO, formado en los tejidos hacia los pulmones y os riRones. (Bl resto de H” es absorbido por el tampén bicarbonato del plasma; el resto del CO, se transporta en forma de HCOs y CO; disueltos.) La unicn del H” y CO, esté inversamente relacionada con la unién de oxigeno. Con un pif FFIGURA 5-15 Dos modelos generaes paral inter= ‘camvesin de as formas nactva y acta de proteinas i &-B-h= i fi 1 “Rt S-B-B-B-B 1 ot 4 Nt 8-8-8-B-H durante la unin cooperative aligande. pear de qe los madeles pueden apliarse 2 cualquier poteha Cincaynde eualier enzims, Caputo 6) que aeserte unin cooperatva, se mustran acu cat subunidades ebido & ae 4! modelo fur sroovesto rgalmeste ‘ala hemoyobira (a) Ene! medlo concerto 0 de tod 0 mada (modelo MWC) se pstula ve tas as ibuniader etn en lk mime conormacin yo ea como D(a ata o activa) © como 0 ata af ad 0 activa, Sein eo fear, Kent as for= ‘mas O,le unin de una om olkclse deanso (0 despazad el euirio hac a forms 0. Las stu ‘dades con un L nid eatin sombeeadas. (8) ol ‘modelo Secuencia cace Subuniad incl puede star ena forma Do ef forma ©, sendo pose un ‘Bn mera de confrmariones, La mayor parte as ‘sibuniades casa la mayor del iepo en os estas sembreaos en a2. relativamente bajo y altas concentraciones de CO, en’ los tejidos periféricos, la afinidad de la hemoglobina por el oxigeno disminuye a medida que se unen H" y CO, ¥ se libera oxigeno a los tejdos. Por el contrario, a medida que se excrgta CO, en los capilares pulmonares ¥ aurnenta consStuentemente el pH dela sangre, la aft dad de la hemoglobina por el oxigeno aumenta y la proteina une més O, para su transporte a los tejidos pperiféricos. Este efecto del pH y de la concentracién de C0, sobre la unién y tiberacion de oxigeno por la hemoglobina es el llamado efecto Bohr, en honor de Christian Bohr, el Gsidlogo danés (y padre del fisico Niels Bohr) que lo descubri6 en 1904. El equilibrio de unién de la hemogiobina y una molécula, de axigeno puede deseribirse por la reaccién Hb + 02 — HO; ue no es una expresién completa. Para tener en cuenta el efecto de la concentracién de H” sobre este equilibrio de unién, debemos reescriir la reaccién como a 0, (Ps) 6 10 FIGURA 5-16 etecto de pt sobre a unin de oxigen por a hemog obi. £1 oH de la sang ens pulmones 6 269s tes 7.2 Las medidas expementaes sare le unin de odgera oor Is hemogicba se sul tomar ap 745.1 Uri eersble de una poten aun ligand: proteinase unin acnigeno 171 HHb* +0, == HbO, + H* donde HHb* designa una forma protonada de la emoglobina. Bsta ecuacién nos dice que la curva de saturacién de O, de la hemoglobina esté influenciada por la concentracién de H° (Fig. 6-16). Tanto el O; ‘como el H’ se unen ala hemmoglobina, aunque con afini- ddades inversas. Cuando la concentraciGn de oxigeno es alta, como ocurre en los pulmones, la hemoglobina une 2 y libera protones. Cuando la coneentracion de oxige- ‘no es baja, situacién que se da en los tejidos periféricos, se une H*y se libera 1 oxigeno y el H” no se unen a los mismos sitios de Ja hemoglobina. Bl oxigeno se une a los toros de hie~ ro de los grupos hemo, mientras que el H” se puede ‘unir a diversos residuos de aminodcido de la protefna. La His! (His HC3) de las subunidades 9 realiza un aporte fundamental al efecto Bohr. Este residuo forma, al protonarse, uno de los pares iOnicos (con el Asp™, ‘Asp PG1) que ayudan a estabilizar la desoxibemoglobi na en el estado T (Fig, 5-9). El par ionico estabiliza 1a forma protonada de la His HC3, confiriéndole a este residuo un p&,stormalmente alto en el estado T. El pK cae a su valor normal de 6,0 en el estado R debido a que no puede formarse el par ifnico, y este residuo esté en ‘su mayor parte desprotonado en la oxihemoglobimaas pH 7,6, el pH de la sangre en los pulmones. A medida ‘que aumenta la concentracién de H’, se produce la pro- tomuacion de la His HC3, lo que favorece la transiciGn al estado T provocando la liberacion de oxigeno. Un efecto similar se produce con la protonacién de los residuos amino-terminales de las subunidades a, de otros resi- duos His ¥ quizAs de otros grupos. ‘Asf vemos que las cuatro cadenas polipeptidicas de lahemoglobina se comunican unas con otras no s6lo por la unién de 0; a sus grupos hemo sino también por la union de H" a residuos aminodcidos espectficos. Y atin hhay otros elementos que afadir al entramado. La