Las reactancias necesarias para el funcionamiento de los fluorescentes se situan siempre en el exterior de la

cámara, para evitar que el calor generado por estas dificulte el control de la temperatura. Por es misma razón,
cuando las camaras de cultivo son del tipo cubículo acostumbran a agruparse en salas especiales dotadas de un
sistema de refrigeración propio que permita un mejor funcionamiento del sistema de refrigeración de cada una
de ellas.

CONTROL DE FOTOPERIODO

Además de la radiación luminosa recibida por el cultivo, otro factor a controlar es el numero de horas de luz
diarias que recibe el cultivo fotoperiodo. La regulación del fotoperiodo se consigue mediante un programador
analogico o digital conectado al circuito de iluminación. El programador del fotoperiodo puede estar relacionado
con el programador de temperaturas, de forma que se puedan programar diferentes temperaturas según sea la
fase del fotoperiodo en la que se halle el cultivo.

LUZ

La luz, definida como una forma de energía radiante que se nos manifiesta mediante la revisión es, en realidad
parte de un fenómeno físico mas amplio: la energía radiante (radiacion), que puede ser desrito según dos
modelos diferentes: modelo ondulatorio (radiación electromagnetica) y el modelo corpuscular.

Los diferentes tipos de radiación electromagnética se pueden clasificar según sea su longitud de onda, asi
podemos obtener un espectro electromagnetico formado por las diferentes longitudes de onda de la radiación
electromagnética, que van desde los 10-₁₆ m hasta los 10⁴m. de todas estas longitudes de onda solo las
comprendidas entre 380 y 775nm pueden ser percibidas por el ojo humano: ese conjunto de radiaciones es el
que denominados luz en el lenguaje coloquial.

Como quiera que solo una parte de la energía radiante (la luz y algunas de las radiaciones infrarrojas y
ultravioletas proximas) tienen influencia conocida sobre el desarrollo de las plantas, a veces se usa el termino luz
para referirse a ese conjunto de radiaciones cuando en realidad se refiere al conjunto de radiaciones
electromagnéticas con efectos fisiológicos.

La luz es uno de los factores principales que determinan el desarrollo de los organismos autótrofos en ello radica
la importancia de controlar el factor de luz en los cultivos in vitro.

Los aspectos relacionados con la luz que son importantes en los cultivos in vitro son:

 La Irradiacion: es la cantidad de luz que incide sobre las superficies fotosintéticas de las plantas
determinara en gran medida la capacidad fotosintética de estas. Esta cantidad de luz puede ser medida
de formas diversas bien midiendo la iluminación de una superficie y expresándola en lux (en realidad se
trata de una unidad definida en términos de percepción del ojo humano) o bien midiendo la irradiancia
es decir la energía radiante que llega a una superficie dada en un intervalo de tiempo. La irradiancia
puede ser expresada en función de la energía: Wm-₂ o en función de los fotones: µmol m-₂ s-₁.

Cuando el sensor del equipo con el que medimos la irradiancia está diseñado para detectar todas las
longitudes de onda comprendidas entre 400 y 700 nanómetros obtenemos una medida de radiación
fotosintéticamente activa.
Se asume que las necesidades de luz de los cultivos in vitro son inferiores a las plantas en vivo dado
que el medio de cultivo contiene cantidades importantes de sacarosa los cultivos in vitro se comportan
sólo parcialmente de forma autotrofica además una irradiación excesiva producirá Un aumento notable
de temperatura dentro de un recipiente de cultivo debido al efecto invernadero.
La irradiación habitual en el campo  a plena insolación Puede llegar a 450 watts es nociva en
condiciones in vitro es habitual usar irradiaciones mucho menores de un 10% incluso menos del valor
de plena insolación 
Irradiación habitual en el campo a plena insolación puede llegar a 450 watts es nociva en condiciones
in vitro es habitual usar irradiaciones mucho menores del 10% incluso menos del valor de plena
insolación.
 
 La calidad de la luz el espectro la luz es esencial para las plantas debido a que proporciona la
energía necesaria para la fotosíntesis.
La clorofila y los demás pigmentos fotosintéticos captan la energía contenida en diferentes radiaciones
para incorporarla a las diversas reacciones químicas que constituye el proceso Pero la Luz también
puede invertir en otro proceso fisiológico como el fototropismo la germinación la floración todos esos
fenómenos no son producidos en igual medida por Todos los tipos de luz radiaciones de cualquier
longitud de onda sino de algunas radiaciones concretas que tiene un efecto notable Mientras que otras
tienen poco o ningún efecto es por ello que es preciso conocer el espectro de la radiación Qué es un
activo en el proceso fisiológico estudiar la cámara de cultivo deberá Reproducir la lo mejor posible de
ese espectro de luz activo por lo tanto conviene conocer Cuál es el espectro que emiten nuestras
fuentes de luz y en qué medida se adaptan este a las necesidades de nuestro cultivo .

