Capitulo 2: examen basico 2.1 Introduccién 2.2 Esquema temporal del examen basico del semen, 12 2.3 Procecimientos prevos al examen 3 oe 24 Procedimientos de examen y post examen 15 a; 255 Informacién adicionaly comentarios. 6 Ba Los exdmanes blossom aquelos que se experaqueresice cualquier lbortori que Investig eaculads humanos. as enka deserts aut etn seh para proporonar ts mejor combinacin de ms aa confabéed yl eecuctn més précis, aunque puede rr haber tcas aeratnasconresuadossmaresesimpeatv que seulcen métodos a ‘comparables para lagrar la estandarzacin clinica y centica. Este enfoque properciona la base iL tral der adecuedo dla dancers del eatade productive mec gz Todos los aspectos de la recoleccién y el examen de la a2 8 eyaculacién deben evaluarse utilizando procedimientos estandarizados adecuados para que los resultados brinden informacién confiable. 2.1 Introduccién mcanrase cone mayors des 2s sereions corpraesexaminadas con ines de dagnéstico © sesuiminto del ratamieno In gece es ua merc heterogénes de sececones que no eit entra del cuerpo antes de ser expuads, Feyaculdo se produce a paride una surpenssn concanrade de espermatozids, macenados en ls epdiinos erpareados, mezdados aludos ‘brncpalmente cone auido prose ena uetra, egudo del vacado dea secret dl ‘vesiclsseminles.121 Pola tanta, ls taciones secvencles delejaclade no esténiguslmene ‘compuests Ls comparacin del volumen de eyaulo ates y después def vasectomia evla que aproximadarnence e 90% el volumen etd compuesto por sereions des drganas acceso (4) Pinciplmetetpréstata yas vesicles serials, con conibuconesmenares dees hindus g uur de Conpe ys pio : La sal ee dos ator usable principals * etmamar de espermataridesrta a roducén de esperntsz0es por bs esuls permeabica desist de conducts posestileres, aca es cntacones del mst i enpenal sears urcrsylaefiiencia eke y de eyaculscén pars expulsar uns eyacuacén ria en espermatozoides. Estes times aspects seven afetados por la exctacién sexual duracén {yeas y se efectdan a través de seas nervosa as cus del mise is vasa deferens, indus, ester de a veliga urnara. as! como als cua del miscul Iso {que contol el fj de sangre que entra y sale del uerpoarécl-tedos del pene, ylos risculosestriados bubocavernoses y perineaes + Elvolumen de guide aportado por las diversas gléndulas accesoria.efeja lo actividad secretora de as elindulas yas siguentescontraccones del méscul so que vaca cada linda, Estas aetvdades sn respuesas aa estimlacion nervosa auténoma provocada or excacion sexual y come preparacin para la eyaculacn, La naturatera dels espermatezoides (Su vtalsed, melded y morfolgi} ya compasicién de los fludos cel eyaulado también son importantes para la funcibnespermitica, Sin embargo, fest dferenciassignicativas con respecto ala expasiién dels espermatozoldes als fhuideseyacuatoriosentelastuaciénin vio yla que acure in vitro. Como resultado de bs relacones seuss, es probable que a accién prosttea inca ics en spermatorides dla eyoeulsén ene a contacto con el mace cervical que se extiende aca ‘vagina (15h ningn contacto sgnfistuo con el resto delejaculad. Po leona, en ntorne Ge bborzario, tod le eycuacén se recogeen un repent, donde ls espermatozldesqueéan _2eapados en un gal dsarolado apart de proteinase orgen vesicular serial. Invi, este ge se smelaldad1. 1618, [et alguna evidenia de que el vlumen totaly el contnid de espetmatzoides de os eyaclados ‘arian seg as cunsancias en as ge se produt el eyaculido. os eyaculaos produeidos pa ‘masturbacidn yeclectades en reiplentes en una habacin cerans a abortario pueden results ‘en un rendimieno menor que ls reuperades dees condones ne espermidasuzados dances relacones seals ene hogar19} ta diferencia puede refljarun nvely una drain eretes dea exctacin semua ya que el empo desiado a produc una muestra mediante a masturbacidn también infuy en elvolumenyel conceide dela eyacladn (20h tn determina canscons de acgis Inscaractercs claude desensen deface ae rormatmene nse puesen moda como I producen de espermatezoises po arte dees ests Bs les tevares (espelente fees) asicme te fetes ‘ame anetnenci de eyo, que debentenrse en curs restradoryconierador en inert de estos Los esutados deus meticions de lnboraore dela avatars del eyaclado dependerén deo + siserecteta una eyaculcn completa, Durante eyaulaén as primera acciones expueasas son pencplment ides prosios kos en espermatrcids, mientras que is freccones posteires ein dominadss po Mudo vesicular seminal (13 Porlo tant, peer primers poraisn rca en esperma) de eyaclecisn ene ms nfuence eos resultados del iss que ere la tin porn aac desis seals aceseras, asides je bs espermatonses epaidiaros “ancentzads ana jaan 21 Pr ott, la canerracn se espermatoclées noe uns me areca de produc deespermataode teats y ue enters 2a incaramans {ea secrecn de ov95 egans. nero oa de espermaowigeseacuaosconenacioa se ‘speimteroies mtipad or lumen de seme es, por atau mej elle dee apace roducin de cpermstaode.22) Pt slemplo as oncrracones de espermateoies >penal seypurdy'e pe openuea 2 Capitulo 2: Examen bésico eyacine homers vne Funan seams, pete elnino expense on ea aires eau eben + tl vempo entre la eyaclacién examinada ylaeyacuecién anterior mas reciente erode de abstinendaeyaculatoria."vempe de abstinencia, a veces denominad menos specieament abstinenca sexuah Los espermatozoldes se acymulan en fs epiicimes hasta que estin lens, lego se desbordan hacsl uretay se elminan en le orna./24 25 Come ls epiisimes nunca se vacan por completo con una eyaculacién/24, quedan algunos spermatozoides del momento e a eyacuacén aneror. Fst infuye en elrango de edad y Calidad de os espermatozsids ene eyaculado (26 La valid ya cromatina de los espermatozoides nose ven afecades por una mayor duracén dela abstinencia(27, 25.2 ‘menos que a funn del epdidina est alterada29} Ademés,exensos estuis para determinar la productin cara de espermatozodes han inside que se neces de 23 das de eyaclacones dlarias para agar el almacenamento de espermatozoldes en el epiaidimo (30,371. a recomendacén, basada enlaexpetienca dea, de ped alos hombres que recojan el evacuate para examinaro después de un pevioga de 237s de abstinenca puede contribu af varlabldad y aun limite indstinto entre esutados normale ysusértls. l aleance deextainluencia es fil de determinary ara ver se considera + etamaro ds tests que nye en cntad otal de espermatozaées produ por iy, porte ‘ano, recameseen predating aude 3254) eamato escape wel de cape eperetapiiesquetenbin et elacond an a oreo de os xpermateien38, + Eade endocrino(26) + Medieamentor que el hombre ex mando, Por jmp ltanspare de espermatooides dese los eidimoshasala urea depende e a actvacién delos receptors af en bs cls del sci Ks de os conducts deferens watanent can bloqueadars lf tbmaces snthipertensorytratamiete comic de la hyperrofa posta antdepresivor Inhbidores elects de a recpsacion de serotonin S85 (p. 6, servalna uoxen, _airptina) pueden inhi la atid del conduct deferente 74 amin vacado de glndulas + Suplementos © medicamentos ne recetades como ls esteroides anabélees tos factors variable yen gran media incontolabescontibuyen la conodda varia en la composcn del semen entre ls indidos.28, 29h iste evidencia de que ls resultados de un solo examen de eyacuacién son suficientes para decd os pasos posteriores de una investigaién de inferiised del hombre (3 Por oto las, para defn una linea de base exacta para un ndviduo, puede ser necesaro examinar dos 0 tres eyaculadoe/40-44 Sibien las mesicionesrealaadas sobre toda a poblacén de espermatozoides eyaculados no pueden defini a capacidad fecundante de es pocos que legan allugar dela fecundacén, el andi del eyaulade proporionainformacin esencal sobre al estado funcional dels frganos reproductivos el individ, Todos los aspects de fnrecleccény el examen dea cyaculacién debenevaluarse mediante procedimientesestandarzadesadecuados se desea que les resultados brinden informacisnconfiable es dei, vida y it Los métodas4 z seypurdy'e pe openuea 2 esos en etapa son procedmentes acepados que consents ass esencales eno 2.2 Esquema temporal del examen basico del semen Elexamen de semen bisic implica ossiguientes pasos (que se desriven en etalle en tos scones siguientes 46) 2.2.1 Preparativos - Procedimientos previos al examen Los procedimiet de prexaen omprende: Por razonespricticas,esconveniente determina el vlumen de le muestr2 mediante el pesale Aurantela fase previa al examen, * beje tempo para que ocuralaleuetacén(generalnence no mis de 30 minutos) 2.2.2 Procedimientos de examen Los procedimientas para el examen del eyaclado se dviden entre la evaluaién quero puede reerasarse sn resgo de nteucisn de anomalasineiidas por aboratarieyaquellas que eden realiarse ms tarde sin ceno riesgo. Esto permite que el bboratone orgie un jo de trabajo efilente sin poner en peligro la caldad del examen 2221 Entre 30y 60 minutos después de lo recoleccién del eyaculado + Evaluarla icuefaccién y el aspecto macroscépico del semen. sae eur pcs valance de espstonses + taal pl delsemen eth inseados + calur nated debs espematnades sel cone ects meses4 z seypurdy'e pe openuea 2 Capitulo 2: Examen bésico elie ots pra elu amor dels espermataadesy otic le * feats ruta de reacin de abut ma MAR para antcurpos nespmaonies (es recess + ftuara presencia de tues lecodaias (ences * cenvtugartasauota de semen se van a anatzar marcacores bioqumicos) + enviar muestra al laborstorlo de mlcoblologi (ls requlers 2.22.3 Més tarde, e1 mismo dia 0 en un dia posterior * Andlss boquimin de marcadores de glinduls accesories fopiona 2.23 Procedimients posteriores al examen + Calculos 2.3 Procedimientos previos al examen fst secon deste tae les pases neces artes de que puedan coment les ans eles 2:31 Informacién del paclente + Elhombre debe recibir instrucciones claras escrtas y habladas con respecte ala recoleccién de la muestra de semen, El médico debe dar la misma informacién al paciente, + La acomendaeisn principal ea recolccién de eyaculsein por masturbacién. No se + recomienda elcotus interruptus y ole debe urarse en casos excepconales debe al riesgo de recolecén incompleta y contaminacén con fdas y clus vaginas. * Los condones especiales para estutios 6 fertidad pueden ser una aernativa en cireunsancias excepcionales, perola eyacclecién completa no estaré disponible para su examen yes probable que la muestra est contaminada por el contacto con la pil del pene y,encerta medi, también con el id vaginal y as clas de pene. elesterior del presenvatvo, Nos pueden usar condones ansconeeptivos debido a a4 z seypurdy'e pe openuea 2 presenca de agentes espermicids. Los condones de ites ordinaroe no deben sare para la ‘ecolecin de sere porque contenen agentes qu inefieren con lami os sspermatorodes (471 * Sedeben evar lslubricantes,ya que pueden contamina el eyacuado y cambiar sus propiedades. sis absoltamente necesaro, se debenutllzar lubricants no espermatotéicos valdades. + Lzeyactain debe rectectrse por comple yelhombredebeinformar cualquier pide de ‘alge actin de la esta El eyaculado debe recogerse tras un minimo de 2 dias y un maximo de 7 das de abstinencia eyaculatora Pars evar exposcén del semen fatuacones determperaturay controll