HIERRO SERICO
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Instrucciones de Uso
Finalidad . Sistema para la determinación del hierro sérico en
muestras de sangre con reacción de punto final.
[Unicamente para uso diagnóstico in vitro.]
Principio . Los iones férricos se disocian de la transferrina por la
acción de un tampón de pH ácido y son reducidos a la forma de ion
ferroso por acción de la hidroxilamina.
Después de la añadidura de FerrozineÒ, se forma un complejo carmín
brillante cuya absorbancia, medida entre 540 y 580 nm, es proporcional a
la cantidad de hierro en la muestra.
Caracteristicas del sistema . El sistema Hierro Sérico - Labtest
asocia sencillez operacional y gran sensibilidad, permitiendo un aumento
del 20% en el volumen final de la reacción, con significativa reducción del
volumen de la muestra.
El método posee tres características fundamentales para su exactitud y
precisión: excelente complejación del reactivo cromogénico para una
medición colorimétrica adecuada, eliminación de la necesidad de
desproteinización de la muestra y una excelente comparación con un
método establecido, indicando exactitud y especificidad.
Los datos de la recuperación y dilución de la matriz indican que el sistema
presenta una correcta exactitud metodológica y los estudios de
replicación demuestran la robustez del desempeño en el día a día.
El método propuesto utiliza la técnica manual y es fácilmente aplicable a
los analizadores semiautomáticos capaces de medir una reacción de
punto final entre 540 y 580 nm.
Metodologia . Goodwin modificado.
Reactivos
1. ( - Tampón - Almacenar entre 15 - 25 ºC.
Contiene tampón 250 mmol/L pH 4,0, hidroxilamina 144 mmol/L.
2. < - Estándar 500 mg/dL - Almacenar entre 15 - 25 ºC.
Después de manipulación, se sugiere almacenar bien cerrado entre
2 - 8 ºC para evitar evaporación.
3. * - Ferrozine - Almacenar entre 15 - 25 ºC.
Ò
Contiene ferrozine 28 mmol/L.
Los reactivos no abiertos, almacenados en las condiciones indicadas son
estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo. Durante la
manipulación, los reactivos están sujetos a contaminaciones de
naturaleza química y microbiana que pueden provocar reducción de su
estabilidad.
01 Español - Ref.: 38
Ref.
Precauciones y cuidados especiales
La vidriería almacenada puede acumular residuos que conllevan a la
obtención de resultados falsamente elevados.
Se deben de aplicar los cuidados habituales de seguridad en la
manipulación del reactivo.
No utilizar los reactivos cuando se muestren turbios o con señales de
contaminación.
Material necesario y no suministrado
1. Baño maría mantenido a temperatura constante (37 ºC).
2. Fotómetro capaz de medir, con exactitud, la absorbancia entre 540 y
580 nm.
3. Pipetas para medir muestras y reactivo.
Influencias preanaliticas . Factores preanalíticos son hoy día la
causa más importante de determinaciones equivocadas de hierro sérico.
La contaminación puede ocurrir en la recogida, en el transporte y en el
procesamiento de la muestra. Estudios indican que el 60% de los errores
acaecidos en el ensayo son debidos a errores preanalíticos.
La muestra debe de ser recogida por la mañana para conseguir las
condiciones óptimas de resultados, porque las variaciones diurnas del
hierro pueden producir reducciones de hasta un 30% en los resultados.
Edad, sexo, período de embarazo, uso de contraceptivos orales y
estrógeno alteran las concentraciones de hierro.
El uso de detergente iónico para la limpieza del material es otra fuente de
contaminación con hierro.
Muestra
Se debe de crear una instruccione de trabajo que establezca
procedimientos adecuados para recogida, preparación y
almacenamiento de la muestra. Subrayamos que los errores debidos a la
muestra pueden ser bastante mayores que los errores acaecidos durante
el procedimiento analítico.
Usar suero (sin hemólisis) obtenido en ayuna. El analito es estable por 4
días entre 15 - 25 ºC y por 6 días entre 2 - 8 ºC.
Como ningún test conocido puede asegurar que las muestras de sangre
no transmiten infecciones, todas ellas deben ser consideradas como
potencialmente infecciosas. Por lo tanto, al manipularlas, se deben seguir
las normas establecidas para bioseguridad.
Para deshacerse de los reactivos y el material biológico sugerimos aplicar
las normativas locales, regionales o nacionales de protección ambiental.
 0,132 - 0,038
Interferencias
Hierro (mg/dL) = x 500 = 96
Valores de bilirrubina de hasta 19 mg/dL y triglicéridos hasta 900 mg/dL 0,490
no producen interferencias significativas.
Debido a la gran reproducibilidad que puede obtenerse con la
metodología, se puede utilizar el método del factor.
Valores de bilirrubina mayores que 19 mg/dL y triglicéridos mayores que
900 mg/dL producen resultados falsamente elevados. 500
Factor de Calibración =
Procedimiento Absorbancia del Estándar