emoglobina también une CO;, y de modo también {inversamente proporcional a la’ unién de oxigeno. El \didxido de carbono se une en forma de grupo earbamato al grupo a-amino del extremo amino-terminal de cada cadena de globina, formando carbaminohemoblogina: i A mode a we ario-termina Esta reaccién produce H’ y contribuye al efecto Bohr. ‘Los carbamatos unidos también forman puentes salinos adicionales (no mostrados en la Figura 5.9) que ayadan a cstabilizar el estado Ty favorecen la beracién de oxigeno. ‘Cuando la concentraciGn de dixidn de carbono es alta, tal como ocurre en ios tejidos periféricos, se une algo ‘de CO, a. hemoglobina y la afiidad por el 0, disrainu- {¥e, haciendo que éste se libere. Por el contrario, cuando la hemoglobina llega a los pulmones, ls alta concentra- ion de oxigeno favorece la union de Oy i liberacion de (CO, Es la capacidad de communicar informaciGn de unin a ligando de una subunidad polipeptidica a lay otras lo gue convierte a la hemoglobina en una moléeula tan perfectamente adaptada a la integracién del transporte de 03, 003 y H" por parte de los eritrocitos. Lain de oxigeno a la hemoglobina est regulada por el 23-bisosfooicrato La interaccién del 2,3-bisfosfoglicerato (BPG) con Jas moléculas de hemoglobina perfecciona ain més la funcién de la hemoslobina y proporciona un ejemplo de ‘modlulacion alostérica hetertropica. Op Nf 9 Ht-0-F-0 2:3tiststogicerato EL BPG esta presente en concentraciones relativamente altas en los eritroeitos. Cuando se afsla Ix heroglobina ‘contiene una cantidad significativa de BPG unido, cuya eliminacién completa resulta dificil De hecho, las PO; enlos pO; os fukrones eos C4500) FIGURA 5-17 Efecto del 2.3-bsfostoglcrato sobre la union de ox eno sls hemoglobins Ls concentra de BPG els sarge humans roma sapaxmadarent 5m cuardo set are delay aed or de 8 mas 2 andes alts Observe qu a hemalbica une xe ‘uy Sestorent en aver total de PG, presetands eteness ue cana de una perl n rela el cece de Hl cosenado pa lar cooperative de O; dminye sl igeramente (8e 3425) arco Se exe el BPG dela ermagota, pero parte cect cee casi ‘modes et caniada aura ee my pears cece loge A nl el ma: a hemaglbina est prctcaete stra con Oz en os pulro~ sero sue de satracién ess de un 60% en os edo, de mares ue I canidad dongs brad on lor ljios es coca a 38% rmésiro que pose sr transport por a sarge. A rans aces la eran de O; urine acrorriafamerte ura curs pate. canzando camo misine @ 30% Sin enbarg, un aumento en concervacén de PG drive io afd de le herons pore Os haciendo cue de ro ebro eos crc dn 37% dl ongeo tansortade172 Funcén delas proteinas ccurvas de unin a O2 para la hemoglobina que hemos ‘examinado hasta ahora se habian obtenido en presencia de BPG urido. Se sabe que el 2,3-bisfosfoglicerato redu- ‘ce de manera considerable a ainidad de la hernoglobina ‘por el oxigeno, hay una relacion inversa ene We unién de Op y la unién de BPO. Por tanto podemos deseribir ‘otro proceso de unién para la hemogiobina: HDBPG + 0, = HbO, + BPG ELBPG se une a un sitio akjado del sitio de jacion para elO,y regula a afiidad de unién de la hemnoghobina para el Op en relacién a la pO; en los pulmones. £1 BPG Jega un papel importante en las adaptaciones fisiolg- cas ala menor pOp disponible a grandes alturas. Para un thumano sano que se paseo a nivel del mar, la urién de coxigeno a a hemoglobins esté regulada de manera que la Cantidad de O;liberada alos tejdos eauivale aproxima- damente al 40% del masimo que podria ser transportado por la sangre (Fig. 6-17). Imaginemes que la misma Pervona se taslaa répidamente aun lugar montatioso a 4.600 m de altitud, en donde a pO, es considerablernente tenor. La Iberacién de O, alos tefides e ve ahora redu- cia. Sin embargo, después de unas pocas horas de per manencia 8 gran alttud, Ya eoncentracién de BPG de la sangre empieza a aumertar, conducieno a una dismin cin de I afinidad deta hemioglobina por el oxigeno. Este ajuste del nivel de BPG tiene un efecto pequefio sobre la union de 0, en los pulmones pero afecta de manera “esto © FIGURA 5-18 Unién del 23-isfestogicerte le desoihomoslo- bin. 2) La rr de! 8° enti exiads Toe dessert xp negivas 8 BPG irtaecoran cn vats gos cams Doster mente (raise azul neta agin de cote espe) ut ‘ofan 2 bls ee sss en eta 7.0) Label denn ae 8G desapaece con ls criracén, roduténdse la