LABORATORIO No.
1
ESTUDIO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO
INTRODUCCIÓN
Desde los inicios de la microscopia, los
investigadores vienen desarrollando
métodos cada vez más sensibles,
eficaces y con mejor resolución. Al
principio ellos debieron enfrentarse a los
problemas de aberraciones ópticas,
imágenes borrosas y pobre desarrollo de
lentes, los cuales se mantuvieron hasta
mediados del siglo XIX que aparecieron
los lentes objetivos que reducían la
aberración cromática con una apertura
numérica entre 0.65 y 1.25. Estos
avances se iniciaron con los reportes
sobre los métodos de iluminación que
propuso el profesor August Kölher, en
1893, y que sentaron las bases de la
microfotografía moderna. En las últimas
décadas se ha incrementado la
aplicación de la microscopía óptica en los
laboratorios de investigación de una
amplia variedad de disciplinas como la
biología celular y molecular,
microbiología, inmunología y virología. El
rápido desarrollo de diferentes métodos
como los de fluorescencia, contraste de
fases, confocal y de campo oscuro entre
otros, que sumados a los avances en la
digitalización y análisis de imágenes, han
permitido a los microscopistas obtener
resultados rápidos, cuantificables y
confiables de una gran variedad de
especímenes biológicos. Al margen de
estos avances, las bases del
funcionamiento de los distintos tipos de
microscopios ópticos siguen siendo los
mismos que se presentan en esta
práctica y con los cuales el estudiante
deberá familiarizarse.
BREVE HISTORIA DEL MICROSCOPIO
Tres eminentes holandeses, Antón Van
Leeuwenhoek, Hans y Zaccharias
Janssen, fabricantes de lentes,
contribuyeron al desarrollo de la
microscopía. El museo de Middleburg, en
Holanda, conserva uno de los primeros
microscopios conocidos, probablemente
fabricado por uno de los hermanos
Janssen. Estos aparatos, eran
extremadamente simples, por lo que solo
permitían el examen de cuerpos opacos.
A fines del siglo XVII el italiano Camping
construyó un microscopio que hizo
posible la observación de preparaciones
transparentes. Las imágenes obtenidas
por estos microscopios eran muy
deficientes.
En Inglaterra el científico Robert Hooke,
trató de construir lentes más eficaces,
pero sus resultados no fueron
satisfactorios; sin embargo, sus
observaciones contribuyeron al
establecimiento de la microscopía como
ciencia. Mientras, en el siglo XVII Jonh
Marshall y otros fabricantes de
microscopios, perfeccionaron mucho el
diseño mecánico, pero no la calidad de
los lentes. Pero fue, durante el siglo XIX,
que se realizaron grandes progresos en
los sistemas ópticos y en la microscopía
en general; aun así, fue imposible evitar
la dispersión de la luz en sus colores
componentes en la fabricación de
microscopios. Este fenómeno conocido
como aberración cromática, producía una
imagen borrosa y coloreada.
Las primeras lentes adecuadamente
corregidas para microscopios,
denominadas acromáticas, hicieron su
aparición alrededor de 1830; pero la
aberración esférica, también producía
una imagen desenfocada. En 1886, Ernot
Abbe y Caol Zeiss en Alemania
fabricaron unas lentes apocromáticas
que corrigieron ambas aberraciones.
A finales del siglo XIX, los microscopios
comenzaron a adquirir la forma que
tienen actualmente, con los aportes de
Khöler.
Desde el año 1900, los microscopios se
han modificado poco en sus principios
fundamentales, pero mucho en sus
detalles. Estos perfeccionamientos
incluyen, la incorporación de varios
objetivos, cada uno de aumento diferente
y roscado a un tambor giratorio o
revolver.
En 1935, Frizt Zenique invento la técnica
de contraste de fase que hace posible la
observación de especímenes antes
invisibles.
El microscopio electrónico, desarrollado
en vísperas de la segunda guerra
mundial, ha sido de gran utilidad para el
estudio de moléculas química, virus y
organelas celulares.
Existe un tipo de microscopio electrónico,
llamado de barrido, que ha adquirido una
extraordinaria utilidad, ya que ofrece
representaciones tridimensionales muy
reales de las células y las estructuras
celulares.
1.1 OBJETIVOS:
1.1.1 OBJETIVO GENERAL:
• Valorar la importancia del microscopio
como instrumento básico para el
estudio e investigación en las
Ciencias Biológicas.