Véase observaciones 1, 2 y 3. Hierro (mg/dL) = (A2 Prueba - A1 Prueba) x Factor

El material usado en el procedimiento debe estar libre de contaminación Ejemplo

con hierro para evitar la obtención de resultados incorretos.
500
Factor = = 1020
Tomar 3 cubetas del colorímetro y proceder como expuesto a
0,490
continuación:
Hierro (mg/dL) = (0,132 - 0,038) x 1020 = 96
Blanco Muestra Estándar
Calibración
Tampón (Nº 1) 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
El estándar es trazable al Standard Reference Material (SRM) 937 del
Suero 0,25 mL
National Institute of Standards and Technology (NIST).
Estándar (Nº 2) 0,25 mL
Agua desionizada 0,25 mL Calibraciones manuales
Obtener el factor de calibración al usar nuevo lote de reactivos o cuando el
control interno de la calidad indicar.
Mezclar y determinar la absorbancia de la prueba en 560 nm o filtro verde
(540 a 580) ajustando el cero con el blanco. Se obtiene la absorbancia A1.
Linealidad
El resultado de la medición es lineal hasta 1000 mg/dL. Para valores
Blanco Muestra Estándar mayores, diluir la muestra (1:5) con agua desionizada, realizar nueva
®
Ferrozine (Nº 3) 0,025 mL 0,025 mL 0,025 mL medición y multiplicar el resultado obtenido por 5.

Mezclar e incubar en baño maría a 37 ºC por 10 minutos. El nivel del agua Control interno de la calidad . El laboratorio debe mantener un
en el baño debe de ser superior al nivel de los reactivos en los tubos de programa de control interno de calidad que defina con claridad los
ensayo. Determinar las absorbancias de la prueba y del estándar en reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para
560 nm o filtro verde (540 a 580) ajustando el cero con el blanco. La especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones
absorbancia de la prueba será A2. correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados
para evaluar la imprecisión e desviaciones de calibración. Se sugiere que
El procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros las especificaciones para el coeficiente de variación máximo y el error
6,8,9
cuyo volumen mínimo de solución para lectura es igual o menor que total sean basados en los componentes de la variación biológica (VB) .
1,25 mL. Se debe de hacer una verificación de la necesidad de ajuste del
volumen para el fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y reactivo Se sugiere utilizar las preparaciones estabilizadas de la línea Qualitrol -
pueden ser modificados proporcionalmente sin perjuicio para el Labtest para el control interno de la calidad en ensayos de química clínica.
desempeño de la prueba y el procedimiento de cálculos se mantiene 10,11
inalterado. En caso de reducción de los volúmenes, es fundamental que Intervalo de referencia . Los intervalos deben ser usados
se observe el volumen mínimo necesario para la lectura fotométrica. sólo como orientación. Se recomienda que cada laboratorio establezca,
en la población atendida, sus propios intervalos de referencia.
Calculos . Véase linealidad
Hierro Sérico (mg/dL)
A2 - A1 Neonatos 100 - 250
Hierro (mg/dL) = x 500 Lactentes 40 - 100
Absorbancia del Estándar Pre escolar y escolar 50 - 120
Hombre 65 - 170
Ejemplo Adulto
Mujer 50 - 170

A1 Prueba = 0,038
Conversión . Unidades Convencionales (mg/dL) x 0,179 = Unidades SI
A2 Prueba = 0,132
(mmol/L).
Absorbancia del Estándar = 0,490

02 Español - Ref.: 38
 8
Caracteristicas del desempeño
Exactitud . En tres muestras con concentraciones de hierro iguales a
63, 216 y 389 mg/dL, se añadieron cantidades distintas del analito
obteniéndose recuperaciones de entre el 95 y 103%. El error sistemático
proporcional medio obtenido en un valor de 50 mg/dL fue igual a
0,5 mg/dL o 1,0%.
Menstruación abundante, hemorragias gastrointestinales, hemorroides
sangrantes, carcinoma de colon y parasitósis son las causa más
comunes de deficiencia del hierro sérico por pérdida sanguínea en el
adulto.
Transfusiones repetidas, hemocromatosis idiopática, cirrosis, talasemia
y anemia sideroblastica son las causa más comunes del aumento del
hierro sérico.