empo etre la recolecibny lands, se recomvenda que le muestra sea recoletadaen una haadn privada ‘ercanaallaboratte [ealments, as vestgudonesdebencomenzar de de os 30 mites posteroes nrecslecén, para sl menos dentro deb 6 minus ruse dese or eo de 20 Cr pared 37° + Sel paciente por alguna razén debe recolecar a eyaculacin en otro lugar, ‘ontenedor dela muestra debe manteneise cerca del cuerpo debaj de laropa, por ‘empla, en a ala, dorante el transporte debe entregarse a laboraterio preferblemente dentro de los 30 minutos posterieres ala recolecién.y al menos no ‘més de 50 minutos después de la recolecién, 23.2 Recogida de muestras + Antes ds eclecn el eyaculoo, el releme de fr muesia debe mantenese a temperatura ambient, enre 20°C 37 para els grandes cambio de temperatura que puedanafecara los espermatroides, + Erreciplente de la muestra debe ser un recipiente de plstco limpio y de boca anch, de un lte que se haya confirmade que no es téxico para los espermatozoides (Seccién 25.10 en la pagina 67, * ehomtenede de mats, as ome ashes deatejo manus covesponeenes, De et 2 posterior manpubcnliminen el ego decnfurin Ge rest hoe de ras Lor requrser Inga para tos marcadores eden ae contandoresputden ster: Powa ser elnombvey + Lagulente nformacisn dee registrarse ena receplén se a muestray presentarse en el Informe fal Seccién&5 en la pagina 233) * enn dl homo (por gmp nombre, ee de naiemay nme de cig personae + elperiodo de abstinencaeyaculatria previ + la fecha y hora de recogida4 z seypurdy'e pe openuea 2 Capitulo 2: Examen bésico * laintegridad de la muestra y cualquier difultad para producir la muestra (por ‘ejemplo, sila recoleccin no se reali en el labersteric:y + Seapcan oncone opel paren tudo emp + colecién estén para reproduceén assis o crlealmacenamieno(Seccin 2.1 en Ia pégina 68) + colecién estén para anlisis mieroboligieos (Seecién 25.12.en la pagina 68 + El eyaculade recogido debe dejarselicuar sin demora innecesari,preferiblemente en tna incubsdora a 37°Cy,sies posible, en una pataforma de mezcla orbital, para facta la icuefacciény la mezela de a muestra, + F1vempo entre a recoleceéin el ino del examen del eyaculade debe reistrorse a ino des evaluseiin macrosedpcaypresentrse en elinfrme fina. Preferiblemente a cevaluaion debe comenzar dentro de os 30 minutos postrires al recleccén ynomas de 50 minutos despues dela recleccién. * Laexposicén in vitro prolongads a iqudo de eyaculacin levado afectars cualidodes comola metildadyla morfoogia, * Les yaad pesencontenraentsinecoses plone (pe. viv delamunodecerca barana il vis dela hepa ess el eres simaey, portato, eben wate cmon ebro olin Petes de seguridad coma se deserseenteciin 82 en appa 214 debe segue ‘srr: a bens rhc de aberator so undrbenls ral seg dl nora “a, 2.4 Procedimientos de examen y post examen 2.4. Evaluacién del volumen del eyaculado La medilén preesa del volumen es esencal en cualquier evaluaién de la eyaclacén porque bind infermacin sobre las funcones secretoras de ls lindas Seales aun. ‘También es necesaria uns evluncén confible de volumen de eyaculado para ear numer total de espermatezedes, el nimero total de clues no espermatics en el eyaculadoy lag canidades totals de marcadoresbioquicos. 24.1.1 Volumen por peso Elvolumen se mide mejor pesandola muestra en el recipient en elque se ha recog. Esto se puede hacer preferblemente ena recepcisn del recpiente de eyaculacién antes de le Ineubacién paral licuetaceién. Oves metodesntreducen una mayer imprecién (Cooper et al, 2007,penal seypurdy'e pe openuea 2 Use un reciplentepreviamente pesado pars recoectar la eysculcién, con el peso anctade en recipient y la tapa, Losrecipentes de muestrasvaciossuelen tener diferentes pesos, or lo que cada reciente con tapa debe pasarseprevamente deforma individual. peso debe anotarse en el recipient yu apa con un retulador permanente anes de diselo al paciente Sse uilzan eiquetas, por ejemplo, para marcadores de senidad su peso debe incuirse en peso vaci, Los relents estes no deber‘anrequeny no requeren, apertura pare 2. Pese l vaso conta eyaculacign en 3, Reste e| peso del contenedor vacio. 4. Caleularelvolumen a pari del peso de la muestra, suponiendo que la densicad del ‘semen sea de 1 g/ml (Auger eta, 1995).(Seha informado que la densidad del semen varia entre 1,03 1,04 gimlv49} 1.00 1,01 g/ml(50)y una media de 1,01 g/ml/51h 2.4.2 Evaluacién macroscépica 1a ealuain macroscpiacomprende una serie de observaciones importantes que tal vez0Se2 posible evluar en un valor numba exaeto Po le ano, conta mestante métosos cvantathor rascals. ere que in pueden tener una gren importance 2.4.2.1 Aspecto macroscépico del eyaculado Un eyaudotieaado nora ane un apecte maroscbpamenehemogénes,clemalgrs= palescente Puede parecer menos zpaca sila concentra de espetmatroides 3 muy baa el cle también pede er diferent, e dee. ieramente amartena dexpuésdetiempor de abstnenla mds prolengades, marin rojzo cuando hay lébulos ros herospermia) © amano mis dare en un pacente con itera o que toma Gertas Varina o medicaments 5a eyaacon parece ous, totalmente ra ¢inolera,entances puede st preeyauacin ieameste debs indus de Cowper que los hombres producen en contidaces variables durateln exci en ext escenario, esta debe dscatise cone padente para establece se produjo una eyaculacnasociad al 242.2 Licuefaccion Inmediaamente después de eyaclaion an elrectlante de recolecai eae sel ser una ase coaguada seize o una masa sar aun gel Porla general, eyaculain conenas 8 leurs verse mss delgada) en unos pocos minutos a temperatra ambiente, momente ene que se verb una meses eterogénea de grumos smssidos en quso. Amesiés que conta Ik leuetacan el eyaculao se wel mas homegéneoy mis 2cso pero ain con na vscosidad ms sha que el agua. En ls eapes rales de a ueacclin slo quedan ques reas de caogulacn na temperatura de 37°C facta a eveacién,Ademés, un movimiento lento gata del recent de ls muestia ayudar a que se complete la leuefcibn. Sin se iia una bandeja ml (onezcdor oa surant shure, es esencal que el recipene se age lentamente durante 15830 segundos anes de comencarla evahacion macroscipica dela euetaccin,4 z seypurdy'e pe openuea 2 Capitulo 2: Examen bésico La euefaccdn compet de a eyeeuacénnormalene se lpr en 15.430 minutos a temperatura + Silaticuetacci6n nose completa en 30 minutos esto debe registrarse y anotarse en el Informe final. Luego, el eyaculade pocria dejarse 237 °C durante otros 30 minutes. Sita cuefaceién no se completa desputs de 60 minutos, esto también dede incurs ene Informe fi Los eysculados euados narmales pueden contene algunas grinulos gelatinesos(verpos aelatinosos) que no se leuany no parecen tener ningtin significado clinic, Sin embargo, presencia de hebras de maco puede interfer con el examen dela eyaculacény, porla tanto, debe anotarseen el informe fa is ofrmacsn sobreeonlomas de luetaccdnse proprcionenla ime pate aeeste captule. 242.3 Viscosiaod de eyacuisdo Derput es teeter loess elaycla puede nro eps teres en una ee desechase de listo de calare ancy fproxinademene 1 mn de dda} vereada ero no ‘sca par es espermatoritesy ses ness, esti permiende ae esemen cigs por ofvededy ‘osenande along ager lo. Un eyaculad Ieuado normal cae come pequeRasgotas cseretas. Sila vistosidad es anormal I gots formars un Plo de mas de 2 em de large. 2424 Olor del eyaculado iste una varia considerable ena capacida de diferentes indivi para perc el olor normal de una eyaculcién humana.) La iformacién sobre un fuerte olor rina 9 putretacclén puede tener imporcancia dia; por lo tanto es importance sehalaresto ene Informe, 24250h: syaclade LipHenla eyaculacién depende dea contribuién relatva ce la serecin protiia Scid ya secrecin vesicular seminal aealina. Enel eyaculado no enste un control etcar dep del ido. Invitro, hab una prada continua de CO que prowoca un aumente gry dep 1 interés enka del pH del eyaculado es un vor Bao, le va a evluar el pH, debe hacerse en un ergo uniforme, preferiblemente 30 minutos después de a recolecién, pero en cualquier as, dentro dela hora dela eyaculaisn ramus armas se debe sr tes de phe depen elrango de 604100, |. aezet bana ec sen 2.para un gta de semen unormerent sobre aes 5. Esperara que se homogenece l color de [a zona impregrada (< 30 segundos). 4. Compare el color con a tira de calibracién para leer el pHpenal sears 2.4.3 Preparacién para la investigacién microscépica Para obtener resultados fables de a investigaion micoseépia, es esencial que ls alevotas cexaminadas sean representatvs de todo el eyaculad. La naturaleza del eyaculadolicuado, que an es ms viscoso que el agua, hace que tomar una muestra representatva de semen para su andlisis sea may problemtic, Sila muestra no esta bien mezehda, es poco probable que el anise dos alicuotas separadas sea representative de toga el eyaclado y puede mostrar marcas diferencias en la concentacin, motihdad, vtaldad y morfologia de los spermatozoides. incluso se eyseuledo Fuad es macrosedpicamente homagénco,pequehas alicuotas pueden tener una composiién muy diferent Ames de eta una aluota de semen pra cunlguer eased, mezele ies a muestra en el recent ginal, ero no tan wgorosamente que se ceen burbs de sie, La mel epee lograrcolcand el recpense de s mesa enuns bandeia ml surant suefecin en uns Incubedora 237°C En ausenca de un mezcladr orbital se padi lograr una msc bésie con oximosamente 15230 segundos de agit manus Seecin 24.22 ena pina 16, 2.43.2 Muestreo representativo ‘Aunque macrscépleament os eyaeuladoslevados pueden parecer completamente homogénes todavia pede haber compartimentesSequehios peo signtatios con ferentecomposcién de ssermay secreciones. orto tant, e seri: La comaracién de dchasaleuotasreetisa es necesrla pars reducielriesgo de erores abide un muesre0 no representatvo. Los métados de comparacién se destriben en cada téeniea de eval’, Inmediotmentedespus de que el eaculado se haya mercado corecamente(Secdn 2431) rete volumen apropado sn dejar tempo para que os expermatozodes se asiencen fuera de ls suspen, Sempre wala ment muesra de semen antes de eta alivots dupliadas Se deben realzarevaluacones de motlidad repleadas en dos preparaiones hurnedas diferentes, en preparaaas(vePrincipies de preparacién himede ena piginaE5para al onde). Glogster mes 0 lene erases emioscope Ine ue preerlerente et + Teng cade de evita ormacin yl arapamiers de burs dare ene eeubreodesy a1 pacts,penal seypurdy'e pe openuea 2 Capitulo 2: Examen bésico 2, Colaque un eubreebjetos de 22 mm x22 mm dejindole caer cn cudado horaontalmente sobre la goa. Fl peso del cubreobjetosesparce a muesta (as que use un eubreobjetes de peso eta 2. valle la preparacin himeds rec hecha tan pronto coma el contenido ya no $8 desplace 2.4.4 Evaluacién bajo el microscopio Esnecesro un mirosope pio equpado con 6p Se contasce de fase pars todos exémenes de preparazonesno eda de semen resco (Seeén 83 en phigina 22% para saber emo centgurar un merosopio} 2.4.4.1 Bajo aumento Un examen mieroseépe nicl dela aieuota de eyoculacin implica escanear la preparacn onun aumento total de »100 es deer, una ombinzelén de un ene objetivo x10 eon un xa x10, Esto proporiona una wisi general de la muesa para ela os expermatazies estén 200 >800 1:50 (1 +49) 50 2450 a; 