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MMINI-INFORME del Aeobajo ex auch
PROGRAMACION METABOLICA:
CAUSAS Y CONSECUENCIAS
Mulchand 5. Patel y Malathi Srinivasan
Departamento de Blequimtca de fa
Escuela de Medicina y Ciencias Biomédicas de
le Universidad Estatal de Nueva York
Buffalo, Nueva York
EI desarrollo programado somal de un organismo mufticelular desde Ja eélula germinal
implica uma serie de eventos sincronizados dirigidos por instrucciones adquiridas durante la
concepeién. Durante los periodos criticos tempranos de la vida el organismo también tiene le
habilidad de responder a situaciones del medio ambiente que son extrafios al normal desarrollo por
adaptaciones a eseala cchilar, biomolecular y bioquimica, Tales adapteciones tempranas a un
estimulo/stress notricional cambian definitivamente la fisiologfa y el metabolismo del organismo y
continéan siendo expresados aun en la ausencia del estimulo/stress que les dieron comienzo, un
preceso denominade programacién metabélica. Un breve resumen Ge los hallazgos de estadios
epidemiolégicos humanos y animales se presenta abajo apoyando el concepto de programaciéa
metabélica inducida por experiencias nutzicionales en los periodos eriticos durants al desarrollo con
consecuencias posteriores en la adultez! Este mini-informe. focalizara en la programacin metabética
con referencia a un nuevo modelo de ratas desarrollada en muestro laboratorio.
Eyidencia de programacidn metabélica extrafilas de datos enidemiolgicos hamanos
‘Numerosos hallazgos epidemiolégicos indican que Ja programacién metabélica ocurre ea
humanos. Barker, basindose en estudios epidemiolégices, fue el primero en sugerir que el tam:
rcionado de recién idos era el resultado de la malnutrici ‘matema con up
wentédo dé fesultads: pata Ia Salid (Diabetes apo. 2hipertensisr emmedades
cand ares) en la vi sciéa nacido. Estas observaciones primarias en la ahora
amijliamente reconocida hipétesis del “origen fetal” enfatizaron en la importancia de wna adecuada
La programacién mutricional ha sido demostrada en estudios animales. En los estudios
cantidad us, comida
= r "Rene consecuencias @ lar
crecimiento, Las mieneias na inducida por ma dicta hipoprotei
restriecién calérica durante el embarazo causa cambios severos en la estructura y funcién de
numerosos érganos de las erias. Ratas jas alimentadas con dieta hipoproteicas tuvi
‘[as alteraciones registradas fueron: vascularizacién
1‘Luciana 2004
reducida del islote, capacidad de proliferacién de las Gélulas By disminucién del tamailo del islote,
Gisminucién de la sensibilidad de ta liberaciéa de insulina esiimlada por gucosa y sensibilidad
alterada 2 la insulina en mésculo, Ademés, los nicleos hipotalémicos suiren malformaciones en estas
ratas destetadas; esto se acompatia de reduccién de vascularizacién de la corteza cerebral en las crias.
‘Las capacidades metabélicas hepaticas, musculares y dal tejido adiposo estén comprometidas por 1a
restriccién proteica materna durente el embarazo y lé lactancia con resultados adversos en la adultez.
Elevadas comcentraciones de insulina durante periodos criticos del deserrollo, como ocurre
perinatalmente en fas crfas de madres diabéiicas embarazadas, condujeron a mala organizaciéa
definitiva del niicleo ventromedial hipotalémico seguido de intolerancia a la glucosa en la vida,
adulta. Colectivamente, los resultados de modelos animales indican que aun los periodos breves de
imanipulacién dietaria en la vida temprana tienen implicancias pera causar patologias, las cuales se
‘veelven evidentes solamente en la aduitez.
