Vectores de EXPRESIÓN

Trabajos en : Genética, Biología Molecular, se materializaron en

los laboratorios de:

Antecedentes

Herbert Boyer
Paul Berg

Stanley N. Cohen
Idearon técnicas para la localización, el aislamiento, la preparación y el
estudio de pequeños segmentos de ADN procedentes de cromosomas.

Se discutió el uso de plásmidos como vectores de clonación de

segmentos de ADN individuales.
 Vectores de Clonación.

Clonación. Han hecho posible la genómica y la

proteomica: Es decir estudio de
genes y proteínas a nivel celular

Estudios han transformado la investigación en:

Ecología
 Es una copia idéntica

Clon

Relación

Clonación

Separación de un gen especifico o de un

fragmento de DNA, para unirse a una
molécula pequeña , para después poderse
replicar, creando múltiples copias del DNA.
Clonación
Se tiene 5 etapas principales

•Cortar el DNA en Lugares precisos.

•Selección de una pequeña molécula de DNA capaz

de auto replicarse. ( estos DNA se denominan
Vectores de clonación )

•Unión covalente de dos fragmentos de DNA

•Traslado del DNA del tubo de ensayo a una célula

huésped.

•Selección e identificación de las células huésped que

contiene el DNA recombinante.
 ¿ Qué es un vector de clonación?

❑Es una molécula pequeña de ADN que puede replicarse de

manera autónoma en un huésped. ( célula bacteriana o de
levaduras )

❖Se utilizan en la clonación por que pueden

seguir su desarrollo normal a pesar de que
secuencias adicionales de ADN sean
incorporados en su material genético.

❖Se auto replican utilizando la maquinaria de la

célula huésped.
 Plásmidos

Algunos Ejemplos de Vectores.

Bacteriófagos Cósmidos
 PLÁSMIDOS
❑Moléculas circulares de ADN de doble cadena
que se replican de modo extracromosómico en
bacterias

❑En ellos se encuentran genes que le confiere al

organismo que los posee resistencia a algunos
antibióticos.
Clonación utilizando el fago
lambda como vector.

Se extrae el DNA de una

preparación de fago lambda y se
elimina el grupo
central de genes por tratamiento
con una enzima de restricción. El
DNA a clonar se corta con la misma
enzima y se liga entre los brazos
del
cromosoma de lambda. Luego se
empaqueta el cromosoma
recombinante dentro de las
proteínas del fago para formar un
virus
recombinante. Este virus puede
infectar células bacterianas y
replicar su cromosoma, incluido el
inserto de DNA.
 Bacteriófagos

❖Son virus que infectan a las bacterias,

constituidos según su núcleo de ADN o ARN y una
cubierta proteica.

❖Presentan cola y son incapaces de replicarse

autónomamente por lo que necesitan infectar a la
célula para poder hacerlo.

❖El más utilizado es el bacteriófago lambda por ser

eficiente para introducir sus bases pares de DNA
en la bacteria.

❖Puede ser usado como vector para clonar

fragmentos de DNA.
 CÓSMIDOS

❖ Son básicamente plásmidos.

❖Emplean la habilidad de las partículas

infecciosas del bacteriófago lambda para
empaquetar piezas lineales de ADN e
introducirlas en las bacterias.

❖Son vectores que se reproducen de igual

manera que los plásmidos en las bacterias.
Cromosomas artificiales “ Levadura”.

Es un tipo de vector de clonación .

Permite clonar hebras de ADN de gran tamaño

Capaz de replicarse en el huésped (levadura común usada en

panadería ).

Cuenta con una estructura semejante a los cromosomas de levadura

normal.
 Tipos de vectores de clonación utilizados en E. coli

Tipo de vector Método de introducción Método de propagación Tamaño del fragmento

en E. coli de DNA que se puede
clonar

Plásmidos: modificados Transformación; las Replicación del

por técnicas de DNA células se vuelven plásmido tamaño del
recombinante competentes para fragmento hasta
incorporar el plásmido 15.000 pb
recombinante; una vez
transformadas las
células se seleccionan
mediante un marcador
seleccionable

Bacteriófago Infección con fagos Replicación del fago Hasta 23.000 pb

Cósmidos construidos a Se necesitan el Replicación a modo de Hasta 45.000 pb

partir de plásmidos y de empaquetamiento en plásmido
genes invitro
 En conclusión
O Los vectores de clonación nos ayudan a obtener
segmentos de ADN idénticos, esto se tiene que llevar a
cabo con específicas encimas utilizadas en la
tecnología del ADN recombinante, es una forma fácil
de conocer e investigar los procesos y la molécula de
ADN, ha permitido la identificación de genes
implicados en muchos procesos biológicos. En
general, el resultado es una amplificación selectiva de
un gen o fragmento de ADN particular
 PALABRAS CLAVE:
O Edonucleasas de restricción
O DNA ligasa
O Vector de clonación
O Plásmido
O Bacteriófago
O Cósmido