40-200 160-800 1:20(0+18) 50 950 ai ae 16-40 64-160 1:10 (1+9) 50 450 245 8-64 45044) 50 200 <2 <8 a2a+9 100 4100 a3 Le 2.4.44 Fador para diuir alleuotas de eyaculado FI Prepace. por ejeme, 7 ro de una solucén acwosa que contenga bicarbonate de sod 0.595 My {exes sprosimadarnents 14M elgse solueén guise formalehid se denorina fermalina Lx eancentraeén fia de formalin es una dima pare dels utzad en bo boratror de paolo tologi. E cmparacén con a statin en dcroslboratoros, In evaporacién de feutina delaspreporaciones de ln cdma de ante es extreadamnente bla Sedebensegu ls : rms bale sobre ol manso e foratina, eres probable qe emg en camoanas de a3 ‘ntl se obiatoro sole para reparacén se hsslucén madre de bos concen. i i | beh 809 3 bearsanato desc aHCO en sprgemaomente 50 mde aa desta agregue 10 ml de solucén de formalde a 36-4 6 apreque agua hasta un velumen fina de 2 Silo desea, greque 259 de azul rip nde de olor 2885805 ml de welea de gencana soturada >A maine de olor 42555) para resatar ns caberas de os espermatezidesy facta bcrga adecuad de is cbmaras de reeset, : g e60i sears Micrografias cortesia de . Brasil Capitulo 2: Examen bésico carga en elemoctémetre, Deben mezelarse al menos SO de semen conf soluion sbluyente par garantzar una representatwidad confab un volumen de suspension suite para una mezca completa dela muestra (se puede agar en vSrtex desputs dela ‘acén. La diucén apropiada se estima en el examen microscépio inca "ie une peta de desplaramiete eae para dspensar camo adecuads de fader on doe ales dtl, 5. Use wna ipta ce esplazamient est para tomar va olumen exacted semen pra si, 4.timpie elsemen delesterior dela punta de pipet, teiendo cid dno tcar bs abersra dela Punta. Asogrese de que no nya bbs eae on punta de pipet ‘5. Dispense el semen ene adoryenjuague la punta del pipetaaspirande y exprimiende el ‘ador. Retire 1a punta de pipeta con elémbole completamente presionado y age a dic inmeelatamente para reduce riesgo de formacion de precptados visbles que arian que las evaluaiones no fueran confables. ‘6 Mezceblen I muestra de semen uevamentey prepare la dlucén replada sguiendo ls pases 2446 Evaluacisn dels acurmulacion de espera Hay dos tipes diferentes de alutinacisn de espermatezeides que es esencal evalua por separa Laadherencia de espermatoreidesinméuiles entre sf0 de espermatoroides méviles ahebras de mace éulas no espermsccasodesechos se define como agregacén no expec (Fi, 2, Fig. 2. Agregacin no especica de ezpermatozoides en el emen sas de espermatozodes agregadas con una cll eitelal (a) Sesechos fo) 0 espermatozodes, 3) oOe etal (1976) con permiso.penal sears Capitulo 2: Examen bésico 2.45 tlementoscelulares alstintes de os espermatozoides Heya comiene cls dss delosespermatoroies, algunas de scales pueden ser liveamentereleventes Esto inlyen ctu epee del trace gentourinai, al como fucoetos yells geranalesinmaduras, ls dos ukimas derominadascoleevamente clus esondas"(S32 Sin embargo noes pesibeditnguir nt coos y cule germinal inaduas con un ao rade de certera(S4medant examen de un fri tedo can in aumenta de * 100 verigura 2.16.0n la pigina 63Figura 2.17 ena pagina 70 Secién 3.7 enla pagina 18). Ora éenicas pars ‘dential intamatrias actos se dese en Secl6n 2 en la pigina 16). Ello cco estas prcbas noes cata oro gue na existen Intesbasodos ena vider (5.57, Ver tamblénseceén 248 ents pgina 28 rte dees xpermatries et reliontdo con teats bres 60 1 ‘one muti kande ena tia espermateoies ono acu por lparcetse de cess rogresvarente dies, Los made de vaio de motidad ue nvlran lands de expen sso ot computador (CAS se deseben enfecel6n 41 ena pina 15 Hora de moti Sits Vevefaccién del eyauldo se compra dentro de bs 30 minutos, entonces se deben nabs Investigaciones. caso de elon ncomoltadespuds de 30 minutes, el ejaculae se puede sare a ineubadara 837°C dante rs 30 mintosy luego se deen nas ivestigecones, La infrmacibn sobre eretaro a fla ela evefscén debe anotrse a informe, Level oe ls espermetozodes mils depend ela erperur. Polo tnt, es esencal standart la temperatura dante la vale de moti. A menudo e més el entot una temperatura sma sstemperatra corporal, pero exo requlere que el meroscopin este ‘euipado con una pina de objeto de temperatura conoada,quelessentacbeosycabreobjeos sel merescopioesin precilentados,y que a muestra también se alent 237°C anes dela ‘vols. Estor agpectos se cumpen flmentecusneo fs mesa se us enna ineubaors 337 “C Usarle temperatura amiente es mis problemi, Sobre odo porque temperatura ambiente noes defini yoo tanto, puede vata sustandaiment Eluso de una reicula ocular con rela (Figura 2.3 en la pagina 25} para faciitar la dlliitacign del rea evaluada. Esto es muy len muestras con un alte namera de espermatozoides en cada campo, Comience sempre a ecanear varios cmpossinconar pra obtener una inpresn de qt tan bien nibs etn os eapermatocedes, Eto se pute hacercon un aumento ms bao (10 200 aumento ota vice evalua eas cercanas(< mm) al borde del cubrecbetos para evtararefactos de secade que afecten a evaluacin dela matiidad Le dlecdn de campo debe ser aletoria: ete elegr campos bsados ene ncmero de espermatorides onservades Escanee la iaposiva stemiticamente para evar ver repetidamente [a misma Srea.Se eben evalua al menos 5 campos aiferentas, indus sse han cantado mis de 200 espermatozoides en menas de 5 camps.penal sears * Gutiele ote desoces es espermstozeides cert dun bee defini cel camp, Seleccone parte ‘alo ts superior de eases ss concentra de eparstozsde a pure os xa concerracién de espematozies eb. + cuenessremsecamente, comenrands can ls espermatorldes de progresién rps y lot para ‘evar sobrestimar ol nim de espermstooiesprosresr, bjt es conar todos Toe “espermatoasidesprogresvamene mévils ena seccin de cusdriul al instante; eve también ‘contr aquelos que adn hei seen de parila ramets puntuscibn. Coun segundo recuert, se venta los expermatozokes na progresives ends que quedon devo de fa secaiin de cade + Fane sproximedomente 20 espermatozoies por pet ada réplia es una prepares harmed resc separad, * Sietogrun ent e200 eepetoraiser ante de que 8 hyan punta togoar nteserae de ‘edad de nes, cose doe cominuar mali de i 209 exprmatxsiaes asa que thyan ‘ontato ede as alegre eps hac alegre mead puruata pinto + compare lovaloresrepliados para verse son acetabernence creas. Ses proceds con los clubs sino, prepare nuevas muestra. Sites conjuntosderpias no han dad resultados aceptasiemente creas, da como tesltaso un promedi de sss evalusones, cn un “comentario n elinforme de qu lero esl promedie de evsiaconssaente variables (fo. que nies I ncersdumre nasal que podria ser el esukado. resultado dealewtas incongruenes, + Par eval stun de problemas de motes, constesecén 7.103 ena pga 207, 2.4651 Categorias de movimiento de esperma Lo dstoe nico ds evalacn manusl des motlas delosespermatez.de el anil de sermatorides asso por computadora demuestran qu a idencactn ds expermatoreides ‘Spidamente progresios es mportante/12, 61:70} Pa otaro, ls etegarisrecamendaaas son (ean Ties velocidad aproximados): "ipaamente progres 53m) espermataodes que se mueven stuart, yes Fnesinentes en ‘eta ond dea oe en un equ puto tal de slnanos 25 ono Ionsment pregesio (52 <25 ys espermatarades mavéndose seamen, yes Inelnente 6h ran creo, ebrendo una dsc, dese puro nc hast el puro fal dea «25 un oat menos une longitu de abers a menos dea itd dea longd dela cola nun segue ne progresiv (5 pms) todos ls dems patrones de movimients atvos dela cola con ausencia de progres - es dec, nadarencirculos pequefos la fuer lagelr desplaza cabeza menos de 5 um une longtud de cabeza), desde punto de partida hasta el punto finaby7 seypurdy'e pe openuea 2 Capitulo 2: Examen bésico 2.4.6.2 Comparacién de réplicas y céiculo de resultados Caleule las proporciones (8) de las cuatro eategorias de metildad pare las dos répicas por separado y las proparciones de progresiva y mul Luego calcule el promedio de las dos éplicas para el grupo dominante(inmévilo mei. Calcular la diferencia entre las réplicas del grupo dominante, Determine [a aceptablidad de a diferencia deTabla 2.2 en la pigina 262 diferencia Iméxima entre dos porcentajes que se espera que ocutra en e1 95% de las muestras debice a cauzasaleatorias. Sila diferencia es mayor que el valor de la tabla, hay menos el 5% de probabilidad de que la diferencia se deba acausas aeatoras. Sila diferencia entre los porcentaes es aceptabl, informe el porcentaje promedio para {ada grado de motildad: (2) progresivarSpida (b) lento progresivo; () no progresvo (@)inméul Sa diferencia es demasiado aka, tome dos nuevas alcuotas de la mu de semen, haga dos nuevas preparaciones yrepita la evaluacién, Silas réplicascitferen més de a eiferenciaaceptable [a evaluacién no debe repetirse és de dos veces. Se puede dar camo resultado un resultado final del promedto de las Seis evaluaciones, junto con un comentario de que el resultado es incertodebido ala alta variablidad entre las evaluacionesrepetioa. Reporte el porcentaje promedio para cada grado de motiidad al némero entero més La suma de los cuatro grads dete ser 100. Si es 99.0 101, el valor del grupo masculine noes cbs y elem de abstinencia es breve, nimere de espermasoxdes ‘erralaciona on elvolamen testa 2 32 34 B79 portant es una meida de capaci de los tesvculs para produ espermatorides(# la permeabidad del aca masculine, potencalmert, el nimero oe espermstozids transeridos alahembra durante el cot Lu concentracin de espermatorldesen el eyacusdo, bien est relacionadas con as asa8 de {eriizciény emibarazo, et in lvenciaa porelvolumen delassecreciones des vesclas Seminales ys prétata,@3y noes una buena medida del funci testiculr. "trinsic desperate asa oun doh debe sre cnn se quer se eneentacin de perso (noneo pr ania devlerer4 z seypurdy'e pe openuea 2 Capitulo 2: Examen bésico + Ela la dlilucién mas apropiada del examen de la preparacién himeda (Seccién 2.4.43 en la pagina 20), + prepare ducanes mezclando volimanes exacts de eyaculad y fador (Tabla 2.4 en a gina 20 eccién 2.4.43 en la pégina 20, + Sisetama una alcuota de 0 ld semen con un pipes de despazamient postive, se altye sdecusdament, slo se neces hacer una aud (6, 5) Fs necesarie examina y comprar alewtas epcadas de a suspensén de sperm, + Prepararta cémara de recuento (hemocitsmet) * argue a cémara del hemoxitémetr9y jla en una cimara med para permit que los espermatozoies se aslenten en el fondo def cimara de recueto, + ale et numer de espermsossidesineneatrente deep de erated cara ined or ‘ert es negnves dele eaporacin dela mara de ever) + Cente at menos 200 espermatoroides por eépia * compare os recuetesrepeids para ver sson acepablemente ceranes. Se as poceda con Ibs clubs: sina, preparar mucus dcines + Caleular la concentracign en espermatezoldes por ml + Calelar elnamero de espermatozoides por eysculado. 