Especificidad . El método propuesto fue comparado con un método La tabla a continuación muestra el comportamiento del hierro sérico, la
similar utilizando 80 muestras con valores situados entre 4 y 727 mg/dL. capacidad total de fijación de hierro (CTFH), índice de saturación de la
La comparación resultó en la ecuación de la regresión: y = 1,039x - transferrina (IST) y la reserva de hierro medular (RH), evaluada por la
2,247 y un coeficiente de correlación (r) igual a 0,999. El error coloración específica del frotis de la médula ósea, en diversas situaciones
sistemático total (constante y proporcional) verificado en el nivel de relacionadas con la alteración del metabolismo del hierro.
decisión (50 mg/dL) fue igual a 0,3 mg/dL o 0,6%.
Alteraciones Hierro
CTFH IST RH
Como las muestras fueron seleccionadas aleatoriamente en pacientes de Sérico
ambulatorio y pacientes hospitalizados, se puede inferir que el método Deficiencia de Hierro D E D A
tiene una especificidad metodológica adecuada. Infecciones Crónicas D D D E
Enfermedades malignas D D D E
Atransferrinemia D D S E
Repetitividad - imprecisión intra-ensayo Período menstrual D S D S
N Media DE CV (%) Embarazo (3º trimestre) D E D S
Muestra 1 20 53 2,41 4,5 Hemosiderosis pulmonar D S D A
Muestra 2 20 219 5,75 2,6 Nefrosis D D E E
Kwashiorkor D D S S
Anticonceptivos orales S/E E S S
Reproducibilidad - imprecisión total Intoxicación por hierro E D E E
N Media DE CV (%) Anemia hemolítica E S/D E E
Muestra 1 20 54 2,43 4,5 Hemocromatosis E S/D E E
Muestra 2 20 226 6,50 2,9 Deficiencia de piridoxina E S E E
Anemia sideroblástica E S/D E E
Talasemia Mayor E D E E
Sensibilidad metodológica . Utilizándose la absorbancia del
patrón como parámetro, la sensibilidad fotométrica es de 1,02 mg/dL D = disminuido E = elevado S = sin alteración
correspondiendo a una absorbancia igual a 0,001. A = ausente

Efectos de la dilución de la matriz . Dos muestras con valores Observaciones

iguales a 851 y 1000 mg/dL fueron utilizadas para evaluar la respuesta del
sistema en las diluciones de la matriz con agua desionizada. Usando 1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores
factores de dilución que variaron de 2 a 16, se encontraron fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de
recuperaciones de entre el 95 y 103%. resultados correctos.

Significado clínico . El hierro es esencial a la mayoría de los
organismos vivos, ya que participa de numerosos procesos vitales,
desde los procesos oxidativos celulares hasta el transporte de oxigeno
hacia los tejidos. La homeostasia del hierro es regulada principalmente
por la absorción y no por la excreción. El hierro es transportado en la
sangre por una proteína - la transferrina y almacenado en los tejidos,
ligado a otra proteína llamada ferritina.
La deficiencia de hierro es consecuencia de suministro inadecuado,
aumento de la demanda, pérdida sanguínea o la combinación de estos
factores. El suministro inadecuado es característico de los niños
alimentados con leche. El aumento de la demanda es característico del
embarazo y de los niños en los primeros cinco años de vida.
2. El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos
y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa
potencial de errores analíticos. El agua desionizada o destilada utilizada
en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así,
para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en
enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad ³1 megaohm.cm o
conductividad £1 microsiemens/cm y concentración de silicatos
<0,1 mg/L. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad
saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones,
silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que
deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los
resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer
un programa de control de la calidad del agua.

03 Español - Ref.: 38
3. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas de interferência en los 11. Burtis CA, Ashwood ER. Textbook of Clinical Chemistry, 2ª edição,
resultados y en la metodología se sugiere consutar “www.fxol.org”. Philadelphia: W.B. Saunders, 1986:2175-2211.

12. Labtest: Datos de Archivo.

Referencias
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2. Henry RJ, Cannon DC, Winkelman JW. Clinical Chemistry, Principles Producto Referencia Contenido
and Technics, 2nd ed. New York, Harper & Row, 1974. 1 1 x 80 mL
Hierro Serico 38-80 1 x 5 mL
3. Ooi DS, Perkins SL, Tokessy NE. Clin Chem 1992;38/4:541-544. 2 1 x 2,5 mL

4. Stookey L. Anal Chem 1970;42:779.

Informaciones al consumidor
5. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott
Laboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarborough, Canada, [Términos y condiciones de garantía]
1972.
Labtest Diagnóstica garantiza la correcta performance del equipo hasta
6. Westgard J O, Barry PL, Hunt MR. Clin Chem 1981; 27:493-501. su fecha de vencimento si há sido conservado de acuerdo a las
instrucciones que figuram em el rótulo.
7. Williams HL, Johnson DJ, Haut MJ. Clin. Chem 1977;23:237-240.

8. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular,

B a s e d e D a t o s d e Va r i a c i ó n B i o l ó g i c a . D i s p o n i b l e
en:<http://www.seqc.es/ar ticle/ar ticleview/330/1/170>
(acceso en 04/2006).
9. Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest
Diagnóstica 2005.
Labtest Diagnóstica S.A.
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
Servicio de Apoyo al Consumidor e-mail: sac@labtest.com.br

10. Ferraz MHC, Delgado RB. Valores de Referência para Exames

Laboratoriais. In: Leão E, Corrêa EJ, Viana MB, Mota JAC (Ed). Revisión: Marzo, 2014 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
Ref.: 041114 Reproducción bajo previa autorización
Pediatria Ambulatorial. 3.ed. Belo Horizonte: Coopmed, 1988. p.837-
848

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