tarsi al ‘tae Compare con Fig 50) Fetes) POBIO 1896 V 0 Reh a, Mat Bo 232270, 1993 () FOR 1D BH, MM. Shae Be ‘Chm 26717288 1952) Imporarte ala liberacion de Oy en los tees, El resulta- does que la iberacién de oxigeno en los teidos vuelve a ser de casi el 40 % del que‘puede ser trasportacto por la sangre. La situacin se invite cuando la persona vuelve al nivel de mar. La concentracion de BPG en los eritroci- 1s también aumenta en las personas que sufren hipoxia, ‘una disrinucion ena cigenacion de los eds perifert ‘08 debida a un funcionamiento inadectado de los pul- :mones o del sistema citulatorio. EL BPG se une a ki hemoglobins en la cavidad exis- lente entre ls subunidades 3 en el estado T (Fig. 5-18). Esta cavidad esta recubierta por residuos aminoacids ‘cargados positivamente que interaccionan eon los grupos cargados negativamente del BPG. A diferencia del Os, s6lo se une una mokécula de BPG a cada tetramero de ‘hemoglobina. E1 BPG disminuye fa ainidad de la hernog- Jobin por el oxigeno al estabilizar el estado T La transi- cin al estado R provoca un estrechamiento dela bola de unin a BPG, impidiendo la uniin det BPG, En ansencia de BPO, la hemnoglobina pasa mis fcilmente al estado ‘a regulacin de la union de oxigeno ala hemoglobina por el BPG juega un papel importante en el desarrollo fetal La nemoglobina fetal a de tener una mayor afinidad por et 0; que la hemogobina materna debido a que el feo ‘debe extraer el oxigeno de la sangre de su madre. El feto sintetiza subunidades 7 en hugar de las 8, forméndose Ia hhemogiobipa ry. Este tetrmero tiene una ainidad por €1 BPG ficho menor que Ya de la hernoglobina adulta normal, y por lo tanto uno mayor afinidad por eh oxigeno. La anemia faciforme es una enfermedad molecular de la hemoglobina [a enfermedad humana hereditaria Uamada ane- na faleforme demuestra de manera indiscutible Ja granimportancia dela secuencia de aminoécidos para ddeterminar las estructuras secundaria, terviaria y cua- temaria de las proteinas globulares y, por tanto, sus funciones bioldgieas. Se conocen mas de 500 variantes ‘enéticas de la hetroglobina en la poblacién humans; con pocas excepciones, se trata de variantes muy raras La mayoria de estas variantes se deben a diferencias en "ae ® FIGURA 5-19 Conparacén de envocies cdncaos worl y nto ‘mes (a) con los eitoctos de formas diversas presents en a anemia {alone que punden ser normale, lives o epics (Fuentes (@) syre/Scsence Sour. (b) Jacke Lewin, Royal Fee Kospta/Scence Source}5.1 Un reel de una pte un igande: reas duis acxigeno 173, lun tinico residuo aminofcido. Los efectos sobre la estructura y funcién de la hemoglobina suelen ser muy pequefios, aunque a veces pueden llegar a ser extraor- dinarios. Cada variante de hemoglobina es el producto de una alteracién genética. A cada variante de un gen se Je lama alelo. Debido a que los humanos poseen en general dos copias de cada gen, un individuo puede tener dos copias de un alelo (Siendo entonces homoci .goto para ese gen) 0 una copia de cada uno de los dos, alelos diferentes (heterocigoto). La anemia falcforme se da en individuos que han heredatio el alclo de esta enfermedad de ambos proge- nitores. Los eritrocitos de estos individuos son anorma- Jes y menos numerosos. Ademés de un mimero inusual- mente elevado de cGlulas inmaduras, la sangre contiene ‘muchos eritrocitos alargados, delgads y en forma de Hemegibina FIGURA 5-20 Hemogibina normal y hemarlebina de a anemia fa ‘ferme (a) Came reastago de un Unico cambio de sinobcdo en os caderas 3 se producen clerencias suis de conformaién eres hemogibina A y la heroglbia 5, (b) A conseeuenia de este carbio la cesouherogobine 5 presenta un parche hicrobics en su super, fue povec la agregacin dels moléculas en caderas que se alien ere de firs mache, hoz (Pig. 5-19). Cuando se desoxigena la hemoglobina de las células falciformes (amada hemoglobina S), ésta pasa a ser insoluble y forma polimeros que se agregan cen fibras tubulares (Fig. 5-20). La heoglobina normal (hemogiobma A) sigue siendo soluble cuando se desoxi- gena, Las fibras insolubles de la hemoglobina S desoxi enada son las responsables de la deformacion en forma de hoz de los eritrocitos y la proporcién de cétulas falci- formes aumenta en gran medida cuando se desoxigena la sangre Las propiedades alteradas de la hemoglobina 8 son 1 resultado