2.4.8.2 EI hemocitémetro con regla de Neubauer mejorada Se recomlenda el uso de cimaras de hemactémetro con regla de Neubauer mejorada Los factores de livcdn para la cdmara de hemocitdmeteo de Neubauer mejorada se dan enSeccién 2.4.43 en la pagina 20. Se pueden usar otras cdmaras de hemecitémetro, pero si tienen diferentes patrones de cuadrculay areas, se requieren otros facrores de ‘dleulo. Los hemocitémetros desechables con regla de Neubauer deben ser validacos/86). Hnemocksmess de Neubauer mejorad one dos cSmaras de reeuentosepaads cada unadelor ‘cuales ene un patrn miroetpico de nese de cuss de 3 mm «3 mm grabado enh supertce vido. Se tis con un cubreobjees especialy arvso(gres0rn*& 0.4 mm, que se encueira bre us reilly ests ssteido pot llores de vir 1 mm (100 pm) por encima dl suelo eo cena. Cad res de cones se dude en muse evades Se 1mm mm, Se ard referers 2 ‘estas eucriauas con os numeros que se muestan en ie.25 Segin[adiucsny elnimero de espermataroides conades, se ulizan diferentes eas de lb ‘imara para determinar la concentraciin de espermatozoies,En general, a cvadricua central seule para conta. Las ocho cuadriclas periérieas se utlzan cuando se han contado menos 4 200 espermarorodes ena cuaereula enaManus dabei dee OS para el examen yprocsamieto de semen hur, Set ean Fig. 25 ELhemocitmetra con regla de Neubauer mejorada Isracn del rea inserts que muestra nee cusses enna cma de hemactimetre (pane zquiea, eis cata (Cy echo rile pete (a cuadiula corral const de 25 cusdradosorandes (pane cent y una mcrogratla de parte de una ciara lena (pane derecho), que muestra une dees 25 euarados dela cual cena cuadrade devo deun ceo ene panel cena delimitade por nea wes y ave ‘conten 16 eusiados mis pequets. Lat och cusdculas per‘ias nen elmimo tamara quel cussicls ental pera ls tamafiorynimeros ‘fe oereetingube mis pequetiosvarian, Con una pofundiad de 190 rn, cads una delas neve rails coin 109 Graficos y micrografiacortesta de L. Bjérndahl Prinepos pars contaren una reilla de hemoctémetro + Cente soles espermatozeidesentees (con caberay cla. + Sinay muenas cola de expermatouodes sin cabez (os lamadosexpermatozoides “eaveza dealer) o cabezas sin col, su presencia debe registrarse en elinforme. 3 con lo espermatoroides completo (por concentracin se puede estimaren rea ejemplo, 85 cos sin cabera por 100 espermatozsides "Sins eaberas de espeematroides con mis de una els son msde uno de ead ene (20 por 100 espermatozolées contade) se debe formar frecenda reat. Elimite de un cuadrade grande ests indicado por la lines media de los tres. 1 ehnecno de que un espermatozie se cuente oo est determina pola ubiacén de su ‘caer a rentacn de ucla no ex importa, + Se entan tds ls espermatoroides sn contact on slimes (meso de nea rl Uuncusérado grande 26 panel aqulrdo culos blancs -contados) * Selo e cuentan los expermatozedes en contacto con ls limites inferior nquerdo: no _aquells en contacto con slits superior derecho (Fg. 26 panel central: culos bancos -contados panel derecho: ieulos negros -contados) 5 i : eeo0 *5 i : Capitulo 2: Examen bésico Fg. 28 Qutespermatosdes eontaren los cuatads dele undies Elena de srs ness define ete del vara nes negra, pone quid Secuean todos Is espermatozoes devo del cura ‘central eeu blanco, Un esprmatozise con I cabeza en line meds se cuenta soos eles es line nfo aque del curd reves blanco, panel entra, pero no ses ain superior devecha del cuctado (cules nares, pane! derechd Microgratias cortesia de C, Brasil. 2.4.8.3 Preparacién y carga de las cémaras del hemocitémetro 1-Humedersligeramente supercede facén del ubreobeos del hemoctéretr (plas dela came, 2. Fee cubreabjetos en las cémaras de ecuentopresionSndole firmemente sobre os ples ee cdmara. La nascencis(mitplesanlles de Newton) entre las des superiies de vidro ‘confea a posit corecta del cubreobjtos. Cuantas mis Iineas, mejor sed elajuste; solo Ln 0 dos linea indian que ls superfiies de vidio no estin lo sufientemente cera y Provocarn una profundidad de cémara incorrect, Aseqirese de que el cubreobjetosexté bien sjetoy nose muevaaltocarlo suavemente con a punta de una pipet 2: Mezele bien primera lun aitando en viriex durante 15 segundos aa velocidad Para ear la sedimentacén ae os esprmatezedes, ett mesiaarante un volumen de la suspenién 3 sufiene para lena ads ere dbaje del cbreobets sobre una cémars de ecwento (normalments, pronmadarente 10 4. Toque con culdado le punta del pipeta contra elborde del cubreodjetos de una dels mara 5. resione lentamente el mbolo de a plpeta, permitendo quel cémar se lee por acién apilarEcubreobjetos ne debe moverse durante el lenado,ylacdmarano debe Hearse en ‘xceso ni por debs cuando eaite ocups parte del ies dea cima). lots Cargu a egund srs dl hroesintre equlendlor zor arteries. 7. Guarde el hemockémetro horzentalmene dane al menos 1-15 mines (pea peri a secimentacn omleta de os espermatozedes ea mara de 100 pm e profunddo) ‘temperatura ambiente en una mare Rimeda (en papel de fro satrado de agus en una placa de Pet cubierts para evar a desecacn,penal sears 2.48.4 Exausién del nimero de expormatoroldes nie cimarse de recente Fnmero de espermatercides debe evaluarse en ambas cimaras del hemectimero. Silos dos valores coneverdan sufeientemente, las aleuotas tomadas pueden considerarse represenatvas dela muestra (Seccién 2.4.3.2 en I pégina 18), Es importante recordar que a _aurencla de espermatoroides del alcucta examinads no signa nacesariamente que estén usentes del esto de eyaculado, 1. xamine el hemacisimetra con éptia de contrast de fase con un aumento de »200 0400 le tia dal microscopio la permite, oetvo es conta al menos 200 espermatozodes en cad epetidn, par lograr un ear de mutsteoacetablerente bajo Primero eva el evadrado grande superorzquerso an a cuadcla central dun lo a ‘chmara de Nevsaver mejrada Use este nimero para deci cudnos cuadraes grandes dea AO espeimetwides: conta ade a cube 25 euadrados grandest + sousespemsiasies! cantar Weundradon render > eb espematzedes: sper gem Scsguna yee. GO | rersececnenes 22 oom enenueropredteino de cuadrados grandes, extlenda el conteo al siguiente nimero mayor de cuadrados grandes arriba Size han evalua los 25 evadrados grandes dels cuadriule enralsin legals 200 espermatozoides,consigere contr también de 1 a8 de las euaéreuasperfércas Fg, 25). 4 Tome nota del mero de cuadrados o cuarculas grandes evaluados paralega a por lo ‘menos 200 espermatoroides Se debe conta el mismo nimere de evadrados grandes 0 cuadrculs desde nota cémara del hemoctSmetro. 5. Conta el mimeredeespermatorides con I ajuda de entador de baratero, Cambie ala segunda cimara del hemocitémetroy reaiceelecuento derépicas en el rmisme nimero de cuadrades 0 cuadrculas que la primera réplia, incluso s\arrojz menos de 209 espermatozoies. Caleula la suma ya diferencia de los dos nimeros. Determine sla diferencia entre los recuentosrepetidos es aceptablea parti dea Sseccién 24.85, Sita ferencia es sceptable,caleue concentracén(Seccén 248.6 ena pagina 34)y numer total de espermatozides por eyaculedo(Secclén 2.48:7 ena pagina 35), Sitnaterene demain sks * prmerexgueunhemectémere races pat deles duane pleads y evens Sila dfrenes * sin aterenciasiguesendo demasiado aka después de wes recuentos de rélas, se cael el promedo de todas is cuentas y se ineluye un comentario sobrela mayo incenidumbre cel resulta en el forme nla Capitulo 2: Examen bésico 2.48.5 Comparacién de diferencia entre recuentos repetidos Encuentrala fla que contiene tu suma de espermatezoides contados en lacolurmna con 1 rango de sumas. Sila diferencia encontrada ene las recuentos de répieas es menor 0 igual que ellimite de diferencia en la cokumna ala derecha del rango de sumas, puede aceptar las evaluaciones de répicas y caleularelresukado final Laterers eoluna da una ndeslin ds incerumbre oe reso nal en func del mime se cbservaconesnimere de espermatazides evaluados). Con pocs observacones, Se pueden acepar recuerts epetios con una ciferenca menor, pera el res fal asain mencssegure debido al rnimero ita de obsersaiones(erSecién 8.6 en pina 234, Incertidumre del resultado cea 969-1000 61 3.2% 938-968 60 3.3% 907-937 59 3.3% 876-906 58 3.4% 846-875, 57 3.4% 817-845 56 35% 788-816 55 3.6% 760-787 54 36% 732-759 53 3.7% 704-734 52 3.8% 678-703 51 3.8% 651-677 50 3.9% 625-650 49 4.0% 600-624 48 41% 576-599 47 42% 551-575 46 43% 528-550 45 4A% 504-527 44 45% 482-503, 43 46% 460-481 42 47% 438-459 a“ 48% 417-437 40 49% 396-416 39 5.0% 376-395 38 5.2% 357-375 37 5.3% 338-356 36 54% 319-337 35 5,6%300-318 34 284-300 33 267-283 32 251-266 31 235-250 30 219.234 29 206-218 28 fe 190-205 a a 76-189 26 G 163-175 25 150-162 24 138-149 23 ae 126-137 2 af 115.125 a BE 105-114 20 94-108 9 85-93 8 - %6 7 i os a 59-66 15 : 52.58 1“ i 4051 1B 38-43 2 32.37 1" 3 a3 10 ; 236 9 uy wh 8 es 1346 7 0-2 6 3 79 5 a 56 4 ae 34 3 RE 2 2 1 3 Lasuma de oe ds contoerepatianaaptado a dia por un fae qe arth detain ol cin yet neve de andro 9 cusecles grandes evaluades en ambascimaras de conteo ase han eliza res ntnto in lgar aun acuerdo sucente entre los contaos repeal promedio de los se utlzan res sua) iCapitulo 2: Examen bésico Namero dcuadrader grander eee @ ‘Nota:\in hemocitometro confaiio de Neubauer mejoradotiene dos cimaras de conteo. rr ada chara de conto cosa ce neve 3) elas gu tama, Leena ip nbc 25 cara grands coda wo reed po nal de ile ay mana que los compos eros constants uno de 6 20 ren ‘se uentan menos de25 espermatorlde en cada mara, a concentracon srs < 35555, espermatrsdesn se enna lun 0 (2487 errr estado del rested superior 14 abla 22 mayor dll, resutado dela concenracin er mayor pero a conel mmo alto eto estimade,> 1) Indqu el nimera de espermatozodes obseredos 3 can eleomentrio "Se contaron muy poco spermatooies pa una deerminain prea & de a concentrcin (56000 ver tamblénecién 248.83 continua cuando se require una evaluacion precisa delbsjo nimere de espermatozlges 24.8,7 Céleulo del numero total de espermatozoides Fs fundamental clear e informar el nimero total de espermetozcies por eyocud, yo que este parémetto proporciona una medida mucho mejor dela produccén de espermatoaoides testculresydelnimero de espermatozodestransferider a Ishembra durante coe, Esto se tiene mulpicandola concentracin de experma por el velumen deta la eyaculacio. ndmero total de expermatozoldes debe Informarse como un numera entero sin lugares decimate de millones de espermatozodes, con la dia exceeién de ners inferioces 3 *0-illoes, donde un lugar decimal puede sr aceptabl en ara dea elaridad en el rango Inferior de resultados, sunaue Ia variblldad analtiea justifies e uso de un lugar decimal Sino se observanespermatozoies en las preparacones himedss duplcadss, se puede sospechar una ata otal de espermatozoides (azoospermia). Aunque se ha sugerido que Aefnién dederiacambia(88 49). azoospermia sigue siendo una descrpdi dels hullazgos ene eysculedoy no un dagndstico ona base paral erapa. En general, se acepta {que el témine azoospermia slo puede usrse sino se encuentran espermatozoides ene sedimento de una muestra centrfugads,(90, seopurdv'epenal sears Sin embargo, se debe tener en cuenta que + erhecho de que se eneuentren one espermatozoides en el sedimente depende el empoy Invelocidad de centitugado(9, 92y en cuanto dela pasilla se examina: + tnconrfupueién 230009 surante 15 minutos no sedimena tas ls erpermatoroces de una rmuesea83ey + después de a centitugaién se puede perder la motiidad6 ya concentraiénseré subestinad@7z 5 se han realrad recuentos en una muestra cetefugads esto debe Inalearseclaramenteenelinfrme fal