Resultados y Discusión

En la práctica se realizo blanco, el cual solo contenía el reactivo de Biuret y agua, la cual se obtuvo
una absorbancia de 0,098 (tabla 1), se discutió que se tenía presencia de impurezas y el blanco fue
significativo para la medición por que se obtuvo una absorbancia mayor a 1x10 -4, por lo tanto, el
blanco se tuvo en cuenta para determinar la concentración de la muestra (Sookg, 2016).

Tabla 1. Datos obtenidos del laboratorio

Absorbanci
Tubo [Muestra] patrón (mL)
a
Blanco 0,00 0,098 0
1-CC 0,25 0,195 0,2
2-CC 0,50 0,316 0,4
3-CC 0,75 0,415 0,6
4-CC 1,00 0,492 0,8
5-CC 1,25 0,579 1,0
*CC=curva de calibración.
Se realizo la curva de calibración (gráfica 1), y se determinó que el método es válido por la
linealidad que obtuvo la curva de calibración con un R 2= 0,9923. A partir de la ecuación de la línea
recta que se obtuvo se determino la concentración de la muestra.

Absorbancia vs Concetración
0.7

0.6
f(x) = 0.3776 x + 0.1162
0.5 R² = 0.99225469105615
Absorbancia

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4
Concentración (mg/mL)

Gráfica 1. Curva de calibración, absorbancia vs concentración (mg/mL)

y = 0,3776x + 0,1162

0= 0,3776x+0,1162

X=|-0,1162|/0,3776

X= 0,275 mg/mL

Se determine la concentración de las proteinas por medio de la ecuación ( Kingsley, G., 1939) :
 Proteina ( mL
mg
)=( U−B ) × ( S−B
U
C
)
s

U= absorbancia de la muestra

BU=absorbancia del blanco de la muestra

C=concentración obtenida del estándar

S= absorbancia del estándar

Bs= absorbancia del blanco del estándar

La concetración obtenida del estándar es 0,275 mg/mL, el promedio de la absorbancia del

estándar es 0,3491.

mg
0,275
Proteina ( )
mg
mL
= ( 0,119−0,098 ) ×
mL
( 0,3491−0,098 )
=0,0229
mg
mL
( tubo6 )

mg
0,275
Proteina ( )
mg
mL
= ( 0,142−0,098 ) ×
mL
( 0,3491−0,098 )
=0,0481
mg
mL
(tubo 7 )

Tabla 2. Resultados de la muestra

Muestra Concentració %proteína
Tubo Absorbancia
(mL) n (mg/mL)
6-muestra 0,5 0,119 0,022993 0,03
7-muestra 1,00 0,142 0,048175 0,06

De los dos gramos de harina que se pesaron se obtuvo un % proteína = 0,03 y 0,06
respectivamente. Los dos gramos de harina se tomaron de una bolsa de harina marca
SUPER AREPA, que según su información nutricional contiene 0,2%p/p de proteínas. Se
discutió que la baja concentración de proteína se debe a varios errores presentes, como el
reactivo de cloruro de sodio al 5% se encontraba contaminada y por lo tanto no se disolvió
por completo la cantidad de proteína presente en la muestra de harina; Es difícil obtener un
reactivo Biuret puro, y se pudo observar que había contaminación que el blanco fue muy
significativo, también se puedo observar que por el color característico de Biuret con la
albumina y globulinas de un color violeta de alta intensidad (Fine, J. 1935) y los del
laboratorio eran violeta pálidos se discutió que la muestra y reactivos presentaban
contaminación.
Conclusiones
Se extrajo por solubilidad con NaCl al 5 % las proteínas de una muestra de harina. Se realizo la
curva de calibración y se determino cuantitativamenta la cantidad de proteína de una muestra de
harina, se obtuvo 0,04%p/p de proteínas. Se concluyo la presencia de muschas interferencias que
afectaron los resultados de la cuantificación de proteínas.
Preguntas:

8.1: Describa que es el espectrofotómetro y para qué sirve.

8.2: Defina con sus propias palabras que es una curva patrón.

8.3: Cuáles son las ventajas y las desventajas, de emplear los reactivos de biuret para cuantificar
proteínas explique.

8.4: Mencione cual es la razón de que en el método de biuret la absorbancia de una proteína se
lea a una longitud de 540 nm.

8.5: Explique si una curva patrón puede ser empleada para cuantificar sustancias diferentes a las
proteínas y cuál sería la diferencia con estas. 8.6:

¿Cuál es la finalidad de utilizar un tubo como blanco? Mencione si siempre se utiliza agua como
blanco

Bibliografía
[.] Kingsley, G. R. (1939). The determination of serum total protein, albumin, and globulin by the
biuret reaction. Journal of Biological Chemistry, 131, 197-200.

[.] Fine, J. (1935). The biuret method of estimating albumin and globulin in serum and
urine. Biochemical Journal, 29(3), 799