IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS MEDIANTE ANÁLISIS DE SECUENCIAS GENÉTICAS

(IES Alpajés, Aranjuez)

Justifica en los recuadros todos los pasos que se van dando y responde a las cuestiones planteadas.

ETAPAS JUSTIFICACIÓN
1) Tomar una muestra de una colonia Degradar la pared bacteriana
bacteriana con el asa de siembra y añadir
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

enzimas proteolíticas
2) Colocar el resultado en un baño a 100ºC Desnaturalizar las enzimas proteolíticas usadas en la etapa anterior
pues en las siguientes etapas se usarán enzimas que se destruirán en
caso de no inactivar aquellas.
3) Centrifugación Separar el ADN del sobrenadante del precipitado que contiene los
restos celulares.

¿Qué precaución hay que tener cuando se centrifugan unas muestras?

4) Transferencia del sobrenadante a un

tubo de PCR
5) Adición de la muestra MASTER a todos ¿Por qué se añaden estos controles?
los tubos, y del control positivo y el
negativo

¿Cuál es la composición de la mezcla MASTER?

¿Y del control positivo y el negativo?

AMPLIFICACIÓN GÉNICA

6) Desarrollo de la PCR ¿Por qué se realiza esta secuencia de procesos y estas variaciones de
temperatura?

¿Qué son los primeros cebadores?

¿Cuánto dura cada ciclo de PCR?

¿Cuántas copias de la secuencia de ADN original se obtendrán tras 30

ciclos?

7) Adición de tampón y de la muestra

obtenida en la PCR a la columna.
PURIFICACIÓN DE

Centrifugación a 3000 rpm

LA MUESTRA

8) Inversión de la columna y adición de

tampón. Nueva centrifugación y
eliminación de la columna.
 9) Dilución de la muestra con agua
MUESTRAS A SECUENCIAR destilada
AMPLIFICACIÓN DE LAS

10) Realización de la PCR ¿Por qué se utilizan doce primers en la secuenciación mediante PCR?

Como terminadores de la cadena se añaden didesoxinucleótidos

marcados con sustancias fluorescentes de diferentes colores. ¿Por qué
son capaces de parar la síntesis de ADN?

11) Introducción de la muestra en el ¿Cómo se pueden separar los fragmentos de ADN obtenidos
SECUENCIACIÓN

secuenciador. previamente?
DE ADN

12) Sigue las instrucciones que aparecen a Nombre de la bacteria presente en la muestra:
ANÁLISIS DE LA

la derecha de la pantalla:
SECUENCIA

o Copia la secuencia obtenida.

o Pégala en la pantalla del BLAST ¿Cómo se habrá contagiado el paciente, previsiblemente?
o Pulsa en “Format” para identificar
la especie