La forma en que se manpuin ests muestra depende dels dats eualtatios sobre presencia Ip motilad ls espermatozoaes son stents os neces un nimers exact de ‘espermatozodesvertxamen de eaculados no centritujades para detectarespermatozold setecar espermatezodes Independientemente desu motiidaden Is pSgina 4) cuando se equare Is evahseén de un jo namero de espermatozodes. réulesanje yoxamen de muestras centrifuga pa ‘Aung se peden obtener ertmacane proxmadh de bjs cncetracones de espermatozliesusanda a ln 111: 2s examina as uae cuss, errr etna e ako Adem elandside -jaculos des tn oto puede mos ue gn cada de fondo bj el micesczpe La eolrain _decSmara grandes puede ear 0320 minuto, perl deen épida de espestor es pease ‘cars meace las de ut Moescere(7} Bebe tenets en cveraquelos sabres btendos por Examen de eyaculados ne centfugados para detetar espermatozoides mévies se onnfoga lace pueden dona aspemateoiaesy feta" moto és expertise: porte, caver esos se tlran muses eng, earners debe eguae se quesusrocedientos no pejuuen a ota des espermatrades ola apace de fet aden {Use dos preparacones himedas consecutvas(Secclin 243.3 en pina 1B, 2 scanee todo el evbceobjets ssemtcamente campo por campo. Comience an una esqunay ‘escanee ao rg eel ee x hac ello opueste lege mueva un campo argo del ee yy ‘escance haa avis ago de todo el anena. Contin de eta manera en 239 par eat una basques completa ysatemsie toca la alot ig, 2.7) Sia observa la dapostva rmaniras emis de camo, Con un objetivo x20 un ocular 10 de 20-min de apertura camp del microscope tiene un _smetr se aproxmadorene 1209 pn (Secibn 25.9 ena gina 67) Por ant, hrs aproximadamente 484 campos por cubrecbete de 22mm x22 mm para examina A parr dl nimero de espermatoreides mévileseinméules abservades en 10 1020, se puede cakular una concentac'én aproximada mukilicando el vlumen total de eyaculaeén por el numero de espermarczoides abservadesy un factor. N=nimereebsenadode espermatozodes Yol= oluren ee eyaulacin (nt Factor (100 pare 10 pl examinados, $0 para 20 pl cexaminados) Concenraeén(aspermaml) = Nx Val factorBS Traducido del inglés al espafiol- wwew.onlinadoctransiator i Caputo 2 amen bsco i é 4. Elinforme debe indicar que se trata de uns aproximacién y no de un valor exacto. uf Ba if uh FI Estimacin dea concentracién basada en observaciones HPP Si hay menos de cuatro espermatozoides por «400 HPF (es decir, aproximadamente menos de 1 » 106/m)}, para hombres con subfertlidad masculina puede ser suficiente informar que la concentracin estimada de espermatozoides es de aproximadamente 1 * 106/ml, con una nata en el informe que indica claramente : aque esta es slo una concentraciin de experma eximada muy aproximads y sie “8 cservaronespermatozodes méviles. Esa extimacién mrecia solo debe nacese i cuando el propésito dela evaluacin de la concentraciin de expermatozoides es i para deca irwestigacion cca adicinalo para deci la madalidad dptima de : tecnologia de reproduccdnasistida TRA) para la pare. Esta extmacion na debe Usarse para el andlsis de semen de rutina, en particular para monitorear los efectos, ellos posibles agentes anticonceptivos masculines ya respuesta ala estimulacién endocrina dela espermatogénes's Seccién 2.48.4 en la pagina 32 ea conerracin (5 cara de ran volaen ene do cars de 10 pn depot cd uns 2 1. Mezclar bien la muestra de semen, i e60penal seypurdy'e pe openuea 2 La liven 149 (1:2 pare muestras con menos de 2expermatozodes ens evaluacisn nial (Tabla 21 en a pagina 20) es apropiado para un rango de concentraciones de esperma, prodiiendo alrededor de 200 espermatacodes dento de to a cSmara 5. Sila tuorescencia esta alsponbl en el microscope, la tinclén de esperma fade “luido™ on un inte apropiado, come DAFT, puede ayuda a suidentiacén Lograr 200 espermatozodes por replica en una cdmara desechable de gran voluren + Sisolo hay un espermatezoide por HPF de 4 nl en la preparacién himeda nici, teéricamente hay 0,25 espermatoroides por nl (250/4 © 250 009%. + La camara de gran volumen contlene 25 ul por lo que habria 6 250 espermatozoides en su Incerior- Diu la muestra 111 (1:2) seduce onde ye ndmere de espermatozsides 23 125 por edmara,sfelente para Un eror de muesreo aceptablemente Dae. “scpermneiery be volenes undone enao 2. lene cada cémara del portaobjetos con 25 ul del que, 3. Guarda chara en osc hargontl duane 1981S minors semaratra ames en ua care red. soar papel eu strat de agua en una picade Pestana) par eta que se Inman zesmertarn en lita de lcmara cant exe tan). 4. framing la apostiva con un aumence e250 5. cuenta menos 200 espermtzoides en cada repeticin, pralograrun errorde muesreo scepablemence bajo Tabla 2.16 ea pagina 78, {6 tsaminar una cémarasistemtiamente campo por campo, Comenes enna esquinsyeseane 6 Taro del je xhoda lla opuess: luego mueva un campo lo lergo del jeyy ascaree hacia str lrg de todo el acho, Cantina de sta manera en sz, Sign observando ls tapostia mientras cambia de campo, Contindecootande hasta ques hyan observa a eros 200 espermatozodes. 7 Anote el nimera de campos evaluados para llegar al mancs 3 200 espermatozcides. El ‘misma nimero de campos se conta desde la otra cimara |. comr elnimero de espermatozoidesy campos con ajuda de un contador de berate 9. Cambie al segunda cimaray reaiceelrecuento de répicas en el mismo némera de ‘campos (el mismo valumen) que la primera réplic, incluso si esto aroja menos de 200 espermatoroides. 10. Calcula la suma y a diferencia de os dos numeras. 11. Determinarlaaceptabildad dela diferencia deTabla 23 en la pagina 33-la diferencia ‘maxima entre dos conteos que se espera que ocurra en el 85% de as muestra debido Linkeamente alerror de muestreo,4 z seypurdy'e pe openuea 2 Capitulo 2: Examen bésico 125ita diferencia es aceptable, calle la concentracién. Sila diferencia es demasiado ata, haga dos preparaciones nuevas y reptala evaluacién. 13 Reporte concenacn promo de espermatozides con dos as sineats. 14 wulplquelaconcenracin de epermatzede perl varies de sen nl prs bane elnimera nde espermatozoides en el semen es su mmero (8, dvisido por el volumen el nimero total in de campos microscépices examinados donde al volumen y} de un camp se aleula como enSectién 25.9 en la pigina 67, multipicado por le dlucién. s der C=(N ny (1) factor devin La concentra on un aumento tea e250 el volumen de campo es de 80 Seccién 25.9, ava unadiucén 147 (1:2) La concentra: C= Nin) (180) «2 espermatozodesin = (Nin) (1/40) espermatozeidesinl millones de espermatczoides/ml de semen). Con un aumento total de 400, el volumen se campa es de 20nl(Seccién 25.9), y para.una dui 141 (1:2 1a conceneracién es Un) (1120) 2 espermatozoides espermatozodes/m de semen), (Wn «(1/10 espermatozodesin millones de Cuando se ha evaluade toda el drea de ambas cimaras, se vide el nimero total de espermatozoides por el volumen total de ambas cSmaras 50 ul, muiplicado por el ‘actor de diucisn 2) para obtener la concentracin en espermatazoides/pl (miles! mide semen). Sila muestra no se ha diluido, el factor de dilucn es 1. + Elvolumen de semen en cada campo microseépico depende del grea del campo (rr, donde wes aproximadamente 3,142 yes elradio del campo microseépico)yla profuncidad de a cimara (aqui 100 jm) El didmetro del campo microscépico se puede mecir con un micrémetro de Platina o se puede estimar dvidiendo el diémetro de la apertura dela lente ocular por elaumento de la lente del objetivo. Com un abjetiva x40 y un ocular x10 de apertura de 20 mm, el campo del microscopa tena Lun dismetro de aproximademente 500 ym (20 mm} En este cao, r= 250 pm, r= 62 500 rmieras, r= 196 375 mierasy,y el vlumen es 19.637 S00 um alrededor de 20 Com un objetivo 25 y un aeular #10 de apertura 25mm, el campo del micreseopi tiene un «iimetro de aproximaéamente 1000 jm (25 mmi25). En este caso, = $00 pm r= 250 000 mera, r= 785 $00 micas, yelvlumen es 78 550000 mc alrededor de 80 nlpenal sears Sensibilidad del método ‘Sihay menos de 200 espermatovodes en cada cimara el error de muestreoexcederd el Cuando se encuentren menos de 400 espermatozoides en ambaschmaras, informe el error de rmuestreo para el nimero de clulascontadas ‘ise eventan menos de 25 espermatozoides en cada mara, la concenvacén ser < 2000 espermatozoies/ml, can un error esimada> 14, Incique el nimero de expermatozoides bservedos con el comentario “Se contaran muy pocos epermatozoides para una determinacin precisa dela concentyacén (< 2000/mI Es importante sefialar que la ausencia de espermatozoides dela allcuota examinada no significa necesariamente que estén ausentes del resto de la muestra Bomplos resuetor Femplo 1 Con una dite 141 (1:2), se encuentra que la répies contene 210 espermatozides en 300, campos, mientras quel répie 2 coniene 300 esparmatozoides en 300 campos. La suma de los valores (210+00) es $10 en 609 campos yl diferencia (300-210) es $0. DeTabla 23 ena gina 33se ve que esto excedea diferencia esperada sole por casvalidad (44, por lo que los resultados se descarany se hacen dos nuevas dlluciones repetias Femplo 2 Con una dite 141 (1:2), se encuentra que a rplics *contiene 200 espermatozides en £00 campos, mientras que répie 2 coniene 230 espermatozoides en 400 campos. La suma de les valores (200+230 es 430 en 809 campos yl diferencia (230-200) es 30. DeTabla 23 ena gina 33s ve que es menor que el encontrado por easualidad (0, pore que se aceptas los vores La concentracién de espermatozoides en la muesta, para una dluedn 161 (1:2) es C= (Wa) @iwpexpermatozcidesin. Siv= 20 nl (d00 auments), C= (430/80) (2720) = 0.0538 espermatczoides/n o 54000 espermatozoides por mide semen a dos eas signfatvas Biemplo3 Con una dlc 141 (1:2), se encuentra quel rpc contiene 50 espermatozoides en toda lacémara, mientras quela réslea 2 contene 70 espermatezodes en toda la cémara. ta suma els valores (50170) 120 enlas des edmaras, la iferenca (7-50) e520. cla Tabla?3 se ve que esto es menor que el que se encuentra Sol por casualdad 21, porlo que ls valves, son aceptados Cuando se ha evalua toda el rea de ambas cémaras (un otal de 50 ph, laconcentracién de In muesta, para una dluciin 11 (1:2) e5 C= (N/SO)x2espermatozoldes por p= (120/50)*2 48 espermatozoides/lo 4 800 espermatozedes/ml de semen (a dos cfrassignfatves) Como se contaran menes de 400 espermatozides, informe el errr de muestre para 120 spermatozoides dado enTabla 23 en la pgin 330,34), Biemplo4 Con una dln 14 (1:2) se encuentra gue rps T caniene 20 espermatoroides en toda ‘cimar, mientras que la répea 2 canine 18 espermatozeidesen toda la mar, Como en 343 cmara se encuentran menos de 25 espertatorides, a concen2csn ser < 2009 espermatzoies! Informs ques observeron 38 espermatozoides ens muestas, muy patos par une decerminacénsrecia dela concentracén (2020penal sears Capitulo 2: Examen bésico Bemplos Con una dluin 19 (1:2) nose encueniranespermatorodes en rngune de rps Come en «ada camara se encuentran manos de 25 espermatoraises, la concentra ser8< 2000 _espermatozodesrl. Informe ‘No se observaronespermatozodes ens gas, muy pcos pars una determinadn precisa dela concentra («200m leu det nimero tota de espermatozoides Se recomienda caleulareinformar el nimera total de espermatozoides por eyaculado, ya {que este parémetro