Cromatográfica en columna húmeda

Se desarrolla en una columna de absorbente, es barata, fácil, y se lleva a cabo a temperatura

ambiente, el absorbente puede ser alúmina o gel de sílice. Se tiene tubos de vidrio que sostienen
el absorbente, se disuelve la mezcla y se pone en el absorbente en la parte superior de la columna,
luego se lava la mezcla en la columna usando un solvente.

PREPARANDO LA COLUMNA

1. El absorbente lo sostienen el tubo de vidrio que tiene llave de cierre o una abrazadera de
tornillo, arriba de esto, colocar un fajo de algodón o lana de vidrio para que nada se caiga,
no use demasiado.
2. Llenar la columna a la mitad con el eluyente menos polar que se use.
3. Despacio colocar arena por medio de un embudo en la columna hasta que haya una capa
de un centímetro de arena sobre el algodón
4. Durante este procedimiento, mantener el nivel de solvente encima de cualquier material
solido en la columna.
5. Lentamente añadir el absorbente.
6. Cuando el absorbente que use (alúmina o gel de sílice) se asiente, se añade un centímetro
de arena en la parte superior para que no se mueva
7. Abrir la llave de cierre o la abrazadera para que el solvente se salga hasta que quede
apenas sobre los niveles de la arena.
8. Revise la columna, si hay burbujas de aire o grietas en la columna, desmantelar y
comenzar de nuevo.

COMPUESTOS EN LA COLUMNA

1. Usar una pipeta y un bulbo den goma para añadir la muestra lentamente en la parte
superior de la columna.
2. Abrir la llave de cierre, y dejar que el solvente entre hasta que el nivel de la solución del
compuesto este apenas encima de la arena
3. Ahora añada el solvente a la columna sobre la arena, sin molestar la arena, dejar que el
eluyente baje por la columna hasta que llegue el primer compuesto

VISUALIZACION Y COLECCIÓN

1. Se ponen una o dos gotas de eluyente en un vidrio microscópico limpio, se evapora el

solvente y se observa si hay signos de el compuesto.
2. Poner el extremo estrecho al final del punteo de CCF para una gota que salga de la
columna, la gota subirá por el tubo, se debe tener mas de una gota para que se visualice
mejor en el plato de CCF

Cuando el o los compuestos salgan de la columna, se empieza con un solvente no polar, pero no
muy apolar ya que así no funcionara, se debe dejar el solvente viejo bajar hasta después del tope
de la arena, luego se añade el solvente más polar
Cromatográfica en columna húmeda: microescala

1. Cortar la punta de una pipeta pasteur y colocar algodón en la punta

2. Añadir 50mg de arena fina
3. Gentilmente tape la pipeta para el absorbente, que son 500mg
4. Colocar un poco mas de arena para mantener el absorbente adentro
5. Ahora añadir el solvente y dejar que se humedezca la columna
6. Disolver la muestra en una menor cantidad de solvente-el menos polar será en el que se
disolverá-y añadir esta solución en la punta de la pipeta.
7. Con la muestra en toda la columna, solamente debajo de la arena añadir un poco de
solvente de elución.
8. Espere y observe

CROMATOGRAFIA FLASH

Tomar una cromatografía en columna húmeda a cierta presión y se obtiene la cromatografía flash,
se hace con aparatos especiales.

CROMATOGRAFIA FLASH A MICROESCALA

Con un bulbo de goma sobre una pipeta pasteur como el diseño de la cromatografía en columna
húmeda, presionar, de este modo se obtiene.