jodelo “rata nacida en
La mayoria de los estudios animales citados arriba demostraron que la desnutrici6a matema
durante el embarazo levaba a un retardo del crecimiento intranterino y adaplaciones eeompafantes—
ajo condiciones adversas, A excepcidn de los efectos adversos descriptes
causades por 4 disminucién de Ta cantidad de alimento suministrado a Jes ratas, el efecto de una
nutriciéa alterada durante el periodo de lactencia no ha sido investigado exhaustivamente en las
Tatas. Esto se debe alas dificultades experimentales en criar exitosamente a estas ratas recién
nacidas con una modificacién en la férmula de la leche y alejadas de sus madres. La tScnica de
Hall da un sentido al estudio de los efectos de una mutricién
alterada durante el periodo de lactancia. Nosotros hemos adapfado esta técnica para evaluar las
consecuencias de un cambio en la “calidad” nutricional (se pas6 de Ja leche de rata, que es rioa en
lipidos a una lect 30) Garante eI periodo de lactancin de estas raias. ET
resultado fue ef m ‘ina faza” (también denominadas como “ratas HC”)
donde tas ratas recién nacidas fueron criadas en tazas de Styrofoam Mlotando en un baiio’de agua &
temperatura controlada, Retas de 4 dias de edad fueron alimentadas por cénules intragistricas,
introducidas sin cirugia, y criadas con leche rica en hidratos de carbono (el 56% de las calorias
provenian de hidratos de carbon comparado.con_el 8% de la leche de rata). Se les dio esta leche
‘hasta los 24 dias de edad, y después se les comenz6 a dar alimento.de laboratorio. A otro grupo de
ratas de 4 dias de edad se las alimenté artificialmente con leche rica en lipidos (con tina composiein
de macronuirientes similar a la leche de rata para dem que la técnica de crianza artificial per se
no tiene efectos de programuciod metabolica) y un tercer grupo de ratas recién uacidas alimentadas
por sus propias madres sirvierom como control. EY protocolo detallado seguido por auestro
laboratorio para los experinenios realizados usando el modelo “rata recién nacida en una taza” se
describe en otros trabajos’. La figura 1A ilustra las adaptaciones metabélicas en Ia primera
generacion de ratas HC.
Adaptaciones metabilicas inmediatas en el perfodo de fnctancia
* Las abreviatras usadas en este informe son: ras HC: mas eiadas con leche ra en hidtos de cxrbore; SAPKC2: proteina quinas,
ectivada porsiese-2 PD-quinasa: fositidinestol3-quinasa; GLP-L peptido smd plueagse-1
Los trabajos son: a) Hiremalagur, BK, pbanaing, G.t, Kathan,SC, yPata, MS. (£992) |, Nate Biochem 3,1724208)
emalagis, BK, VadlamudiS, Johenning, G.L, y Palel M5. (1.595) at}. Ober, 17, 495-502
EiUn_resultado inmediato de la dieta_rica_en
perinsulinemia dentro de las 24 horas de tisfaurada la dieta, persistiendo la misma durante el
periodo de Jactancia y en Ja adultez incluso ain después de haber retisado la leche rica en hidratos 3
carbono en el tiempo del destete (Fig. 1A y 2A). Durante el periodo de lactancia no hubo diferencias
en el peso corporal y los niveles de glucemia entre las ratas HC y los grupo coatrol. La superposiciéa
de la ventana critica entre el desarrollo pancredtico postnatal coa la dieta rica en hidratos de carbono
en las ratas HC sugiere que el pancreas endocrino es el organo blanco de adaptaciones significativas.
Hemos observado alteraciones significativas a escala celular, molecular y bioquimica en islotes
aislados de ratas HC recién nacidas y también hemos observado la programacién de estas
adaptaciones en Ja adultez.
Las adaptaciones celulares inducidas por la modificacién en Ja dieta durante el peticdo de
Jactancia incluyen un némero incrementado de islotes més pequefios en Jos pancreas HC comparados
con las ratas control. Estos islotes tienen una 4rea inmunopositiva mayor para Ja insulina, lo que da
como resultado un incremento neto de la masa preductora de insulina en los islotes HC.