1.1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS:
• Identificar las diferentes partes que
constituyen el microscopio y y de ella se agarrará el microscopio
reconocer las funciones de cada una
de ellas
• Adquirir habilidad en el uso y manejo
correcto del microscopio, siguiendo
las indicaciones de las guías de
laboratorio.
1.2 MATERIALES
Microscopios
Porta-objetos y cubre-objetos
Papel limpia lentes (papel de arroz)
Goteros o Pipetas Pasteur
Hilos de lana y algodón
Flores con polen
Agua de charca
Partes de insecto
Pinzas de disección
1.3 CLASES DE MICROSCOPIOS:
Existen dos tipos de microscopios:
simples y compuestos
 Microscopios simples:
Consta de un solo sistema de
lente
 Microscopios compuestos:
Constan de dos (2) sistemas de
lentes: el objetivo y el ocular. El
microscopio compuesto es un
instrumento que aumenta
considerablemente la imagen
de los objetivos que en él se
observan. Entre las variedades
de éste microscopio
encontramos el electrónico y el
fotónico u óptico. Este último
tipo de microscopio está
formado por una parte
mecánica y una parte óptica.
(Figura No.1.1)
Parte Mecánica:
a. Pie o Base: Generalmente en forma
de herradura o rectangular, es el apoyo
de las demás piezas del microscopio. El
pie debe ser sólido y pesado para
asegurar su estabilidad.
b. Columna o Brazo: Este elemento
relaciona el tubo del microscopio con el
pie; sostiene la platina y el condensador
cuando se traslada durante los trabajos.
En algunos microscopios la columna es
móvil.
Figura No.1.1 Microscopio Óptico
Para observar imágenes de las diferentes
partes del microscopio haz click aquí
c. Tubo del Ocular: Está colocado en la
parte superior del microscopio, donde
están acoplados los oculares, que
pueden tener movimiento vertical, con
ayuda de una cremallera sobre la
columna. En algunos microscopios el
tubo ocular es inclinado y se mantiene
fijo, en este caso se mueve la platina.
d. Revólver o Disco Giratorio: Está
debajo del tubo ocular donde están
acoplados los objetivos, presenta
movimiento giratorio para facilitar el
cambio de un objetivo a otro.
e. Platina: Es una placa que puede ser
cuadrada, circular o rectangular, con un
orificio central que permite el paso de la
luz a través de ella. Su función es
sostener las placas con los preparados
biológicos que se van a observar.
f. Carro: Es un dispositivo ubicado sobre
la platina, cuya función es sujetar y
mover la placa que se va a estudiar.
Posee dos tornillos que permiten
movimientos horizontales y verticales
(hacia adelante, hacia atrás, hacia la
izquierda y hacia la derecha) del
portaobjetos. Cuando la platina carece
del anterior dispositivo, lleva dos
soportes para fijar las placas llamadas
ganchos o uñas.
g. Mecanismos de Movimiento: Está
integrado por el tornillo Macrométrico y el
Micrométrico.
 Tornillo Macrométrico: Acerca o
aleja rápidamente el objetivo del
preparado a observar; su función
es lograr un enfoque más o
menos claro o aproximado del
objeto.
 Tornillo Micrométrico: Acerca o
aleja el objetivo del preparado,
pero lentamente, casi
imperceptiblemente, permite
desplazamientos muy finos de la
platina o del tubo del ocular.
Durante la observación y enfoque
este tornillo debe estarse
moviendo permanentemente; su
función es darle nitidez al
enfoque.
Parte óptica:
Esta integrada por los objetivos, oculares
y el aparato de iluminación (espejo,
diafragma, condensador y filtros). Estos
elementos son los que permiten la
iluminación, ampliación y la visión
aumentada del objetivo.
a. Objetivo: Es la pieza más importante
del microscopio. Ellos se acoplan
mediante roscas estándar al revólver y
pueden ser cambiados de posición con
sólo rotarlos. Reciben el nombre de
objetivos porque son los lentes que están
más cerca del objeto. La mayoría de los
microscopios tienen tres o cuatro
objetivos. Las lentes de los objetivos son
de aumentos diversos, los más usados
son: Objetivos de pequeños aumentos
3.5x; 4x, 5x, 6x, 8x y 10x; objetivos de
grandes aumentos 40x, 45x, 50x y
objetivos de inmersión 90x, 95x y 100x.
Las lentes de inmersión se emplean con
aceite de cedro para conectar la lente
frontal (lente inferior del objetivo) al
porta-objeto. Entre el objetivo y el objeto
se produce una pérdida de luz por
reflexión que se corrige adicionando al
