Protocolo de extracción para Saccharomyces cerevisiae.

1. Preparación de la muestra
 Como material de muestra puede utilizarse hasta aproximadamente 40 mg de peso
húmedo del microorganismo.
 Añadir 100 μL de Solución buffer BE y resuspender las células.

2. Lisis celular
 Transferir la suspensión celular al tubo NucleoSpin® Tipo B (suministrado).
 Añadir 40 μL de Buffer MG.
 Añadir 10 μL de Proteínasa k
 Centrifugar a 12 min

3. Ajuste de las condiciones del ADN

 Añadir 600 μL de buffer MG
 Mezclar en, vortex durante 3 s
 Centrifugar durante 30 s a 11.000 x g.
Nota: Los Glass beads deben ser resuspendidos; algunos residuos de pellets (restos
celulares) pueden quedar en el fondo del tubo.

4. Unión del ADN

 Transferir el sobrenadante ~500-600 μL dentro NucleoSpin® Microbial DNA Column
colocado en un Tubo de recogida de 2 mL (suministrado).
 Centrifugar durante 30 s a 11.000 x g. Desechar el tubo de recogida con el flujo.
 Colocar la columna en un nuevo tubo de recogida (2 mL, suministrado).

5. Lavado de la membrana de sílice

1er lavado

 Añadir 500 μL de Buffer BW.

  Centrifugar durante 30 s a 11.000 x g.
 Deseche el flujo y coloque la columna en el tubo de recogida.

2º lavado
 Añadir 500 μL de Buffer B5 a la columna y centrifugar durante 30 s a 11.000 x g.
 Deseche el flujo y coloque la columna de nuevo en el tubo de recogida.

6. Secado de la membrana de sílice

 Centrifugar la columna durante 30 s a 11.000 x g.
Nota: El tampón de lavado residual se elimina en este paso.

7. ADN de alta pureza

 Coloque la columna de ADN microbiano NucleoSpin® en un tubo de 1,5 mL libre
de nucleasas (no suministrado)
 añada 100 μL de Buffer BE en la columna.
 Incubar a temperatura durante 1 minuto.
 Centrifugar 30 s a 11.000 x g.
Para procedimientos de elución alternativos, véase la sección 2.5

Sección 2.5

 Procedimientos de elución

Además del método estándar, son posibles varias modificaciones para aumentar el
rendimiento y la concentración

 Elución estándar: se puede realizar mediante la adición de 100 μL de buffer de

elución en la columna.
 Alto rendimiento: Dos eluciones en serie de 100 μL cada una para un volumen
total de elución de 200 μL.
 Alta concentración: Utilizar 100 μL de eluido inicial para la segunda elución - 100
μL de volumen de elución, 2 eluciones.