properciona una medida dela produccién de espermatozoides tescculares y del nimero de espermatazoides ransferdos ala hembra durante el cote, Esto se obtiene multilicando la concentracién de esperma por el volumen de toda a eyaculacin. txamen de metas contrfugads pra astctarespermatozisesindepandantrnante de rotided Cuando n se obseran espermatzoides en ninguna des preparaiones himedas sstado de metdes dens espermatooies noes imparant, a muestia se suede centrifuga sa ecerminar hay espermatozoies presenesen uns muestra mis grande 2 baraer una alevta de mde semeny cetnfugarieslmente 230009 durante 1S mints, aproxenscament 50 yl estantes de sma sein |Reaee una aos pepraines homed de 10 Seceén 243 ena piney elie come se “errs arterrmenie Secc6n244en spina 1 + La presencia de espermatozoides en la muestra inca: * paso del testiculo(s) a la uretra + La ausencia de espermatozsidessusiere: * gece suede esperszees nose patent aud or pred nlna * enrol de ee + no hay paso de los testculos ala uretra, 2.4.9 Morfologia espermatica valor dela evaluacién de la mortologia del esperma humano noes Sole valor pronésteo Tritado con respectoa fos embarazos expontineos 0 el esutado de TRA. sine adn mis la Informacén sagnéstcs sobre el estado funcional de los érgancs reproguctores masculinos, Princpalmente los testicle y los epldidimos. Paral evaluatén de los 6rganos reproductores ‘maseulines, no es suflente deveiminarUniamente la propercisn de espermataroides ‘normals’ Es importante evalua a morfolgiaespeciia de cabeza, culloipezaintermeslay Cola yla posible presencia de residues coplasmtiea anormles. “Todos lo eyacuaos humans conienen espermateziss con una api gua de parca morte ‘teers as erionesassoes de bevel eles espeimatozids se basban piperpenal sears Los enters presents aqu se desarrollron a prtr de Investigaciones de la morolosia de los espermatozoides capaces de penetra elmoco cerwcaly uns ala zona pelicida. Elsémineespermatozoise ‘normal es en certo modo ambigue, lo que provoca malentensidos ce nclso conto académicos. Un significado general de “normal’ es una ualidad que es ‘comin, por ejemplo, en una poblacén sto no es ert para la "merfologiaespermstica normal’ en humanos. Otro signfiade esque indica quela culo incviduo no est afetado por enfermedad, pero uns morfeogis normal no sgnfice que el espermatozolde ne pueda portar otra causa de patlogla(ecolainmivleADN dafadoy, La morflogia variable dels espermatozoides humanos dfcutalaevaluacin, pero bs observzcones de los espermatozoldes recuperados del aparatoreproductor femenino, especialmente en «1 moco endocervical pascal, 95) también dela superficie de a zona eliisn/95, 974Figuea 2.8 ena pgina 4), han ayudadoa defini hapariencia de tos espermatezbides potenialmentefecundantes (merolsgicamente narmales 0, mejor, “ieales" o"ipicoe, Mediante la apcaion esrcta de cies crterios de morologa de los sspermatozodes, se han establecdo relclones entree poreentae de formas “normals ‘vatoseteris de valoracién de a fertiidad (tiempo nasa el embarazotasas de embaraz in ‘woe avira. (58, 96, 98-103), que puede se tl para el prondstico dela feriisad La flosofia subyacente el sistema de closicaiin descrtoaquies mito lo que se identics coma tpi de a subnblacion de espermatozoidespotenealmente fel zantes que prevalece ten elmoco endocervical Es probable que elrango de porcenaje de formas normale para hombres fries entries este muy por debsje del 309/104) Esto produce ineitablemente tumaralesbajos que dscriminen entre poblacioes fetes einfrtles: de hecho, se han encontrado limites de referencia y umbrales de 3a 5% de formas normales en estudies de feria in vir (F199) nseminaci ntrauterina {yO fetlisad in vivo TOS. Ages, se debe enatizar que hs aiferencins observadas en los promedios grupales entre hombres infrtes suatérles no significan automiticamente que los “limes” clelados uedan usarse paral interpretacin delos resultados de hombres individuals, Para obtener tales lites ties, se deben determina los valores predietivos postva y negative. Estos Al, por ejemplo, cuando se rata de a proporciin de espermatozoidesnormales'(o sigeales" ipcos) ara dstingutr estaisicamente en, por ejemplo, 3 y 5% de formas “normales” para hombres indvidules, 1500 espermatoreides deben ser evaluados por personal altsmente eapacad, los espermatroides unis ala zona peda humans también exhben una subpebacén de sspermatorodes morfloieamente sare. (13) rae ahaa de restr a func de es esparmstozedes puede seals 105, a ealuacin pce de a mesolgia del eserms humane compen as iuientes pasos + prepararun fot de evade en un portaobystosSeecin 249) + seadoal ave, Fecdny sn del peracjetes Sec 2.4.2 I pga de * mona eportaobets cn un cureejetselponacdetasseva a guetar durante mathe enpo { * examinandoeporaniees on ge campo claro can un aumets de 100 cn resign en cee Seecdn 249 6enla pga y7 seypurdy'e pe openuea 2 Capitulo 2: Examen bésico + exatuando aproximadamente 200 espermazorides(Seccién 249.6, + pars ouconarproblonar de evsuscane morta, coneutesoccén 7.10268 phging 207 (a,b) Espermatozoids tehides con Shorr recuperados dea 20na plicia nvr.) Fspermatozoies tehidos con Papanicolaou recuperados del mocoendocervieal despuds del ‘oto, Seabservan muy pocosdefectosen Ia cabeza del espermatozoide,peza intermedia o leza principal Las colas pueden ser eurvas pero no muy anguledae. 8) é @ § Ry eae e . vo : Reproducide de Liu etal. (2003) con permiso de a Sociedad Europea de Reproduccién Humana y Embriologia.(¢) Reproducida de Menkveld & Kruger (1990) con autorizacién 2.4.9.1 Preparacién de frotis de eyaculado aad rpida de fader a eyaculedo ne permite una vsualzaién adecuada de los spermatozodes, ya que estinoscutecdos por ls proteins seminalesdesnaturaeadss Para clandliss merfelgic, se acestumbra prepara rts de eyaulado que se secanalair antes, de farls yteils, Sn embargo, tl proceso conduce a artefactas morfoligios, ya que el Secado al ie de otis de semen esté asocade cons * carsorenbedeensrasde i esematreer repeated sas Hac tar son mie seuatesqulosepermstzles vice usuadoseneseen(a7, * expansin se abens de spermicides iad Sle etal 20009 + pérdida dle gotitas ctoplasmaicas osméticamente sensibles(108, 19), aunque se retienen randes entices de exceso de coplasms residual. ‘Se deben hacer dos oma rts de la muestra de semen fresco en caso de que hay problemas ‘on atneén se rompa un portaabetosseopurdv'e 2. Yusha a mech Ia muestra de semen antes de rears alievetaedupliada (al sunde rots se usa come reserva en case de que haya problemas con tin. Eyacula con caracteristcas normales [eves procedmiento se unta un aluota de sen sobre tds I supertce del portacbjetas redint tenia de emplumado 9.25) Limpie amas superciesdelos portaobjtos esmerlades rotando enéaieamente con papel de eda sn pela o limplando con etanol 2. Xiquete la porciénhelada con informacién de idenifcacién con dos identiiendores Unicos:asegurarse de que la marca no puede volverse legible por la faci, tncién © monte. Leak oscion minima de expermatozides en lportacbjeos depended menos probable er ques uperpongan entre 14de manchade cuanto misripid es elmovimien, mis delgado esl ots Camience con unvluen de un gu de 4" un tos de aroxadarere segundo (85 Lemplaradofncon bien cusno viscose del seme uc cote largo del bord del oboain lve potabjts de raze ntmentehaci ors Suraneatoximademente 1 segunde) ale kr del @ ©) 0 Fotografias cortesia de C, Basilpenal seypurdy'e pe openuea 2 Capitulo 2: Examen bésico Eyacula con caracteristicas anormales ons ean na coment ce exparmatares Silsconeriracon 6 eprmsarises aj io ese, mens de 2, concent es ele 1.Centifugarla muestra a 600g durante 10 minutos 2 Reece a mayor pate del sobrenadante 5. vost a suspender a seiment en elt dl sobrenadanieppeteando susvemente {4 obvenerta mayer concenracién de espermatexides posible no superando aproximadamente Strata como na muesva normal Secel6n 2492 na gina A) © | etter ne een retenteememtionye me ate rnte regitradoenlinfrme fina -Aveces es fel preparar buenos rts porque el plasma seminal es muy viscoso, lo que da como resultado frtis de grosor irregular. Las muestras vstosasse pueden tratar dela misma manera que las muesias mal lcuadas(Secelén 25.2 en a pagina 64) 0 porlavado, © | terrence nestor nore eprmteny so debe reitrarse, tos desechos yuna gran camtdad de mater partculado (come en muestra Wsosas pueden hacer ue los espermatorides se acuesten con a cabeza de ado fo que iu su categoricacin. Estas reso pueden var de siguiente mores Diya ua aeuota de eyacuado bien mended (92-05 mi Seana concentra de sspermatoroides) con un solu sana 70 mM para reduc ambi osmstias en bs “spermatozoites Dependlendo de cunt temo despues dea preparacén des eyculacén ‘osmoalidad de a eyaclacidn puede haber umentado 2350-400 mOsmvkg Un mei isxérico a In culaidad general del cuerpo 290 mOsm induc un chaque ipténice aos sspermatorstesadptados ala mayor opmolaliad de yaclade esd (7, 18) 2. ceniifuger 800g éurente 10 minutos 5. Haga un ots de a suspensisnesparcendo de a 10 ude suspensisn de esperma en un ponaobets de miroscopi con una plpeta Paste (9.236). ‘seared onan con ots de cera dee conn suet e60 *penal sears 2.eriique que hay al menos 4 espermatzoides por campo de 400 sin alameracions ni ‘eet quel porucacs se several + Sinaysemasadosespeimatoroide superpuesos en el potscjetas haga ot rts can una slew mis pequena de yacuado + Estas manipulaciones pueden afectar la morologia de los espermatozodesy su uso debe regjstiorse 2.4.9.2 Fijacion y tincién Uno vee que ls frais de eyaculado se han secado alate, deden forsey terse para resaltar los detalles de es espermatozcides. Se recomienda el uso dea tincién de Papanicolaou, ya que se han realizado valdaciones yevaluaciones exhaustivas para los criterios estricts de Tygerberg utllzande est tip de tincién, que brinda a mor Vsibiidag general de todas as regiones del espermatozoide humano (95, 110-113) El uso de owas tinciones debe valdarse en comparacién conlatincién de Papanicolacu deserita adaptada para espermatozoides humanos, Con elmétode de incén recomendado en dptica de campe car luminadién de Kohler Cabeza se ite de azul pido ena veqin acrosomaly de aul oscuro ena egién postacrosomal. Tie las regiones acrasomalesy post-acrosémicas dela cabeza el exceso de clroplasma resus Ia pez intereiayla plaza principal La peza intermedia puede mostrar lgunas manchas rojas yla cela est teRida de azul 0 cojao. fl exceso de ctoplasma residual, oro general ubicade devs de a cabezay alrededor dela peza intermedi, svele tise de verde 5 es e color rojo, puede indear otras anomalas, Ltneén de Papanicalou también dana buena neon de otras Aas. a tenia de tien deserts aqua veces es tl pare sting entre cls germinalesinmadrasy ulas no espermétias Figura 215 en ta pdgina 62Flgura 216 en la pgina 63). Los procesimianos de rina se han maafieado para abs sin ter (oma fader elena para mona) t14}(Sceén 24192) Los portabjtos dos con el procedemiente de Papanclaou se pueden mantary _ainacenarge forma permanente para su. uso futuro en programas de foraeny control de calla Hay algunas otras técnica comunes desertasen la ditma parte de este capitlo: Tne cotta yrépida La razén de recomendar la tincién de Papanicolaou es que sigue slendo la ‘técnica mejor evaluada, Para un uso global, es fundamental que las técnicasy los eriterios de evaluacin estén estandarizados. Se pueden usar otra ténicas, pero con una cevaluacin y validacién adecuadas con técicas estindar especialmente sise usan para studios centficosseopurdv'e Capitulo 2: Examen bésico 2.4.9.3 Fjacién y Papanicolaoupasos de tincién Esto implies las siguients pasos. ‘Table 25 Pasos de fiiacin ytincin de Papanicolaou Etanol 1. tanol graduado 2 eranol graduado 3 Agua purities 4 Hematontina de Hares 5 Aguapuritcads 6 etanol éeidos 7 Aguapurieasa 3 Agucomtante ti deante 9 Etanol 10. Etanol 11 Etanol 12. Gétinclinnarania 13. Etanol 14 Etanol 15. Etanol 17 Etanol 18 Etanol 19. Etanol 20. Etanol 21. xileno Boca 95%6(vIv)__al menos 15 minutos arregla I elds; tambien los desidrata ‘ehiraarorauatmentelos ets fades para 80% ve So segundes permit la tincién con hematonilina soluble en agua somte especfiamente del etoplasma(desticibn) Bo pepunion | pare radvar is wiry doyober a eoor sata nce L olen de Seat de zara sei) seams ones ee 100% ‘Weegendes “deshicratar gradualmente las ‘ratis tehides para permits el tana seas aha mg eos mies concer 32037 ge eel aOR ah4 z seypurdy'e pe openuea 2 tos portaobjetos se pueden vr sin mont o montades (sno can un cubreabjtas auto} monte de os poriobetes peril tacenariente a large plaza, de mae que pueden vor & ‘sluasa sl eznecesr y ulzarse en un programa de contra de ealadinterno (QO elndee de retrccn dels medos de montje despues del secad (1498-155) e sma a eld (1.50- 1.58 ya mejor calidad pices logra con eluso de acete de inmersin, que ene un sia 519. 