de la sustitueion de un Ginico aminoacid, ‘una Val en Ingar de un residuo Glu en la posicién 6 de Jas dos cadenas 4. El grupo R de la valina no posee carga eléctrica, mientras que el glutamato tiene una carga negativa a pH{ 7,4. Por lo tanto la hemoglobina S tiene dos cangas negativas menos que ls hemoglobina 8, una por cada una de las cadenas 3. La sustitucién de Glu por ‘Val crea un punto de contacto hidrofobico “adhesive” en la posicién 6 de la cadena 9, que se sitia en la superficie exterior de la molécula. Estos puntos adhesivos hacen ‘que las moléculas de desoxihemoglobina $ se asocien anormalmente entre ellas, formando os largos agrega- dos fibrosos caracteristicos de esta enfermedad. Como ya hemos visto, la anemia faleiforme se pre ‘senta en individuos homocigotos en el alelo falcforme ddpl gen codificante de la subunidad f de la hemoglobi- AA Les indvidace que recben el all fakciforme de uno ‘solo de sus progenitores y que, por tanto, son heteroci gotos, sufren una enfermedad més leve Uamada rasgo de la anemia falciforme; en estos casos solo un 1 % de ‘sus eritrocitos son faleformes en estado de desoxigena- ‘cin. Estos individuos pueden tener una vida completa- mente normal si evitan el ejercicio vigoroso u otros eesfueraos sobre el sistema circulatorio, ‘La anemia faleiforme es una enfermedad dolorosa ¥ que puede ser mortal. Las personas con anemia faleifor. ‘me sufren crisis recurrentes provocadas por el ejercicio fisico, Se sienten débiles, tienen vértigo y les falta el aire, ademés de sufrir un aumento del pulso y sopios ‘cardfacos. El contenido en hemoglobina de su sangre es ‘slo la mitad del normal, de 15 a 16 g/100mL, debido a ‘que los eritrocitos faleiformes son muy frgilesy se rom- pen con facilidad, lo que provoca una anemia (“falta de sangre"). Una consecuencia atin més grave es que los capilares quedan bloqueados por los eritrocitos alarga dos ¥ con formas anormales, provocando un intenso dolor ¢ interfiriendo con las funciones normales de los Organos, siendo ésta una de las causas principales que ‘provocan la muerte temprana de muchas personas que ppadecen esta enfermedad. {Las personas con anemia falciforme suelen morir en su infancia sino reciben trataruiento médico. Sin embar- 40, elalelo de a anemia falciforme es sorprendentemen- te comin en algunas partes de Africa. La investigacién sobre la persistencia de un alelo con efectos negativos tan evidentes en los individuos homocigotos, Uevé al descubrimiento de que este alelo aporta una pequefia, ‘Pero importante resistencia a formas letales de la mala- ria en individuos heterocigotos. Los individuos heteroci _gsticos experimentan una enfermedad mAs leve deno- ‘minada rasgo de la cStula faiciforme; solo un 1% de sus ceritrocitos adoptan la forma de hoz al desoxigenarse. Estosd individuos pueden vivir una vida totalmente174 Funcén de as proteinas rnormal siempre que eviten el ejercicio vigoroso y otras tensiones sobre el sistema cizculatorio, La seleccién natural ha dado como resultado una poblacién de alelos. cen la que se compensan los efectos negativos del estado Ihomocigoto con la resistencia a la malaria que aporta el ‘estado heterocigoto. RESUMEN 5.1 Unién reversible de una proteina a un ligando: proteinas de unin aaxigeno (La funcion proteica suele implicar interacciones con otras moléculas. Una molécula que se une a una protel- na se denomina ligando y e! sitio al que se une sitio de fljacion de ligando. Las protelnas pueden experimentar cambios conformacionales cuando se une un ligando en ‘un proceso que se llama encaje inducido. En una protes- ra con miitiples subunidades la unin de un ligando a luna subunidad puede afectar la union del ligando a otras subunidades. La unién de ligandos puede estar regulada. @ La mioglobina contiene un grupo prostética hero ‘que une oxigeno. E1 hemo consiste en un tnico étomo de Fe coordinado en un anillo de porfirina. Fl oxigeno se une reversiblemente a la mioglobina; esta unién sim- ple reversible se puede deseribir mediante una constan- te de asociacion XK, 0 una constante de disociaciOn Ky Para una protefna monamérica tal como la mioglobins, la fraccion de sitios de fjacion ocupados por ligando es luna funcién hiperb6lica de la concentracién de ligando. W La hemogiobina adulta normal tiene cuatro subuni- dads que contienen grupos hemo, dos