Adicionalmente, la tasa de apoptosis y la expresién de antigeno nuclear de células proliferantes estin
‘inversamente alteradas en los islotes y el epitelio ductal de las ratas HC. Uno de los factores
contribuyentes a Ja ontogenia alterada ha sido atribuida al cambio en la expresién del factor de
crecimiento simil insulina I.
‘Numerosas adaptaciones moleculares se observaron en islotes neonatales en respuesta a la
dicta rica en hidratos de carbono. Se observaron en los islotes de raias HC neonatales incrementos de
la biosintesis y la expresion génica de preproinsulina (Fig. 2B). Adicionalmente, los niveles de
factor de trascripcién de ARNim tales como el factor homeobox" pancredticoducdenal-1 (PDX-1) . el
factor del islote-1 (Isl-1), el factor estimulante corriente arriba-1 (USF-1), el factor regenerador-3
(ceg-3), el Beta 2/NeuroD y el factor nuclear hepatocitico §3 estan significativamente elevados en
los islotes HC neonatales. Los niveles de ARNm de SAPK-2, PI3-quinasa, Acetil-CoA carboxilasa,
GluT2 y los sustratos de receptores de insulina 1 y 2 son también significativamente mes altos
estos islotes HC. PDX-1 es un importante transactivador del gen de Ja insulina y es un componente
esencial de los mecanismos causados por la glucosa que modula la eccién promotora de Ja insulina.
La actividad fijadora“de"/ADN de PDX-1 ha sido propuesta set modulada por Ja glucesa
mediante una cascada de fosforilacion que involucra a SAPK-2 y PI-3 quinasa, la cual facilita la
translocacién de la forma fosforilada activa de 46 Kda al nficleo lo que provoca un aumento en la
transeripeién del gen de la insulina (Fig. 3). La posible correlacién entre los efectos observados de la
dieta rica en hidratos de carbono in ratas HC y la transcripeién del gen de la preproinsulina se
muestra en Ja figura 3, También PDX-1 es un importante factor de transcripcién que se encarga de la
progresiGn de las células ductales pluripotenciales, en células endecrinas. El incremento significative
de In expresién génica, la actividad fijatiord del ADN, y el componente proteico de PDX-1 en los
islotes HC neonatales.sugieren que estos juegan un papel fundamental en las adaptaciones celulares
como asi también del inicio y mantenimiento de 1a hiperinsulemia en este modelo de rala. Los
factores de transcripcién como el Isl-1, Beta2/NeuroD, reg-3 y el factor hepatocitico nuclear 5-3
también contribuyen a la organogénesis pancreética. Los inerementos en la expresién génica de estos
factores sugieren que ellos también contribuyen a la modificacion de la arcuitectura del islote en las,
ratas HC meonatales. El andlisis de genotecas de ADN circuls~ ha indicado significativos cambios en
Jos patrones de expresién génica global en las ratas HC neonatales como asi también de los islotes
5 omeotox: Secuencia altamente conservada dentro do numerocos gones del dsarrot, inelies ins elacinns homesicoso
grnes HOX. Elheaenbox codifca una oowerela de aincacidee (el homecernic) capuz de unirseal ADN para sa
segulzciéa, Puente: Biologia de Custis @ Eiciinde adult jendo que son esexviales un amplio abanico de alteraciones moleculares para el
| inicio ere del fenotipo HC en las ratas H¢
Las significativas adeptaciones bioquimicas resumidas abajo inician y sostienen Ja
hiperinsutinemia en ratas HC neonatales. Un rasgo caracteristico de las ratas HC neonaiales es un
ineremento de 6 veces en Ia insulinemia. (Fig. 2A). Hay un incremeato en la sensibilidad distinta de
Ja respuesta seeretoria de insulina stimula por glacosa en los isles HC; (Fig. 20) y este hecho
esta asociado con Ios inerementos en actividad de la hexoguinasa de bajo Km y con un incremento
de la cantidad de protefnas que conforman el GluT? (Fig. 2D), La secrecién de insulina de los islotes
esta_regulada por 3 vias: la via dependiente del canal Karp, la via de mimento independionte del
canal Kyzp y Ja via de aumento independiente del canal de Ca” y estas vias tienen una regulacién
ascendente en Ios islotes HC. Los niveles cireulantes de GLP-1 son siznificativamente mas clevados
en las ratas HC sugiriendo que los eventos mediados por ei GLP-1 contribuyen significativamente
con la hiperinsulinemia de las ratas HC. En adicién con su efecto insulinetrépico, el GLP-1 estimula
la transeripeién del gen de Ja preproinsulina y el gen PDX-1 y también la proliferaciéa y neogénesis
de células Ba partir del epitelio ductal en toedores. A la luz de lo expuesto arriba, el incremento
significative de niveies circulantes de GLP-1 en las ratas HC de 12 dias de edad tiene importantes
‘conseenencias para el fenotipo IC en las ratas HC Iactantes.
