Clase 1 - 25-08-2013

Fundamentos y Aplicaciones de la 26/08/2013
Cromatografía Gas-Líquido DQO-FCEN-UBA

2013
Fundamentos y Aplicaciones de Cromatografía Gas-Líquido. DQO-FCEN-UBA 2013
Definición de IUPAC (International Union of Pure and Applied

Chemistry):
La cromatografía es un método físico de separación en el cual los
componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una de
ellas es la fase estacionaria, mientras que la otra (fase móvil) se
mueve en una dirección definida.
Cromatografía de elución:
Flujo continuo de fase móvil
Introducción de muestra – solución concentrada
Denominación del proceso cromatográfico → fase móvil

Cromatografía → gaseosa
→ líquida
Componentes A, B
Partición entre dos fases
A: mayoritario en fase móvil

B: mayoritario en fase estacionaria
A eluye antes que B
Ensanchamiento de los picos

↓
Procesos cinéticos
1
2013
Constante de distribución (coeficiente de partición)

Constante termodinámica, depende de T

Tipo de sorción:
Adsorción → superficie de la fase estacionaria
Absorción, partición → seno de la fase estacionaria
Uno o ambos procesos pueden determinar la separación
Cromatograma típico para un único soluto B
VR = tR × Fc
Velocidad de flujo constante
VM: aire, metano
VR = VM + KC VS
El soluto avanza con la fase móvil o queda sorbido en la fase estacionaria

4
2
2013
Ventajas y desventajas de la cromatografía gaseosa

Ventajas:
1. Análisis rápidos, en el orden de minutos.
2. Eficiente, con alta resolución.
3. Sensible, es posible detectar en el rango de ppm y frecuentemente ppb.
4. No-destructivo (la cromatografía), lo cual hace posible acoplar el

cromatógrafo en línea a un espectrómetro de masa.
5. Análisis cuantitativos muy confiables, con desviaciones estandar típicas

1-5%
6. Requiere poca muestra, típicamente del orden de µl y µg.
7. Simple y de bajo costo.
1. Análisis rápidos, en el orden de minutos.
3
2013
2. Eficiente, con alta resolución.
Eficiencia: N°de platos donde ocurre la separación
Ventajas y desventajas de la cromatografía gaseosa
CG reemplazó a destilación en la separación de muestras volátiles.

Suma separación por naturaleza química de la fase estacionaria.
Desventajas:
1. Volatilidad de las muestras. Límite práctico: 380 °C, Pv ≥ 60 mm Hg
Teb ≤ 500 °C, PM ≤ 1000 Da
1. No adecuado para muestras termolábiles.
2. Difícil para muestras preparativas.
3. Requiere confirmación de la identidad de cada pico, usualmente para

esto se usa CG acoplado a espectrómetro de masa.
4
2013
EQUIPAMIENTO INSTRUMENTAL
Gas carrier, controlador de flujo, inyector, columna, horno,

detector, sistema de datos
9
Dos tipos de columna: empacada y capilar
10
5
2013
Gas carrier, controlador de flujo, inyector, columna, horno, detector,

sistema de datos
11
Gas carrier
Trasporta la muestra a través de la columna.
Inerte ⇒ no hay interacción química con los analitos
Adicional: Provee una matriz adecuada para el detector
Detector Gas carrier

Conductividad térmica Helio
Ionización de llama Helio o nitrógeno
Captura electrónica Nitrógeno muy seco
12
6
2013
Gas carrier – Pureza
O2, H2O: pueden atacar la fase estacionaria (poliéster, poliglicol,

poliamida)
H2O: puede desorber otros contaminantes ⇒ background alto,
picos fantasma
Hidrocarburos: background elevado en FID ⇒ menor capacidad
de detección
Calidad Pureza Abreviatura