Resumen de las principales fuentes de luz usadas en la cámara de cultivo

LAMPARAS INCANDESCENTE: Producen la luz por fenómenos de incandescencia del filamento

calentando por el paso de la corriente eléctrica buena parte del espectro se halla en la zona del rojo
rojo lejano producen gran cantidad de color y mucho consumo de energía eléctrica.

LA FLUORESCENTE: Producen la luz por fenómeno de fluorescencia del gas sometido a un arco
voltaico el espectro de la luz producida es rico en la zona del azul existen fluorecentes especiales con
un espectro rico en la zona azul y roja y consume menos electricidad.

LAMPARAS DE VAPOR DE MERCURIO Y SODIO:  producen luz por efecto del paso de la corriente
eléctrica a través de gases calientes de mercurio azul y verde y sodio naranja son altamente eficientes
en el consumo de la electricidad.

 De todas ellas son los fluorescentes las fuentes de luz más usadas en las cámaras de cultivo aunque
también se pueden encontrar Generalmente en instalaciones de industrias y de lámparas de vapor.

 La alternancia de los ciclos de luz con los de la oscuridad:

El fotoperiodo: algunos fenómenos propios del desarrollo de las plantas como la germinación
floración y tuberacion pueden ser activados por el número de las horas diarias de la luz que recibe la
planta de forma análoga el número de las horas de luz que recibe el ex plantó cultivado in vitro puede
afectar a su desarrollo en general el mejor fotoperiodo invivo será también el mejor fotoperiodo in vitro.

TIPOS DE CULTIVO
 Una planta se compone de diferentes órganos cada uno de los cuales contiene diferentes tejidos los
cuales a su vez están constituidos por células individuales si se dirigen enzimáticamente a las paredes
celulares se producen los protoplastos hay muchos tipos y diferentes de cultivo in vitro de la misma
forma se encuentran materiales diferentes en las que Constitución de la planta Estos tipos de cultivos
son:
CULTIVO DE LAS PLANTAS INTACTAS:  se siembra la semilla in vitro obteniéndose primero una
plántula y finalmente una planta
 
CULTIVO DE EMBRIONES:  se cultiva el embrión aislado después de retirar el resto de los tejidos de
la semilla.

SE CULTIVA IN VITRO UN ORGANO AISLADO.  se puede distinguir distintos tipos cultivo de

meristemos cultivo de ápices de vástago cultivo de Raíces cultivo de anteras y de explant o etcétera.

CULTIVO DE CALLO: Se llama así cuando una porción de tejidos de diferencia in vitro originando un
callo.

CULTIVO DE CÉLULAS AISLADAS:  es el crecimiento de células individuales obtenidas de un tejido

callo o cultivo de suspensión con la ayuda de enzimas o mecánicamente.

CULTIVO DE PROTOPLASTOS:  se obtiene a partir de células Por digestión enzimática de la pared

celular.

La biotecnología vegetal se fundamenta en la posibilidad de cultivar in vitro células tejidos u otro

órganos vegetales y de regenerar a partir de ellos plantas completas.  si El proceso de cultivo es muy
eficiente obtendremos miles de individuos clonados si esto se derivan de células sanas y no albergan a
ningún microorganismo patógeno las nuevas plantas estarán completamente libres de enfermedades
si los clones provienen de materiales parenterales seleccionados o de células que han sufrido algún
cambio genético y poseen una nueva característica las plantas que se deriven a ellas expresarán
también esa nueva característica. 

EXPLANTE:

Todos los cultivos se inician a partir de un explante que puede ser un fragmento de tejido u órgano de
cualquier parte de la planta sea una hoja tallo raíz o una yema.

Los explantes se tratan con desinfectantes como el hipoclorito de sodio y se lavan exhaustivamente
con agua estéril para eliminar los microorganismos que se encuentran en su superficie una vez
desinfectada se encuban en unos frascos de cultivo adecuado que contienen el medio de cultivo
líquido y semisólido del que se nutrirán las células.