24.84 Tratamiento del frotis de eyaculado tefido antes del montaje Hay des tipos defuides para montar la preparacién: medios de montaje solubles en cetanale insoles en etanal Sita mesios de morta cables enetanol tome los potacetos dractamente desde puto 18 anterior hasaos siguientes passa relar en una iri de gases + susttute de lenonetanol, 141 (1:2) 1 minuto + s00% susetut deen 1 minuto + ere un portaabjetos a ve el eipiente deinen con sustute deen y je que se ‘seura rane soo 10 2 segundos ya que el poraobetos debe estar bastante hime con leno durante el monte 2.4.9.5 Montaje de frotis de eyaculado tefidos [Al montar los rotistehides, no hay riesgo de contaminacién de los objetivos del mieroscopio, 1.Colque cures (24 min «50 mo 24mm 60 mr) sobre una toll de papel dobad 2. coloque el soporte en forms de mancuerns sobre elcubrebjetos 2 tuagecobqel orang cant hac a laren, S. Oe qu lta montae a hrenabars, cones eobor Ra ta mun aie aot potatos o sabre paplaantente uate othe enna tn 2.4.9.6 Examen de la preparacién tentida Para una evalacin dil dela merflogiadelos espermatozoides, es esencl que sea realizado por personal de laboratorecapactade que realzaIQCregularmente, Para realar comparaciones entre laboratoriose mplementartécoicas y imtes de decsién esarrllados en 0s centres, es fundamental participa tambign en evauaciones externas de calidad (EQR) ardecuadas. La dasiieacén recomendada aqui esa dels espermatozoides como ideal {eens es un per pratasalidy na debe uss, Anora hay susttos, come NeeClerpenal sears Capitulo 2: Examen bésico (tile dels espermatozoidescapacesdellegar al sie dea forlzacién'¢ anormal besado ten elreconaciminto de anomaliaeen todas ls ubicaiones del espermatezode Para realizar uns evaluseiin moroldgien adecuad el inaviv debe estar familie con todos los crteris, lo que signifies que incluso el Iaboratora lige informar soo la proporcién de espermatezoies ideales 0 ancrmales, Cy EQA deben evar la capacidad de reconocer ‘orrectamentelas anemallas en todas las ubcacones Los siguientes citeros debe aplicarse evalua la normalidad morfligica del espermatozoide(35 98,115. Los espermatoroides estén formados por una cabera yuna cola. La parte dela cola que etd onectada al cabeza la partes gruesa que contiene as mixocondras se lama peza Intermec El esto de la col consta dela pieza principal (un axonema o estructura cilar Fedeada de fbr densasextemas)y una vaina brasaconcolumnas ongtuiales. (1769 una pieza fina. Como pieta final es if de ver con un microscope Spice, se puede consderar ‘quel ea comprende una cabeza ty cullo)y una cla plea intermedia ypiza principal, Pata que un espermatoroide se considere sin anomalias, I cabezs, ls ples intermedi, la colay elresiduo etoplasmatico deben consiserase normales. Teas la formas limites eben ‘orsierarse anormales gina bese quele caesar rarmslmene ances nen nerles los expemstasies “Sood extn con un ea eral plana dee odes ~1.6 ees eltamae de una aba de “speeds nomleiene inte nig. 213,24 245, La espermatogénesisdefectuosay algunas patologas dl epididimo se asccian ‘comunmence con un mayor porcentaje de espermatazoides can formas anormal. Los efectos morfolégicos selen ser mixtos. Los espermatozoides anormales generalmente tienen un potencialfertilizante mas bajo, segin lo ipos de anomalias,y también pueden ‘tener ADN anormal. Los detectos merfolégicas se han asociado con uns mayor fragmentacién del ADN/771 una mayer incldencla de aberracionescromosémicas estructurales(178),cromatina inmadura(179)y aneypl'dia/120, 121) Por lo tanto, se hace hincapié en la forma dela cabeza, aunque también es importante tener en cuenta a ola del espermatezolde(pieza intermedia y pieza prine)pal) para comprender el aparato reproductor mascutino. Residuosctoplasmicas(122}0n componentes normales dels espermatoreides humanos Fsioléscamentefuncianates, Los residues citoplasmaticos son asmétcamente sensibes¥ no se conservan bien mediante ns proceeimientos de secado al aire de rutina (09,1231 No son evidences en las preparaciones todas, donde pueden aparecer como pequehas dstensones de piesa intermedia Si estén hinchados, pueden extenders ao largo de la pezaintermeds, ‘como se observa por contaste de fase, contrast de nterferencia ierenaly miroscopia de rayos X de cul vias en semen, moco cervical y medio (108, 124) El exceso de ctoplasma residual se asoca con espermatezoles anormalesproducidos por un proceso de espermiacén deteccuoso, Este exceso anormal de itoplasma no debe contunitse con cltoplasmaticos mis fsicl6gcos que se pueden observar en micoscopia recta del eyculado pero. en fous de morflogia seeos fladosyteldos (alesis, vos Las colasenrllaas mis e 360°, ig. 2.10) pueden indica distuncin del epidimo(125)@ (o) oO @ (mi) © cénico informe tedende Amorfo vacuolade esate acrosomal No ret tt rea 8 w w ww nw Kw KW w ae (h) aw oO tk) wo a 3 Asimétrico cue Conon se >unterco PUT TTS a7 seypurdy'e pe openuea 2 Cola residuo La cabeza debe se ia, de contormo regular ygeneraimente de forms ovsleda.Debe hater una resin acrosomal ben defrida ‘que comprenda del 4021 70% del dea dela cabera ‘contener vacuoas grandes y no mis de dos 2 resin acrosomal ne debe vacuols pequetas, que no deben ocupar ras de una quina parte del cabeza del exper no debe contener vacualas ovide. a regiénpostacrosémica Uunorme en todas longs er mt elgada que apizaintermediay tener (orededor de 10 vecesIaongtud dee case} Se puede ena sbresimisme, Capitulo 2: Examen bésico + acrosoma inferior al 40% o superior al 70% del drea normal de Iacabera,o Felacién de argo a ancho inferior a 1,5 (redonda) 0 superior a 2 (alargada).o| forma: forma priforme (en forma de pera), aorta, asimétrica 0 no ovalada ena parte apical, 0 cabezae dobles, forma irregular, 0 inseriénasimétriea oon Sng enta cabeza, © muy doblado, 0 saves curvas cerradas, 0 corto (roto), 0 ancho irregular, 0 rips cos, © + coders) + cols seloy pers termed (sAM) + exceso de ctoplasma residual (50, ‘se puede utlzar un contador de elas mips, con una tela paranormal dea tip}, una para anormaly une para cada una de las uate catagoras anormales(, NM, T, Se puede ‘sar un eantador meenica para ingresar maliples anormalsades manteniendo presionada fe Primera tecla mientras ingresa las tras anormaldades observadas en un slo 660 "penal seypurdy'e pe openuea 2 ‘sperma Medan sa operain, cade espermatozode se cuenta una Slavery cada una de sus snomalis se punta pr separa, + Apartr dela evaluacion de 200 espermatozoides, es posible obtener el porcentaje de espermatozcides ideales y anormales (las dos cifras deben sumar 100%), as! como el porcentae con cada tipo de anomalla, es dec, SH, SNM, Ty S6C la suma de estas ‘timas cas dede ser superior at 100% si a evaluaein se realizacorrectamente) Fporcentaje de espermatoroides en estas lases de anormalidad se obtiene dvdiendo el numer total de espermatozedes cn un defect en fcategoriaporelndmero total puntuado Estos ners se utlizan pas calular el indee de teratozoospermia (2) Seeci6n 32 enta pagina 36, Ccasionalmente, muchos espermatozeides tendrdn un defect estructural espedco. Por jempla l aerosoma puede no desarolarse dando gar al “efecto de cabeza edonds"o *alobozoospermia Sf placa basal na se adhere al clea ene plo opuest a acrasoma en Iaespermiain, las caberasseabsorben y sola se encuentran cols en el semen el lamado “deecto de cabera de alfler, Las caberas deaf: (ols ies) no se cuentan como defectos de cabeza, ya que no poseencromtina ni estruturs de eabezs anterior sa placa basal. Los pacentescuyos espermatozoides presentan uno de estos defectos sulen ser esti. Tales casos son rats, pera es fundamental ue seidenciiquen y se noioquen corectamenteSihay ‘muchas cabezas dealer o cabezs libres, se puede determina su prevalenca en relaciin con los espermatozoides (Seetiones 2.5.18 y 25.17, Informalapresencayprevalencia relative alos espermatezedes de: + accepts esos escent bce de thts aera cuss germinaesinmaduras tas. 2182.18) + eeu no espermseas figs 215926. Sinay muchos deecos de este poo clas ne especies, se puede determina suprevalenda en Uns orden eucurads para fevaluaion de a morflogiadelesperms humans La ddceica evaluaién secuencial de cada espermatozoide es ic tanto en el entrenamiento coma en a realizacién de anlisis de rutina/126), e60 »Capitulo 2: Examen bésico Fig,211 Orden esructuredo area evaluacin de la merolgl del esperma humane leet, ella germinal vows abetapunsie por sepnrado sex necesaio) Ay Line por ences termedia ‘Anomalia Puntajeesperma anormal (sinoparencina yeabexa ‘Anomalia cesta cabeza ganormak | | * completo con cabers y cola, claramente visible y ne unerpuesto por otras celdas u vjetor seopurdv'e4 z seypurdy'e pe openuea 2 Evaluacién microscépica y clculos de resultados Con elparadigma de evaluesn de a morolgiarecamendade aul seeder conser todaslas realones funconles el expermtozede Noes necessri dstingi tad svricones en ‘amano yla forma de cabeza les dversos deters de plezacetaly la pera poral nciso ellaserato solo informalaprogoeén de espermatozodes ideals, examirador en ellaboratorio ebe poderdentifear oar as anomals. (a evaluseibn marfliges debe realzarse en cada cspermatozode evaluable envaris rea seleeconadasstemstiament dl poracbjeos, pa ‘ear a sec seageda de expermatorides particulars Se recomvensa comenrarsxaminand eft por jel, con un sumento ttl se 400 (Sra. de campo claro para obtener una impressn general dela dstibuclén yaparenca delas spetmatorides, a5 cls, deseches, a evatuaccn deta se eata uttzndoun obese campo co Ge mes en aceite de 10 ya menos un eel de 10. Elacete