Grado investigación 99,9999 6.0 (6 nueves, luego 0)
Ultrapuro 99,999 5.0 (5 nueves, luego 0)
Alta pureza 99,995 4.5 (4 nueves, luego 5)
H2O, hidrocarburos: filtros de molecular sieve 5 Å

O2: filtros especiales (proveedores de columnas)
13
Gas carrier – Control de flujo y medición

Importante para: eficiencia de la columna
análisis cualitativo
Valor típico: 0,75-1,0 ml min-1 para columna con 0,25 mm i.d.
Análisis cualitativo → Reproducibilidad de los tR
Regulador de dos etapas
2500 psig (17.240 kPa) → 20-60 psig (138-414 kPa)
14
7
2013
Gas carrier – Control de flujo y medición

Si T = cte ⇒ P cte mantiene velocidad de flujo cte
Si T programada ⇒ viscosidad del carrier aumenta con la
temperatura, velocidad de flujo disminuye (si P = cte)
Ejemplo: si Pcabeza = 24 psi, a 50°C Fc (He) = 22 ml min-1
a 200 °C Fc (He) = 10 ml min-1
⇒ Controlador diferencial de flujo, flujo de masa constante

(columnas empacadas)
Otro dispositivo: Control electrónico de presión (EPC): detecta

la velocidad de flujo decreciente y aumenta la presión en
consecuencia (columnas capilares).
15
Ingreso de muestra y dispositivos de muestreo

Compatible con diferentes muestras (gas, líquido, sólido)
Introducción rápida y cuantitativa de la muestra
16
8
2013

Compatible con diferentes muestras (gas, líquido, sólido)
Introducción rápida y cuantitativa de la muestra
Columna empacada Columna capilar

Tipos de inlets
Vaporizador flash Split
On-column Splitless
On-column
Ingreso de la muestra a la columna como una banda aguda y
simétrica
Valor típico: 0,01-3 µl de muestra líquida para una columna
capilar de 0,25 mm i.d., 0,2 µm espesor de film
Mayor N°de analitos, mayor tamaño de muestra. El
comportamiento de cada analito suele ser independiente de la
presencia de los otros.
Análisis de trazas: mayor tamaño de muestra.
17

Muestreo de gases: jeringas o válvulas para gases.
Jeringa: flexible, económica, más usada
Válvula: mejor reproducibilidad, menor entrenamiento,

automatizable.
18
9
2013

Muestreo de líquidos: jeringas de 1; 5 y 10 µl, aguja de punta
biselada.
Evitar sobrecalentamiento de muestra y descomposición térmica.

Muestreo de sólidos: se disuelven y se inyecta la solución
Autosamplers
19

Septa. Silicona polimérica
Considerar estabilidad térmica, sangrado,
tamaño, duración, costo.
Recambio regular
20
10
2013
Columna
Columnas empacadas. Longitud: 3; 6; 9 ft (0,9; 1,8; 2,7 m)
Diámetro externo: ¼”; ⅛”
Acero inoxidable: más fuerte
Vidrio: más inertes
Empacadas con partículas pequeñas,
cortas, bajo número de platos
(separaciones)
21
Columna
Columnas capilares. Sin material de empaque.
Capa de fase estacionaria líquida
sobre las paredes internas de un tubo
de sílica fundida.
OT = open tube ⇒ baja resistencia al flujo de gas carrier ⇒

longitud hasta 100 m
Separación eficiente de mezclas muy complejas
22
11
2013
Zonas de temperatura
La separación cromatográfica ocurre en la columna termostatizada.
La columna está fija entre el puerto de inyección y el detector,

ambos a temperatura controlada.
Temperatura del inyector.