Debido a Ia kiperinsulinemia crdnica, la capacidad de lipogénesis hepatica se mejora en las
ratas HC. Enzimas como la glucoquinasa y la enzima mélica que normalmente aparecen en el higado
ea el destete son precozmente indvcidas por el tipo de alimentaciéa que reciben estas ratas
sugiriendo que su aparicién no es desarrollo-dependiente, sino controlada por la presencia de un
estimulo Ga hiperinsulinemia inducida por fa dieta). Se desprende de lo arriba expuesto que Ja
alimentacioa de ratas con una formula de leche rica en hidratos de carbono, en Iugar de Ta leche
matema, durante el periodo de lactancia provoca alteraciones significativas en las fimciones del
islote como asi también de Ia respuesta metabélica de los tejidos periféricos, los cuales son
importantes para el desarrollo de la obesidad adulta. (Fig. 4, fase adaptativa)
Hes £1 enlaa
Programacién del ta
La hiperinsulinemia persiste en Ia adultez de las ratas HC a pesar del retiro de la dita rica en
hidretos de carbonos en el 24° dia de vida. (Fig. 1A) Las alteraciones observadas ea la via secretora
de la insulina en los islotes HC neonatales son programadas ea los islotes del adulto.. Los cambios
‘moleculares (incremento en Ja transeripciéa del gen de la preproinsulina) observados en Ios islotes de
las ratas HC neonatales también se observan en los islotes de los adultos HC. Hay un incremento en
la masa productora de insulina del pancreas de los adultos HC. La hiperinsulinemia orénica se
acompatia de un incremento en el peso corporal de los animales desde el dia 55 en adelante y se llega
a una obesided muy desarrollada en el 100° dia. Aunque las ratas HC adultas se mantienen ea
normoglucemia, se observa una respuesta alterada de Ia prueba de tolerancia a la glucosa en et 75°
dia. Ademés, el higado y el tejido adiposo muestran un aumento de su capacidad lipogénica en la
adultez. Un aumento del tamatio celular en el tejido adiposo del epididimo refleja la adiposidad
observada en el adulto. La cantidad de glucdgeno y Ia cascada de activacién de Ia glucdgeno
sintetasa tienen una regulacién descendente en el higado y en el misculo esquelético y tienen una
regulacién ascendente en el tejido adiposo del epididimo de fas ratas HC adultas. Tomados jumtos,
estos hallazgos indican que las adaptaciones tempranas estén programadas y son acompaiiados por
cambios adicionales, probablemente disparados por fuctores de la adultez. (Fig. 4, Fase de
persistencia).
El efecto generacik icionalmente inducido en
Ja programaci6iLuciana 2004
"Una’-importatte-e' inesperdder consecuentia’
inducida es la trmsmisién del fenotipo desde la ma
alterado de secrecién de insulina en las 48 horas posteriores al desiete, Este oourre en el 24° dia,
de ‘flulas, causando niveles alterados de cxpresién génica en tojldes, especifices. Ademés, los
eerie ca grades de metilacién de ADN en tjdos especifieos se tansmiten's les eéhns hijas por
eplicacién, lo que produce la inmortalizacién de las modificaciones iniciales
Comentarios Finales ” \
E] Modelo “rata reciéa nacida en ma taza” es tinico en el sentido que programa
ae a Teche nenle l metabolismo de una rata adulta por el simple hecho de modificar composiciéa
Buestros estudios con ratas que la naturaleza y duracién de los Programas de tratamiento dietario
Programan el inicio de condiciones patolégicas en el adullo que mimetizan enfermedadesLuciana 2004
metal
slicas mayores, tales como la obesidad y la diabetes tipo 2. Las evidencias apuntan a la
iperinsuifinemia inducida por dieta como el evento primario en ia programacién metabélica en las
ratas HC.