preparado unas gotas de aceite de cedro
(aceite de inmersión) cuyo índice de
refracción 1.515, es próximo al cristal.
Este aceite también reduce o suprime
por completo la refracción de los rayos
de luz provenientes de la fuente
luminosa.
Figura No. 1.2 Especificaciones de los
objetivos.
b. Ocular: Están colocados en la parte sucede cuando se trabaja con objetivos
superior del tubo ocular. Está formado de menor aumento (4x y 10x).
por dos sistemas de lentes dispuestos en g. Filtros: Entre la fuente de luz y el
un cilindro. Su finalidad es aumentar la condensador de algunos microscopios
imagen dada por el objetivo y existe un portafiltros en el cual se pueden
eventualmente corregir algunos defectos colocar filtros a voluntad del observador.
de la misma. Reciben dicho nombre Los filtros son elementos de cuarzo o de
porque son las lentes que se encuentran vidrio, pueden ser de color azul, amarillo
más cerca del ojo. Hay oculares de 3.5x; o verde. Ellos interceptan el haz de rayos
5x; 6.3x; 10x; 12.5x; 15x; 20x y 25x. luminosos antes de entrar al
El aumento de la imagen de un objeto condensador, esto se hace con el objeto
observado a través de un microscopio, de seleccionar un tipo de luz
se calcula multiplicando el número de determinada para una experiencia dada.
aumento del objetivo con el cual se está Para observar imágenes de filtros haz
trabajando por el número de aumento del click aquí
ocular que se está utilizando.
1.4 LA LUZ:
c. Aparato de iluminación: Está
La luz es una forma de energía
conformado por la fuente de luz, el
transportada continuamente por el
diafragma, el condensador y los filtros.
espacio a velocidades muy elevadas
d. Fuente de Luz: Puede ser natural o
(330.000 Km/s en el vacío). La luz está
artificial, cuando es natural (solar) o
formada por pequeños corpúsculos que
procede de un foco luminoso situado
salen de un foco luminoso en forma de
fuera del microscopio, un espejo recoge
ondas. El brillo de la luz es proporcional
la luz del medio y la refleja a través del
a la altura o amplitud de la onda y su
objeto y del sistema de lentes. La luz
color depende de la longitud de ésta. La
artificial la constituye un bombillo en el
luz blanca está constituida por una gama
microscopio y conectado a un circuito
de colores del espectro visible, estos
eléctrico de bajo voltaje.
colores son: rojo, anaranjado, amarillo,
e. Diafragma: Está ubicado entre la
verde, azul y violeta.
fuente de luz y el condensador,
Cada color corresponde a una longitud
inmediatamente debajo de la platina, su
de onda determinada, por consiguiente,
función es regular la intensidad de luz
la luz blanca se compone de muchos
que atraviesa el objeto. El diafragma
rayos de luz, todos vibrando con
tiene una palanquita que al moverla
diferentes longitudes de onda. (Figuras
hacia adelante o hacia atrás agranda o
1.3 y 1.4)
achica el orificio central, dejando pasar
mayor o menor cantidad de luz
respectivamente.
f. Condensador: Es un elemento cónico
que posee un sistema de dos lentes
convergentes que recogen o concretan
los rayos luminosos para enviarlos al
objetivo por el agujero de la platina.
Existe un tornillo manual que permite
graduar la altura del condensador. Esta
graduación es importante cuando se
trabaja con objetivos de gran aumento
(40x y 100x), debido a que en la medida
Fig. No. 1.3 Naturaleza ondulatoria de la
que se trabaja con estos objetivos el
luz
condensador debe subirse. Lo contrario
La luz de una sola longitud de onda se
llama monocromática. Si bien se utilizan
casi solo microscopios de luz blanca, la
mayoría de las lentes modernas están
diseñadas para el uso de luz
monocromática verde.
Fig. No. 1.4 Espectro de luz visible.
1.5 LENTES:
Las lentes son el componente más
importante del microscopio; se fabrican
de vidrio u otros materiales
transparentes.
Pueden ser convexas o cóncavas en
ambas superficies, planas en una cara o
tener cualquier combinación de éstas dos
formas en su superficie.
Las lentes son de dos tipos: positivas y
negativas.
 Lentes Positivas: Hacen
converger los rayos de luz, es
decir, los concentra para formar
una imagen real.
 Lentes Negativas: Hacen
divergir los rayos de luz, sin
formar ninguna imagen real.
1.6 PREPARACIONES
MICROSCÓPICAS:
Debemos tener en cuenta que a través