a y dos 8, simi- lares en estructura entre sf y con la mioglobina. La hemoglobina existe en dos estados estructurales inter- convertibles, T y R. El estado T es el mas estable en ausencia de oxfgeno. La unin de oxigeno promueve Ia transicin hacia el estado R, La unién de oxigeno a la hemoglobina es al mismo tempo alostérica y cooperativa, Al unirse O, a un sitio de fjacién, Ia hemoglobina experimenta cambios con: formacionales que afectan a los otros sitios de fijacién, Jo que constituye un ejemplo de comportamiento alosté- rico. Los cambios conformacionales entre los estados T y R, a través de interacciones subunidad-subunidad, ddan lugar a una unién cooperativa; este comportamien- to se describe mediante una curva sigmoidea y se anali- 2a mediante la representacién de Hill, | Se han propuesto dos modelos principales para explicar la unin cooperativa de ligandos a provetnas con rmiltiples subunidades: el modelo concertado y el modelo secuencial 1 La hemogiobina también se une a H* y COs, lo que resulta en la formacién de pares iGnicos que estabilizan elestado T y hacen disminui la afinidad de la hemoglo- bina por el O; (efecto Bohr). La unién del oxfgeno a la Iemoglobina esta también modulada por el 2,3-bisfosfo- slicerato, que se une y estabiliza el estado T. La anemia falciforme es una enfermedad genética causada por la sustitueién de un tinico aminodcido (Glu por Val*) en cada una de las cadenas f de la hemoglobi- nna. El cambio genera la aparicién de una zona hidrof6- bica en la superficie de la hemoglobina que hace que las moléculas se agreguen en haces de fibras. En condiciones de homocigosis, esta enfermedad presenta graves complicaciones médicas 5.2 Interacciones complementarias entre proteinas y ligandos. El sistema inmune y las inmunoglobulinas Hemos visto de que modo las conformaciones de las Droteinas de unién a oxigeno afectan a y son afectadas por la union de pequefios tigandos (0; 0 C02) al grupo hemo. Sin embargo, la mayoria de las interacciones pro- tefna-ligando no implican un grupo prostético. En vez de esto, el sitio de fjacion de ligando suele ser més a ‘menudo como el de la hemoglobina para el BPG: una hendidura en la proteina recubierta de residuos aminos- dos dispuestos de tal manera que hacen que la inte- accion sea altamente especifica. Una discriminacion efectiva para los ligandos es la norma para los sitios de Ajacin, incluso cuando los ligandos tienes diferencias estructurales muy pequefias. ‘Todos los vertebrados poseen un sistema inmune capaz de distinguir las moléculas “propias” de las “aje- nas" y destruir a continuacién las consideradas ajenas, De esta manera, el sistema inmune elimina virus, bacte- Tas y otros palégenos, as{ como moléculas que puedan representar una amenaza para e! organismo. Fisiol6gi- ‘camente, la respuesta inmune es un entramado com- plejggteinteracciones entre muchas clases de proteinas, rmoléculas y tipos celulares. Cuando se trata de protes- nas individuales, la respuesta inmune demuestra como lun sistema bioquimico espectfico y extremadamente sensible puede basarse en la uniGn reversible entre ligandos y protesnas, La respuesta inmune incluye un conjunto de céluas y protenas espedalizadas {La accion inmune es Nevada a cabo por ura amplia gama de leucocitos (xlébulos blancos de la sangre) que incluyen a los macr6fagos y linfocitos, originados todos ellos partir de eélulas made no diferenciadas de Ja médula dsea. Los leucocitos pueden abandonar et torrente sanguineo y patrllar los tedos. Cada una de las células sintetiza una 0 mds proteinas capaces de reconocer yunirse a moléeulas que podrian ser sefal de ‘una infeccion La respuesta inmune es el resultado de a accién de dos. sistemas complementarios, el sistema inmune ‘humoral y el celular. El sistema inmune humoral (del latin humor, “uido”) esté dirigido contra infecciones Dacterianas y virus extracelulates (los que se encuen- tran en los fuidos corporales), pero también puede responder a proteinas externas individuals, E sistema inmune celular destruye ls céulas props infectadas por virus, encargandose también de destruir algunos parfsits ytejdos ajenos Enel centro de la respuesta inumune se encuentran ‘unas proteinas solubles laadas antieuerpos o inmu- noglobulinas, normalimente abreviadas como Ig. Las inmunoglobulinas se unen a bacterias, virus 0 