La muestra debe vaporizarse rápidamente para que no haya
pérdida de eficiencia.
Deben evitarse la descomposición térmica o reacciones.
Tinyección: Teb + 50 °C
Aumentar Tinyección: → puede mejorar la eficiencia o la forma del

pico
→ puede cambiar tR, área o forma ⇒
descomposición
23
Zonas de temperatura - Temperatura de la columna

Tiempo razonable de cromatografía.
No es necesario que T sea mayor a Teb de la muestra. Mejor inferior a
Teb.
Menor T, mayor resolución
Mayor tiempo de análisis
Ensanchamiento por difusión
Mezcla de hidrocarburos
¿Corrida isotérmica o Mayor T, superposición de analitos

con programa de T? Menor tiempo de análisis
24
12
2013
Zonas de temperatura - Temperatura del detector
Evitar la condensación de la muestra en el detector.
Detector de conductividad térmica: control de ±0,1 °C para tener una

línea de base estable
Detector de ionización de llama: se debe evitar condensación del agua
formada.
Detector
Analiza el flujo de gas que sale de la columna, registra la
cromatografía → cromatograma
FID (flame ionization detector): alta sensibilidad, linealidad y

detectabilidad. Simple y económico.
Otros: TCD (thermal conductivity detector), ECD (electron capture

detector)
25
Sistema de adquisición de datos

Debe medir la señal de salida del detector a alta velocidad de
muestreo.
Integradores: microprocesadores con conversor analógico-

digital
Cromatograma → señal analógica
Reporte digital → análisis cuantitativo (inicio, máximo, final y
área de cada pico)
Computadoras: manejan sistemas cromatográficos simples o

múltiples
Envían resultados a terminales locales o remotas.
Además controlan el instrumento, el tratamiento de datos y la
posible transferencia a otros dispositivos.
Plaqueta conversora A-D conectada a la computadora.
26
13
2013
Conceptos y términos básicos

Constante de distribución

Si KC es grande, el soluto está más retenido en la fase estacionaria.
La fase móvil avanza por la columna ⇒ Proceso fuera del equilibrio
Suposiciones:
Si la cinética de transferencia de masa es rápida, el
comportamiento del sistema se aproxima al equilibrio.
Los distintos solutos presentes en la muestra no interaccionan

entre sí. Suposición válida porque: hay bajas concentraciones de
solutos, la separación es mayor a medida que avanzan.
27

Factor de retención

Otra forma: β β

β es la relación de volúmenes de cada fase

k es el factor de retención (relación de masa)
En las columnas capilares se puede calcular β como:

β
rc, radio de la columna; df espesor del film

Si rc >> df ⇒ β

En columnas capilares β ∼102 (10 veces β de columnas empacadas)
28
14
2013


β β ,

,
Si reordenamos las ecuaciones podemos introducir el “volumen de

retención ajustado”
V’R = VR – VM = KC VS
Es el tiempo de retención medido a partir de los picos no retenidos
(VM)

´

- 1

⇒ se puede medir
k de cada soluto.
29


β β

,
,
⇒ se puede medir k de cada soluto.
Si un soluto es retenido por la

fase estacionaria ⇒ VR, tR y k
aumentan.
Si no se conoce KC, se puede

usar k como medida de la
sorción del analito a la fase
estacionaria.
Si además se conoce β (en

columna capilar) ⇒ se puede
calcular KC. 30
15
2013

Forma de los picos
Luego de procesos de sorción y desorción repetidos, las moléculas
de un soluto dado generan una distribución de tR. La forma ideal de
un pico cromatográfico es una curva gaussiana.
Pico ancho:
Común en columnas
empacadas
Indica cinética lenta de
transferencia de masa
31

Forma de los picos
Picos asimétricos:
Fronting o tailing
32
16
2013

Forma de los picos
Picos tipo doblete:

Dos solutos que no se
separan.
Verificar la reproducibilidad:
puede ser inyección incorrecta,
saturación de la columna o
degradación de la columna
33

Forma de los picos
La forma ideal de un pico cromatográfico es una curva gaussiana.
wi = 2 σ
w1/2 = wh= 2,35 σ
σ: desviación estándar
wb: ancho en la base del pico

wb= 4 σ
34
17
2013

Número de platos
La eficiencia de una columna cromatográfica se determina en base
al ancho del pico, teniendo en cuenta su tR.
w aumenta con tR
35

Número de platos
La medida más común de la eficiencia de una columna
cromatográfica es su número de platos N.
2 2 2
N 16 5,54
σ
N no tiene unidades
Si N es alto ⇒ la
columna es eficiente
36
18
2013

Altura de plato, H
También expresa la eficiencia de una columna cromatográfica.