del microscopio solamente se pueden
observar objetos que dejan pasar rayos
de luz, por esta razón el preparado debe
ser lo más delgado y transparente
posible, pues un preparado grueso solo
nos permite observar una mancha negra.
Los detalles solo se observan si la
preparación es lo suficientemente
delgada para que sea transparente con
la luz que recibe. Para realizar
preparaciones microscópicas la porta y la
cubre-objetos deben limpiarse antes de
usarse. Un buen método es guardarlos
en alcohol y antes de utilizarlos secarlos
con un paño limpio y libre de grasa. Los
cubre-objetos deben limpiarse con
mucho cuidado porque son frágiles.
Las preparaciones microscópicas pueden
ser acuosas o en seco. Las
preparaciones acuosas son las más
simples y fáciles usadas para examinar
cualquier objeto fluido, como agua de
estanque o sangre. Se deposita una
gotita del líquido que se desea observar
en el centro del porta-objeto, se coloca el
cubre-objeto sobre el porta, forme con
las dos láminas un ángulo de 45 grados y
luego deje caer suavemente la laminilla
(cubre-objeto) sobre el preparado,
evitando la formación de burbujas.
El líquido no debe rebosar los bordes del
cubre-objeto, en caso de que suceda
seque cuidadosamente el líquido
sobrante usando papel absorbente o
papel toalla. La preparación queda así
lista para la observación. Estas
preparaciones son de corta duración
porque se secan rápidamente; para
hacerlas más duraderas debe cerrarse
herméticamente los bordes del cubre
objeto; la duración de ésta preparación
no es indefinida. Los bordes se pueden
cerrar con vaselina o esmalte. Un cierre
más hermético se consigue cerrando con
bálsamo de Canadá (Euparal).
Las preparaciones en seco como lo
índica su nombre, se hacen para
observar objetos secos, tales como alas
de insectos. Aquí se utiliza goma
arábiga, la cual se extiende sobre el
porta, luego se deposita el objeto sobre
la superficie y se deja endurecer la
goma. Una vez endurecida la goma se
pone un poco de bálsamo de Canadá
sobre el objeto y se coloca el cubre-
objeto.
Fig. No. 1.5 Preparaciones Acuosas
1.7 COLORANTES:
Los colorantes son sales compuestas por
un ácido y una base. Se clasifican en
ácidos, básicos y neutros, según la parte
de los mismos que imparta el color. En
los colorantes ácidos el grupo cromóforo,
el que imparte el color, es el componente
ácido, el componente básico es incoloro.
Lo contrario sucede con los colorantes
básicos. Los colorantes neutros tienen
coloreado el componente ácido y el
básico.
La mayoría de los colorantes son
sintéticos, aunque se emplean todavía
algunos naturales. La hematoxilina y el
carmín son los colorantes naturales más
importantes para la tinción de tejidos. El
carmín es producido por la conchinilla
(Coccus cacti). La hematoxilina se extrae
de la madera de un árbol de México, el
palo Campeche. Otro colorante es la
orceína que se extrae de líquenes.
Existen tres técnicas de tinción de uso
general: la coloración seca o de tejidos
muertos, la coloración vital o de tejidos
vivos y la histoquímica, en la cual se
utilizan las reacciones de los colores
para hacer visible los elementos
estructurales de las células y de los
tejidos. Una reacción histoquímica muy
conocida es la de Feulgen, en la que se
emplea el reactivo incoloro de Schiff para
teñir el DNA en tonos rojizos purpúreos.
Fig. No. 1.6 Colorantes.
1.8 MANEJO DEL MICROSCOPIO:
Antes de iniciar una observación
microscópica se debe iluminar
completamente el campo visual, para lo
cual se procede de la siguiente manera:
1. Gire el revólver hasta que el objetivo
de menor aumento quede en posición de
trabajo, o sea que quede alineado con
los oculares. Usted sentirá un golpecito
(como un clic) cuando el objetivo llegue a
su posición de uso.
2. Lleve el condensador a su posición
más alta.
3. Accione el tornillo macrométrico hasta
que el objetivo de menor aumento
descienda lo máximo posible o hasta que
la mesa ascienda lo máximo posible,
según sea el modelo del microscopio.
Esta operación se hace llegar hasta un
punto de parada (tope).
4. Mire a través del ocular o gire el
espejo hacia la fuente de luz hasta
obtener un máximo de iluminación. Si el
campo visual no queda uniformemente
iluminado, baje lentamente el
condensador hasta obtener una