moléculas ‘grandes identifcadas como ajenas, mareéndolas para 2a destruccién. Las inmunoglobutinas constituyen hasta un 20°% de las protainas sanguiness y son preducidas por5.2 Interacions complemestaras entre proteinasyigandos. sistema inmune yas inmunoglbulnas a icy sor fagocitosis Prteciny sc rene Laden?) Catulas T citotéxicas (1) (asesinas) Linfocitos B (cétulas B) | | | | Interaccionan con cétulas infectadas a través de receptores de superficie de las células T Interacedonan con acréfagos yeecretan ctuoquinas | (Gnterleuguinas) que | estimalan la | | | Cétulas T auxiliares | retper) (Te) proliferacién de Ins células Te, Tay B. los Linfocitos B o célulay B, lamadas as{ debido a que ccompletan su desarrollo en la médula dsea (en inglés™. “pone marrow”), Los agentes que conforman Ja base de la respuesta inmune celular son una clase de linfocitos T 0 eélulas o © FIGURA 5-21 Inmunoglobuina 6. (2) Pare de cadena» pesados eet se combinan para rar na alia con lorma de, Se ces os stios de jacon de antigen por la combiacin de 1s dora varabies de una cadena lier (V,)y de ura nesade (V). La egestin ‘con papaina separs la porores Fb y Fe del roteina por tein tisagra La poein dea macula conten tanbién gid unida (se 175 ‘T (lamados ast porque las tltimas fases de su desarrollo tienen lugar en el imo) lamadas eélulas T citotéxicas (células Te, también lamadas células T asesinas). En el reconocimiento de las e6lulas infectadas 0 de los parési- tos tintervienen nas proteinas llamadas receptores de Jas eélulas T que se encuentran en la superficie de las células To. Les receptores son proteinas que habitual- mente se dsponeen en la superficie exterior de las céulas| y se extienden a través de la membrana plasmatica, reconocen ¥ unen ligandos extracelulares, desencade- ‘anido una serie de cambios en el interior de la célula. ‘Ademas de las céhulas T citotéxicas también encon- trams las eéiulas T helper (células Ty, eélulas T cooperantes © auxiliares), cuya funcion es producir lunas proteinas sefialzadoras solubles lamadas citoqui- nas, entre las que se Cuentan las interieuquinas. Las célu- las Ty, interaccionan con los macréfagos. Las células Ty participan solo de manera indirecta en la destruccién de csiulas infectadas y patogenos, estimulando la prolifera- cin selectiva de las células Tey B que pueden unirse a un antigeno conereto. Este proceso, llamado seleccién clo- nal, aurmenta el niimero de céluias del sistema inmurita rio capaces de responder « un patégeno dado. 1a impor- tancia de las cdhulas Ty s€ aprecia claramente en el caso de la epidemia causada por el VIH (virus de la inmunode- ‘iciencia humana), el virus causante del SIDA (sindrome de inmunodeficiencia adquiida). Las células Ty son ls diana primaria de la infeecién por VIH. La eliminacion de estas oélulas incapaetta progrexivamente a la totalidad del sistema inmune. En la tabla 5-2 se resumen las furciones| de los diversos leucocitos del sistema insmune. muestra en ()) CO) Modelo de cnas dela pramera melds ge ig completamente crstalzada y analzada esrctoraimerte A nese de (ue la molcua conten dos cadenaspesadas és (en dos once Ge zu y dos caderasligersaticas (en dos tnos de) istina sepin ocantrmacionasmétrca mostrads. La Bebidad conformace: nal puede Ser importante para le lurcién de las inrunepobunas, (ete () PDB. GT, L} Harrie a. Biches 365811997176 Funcn delas proenas FFIGURA 5-22 Uni dela fg a un antigeno Para generar wn ast {pte con ol amgen, oe ts de unin dee gG suelen experiesentar lgeos cambios de conformer. Un aust Indigo de est tbo too de diversas eteracianes entre pote y igando. Cada protetna de reconocimiento del sistema inant ne, ya sea un receptor de células T 0 un anticuerpo producido por una célula B, se une de manera espectfica 4 alguna estructura quimica concreta, distinguiéndola récticamente de todas las dems. El ser humano es capaz de producir més de 10° anticuerpos diferentes con especificidad de unién propia. Dada esta extraordi- naria diversidad, es altamente probable que cualquier estructura quimica de la superficie de un virus o de una ceélula invascra pueda ser reconocida y unirse a tno 0 ms anticuerpos, La diversidad de los anticuerp0s pto- cede de la reorganizacién al azar de una serie de seg- rmentos de los genes de las irununoglobulinas mediante ‘mecanismos de recombinarién genética