PROTEINAS

EXPERIMENTAL
 PARTE EXPERIMENTAL
1. Reacción con Ninhidrina: Presencia de aminoácidos libres.
A cada uno de los 3 tubos de ensayo agrégales 1 mL de triptófano, albumina y muestra problema.
Agregar a todos los tubos 2 gotas de la solución de ninhidrina al 0.3%. Calentar unos minutos y
observar. Se considera positiva a la reacción si la solución toma un color violeta.

Reacción con Ninhidrina: Los aminoácidos libres, en solución acuosa, al ser calentados con
ninhidrina dan una coloración violeta o violeta azulada debido a la formación de un producto de
condensación entre el aminoácido y el reactivo. Con esta reacción identificamos grupos aminos
libres.
 PARTE EXPERIMENTAL
2. Reacción Xantoproteica: Presencia de aminoácidos con restos aromáticos
En cada uno de los 4 tubos de ensayo colocar 1 mL de: tirosina, glicina, albumina y muestra
problema. Añadir a todos los tubos 1 mL de acido nítrico concentrado. Calentar por unos minutos
y observar. Agregue a todos los tubos 1 mL de hidróxido de sodio al 20%. Observe y anote.

Reacción Xantoproteica.- Esta reacción permite detectar la presencia de los grupos bencénicos de
ciertos aminoácidos .el acido nítrico es presencia de esos grupos aromáticos de lugar a la
formación de derivados nitratos de color amarillo que por alcalinización intensifican su color.
 PARTE EXPERIMENTAL
3. Prueba de Millon: Presencia de aminoácidos con restos fenólicos.
En cada uno de los 3 tubos de prueba colocar 1 mL de: tirosina, albumina y muestra problema. A
todos los tubos agregarles 5 gotas de reactivo de Millon, calentar por unos minutos y observar. La
aparición de un color rosa salmón o rojo nos indica que la prueba es positiva.

Prueba de Millón.- Es una prueba característica para restos fenólicos, cuando existen estos restos
representan una coloración rosa salmón. El reactivo de Millón es una mezcla de mercurio y acido
nítrico( nitrato mercurioso y mercúrico).
4. Prueba de aminoácidos azufrados:
En cada uno de los 3 tubos de prueba colocar 20 gotas de soluciones de: cisteina, albumina
y muestra problema. Luego agregar 8gotas de NaOH al 40% y calentar. Añadir 5 gotas de
acetato de plomo al 10%. Observar si cambia de color.

Prueba para aminoácidos azufrados.- Todos los aminoácidos azufrados y las proteínas que
tienen estos aminoácidos, reaccionan con el acetato de plomo en medio alcalino formando
sulfuro de plomo y la solución toma un color marrón o gris oscuro que se debe a la
liberación del azufre en medio alcalino y a ebullición, formando el PbS.

• R-SH + 2 NaOH -----> R-OH + Na2S + H2O

• Na2S + (CH3-COO)2 Pb -----> 2CH3-COONa + PbS (precipitado)
5. Reacción de Biuret: Presencia de enlaces peptídicos
A 20 gotas de solución de albumina, añadir 20 gotas de hidróxido de sodio al 10%, luego una gota de
solución de sulfato de cobre al 1%. Observar el color que se forma. Repetir el ensayo con un aminoácido
y con su muestra problema.
Reacción de Biuret.: Las proteínas y pépticos que contienen por menos 3 unidades de aminoácidos (2
enlaces peptídicos) dan una coloración violeta característica al reaccionar( en medio alcalino) con una
solución de sulfato cúprico.
Esta prueba es muy sensible, utilizada para detectar la presencia de enlaces peptídicos y también en la
determinación cuantitativa de proteínas. Es negativa con los dipeptidos y con los aminoácidos libres.
6. Desnaturalización de albumina:
En 5 tubos de ensayo colocar 20 gotas de solución de albumina.
El primer tubo se calienta poco a poco observando la temperatura aproximada ala que tiene
lugar la coagulación
Al segundo tubo se adiciona 4 mL de alcohol (etílico)
Al tercer tubo adicionar unas gotas de acido clorhídrico concentrado
Al cuarto tubo adicionar unas gotas de acido nítrico concentrado
Al quinto tubo, añadir 4 mL de solución concentrada de hidróxido de sodio
Anotar en que casos se produce la coagulación
7. Precipitación de proteínas mediante cationes:
A cada uno de 6 tubos adicionar las siguientes soluciones.
Tubo a: 3 mL de agua
Tubo b: 3 mL de solución de albumina
Tubo c: 3 mL de agua mas 3 gotas de acido clorhídrico
Tubo d: 3 mL de solución de albumina mas 3 gotas de acido clorhídrico
Tubo e: 3 mL de agua mas 3 gotas de solución de NaOH al 10%
Tubo f: 3 mL de solución de albumina mas 3 gotas de solución de
NaOH al 10%
Observe que hay 3 parejas de tubos a con b; c con d y e con f. Los miembros de cada pareja se diferencian
únicamente en que mientras un tubo tiene solución de proteína, en el otro esta se ha sustituido por agua
destilada. Los tubos con agua( a, c y e) son el “blanco” o patrón de comparación de aquellos que tienen
proteína. Una de las parejas esta en medio neutro, otra pareja en medio alcalino y la otra en medio acido. Los
ensayos en blanco( sin proteína) son necesarios para determinar si el efecto observado se debe realmente a la
precipitación de la proteína o es el hidróxido metálico el que esta precipitado.

Adicione a todos los tubos 20 gotas de solución de sulfato de cobre al 10%, agite y observe los resultados,
haciendo las comparaciones por parejas. Anote los tubos en los que se cree ha habido precipitaciones de la
proteína.
8. Precipitación de proteínas mediante aniones:
En este ensayo no se necesita preparar o hacer pruebas con blancos o
patrones, ya que acá no hay las interferencias del caso anterior. Por ello,
se preparar únicamente 3 tubos idénticos a los tubos b,d y f del ensayo
anterior. A todos los tubos se les adiciona 2 gotas de solución de
ferrocianuro de potasio, observe el tubo que se presente precipitado de
proteína.

Precipitación con Iones:

Algunos cationes de metales pesados (𝐴𝑔+ , 𝐻𝑔+2 , 𝐶𝑢+2 , 𝑒𝑡𝑐) y también
algunos aniones ( perclorato, picrato, ferrocianuro, etc.) causan la
precipitación de las proteínas. Los cationes metálicos reaccionan con
proteínas cuando estas se encuentran en su forma aniónica o básica ( a
pH mayor a su pI) dando sales con iones carboxilato de proteína.
Similarmente, los aniones formaran sales con las proteínas cuando estas
se encuentran e su forma catiónica o acida ( a pH menor que su punto
isoeléctrico)