En un reporte reciente Mokdad y col. sefaleron que Je epidemia de obesidad es uaa emenaza
cxitica para la salud piiblica en los Estados Unidos (casi 1 de cada 5 americanos son obesos). Es poco
probable que los genes relacionados con la obesidad estén involucrados en la inorementada
incidencia de esta enfermedad, porque no ba habido cambios significativos en las ultimas décadas
del “pool” de genes en los Estados Unidos. También ha habido un incremento del 33% en la
incidencia de diabetes diagnosticada en la década pasada, y esto se ha correlacionado fuertemente
con el ineremento de la incidencia de obesidad, sugiriendo que la obesidad es un factor de riesgo
mayor pata las enfermedades crénicas. Con esto empicza a verse que los origenes de las
enfermedades crénicas no se limitan solo a los genes heredados y/o al estilo de vida sedentario. Los
resultados obtenidos a partir de la rata HC sugiere que las experiencias matricionales durante la vida
inmediata postnatal tales como la sobrealimentacién y la introduccién temprma de comidas ricas en
hidratos de carbono después del destete (por ejemplo cereales, frutas, jugos, ete.) pueden coniribuir a
la programacién metabélica levando al desarrollo de enfermedades adultzs como la diabetes y ta
obesidad. El nuevo campo emergente de la programacién metabélica por Jo tanto offece una ruta
adicional para examinar la etiologia de las enfermedades adultas.
‘TRADUCCION DE TEXTOS DE FIGURAS
Fig 1. Programacién metabélica indueida por la dieta en la 1* y 2° gencraciin de ratas HC. Se
muestran las adaptaciones metabélicas en la 1* generacién (A) y 2° generacién (B) de ratas HC en.
respuesta ala alimentacién con leche rica en bidratos de carbono.
Fig2. Adaptaciones biguimicas en los islotes pancredticos de rtas HC recién nacidas. 2A
representa fos niveles de insulina plasmaticos (en piM) en las ratas HC recién nacidas. 2B muestra los
niveles relatives de ARNm de preproinsulina y PDX-1 en islotes de ratas HC de 12 das de edad
comparindolas con ratas alimentadas por sus madres. 2C represenia la respuesta secretora de
insulina ce los islotes de ratas HC de 12 dias de edad después de un esfirmlo con glucosa. La
respuesta se mide en 30 islotes y en 60 minutos. 2D representa Ja actividad de Ja hexoquinasa de
bajo X., «n fracciones de sobrenadante (S) y homogeneizado (P) de extracios de islotes de ratas HC
de 12 dias de edad, comparéndolas con ratas alimentadas por sus madres. La actividad se expresa en
miliunidades‘mg de proteina.
Fig. 3. Mecanismos probables de la regulacién de la trascripciéa del gen de la
‘Preproinsulina en islotes de ratas HC neonatales, Este esquema indica las repuestas inducidas por
las dieta riea en hidratos de carbono en las ratas HC, las posibles interacciones entre ellos y la
‘consecuente regulacién de la trascripcion del gen de la preproinsulina
Fig. 4. Las 3 fases de la programacién metabélica en las ratas HC. Se mmestran fos posibles
mecanismos para las adaptaciones a la dieta rica en hidratos de carbono en el periodo de lactancia
(Fase cdapativa), ta persistencia en la adultez de estas adaptaciones (Fase de persistencia) y su
iransmision a la descendencia (Fase de transmisién)