que se describi- én en el Capitulo 25 (véase la Fig. 25-49). Se utiliza un léxico especializado para describ las interacciones, exclusivas del sistema inmune, que s¢ cestablecen entre anticuerpos 0 receptores de las células Ty las molécalas a las que se unen. Se conoce como antigene cualquier molécula 0 patogeno capaz de generar una respuesta inmune, Un antigen puede ser un virus, una pared celular bacteriana, una protefna individual w otras macromolécutas. A un antigeno com: plejo se le pueden unir una serie de anticuerpos diferen- tes. Un anticuerpo o un receptor de las eéiulas T con- creto se uniré solamente a una estructura molecular determinada dentro del antigeno denominada determi- nante antigénico 0 epitopo. Responder a moléculas pequefias que son interme iarios comunes y productos del metabolismo celular no serfa productivo para 41 sistema issmune. Las moléculas| ‘con una Mf, <5.000 generalmente no son antigénicas. No obstante, cuando estas moléculas pequefias se unen ‘covalentemente a grandes protefnas en el laboratorio, pueden usarse para originar una respuesta inmune. Estas moléculas pequefias son lamadas haptenos. Los anticuerpos producidos como respuesta a los haptenos unidos a proteinas se unirén entonces a las mistnas ‘moléculas poquetias en su forma libre, Este tipo de anti- ‘cverpos se emplea algunas veces en el desarrollo de pruebas analiticas que deseribimnos mis adelante en este capitulo o también como ligandos especificos en cromatografla de afinidad (véase la Fig. 317c). A conti- ruacién veremos una descripcién mas detallada de los anticuerpos y de sus propiedades de union, FIGURA 5-23 Pantsmero IgM de unidades de inmunastobulna. £1 eslmere ext entezzado con ences dsuluro Gen amarile) La cadena J es un ellpttio de M, 20900 ercontado tanto en la gk eo nin ig Los anticuerpos paseen dos ugaresidénticos de union a antigeno Las inmunoglobulinas G (IgG) son la principal clase de moléculas de anticuerpo y unas de las proteinas mas bundantes en el suero sarguineo. Las IgG tienen cuatro cad Polipeptidicas: dos cadenas largas, llamadas cadenat pesada, y dos cadena ligeras, unis por enla- es no covalentes ¥ puentes disulfiro que forman un complejo de M, 150.000. Las cadenas pesadas de una rmolécula de 8G interaccionan en un extremo y a conti- ‘uacién se abren para interaceionar separadamente con las cadenas lgeras, formando una molécula en forma de Y (Fig. 5-21). En las “bisagras” que separan la base de la 1G de aus ramus, la inmunogiobulina puede ser cortada Dor proveass. La rotura con la proteasa papaina libera el fragmento basa, llamado Fe debido a que suc cristal ar Ticimeste¥ las dos ramas, conocidas como Fab, los fragmentos de unién a antigeno antigen-binding”) Cada rams tiene un tinico sitio de fijacién de antigeno. La estructura basica de las inmunoglobulinas fue establecida por primera vez por Gerald Edelman y Rod- ney Porter. Cada cadena esta compuesta por dominios ‘dentineables: algunos son constantes en secuencia y FIGURA 5-24 Fogotoss por un macrtage de un isu aan cer. La regones Fe dels acuerpos was alo vue se uron 3 receplres de Fe stuados enka suprfce el mactago,hacenda que acta fag al vis yo desteuye5.2 Interaciones complements ete rots andos Ester inmuney as manoglobulas 177 (€9 Conformacén sn atieno unio FIGURA 5-25 Encae induc en aur de un antigo a IgG. 2 mola, masiada en un contoro de super sha colored pare moss i fob. Las supers hitidbicas estan en ara los supers hirolies en anu can mates desde and a verde con arora entre meio (2) Vista del ragmert Fab en auseria de ant= _er0 (un plo pequet procadete de VM) ivan hacia ito de Fiacon de atgano.(b) Lamia perspctva, pao gu el agent Fab estructura de una IgG a otra; otros son variables. Los dominios constantes tienen una estructura caracteristi- ca conocida como el plegamiento de la inmunoglo- bulina, un motivo estructural muy conservado en todas Jas proteinas de la clase 3 (Capitulo 4). Hay tres de estas dominios constantes en cada cadena pesada y yf fen cada cadena Iigers. Las cadenas pesada y ligera Poseen ademas un doranio variable cada una, en el cual se encuentra la mayor parte de la variailidad en la secuencia de arninoscidos. Los dominios variables se asocian para crear el sitio de fjacidn del antigeno (Fig. 5-21), que permite la formacién de un complejo antige- nno-anticuerpo (Fig. 5-22). En muchos vertebrados las IgG son solamente una de ls cinco clases de inmmunoglobulinas. Cada clase tiene tun tipo caracterstico de cadena pesada,lamadas a, 8, “7 14, que corresponden las IBA, gD, IE, 1aG e tM, respectivamente. Hay dos tipos de cadena ligera, x y A, ue estan presents en todas la clases de ineaunoglobu- Jinas. Las estructuras globales de las IgD y las IgE son similares ala de ls IgG. Las TgMf pueden presentarse en forma monomérica, unidas a membrana, o en forma de pentémero entrecrizado de la estructura basica cuando som secretadas (Fig. 5-23). Las IgA se encuentran prin- cipalmente en secreciones coma la saliva, las Mgrimas ¥ la leche, putiendo encontrarse como monémeres, dime- ros o trimeros. Las IgM son los primeros anticuerpos producidos por los infocits B y el principal aruicuerpo en Jos primeros estadios de la respuesta inmune prima- ria, Algunas células B empiezan también pronto a produ- cir IgD (con el mismo sitio de fijacién de antigeno que la IgM producida por la misma célula) pero la funcién especfica de las IgD no est bien definida La IgG deserita anteriormente es el principal anti- cuerpo en la respuesta inmune secundaria, la respuesta iniciada por una clase de eélulas B denominadas e6lulas Bde memoria. Como parte dela inmuridad del organis- mo frente a antigenos ya conocidos, la IgG es la inmuno- ‘lobulina mas abundante en la sangre. Cuando la IgG se tune a uns bacteria invasora o a un virus, activa clertos Jeucocitos, como los macrétagos, para que engullan y destruyan al invasor, y también activa otros componen: tes de la respuesta inmune. Unos receptores de la (09 Anigano uid (pro na mosrado) {0 Aotigano unio (mosrade) ‘dena conormacin de “una anger no et represen fara permite una vin sn rewdienos det de Wacén ateato, Onseve ‘ue cvidad de unin se ha aan varios us han cambio de posi. (e) La misma perspertha queen (0), pro cor el artgeo rep ‘Seago en tio de fhackn como una estar de ails. (Fue tes (@)PDBID YGGC. RL Stand eta Structure 185,193, (6) POBID {GGL M. Rie a, Proc Natt Aca. Si USA 906325, '993) ‘superficie celular de los macréfagos reconocen y unen la region Fc de las IgG. Cuando estos receptores de Fe se ‘unen a un complejo anticuerpo-patdgeno el macrofago lo rodea y lo incorpora por fagocitosis (Fig. 5-24), La Ig juega un papel muy importante en la res puesta alérgica, interaccionando con los baséfilos Geucoctes fagoctics) en la sangre y con las eéluas secretoras de histamina Uamadas mastocitas que estén ampliamente distribuidas por los tejidos. Esta inmuno- ‘lobulia se une por su regidn Fe a receptores Fe spec {cos de los basflos ode ls mastocitos.De esta manera, 1a Ig actia como ura especie de receptor del antigeno. La unin del antigeno induce la secrecién por parte de las Célula de histamina y otras aminas bilégicamente act- ‘zs que provocan dilation y aumento dela permeabli- ad do los vasos sanguineos. Se eree que estos efectos Sobre los vasos sanguineos sirven par facilitar el despla- zamiento de las células y proteinas del sistema inmmune hacia los lugares de inflamaciin, También provocan los sintomas normalmerte asociados con las alergia. El polen y otros alergenos son reconocidos como extraftos, desencadenando una respuesta del sistema inmune que, ‘ormalmente, se reserva para los patigenos. Los anticuerpos se unen fuertemente y de manera cespeciia al antigeno a eapecificida de unin de un anticuerpo viene determi ‘ada por los residuos aminoscids de los dominios vara bles de sus cadenas pesada y ligera. Muchos residuos de ‘estos dominios son variables, aunque no en la misma ‘medida. Algunos, principalmente aquellos que recubren cl sitio de fijacién del antigeno, son hipervariables (especial- ‘mente prociives a la variacién). La especificidad se debe Ja complementariedad quimica entre el antigeno y su sitio de fijaci6n espectfico, en términos de forma y localizacién de grupos cargados, apolaresy formadores de puentes de Idrégeno. Por ejemolo, un sito de fackin con un grupo cargado negativamente puede unir un antigeno con una carga postva en la posicion coriplementaria En rauchos ‘casos ls complementaredad se consigue de modo interae- tivo gracias a que las estructuras del antigenoy del sto de fijacién se influyen mutuamente durante la aproximacién del ligando, A continuacin, cambios conformacionales en