iluminación uniforme. Si su microscopio
es eléctrico siga los pasos 1, 2 y 3.
Enchufe el cable del transformador a la
fuente de energía.
Conecte el cable del microscopio al
transformador y luego accione el botón
de este para que encienda la bombilla.
Mire por el ocular.
5. Una vez lograda una correcta
iluminación coloque el preparado sobre
la platina. Mirando de lado, asegúrese
que el objeto a observar esté centrado
justo debajo del objetivo de menor
aumento.
6. Mirando a través del ocular mueva
suavemente el tornillo Macrométrico, si el
objeto esta bien centrado aparecerá su
imagen en el campo visual. Dele nitidez
al enfoque accionando el tornillo
micrométrico. Mueva el carro en
diferentes direcciones para seleccionar el
mejor campo posible. Puede controlar la
intensidad de la luz, mediante el
diafragma o el regulador de la intensidad
de la luz de la bombilla.
Para hacer un mayor enfoque con mayor
aumento debe seguir las indicaciones
anteriores. Una vez obtenido el enfoque
correcto con menor aumento, mueva el
revolver y coloque en posición de trabajo
el objetivo de mayor aumento. Si su
microscopio esta bien calibrado debe
aparecer enfocada la imagen del objeto.
Este enfoque se refina accionando el
tornillo micrométrico.
Cuando el microscopio es monocular
debe acostumbrarse a mantener también
abierto el ojo que no utilice en la
observación microscópica, esto le evita
cansancio.
1.9 RECOMENDACIONES QUE DEBEN
TENERSE EN CUENTA PARA EL
BUEN USO Y CUIDADO DEL
MICROSCOPIO:
1. El microscopio es un instrumento
costoso y de precisión, con muchas
partes delicadas, por lo tanto, debemos
darle le mejor cuidado posible.
2. Si su microscopio presenta algún
defecto, consulte con su Profesor o
Tecnico de Laboratorio. No trate de
arreglarlo Usted.
3. Las lentes del microscopio cuestan
casi tanto como todas las demás partes
juntas. Mantenga las lentes limpias. No
toque las lentes con los dedos, debido a
que el sudor las daña. Nunca limpie las
lentes con otra cosa que no sea papel
especial para lentes.
4. No permita que líquidos,
especialmente ácidos o alcoholes, se
pongan en contacto con su microscopio.
5. Use siempre cobre-objetos cuando
observe en agua u otros líquidos.
6. Localice siempre el objeto con el
objetivo de menor aumento.
7. Los sedimentos de grasa, el aceite de
inmersión y los residuos de estos
productos deben eliminarse
inmediatamente con un poco de
disolvente como éter o xilol. Nunca debe
emplearse alcohol, debido a que disuelve
el cemento utilizado en la fabricación de
los lentes. La limpieza final es más
efectiva usando un poco de agua
destilada.
8. Cuando no se esté usando el
microscopio, debe mantenerse siempre
cubierto con una funda.
9. Al finalizar sus actividades de
laboratorio, tenga en cuenta lo siguiente:
9.1 Antes de apagar la fuente de luz,
llevar el dispositivo que regula la
intensidad luminosa a cero.
9.2 Dejar el microscopio con el objetivo
de menor aumento en la posición de
enfoque y la platina en su máxima
posición superior.
9.3 Desenchufar el microscopio y
colocarle la funda protectora.
2.0 EJERCICIO DE APLICACIÓN:
Con las siguientes prácticas se ejercitará
inicialmente al estudiante en el uso y
manejo del microscopio.
Con las siguientes prácticas se ejercitará
inicialmente al estudiante en el uso y
manejo del microscopio.
1. Fibra de lana o algodón:
Coloca varias fibras de lana o algodón de
diferentes colores sobre un portaobjetos,
coloque el cubre-objetos, enfoque con
menor y mayor aumento. Esquematice
sus observaciones.
2. Granos de polen:
Coloque los granos de polen del estigma
de una flor en un porta-objetos, luego
con ayuda de un gotero ponga una gota
de agua, ubique el cubre-objetos y
observe con menor y mayor aumento.
Haga un esquema de lo observado.
3. Agua de charca:
Con ayuda de una pipeta Pasteur, tomar
una o dos gotas del agua de charca y
colocarla en la porta-objeto, luego ubique
el cubre-objeto y observe con menor y
mayor aumento. Esquematice lo
observado.
4. Insecto
Tome la parte del insecto que desee
observar (pata, cabeza, torso, etc.) con
ayuda de la pinza de disección,
colóquela en la porta-objeto y se le
adiciona una o dos gotas de Bálsamo de
Canadá, ubique encima el cubre-objeto y
observe con menor y mayor aumento.
Realice esquemas de lo observado.