H

H tiene unidades de longitud. L, longitud de la columna

Es mejor que N para comparar columnas de longitudes diferentes.
También llamada HETP: height equivalent to one theoretical plate.
Una buena columna tiene H pequeño y N grande
37

Resolución, RS
Expresa el grado de separación de picos adyacentes. En
cromatografía:

",! %"#,
( !
#$ &
, ,
' , ,
En esta figura d = w ⇒ RS = 1
Para separación completa en la

línea de base, RS ≥ 1,5
38
19
2013

Teoría de la velocidad – Ecuación de van Deemter
Para explicar el ensanchamiento de las bandas cromatográficas en
columnas empacadas, expresado en términos de la altura del plato,
se identificaron 3 efectos: Difusión por caminos
múltiples, eddy diffusion
!
) * + ū + C ū
Transferencia de
masa en la fase
Difusión molecular
estacionaria líquida
longitudinal
ū: velocidad lineal de gas

Para maximizar la eficiencia de la columna, H debe ser mínimo.
39

Teoría de la velocidad – Ecuación de van Deemter
Para explicar el ensanchamiento de las bandas cromatográficas en
columnas empacadas, expresado en términos de la altura del plato,
se identificaron 3 efectos: Difusión por caminos
múltiples, eddy diffusion
!
) * + ū + C ū
A es proporcional al
tamaño de las
partículas
40
20
2013

Teoría de la velocidad – Ecuación de Golay
Las columnas capilares no tienen material empacado ⇒ no
considera A
!
) ū + (CS + CM) ū
CS: transferencia de masa en fase estacionaria
CM: transferencia de masa en fase móvil
Difusión molecular: B = 2 DG
DG :coeficiente de difusión del soluto en el gas carrier.
DG es bajo para gases de alto peso molecular (N2, Ar)
ū ↑ disminuye el tiempo que el soluto pasa en la columna,
disminuye la difusión molecular.
41

!
) ū + (CS + CM) ū
fase móvil
CS: transferencia de masa en fase

Soluto en
estacionaria
Kc = 2
Idealmente, si los procesos de sorción y
desorción son rápidos, las moléculas de
estacionaria
Soluto en f.
soluto se mantienen juntas.
2 ./2
,-
3 1 + 2 1
df espesor del film (delgado)

Ds coeficiente de distribución del soluto en
fase estacionaria (alto). Difusión rápida hacia
adentro y afuera de la fase estacionaria.
42
21
2013

!
) + (CS + CM) ū
ū
fase móvil
CS: transferencia de masa en fase
Soluto en
estacionaria
Kc = 2
2 ./2
,-
3 1 + 2 1
estacionaria
Soluto en f.

1 + 2
k: factor de retención, es alto si la

solubilidad en la fase estacionaria es alta.
Este factor no varía mucho para k >20
43

!
) ū + (CS + CM) ū
Flujo no turbulento de soluto (fase móvil).