deinmetsn es eseneal gta obtener la morimagenenelmieseap6 race deretaceé, 8184 [ale todostosespermatzoides en cada campo, movindose de un campo micoscpico 3 otro. [lua se os espermatoroidesintacos(aquels con eaeray cl) Nona cls Inmadueas en eleeventa de espermatosoides Las nbers sin cladebencontarse por stparadoy anatase en elinforme shay mis de 20 or 100 esprmatoxises. No eval campos con espermatozodessuperpuests o on un espermatozoide atl los 0005 os campos enen al poblema, se evalian|osespermatozids en hos amos ylueeo 2 valvaral menos 200 espermatozldes, para lograruneror de muesro aeptablemen ba. 3.Contaelnimere de espermatarides tips 9 normalesy ancemalisaes en ls cut reganes ‘con ajuda dun contador de borate, 4, Caleuta las proporciones de formas tipicasy las proporciones de anormalidades en las aliferentes region ‘1721 (a sums de todas as snormaldaces divides por la suma dos espermstocoides anormales dando siempre un resultado entre 1,00 4,00} ITZ tene un miximo de cuatro setecos por espermatozoide anormal-une por cabeza le intermedia Plza princely uo por excese de copa residual, Informa los porcentaes de formas upicas al nimero entero mas préximo y el TZ con dos decimales, 660 “. a 8. ApéndicesSS EE ee 2 a ou = a Be | 6 normal vor vor sormal " 7 aera cue woe com exnne] gs [10 anormal oe vera sora aa) ees = car) ad 12 normal normal normal ‘normal fe] cso _ = nr awe anormal normal we anormal i 18 normal normal normal Normal Dl een von vom == Sa oo = en 22 normal vo vem sora 2a normal _ vera oral = vo = = 26 anormal cénico vo ws norma £ 29 anormal — normal anormal 5 31 anormal asimétrico normal anormal ; i e506e8 .9° 8. ApéndicesSESS Ee aT ou = a Be |e noma von vor sormal " 7 ona com rere rom aa) ees = car — ad 12 anormal grores, asimétrico anormal awe anormal arose normal, anormal i 18 normal normal normal normal D) ene von vom == 2a normal _ anormal oral sa vo = = 28 sovmal oe worm sora £ 29 anal wal anal formal 5 31 anormal normal normal anormal 5 So bales oon = a ; i e506e8 “Plates 7% 45 8. Apindlcesi i . 6 normal normal normal normal . 8 anormal normal normal anormal BE [12 norma normal norma vor J a anormal normal normal of 17 anormal normal anormal [te enorme ws sors . 19 anormal srw nia anormal £ 30 normal normal normal 5 32 normal normal normal norma ia Capitulo 2: Examen bésico 36 37 38 39 40 a a2 43 44 45 46 47 normal normal normal normal normal asimétrico normal Tabla 2.10 Placa de Papanicolaou 4 macréfago espermatozside anormal citoplasma espermatozoide anormal cespermatecito expermatozoide anormal expermatoroid itoplasma 10 " 12 8 1“ 18 espermatocito ‘espermétida degenerada toplasma ‘espermétida degenerada 7 1" 9 20 a 2 23 24 espermatozoide anormal espermatoroide anormal macréfago fagocitador espermatocito Tabla 2.1 Pace de Papanicolaou macréfago expermatozoide anormal (eiviinde xpermstise (cimaindo sperma itoplasma no clasificable ‘espermétida degenerat ‘espermitida degenerada? cespermétida degenerada espermétida degenerat macréfage cexpermétida degenerads B “4 5 ‘espermétida degenerada ‘espermétida degenerada cespermétida degenerada macréfagosearsCapitulo 2: Examen bésico 8. Apéndicespenal sears 2.5 Informacién adicional y comentarios 2.51 Antececentes para a evalacion del volumen del eyaculado + thvclumen medido con una pitta de mediisn sempre seers alcade por una praia de (08 ml, 51,127. También puede haber burbs de ate insbles dene de una piesa ‘volunis que pueden causarunasobreestmacin delvalomen de eyaulcdn Ader, 8 Pere alg de vlumen enta propia pipes que puede deur otras evaluaiones en yculas de bj volumes, + Ehbaovolumen de sernen es caracerisie de ls bstruclén del conducaeyauladro users ‘congtoda bea de ls conducts deftentes(C0AVD)128-37 una conden ent quelas ‘vesicles seminales ambien extn poo dessa * thojovtumen de semen unbin puedes lesa de problemas eclecién(p dune fren del earls eyeliner paral dnc de andrgenes * Unalovelumen de semen puede refer una enudacin acta en esos deinflamacdn acta de tos éganos accesories. 25.2 Problemas delicuefaccién * casionalmente, las muestras pueden no lewarse, lo que hace prcticarente imposible a cevaluaciondlagnéstica del semen. En estos casos tratamiento adicona, le mezclb rmecénica ola aigesion enaimétice pueden permit evaluaciones adconals, per las rmanipulaionesafectar a bioquimicadelplasma seminal a mettdad yla movologa de los espermatozodes,y su uso debe informarse, La lucién del semen con mets decultvo debe tenerse en cuenta al calcula a concentraciin de esperma, Se debe ular el pipeteo de desplazamiento postivo dl semen para permit la mayor precsin posible + Algunas muestras se pueden india fevar mediante a aden de un volumen qual de medio fsiolégeo 0 solueién salina tamponada con fosfato de Dulbecco, verseccén 8.45 en Ia pégina 227, seguido de pipeteo suave repetido, Sin embargo, la adieién de un media de ‘utvo cambiar la moti y concentraion de los espermatozedes, 2s como los marcadoresbioquimics. + Ls fat de homepeneidad epee aver mediante a pare sve repenaa 3 1a veces) através ‘de una agua roma de aire 18 dre interno 84 mm cave 19 (amet inerno 0.53 rm) cneztad a una jringa Ser embargo «stone serecomiend, ya que probable que ‘era de eallomiena date los expermstozedesy, pro tant,afectennegatvamente Incas del AON 1321 + tadigesin por bramena un erimapratelica de mpl espe (162422. puede judas Prepare 10 Ul de ramet en solucén salina tmponoda con osfoto de Dulbecco (Seen {845 ena pigina 227 e fel de sauer per, al merc, mayoria deber'asalerseen 15 2aminutos. Dlr semen Te (1:2) con 10 Ulin de bromina, agar con a pnta de una piperspenal sears Capitulo 2: Examen bésico 2.5.3 Evaluaciones alternativas de viscosidad + alvernativamente,laviscosdad se puede evaluarintroduciendo una varila de vidrio en Ta muestra y observando [a longitu del hile que se forma a retrar la vail, * A terenda dena muestra paralmente in Feuar, una muestra de eyaeulade scoso muestra una passa homogénea su constencia ne cambiar con sem. aks vised pede fieutartaevluscin adecussa dala motldedyconcentracén delosespermatzoies sereccén de anticuerpos anespermatozides la evluacion de marcadores bioqumicas, Los rmétodos pra reduc a iscoside son as mises que para bs problemas de eveacesn(Seelén 25.2enla pfgina 6) porlo tana, fears varios apector de fs caraterieas de ‘eyacladi. nso sb viscosidos puede mejorase afecar ls resultados dl examen de ‘ecto, 254 pH del eyaculado + Sie pt es interior a 7,060 un eyseuade sn espermatozoides, puede haber una avsenca congénita lateral de os conductosdeferentes (128-131, 123. debidoalorigen tembrienaro com, las veseuas seminales también pueden far © estar poco sesaroladas, toque provoca un baj volumen yun pH bao. + Para muesirasviscses, el pH de una pequenaalcueta del eyaculade se puede red uulzando un medider de pl dseRade parala medi de solucones viscosas,134) 2.55 Mexcla de muestras + Ateratvamemt, la mea se puedelogrrasprando la muesya ~ 10 veces en una pipeta de Pisco desechable de calor acho (apereura de aproximadamente 15 mm de mew est uando sea necesai Enonees se debe tener eu de no causa burs de ite Na merce ‘con unmerchor ce wre ya que ere data los espermatorlde, 2.5.6 Preparacién himeda - principios tHvomes de jaeldoy serene del ubrectetos tama peo eben aestate pra dar una reparacién de profinad fj de unas 20mm, que perme gue espermatoaiesnaenlreerte 135,961 ronsble que una preparacin mis pounds cue cues pore petundn oa 1 profundiaad de un preparacién (um) se btenedudendoelvlumen de ls muestra H= rm gor supe sobre la qu se extend (A ms: 0-1A AS un lume de 1D men un ponacbets de vidio pio y cubirto com un cubrecjes de 22 mm «2 mre 44 em) roporcona.un crass 62,7 ym de rofunddsd, 25.8.1 Protabilidad de espermatozoides no detectades al escanear preparaciones himedas ‘Sino se detectan espermatozoides en una o dos preparaciones himedas, existe una baja probsbilidad de sue toxviaexstan espermatozoiges en el eyaculso, en parte dependiende dal volumen total del eyaculedo. La prosabildaé de un certo nimero de espermatozcides no detectados se puede estar caleulando el intervalo de conlanza dl valor de un Po'ssonseopurdv'e stribucnt37Ho qu signiica que sno se encuentran espermatexics en prepaadin himeds, seespera encontar menos espermatooies queles que Se muesran ena Tabla 212 en todo! syacuid con un 95 yon 93,5 de probabil, erpecvamente Ls abla muestra los esusdo= de ferertesvldmenesy de una © dos preparecones Nimedas de 0 plexaminadss. racones meds ag ee ee eee 1 300 150 530 265 2 600 300 +1060 530 4 1200 600 2120 1060 8 2400 1200 4240 2120 256.2 Probablided de expermatocoides no detectados después del centrfugacisn Sino se detectan espermatozoides en una o dos preparaiones himedas de grinules de cencfugacin, existe una baja probabilidad de que ain exetanexpermatorodas en el yacula, en parte dependiendo delvolumen total dl eyaculas, La probabil de un certo numero de espermatozldes no detectados se puede estimar cleulande enteral de ‘onfanza del valor de una lsribucén de Po'sson/137H1o que sigifiea que sino se encuentran spermatozoides ea preparaciin hdmeda se espera enconrat menos espermatorodes que les que se muestra en la Tablh 2.13 en todo eyaculado con un 95 Hy un 93.5% de probablidad, expactivamente La tabla muestrs los resukados de diferentes volimenes y de una odes preparaciones himedas de 10 pl examinadas. fn la tabla la concentracén por ensfagacin se ha clelade como de* rl #50 (200, Coot 1 2 30 18 53 Fa 4 60 30 106 53 8 120 60 212 106 2557 Aalutinados espermaticos + Lapresencia de agltinacisn no es evdencasufcente para dedi una caus nmunolégia de inertia pero sugire la presencia de antcuerpos antespermaterodes; es posible que se requeran ms pruebas (Seccin 27 en la pégina 119. * Lesa eae pd seta evn della concern deo epemstriee4 z seypurdy'e pe openuea 2 Capitulo 2: Examen bésico Lirmpie la cara del hemactémetroy al cubreobjetes con agua y detergente Frotarsvavementela supe de frei eiminar los exparmatosodesrescuaks dea Seavebinan vita tutte gues pe Fotencatments neon debe eantrrenare, or gem epsnando ciara restiber yet ‘lbroobeos rate nach on gence Secon 8.25 en pagina 218) * Hay cimaras desecnables disponibles para determinar la concenratin de espermatozoides( 6,138.74), pero pueden produce esuados diferentes los delhemadtémetr de Neubauer mejrado, + Las cimaras poco profundastpiamente de 20 um) ques lean por accién caper no tienen una distrinucén unforme de ls espermatozoides debido a efecto de le transmiisn 142,143} Podtia ser posible corregiesto(14), pero no se recomienda(144h. 2.59 Area y volumen de un campo de microscopia de alta potencia (HPF) Elyolumen de semen observado en cada campo microscdpico depende dela profundidad 4e la preparacién y del drea del campo (nr, donde es aproximadamente 3.142 y res el rai del campo mieroseépieo) yl profundidad de a edmara 20.7 ym para la preparacién himeda) I didmetro del campo mieroseéplco se puede medircon un Iicrémetro de platina 0 se puede estimar dviienda el dismetra dela apertura de a lente ocular por el sumento dela lente del objetivo. Con un objetivo a0 y un ocular #70 de apertura de 20 mm, eleampe del microscopo tiene un

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