3.0 CUESTIONARIO:
1. Coloque los nombres a las diferentes
partes del microscopio numeradas en la
figura No. 1.6 e investigue las funciones
de cada una de ellas.
2. ¿Qué otros tipos de microscopios se
utilizan en la investigación biológica?
3. ¿Qué son objetivos secos?
4. ¿Qué son objetivos de inmersión?
5. ¿Para que se utiliza el aceite de cedro
cuando usamos el objetivo de inmersión?

Cuando se utiliza un microscopio de

espejo:
6. ¿Qué importancia tiene utilizar la parte
cóncava del espejo?
7. ¿Qué importancia tiene utilizar la parte
plana del espejo?
8. Investigue sobre en funcionamiento de
los diferentes microscopios electrónicos y
establezca diferencias entre ellos.
9. Describa las principales técnicas de
preparación de muestras empleadas en
microscopía óptica.
10. ¿Qué son los colores
complementarios y que utilidad tendrían
en microscopía óptica?

3.1 ENLACES
 http://bioservice77.obolog.com/
partes-microscopio-108433
Como usar el microscopio, partes,
funcionalidad y generalidades.

 http://www.itg.uiuc.edu/technology/
atlas/
Página con atlas de imágenes
obtenidas en diferentes tipos de
microscopios.
Fig. No. 1.6 Imagen del Microscopio Óptico.
 GALERIA DE IMÁGENES

1. LAS PARTES DEL MICROSCOPIO

1.1 OCULARES 1.5 CONDENSADOR

1.6. TORNILLOS
1.2 OBJETIVOS Y REVOLVER

1.7. BRAZO
1.3 PLATINA Y CARRO

1.6

1.7
1.8

1.8 LA IMAGEN
1.4 DIAFRAGMA
2. FILTROS 3. TINCION DE MUESTRAS
2.1 FILTROS POLARIZADORES

2.2 FILTROS MONOCROMATICOS

4. ESTRUCTURA INTERNA DE UN
INSECTO
2.3 UBICACIÓN DE LOS FILTROS

2.4 A) Cabeza; B) Tórax y C) Abdomen.

5. MICROORGANISMOS (AGUA DE
COLORES COMPLEMENTARIOS
CHARCA)