Si la transferencia en la fase móvil es lenta,
las moléculas del centro se adelantan. →
La tranferencia de masa axial disminuye el
ensanchamiento.
Para los films delgados (< 0,2 µm), C está controlado por CM.
Para los films gruesos (2-5 µm), C está controlado por Cs.
Para los films intermedios (0,2-2 µm), hay que considerar CM y Cs.
El término C ū se minimiza para velocidades bajas: las moléculas entran

y salen de la fase líquida, y difunden en la fase gaseosa.
44
22
2013

Teoría de la velocidad – Gráficos de van Deemter
Al graficar H vs ū se obtiene una hipérbola no simétrica.
Hmín indica la velocidad óptima
teórica, con mínimo
ensanchamiento de los picos.
Si ū aumenta, disminuye el
tiempo de análisis. Predomina
el efecto del término C
(transferencia de masa).
45

Efecto del gas carrier:
N2 tiene mayor peso
molecular, minimiza el
término B ⇒ Hopt menor
He y H2 tienen Hopt a mayor ū

⇒ permiten reducir a la mitad
o a un tercio el tiempo de
análisis.
H2 tiene menor pendiente a

mayor ū ⇒ un aumento de ū
aumenta poco la altura del
plato.
46
23
2013

Resumen:
• Si ū aumenta, disminuye el
tiempo de análisis. Predomina
el efecto del término C
(transferencia de masa).
• El espesor de film debe ser

pequeño: 0,1-0,25 µm.
Pequeña cantidad de muestra.
• Columnas de diámetro interno

pequeño.
47
24

Clase 1 - 25-08-2013

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Cromatografía Gas-Líquido DQO-FCEN-UBA

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Definición de IUPAC (International Union of Pure and Applied

Denominación del proceso cromatográfico → fase móvil

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Partición entre dos fases

A: mayoritario en fase móvil

A eluye antes que B

Ensanchamiento de los picos

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Constante de distribución (coeficiente de partición)

Constante termodinámica, depende de T

Uno o ambos procesos pueden determinar la separación

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Cromatograma típico para un único soluto B

VM: aire, metano

El soluto avanza con la fase móvil o queda sorbido en la fase estacionaria

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Ventajas y desventajas de la cromatografía gaseosa

1. Análisis rápidos, en el orden de minutos.

2. Eficiente, con alta resolución.

3. Sensible, es posible detectar en el rango de ppm y frecuentemente ppb.

4. No-destructivo (la cromatografía), lo cual hace posible acoplar el

5. Análisis cuantitativos muy confiables, con desviaciones estandar típicas

6. Requiere poca muestra, típicamente del orden de µl y µg.

7. Simple y de bajo costo.

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1. Análisis rápidos, en el orden de minutos.

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2. Eficiente, con alta resolución.

Eficiencia: N°de platos donde ocurre la separación

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Ventajas y desventajas de la cromatografía gaseosa

CG reemplazó a destilación en la separación de muestras volátiles.

1. Volatilidad de las muestras. Límite práctico: 380 °C, Pv ≥ 60 mm Hg

Teb ≤ 500 °C, PM ≤ 1000 Da

1. No adecuado para muestras termolábiles.

2. Difícil para muestras preparativas.

3. Requiere confirmación de la identidad de cada pico, usualmente para

Fundamentos y Aplicaciones de Cromatografía Gas-Líquido. DQO-FCEN-UBA 2013

Gas carrier, controlador de flujo, inyector, columna, horno,

Fundamentos y Aplicaciones de Cromatografía Gas-Líquido. DQO-FCEN-UBA 2013

Dos tipos de columna: empacada y capilar

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Gas carrier, controlador de flujo, inyector, columna, horno, detector,

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Detector Gas carrier

Fundamentos y Aplicaciones de Cromatografía Gas-Líquido. DQO-FCEN-UBA 2013

Gas carrier – Pureza

O2, H2O: pueden atacar la fase estacionaria (poliéster, poliglicol,

Calidad Pureza Abreviatura

H2O, hidrocarburos: filtros de molecular sieve 5 Å

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Gas carrier – Control de flujo y medición

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Gas carrier – Control de flujo y medición

⇒ Controlador diferencial de flujo, flujo de masa constante

Otro dispositivo: Control electrónico de presión (EPC): detecta

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Ingreso de muestra y dispositivos de muestreo

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Ingreso de muestra y dispositivos de muestreo