CULTIVO DE CELULA TEJIDO DESDIFERENCIADOS

Las células del explante por ejemplo del parénquima de la hoja comienza a dividirse de manera
acelerada y desorganizada formando una masa de células denominadas callo  estas células no son las
células parenquimatosas en virtud de que han sufrido una de diferenciación parcial o total los callos
pueden ser mantenidos  En este estado por largos períodos y transferirle es en forma periódica a
medios de cultivo frescos.

Los callos pueden ser transferidos a un medio líquido con agitación en donde las células se  disgrega
dando lugar a un cultivo de células en suspensión que pueden mantenerse En este estado.
Cuando las células del explante callo o cultivo en suspensión son tratadas con enzimas celulolíticas o
pectinoliticas la rígida pared celular es digerida liberando los protoplastos o células desnudas
delimitadas exclusivamente por su membrana plasmática estos protoplastos cultivados bajo
condiciones específicas pueden regenerar la pared celular y convertirse de nuevo en células que al
dividirse volverán a formar callos.

ORGANOGENESIS:

Cuando un callo Es cultivado bajo condiciones adecuadas de luz la temperatura y nutrientes y sobre
todo cuando el cociente de citoquina auxina es elevado algunas células inicien una división ordenada
para dar lugar a un brote que se desarrollará en el tallo caulogenesis.

Al transferirse un medio fresco con un consciente menor de citoquina auxina en muchos casos carente
de citoquinas se induce la formación de Raíces en la base de los tallos rizogénesis a elevada
concentraciones de auxinas  los callos forman raíces directamente Pero esas son incapaces de formar
sayos al transferirlas a un medio con elevada citoquina.

 si los brotes son trasplantados en medio con citoquina en lugar de hacer a un medio de enraizamiento
es posible inducir la formación de nuevos brotes adventicios en su base los brotes pueden separarse y
rembran se nuevamente para formar más brotes adventicios estos procesos de multiplicación pueden
repetirse indefinidamente antes de transferir los a un medio de enraizamiento. 

las plántulas así formadas son trasplantadas a macetas con tierra y otros sustratos sintéticos en donde
completan su desarrollo

CULTIVO DE MERISTEMOS:
 el cultivo de yemas axilares principalmente de yemas apicales es de Gran importancia por dos
razones:
primera Porque siendo tejidos ya organizados presentan una gran estabilidad genética.
segundo porque los meristemos apicales se encuentran por lo general libres de patógenos.

 los meristemos son extremadamente pequeños y su aislamiento de la planta madre debe  realizarse 
va de me microscopio loco requiere remover lo primos foliares  sin maltratar al ápice.
Los meristemos se desarrollan directamente en tallos que pueden seguir las rutas y descritas para los
tallos de diferenciados de cayó el desarrollo de los meristemos no es un proceso de novo Pues se trata
de un tejido ya organizado en algunos casos los meristemos se injertan directamente a un patrón
tierno por lo general el brote de una semilla germinada in vitro Qué es decapitado para recibir un nuevo
ápice este proceso denominado micro injertación es de Gran importancia para algunas especies.

 EMBRIOGENESIS:  

En ocasiones las células cultivadas in vitro dan origen a estructuras con una organización Bipolar muy
semejante a la de los embriones producto del desarrollo del óvulo fertilizado para diferenciarlo de la
embriogénesis sexual este proceso se denomina embriogénesis somática.
Cuando los embriones se forman directamente de las células del explante se le denomina
embriogénesis directa  cuando Se forma a partir del callo se denomina embriogénesis indirecta los
embriones somáticos germinan desarrollándose en plántulas completas con tallo y raíz que son
entonces transferidos a la Tierra

CULTIVO DE CELULAS HAPLOIDES:

 cuando los gametos el polen y óvulos son empleados como explantes inicial el resultado de una
planta que posee la mitad del número cromosómico de la especie es una división desorganizada de las
células gaméticas originando el gallo haploide pero si se completa el balance correcto de reguladores
se produce un desarrollo organizado desde las primeras divisiones que originan embrión es el aspecto
más importante de la metodología es que los gametos pueden encontrarse en el estadio correcto para
hacer embriogénicos el cultivo de las células haploides tienen grandes aplicaciones ya que pueden ser
modificadas genéticamente antes de inducir de nuevo su  diploidizacion Por métodos químicos que
resultan en la generación de las plantas dihaploides (diploides homicigas) Qué expresan un solo alelo
para todas las características y que son de enorme valor para los programas fitomejoramiento.

 ESTERILIZACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Antes de que las semillas porciones de plantas órganos tejidos se han colocado sobre el medio de
inoculación éste debe ser esterilizado esto es liberado de todos los microorganismos la esterilización
se puede realizar de las siguientes forma:

Destrucción física de los microorganismos por medio de aire seco y caliente vapor o irradiación luz
ultravioleta o radiación Gamma.
 destrucción química de los microorganismos utilizando compuestos esterilizantes como el óxido de
etileno alcohol hipoclorito o antibióticos.
eliminacion física de microorganismo por filtro filtración o lavado.

La esterilización de los medios nutritivos Generalmente tienen lugar de un autoclave menos frecuentes
por filtración y rara vez por irradiación.
 Los medios nutritivos así como cualquier otro material esterilizado deben ser almacenados en
armarios o cajas metálicas que hayan sido previamente desinfectados con alcohol al 96%

AUTOCLAVADO:

La mayor parte de los medios nutritivos se esterilizan en autoclave este aparato literalmente es un
recipiente que se cierra Asimismo esteriliza por medio de vapor siempre que el tiempo de la exposición
sea suficiente el vapor a presión puede destruir todo los microorganismos por ejemplo de un medio de
cultivo con un volumen de hasta 50 ML se mantiene en 20 minutos a 121 grados centígrados en vapor
saturado de alta presión.

la autoclave tiene un Rango de temperatura de 115 a 135 grados la esterilización depende del tiempo
presión temperatura y del volumen del objeto que se va a esterilizar.

Las ventajas de la autoclave son velocidad simplicidad destrucción adicional de los virus y no de
absorción qué ocurre con la esterilización por filtrado.

Las desventajas del autoclave son puede producir un cambio en el pH en algunos componentes que
se puede preparar se separan y se pueden producir reacciones químicas que pueden Conducir a una
pérdida de actividad de los componentes del medio.

Orientaciones que se deben seguir cuando se utiliza en la autoclave:

 
 tubos de ensayo y matraces conteniendo entre 20 y 50 ML del medio de cultivo en 20 minutos a
120 centígrados.
 Matraces conteniendo 50 500 ML del medio nutritivo 25 minutos a 121 grados centígrados
 Matraces conteniendo 50 A 5000 ML de medio nutritivo en 35 minutos y 121 grados
  tubos de ensayos vacíos matraces y papel filtro de 30 minutos a 130 centígrados

Por seguridad Cuando se autoclavan frascos no se deben disponer demasiado apretados entre sí y
deben colocarse con los tampones sin apretar.

El material que puede ser esterilizado en Seco requiere de dos a tres horas de esterilización se caen
160 grados centígrados

Cómo se han puesto de manifiesto los medios de nutritivos y los objetivos vacíos de vidrio papel deben
ser esterilizados de forma separada lo mismo ocurre con los matraces grandes y pequeños hay que
darse cuenta de que la penetración del calor es muy importante en el autoclave y los volúmenes
grandes deben ser en principio esterilizados durante el período de tiempo más largo ya que el calor
tarda más tiempo en llegar que en el caso de los volúmenes más pequeños.

El autoclavado produce la ruptura de las siguientes sustancias:

 Sacarosa se descompone produciendo fructosa y glucosa

 colchicina
 zeatina
 Acido giberelico pérdida del 90% de reactividad
 vitamina B1 se forma piramidal y tía sol vitamina B12 ácido pantoténico y vitamina C
 extractos vegetales pérdida de actividad
 enzimas

 Los medios utilizados para el cultivo de protoplastos donde se requieren son más elevados que para
un cultivo de callos o explanaos se esterilizan frecuentemente por filtración.

Durante y después del autoclavado se debería tener en cuenta lo siguiente:

 El pH de los medios baja de 0 3 a 0 5 unidades

 El autoclavado de una temperatura demasiado elevada puede caramelizar los azúcares

pudiéndose producir toxicidad

 Un Proceso demasiado largo puede Conducir a la precipitación de sales y al mismo tiempo

despolimerizar el Agar

 Se debe tener cuidado al utilizar la duración y la temperatura correcta la presión eficaz los
bacillus stearothermophilis y pueden ser utilizados como un indicador biológico para ver si la
esterilización se ha realizado correctamente ya que mueren entre 12:15 a 121 centígrados

 Se debe tener en cuenta que las sustancias volátiles pueden ser destruidas por el uso del
autoclave.