Amparo Canoso de Barrero
INTRODUCCIÓN
La presencia de los microorganismos en el agua
ha sido bien documentada, se acepta que los
virus, las bacterias, los protozoos, las microalgas y
los hongos, se encuentran ampliamente distribui-
dos en el medio acuático. En los inicios de 1 970,
hubo un reconocimiento general de que los mi-
crobios eran los responsables de la mayoría de
acciones del ciclo del carbón en suelos y en aguas
dulces así como el del nitrógeno.
Sin embargo, a pesar de ello y de los progresos
en los últimos 25 años, los métodos para su estu-
dio son muy limitados. Aún hoy hay escasez de
datos confiables sobre su distribución, número y
productividad.
Acerca de las inquietudes sobre la actividad total
y/o la productividad de la comunidad microbiana
debe aclararse que los numerosos métodos que
intentan responder estas preguntas, no pueden dar
información acerca del estado fisiológico de las
células simples, en general hay muy poca informa-
ción acerca del nivel de actividad de las células
individuales. Lo que significa que se deben desa-
rrollar nuevos métodos para hacerlo. Además
muchos de los procedimientos comunes de labo-
ratorio no funcionan para algunos de los micro-
bios de las aguas naturales, puesto que ellos existen
en unas condiciones de nutrientes extremadamen-
te bajas y no crecen bien en medios de laboratorio.
Tampoco se sabe con certeza los nombres de to-
das las especies encontradas en un mililitro de
agua, menos aún cuáles de ellas eran activas en
la naturaleza, puesto que tienen la habilidad de
'Microbiólogo, M. Se. Laboratorio de Microbiología, Universidad Jorge Todeo Lozano, amparo.canoso(cDutadeo.edu.co
sobrevivir por largos períodos con su actividad
notablemente reducida. Otro problema es que aún
cuando los microbios son activos en sedimento o
en la columna de agua, su metabolismo es bajo.
Por ejemplo, la incubación para la medición de la
respiración debe extenderse por muchas horas o
días para notar cualquier cambio con el inconve-
niente de que cuando los microbios son dejados
en botellas de incubación, pronto mueren, crecen
o se activan. Adicionalmente es imposible separar
microbios de residuos orgánicos no vivientes en
lagos y océanos de tal manera que la medición de
las cantidades de carbón, nitrógeno e isótopos
estables no es posible, por ello se buscan métodos
que puedan resolver esas situaciones. Además es
aceptado que un buen método no debe introducir
artefactos en los resultados, sin embargo estos con-
tinuamente surgen y son muy difíciles de identificar.
CONSIDERACIONES PRELIMINARES
En general, los métodos usados hasta el momento
proporcionan estimados de las poblaciones. Sin
embargo antes de desarrollar cualquier estudio es
necesario tener en cuenta las siguientes conside-
raciones:
1. El pequeño tamaño de cada organismo.
2. Su estrecho contacto con el medio ambiente
que relacionado con su pequeño tamaño ori-
gina una alta proporción superficie/volumen.
Esta superficie tan grande permite una gran
vulnerabilidad a los factores medioambientales
como luz, temperatura, pH, niveles de sustan-
cias orgánicas, CO2 y otros.
15
Manual de Métodos en Limnología
3. Muchos microorganismos acuáticos no se de-
sarrollan en los medios de cultivo comunes.
4. Afinidad de los microorganismos a adherirse
a substratos (superficies sólidas) como plan-
tas, animales y partículas.
5. La mayoría de técnicas de muestreo y estudio
son muy laboriosas, requieren de mucho tiem-
po y algunas de ellas personal muy entrena-
do.
ó. Los equipos para muestreo son muy especiali-
zados, hay gran dificultad para toma de mues-
tras de fondo y el transporte de las muestras
puede originar cambios por muerte o repro-
ducción.
7. La cantidad de muestra a analizar con respec-
to al habitat es muy pequeña (y muy
heterogénea) por lo tanto hay que tomar mu-
chas muestras para obtener datos confiables.
8. Los microorganismos presentan grandes va-
riaciones en morfología y fisiología, por lo tanto
pueden ser encontrados en gran variedad de
hábitats, en general se considera que cualquier
microorganismo que pueda desarrollarse en
un ambiente, probablemente estará allí. Por
lo tanto para elegir el mejor procedimiento
es necesario tener en cuenta las característi-
cas físicas y químicas de la muestra, el propó-
sito del estudio, cuál grupo de
microorganismos se desea estudiar, infraestruc-
tura con la que se cuenta, además de las con-
sideraciones financieras del caso.
9. Finalmente e independiente de la metodolo-
gía que se use, el trabajo siempre es tedioso y
laborioso.
A pesar de ello, hay una gran variedad de méto-
dos que los investigadores con experiencia o no,
podrían tener en cuenta. Algunos son más fami-
liares como por ejemplo, el método de conteo
directo por epifluorescenáa, otros son relativa-
mente nuevos y por ello son usados solo por es-
pecialistas, como sucede con los estudios sobre
ecología molecular en los cuales se necesitan equi-
pos muy costosos como el microanálisis con rayos
X y la citometría de flujo no disponibles para la
generalidad de las instituciones.
16
MÉTODOS DE CAMPO
RECIPIENTES
Las muestras se recolectan en botellas lavadas,
enjuagadas cuidadosamente (un último enjuague
se realiza con agua destilada) y esterilizadas. Los
recipientes deben guardarse cerrados antes de su
uso. En algunas ocasiones las muestras pueden
ser recolectadas en bolsas plásticas pre-esteriliza-
das.
Desclorinación
Cuando se sospecha que las muestras de agua
tienen cloro residual u otro halógeno hay que agre-
gar un agente reductor a los recipientes antes de
la recolección, generalmente se adiciona tiosulfato
de sodio. Dependiendo del tipo de agua se adi-
ciona mayor o menor concentración, por ejemplo
0.1 mi de tiosulfato de sodio al 3% neutraliza una
concentración de cloro residual de 5 mg/l. Las
muestras de agua con altas concentraciones de
cobre o zinc o las aguas residuales con altas con-
centraciones de metales pesados se les agrega
un agente quelante que reduce la toxicidad que
pueda ser significativa cuando el transporte se de-
more más de tres horas, se usa frecuentemente
EDTA (sales disódicas de ácido etilendiamino
tetracético).
PROCEDIMIENTO
En general se debe tener en cuenta que las mues-
tras han de ser representativas y utilizar técnicas
asépticas durante la toma.
En el caso de muestras de aguas naturales se esta-
blece el tipo de muestreo de acuerdo al tiempo,
disponible para hacer el estudio, la situación geo-
gráfica del cuerpo de agua, sus características!
morfológicas, etc. La muestra debe ser representa-
tiva y recolectada desde un bote o puente. La fre-
cuencia del muestreo refleja las condiciones délo
corriente, por ejemplo, si se van a estudiar des-
cargas de aguas residuales, se toman muestras]
cada 4 o 6 horas y en períodos de cerca de 7 a 1
días. Dependiendo del tipo de estudio se elige
muéstreos verticales y algunas veces se toman
 2. Métodos paro el estudio del bacferiop/ancton en sistemas epicontinentales
muestras de sedimento. En general, los sedimen-
tos suministran un índice estable de la calidad ge-
neral del agua superficial.
Toma manual de muestras
Para muestras de ríos, lagos y embalses se toma la
botella muestreadora cerca de su base, se sumer-
ge con el cuello para abajo. Debajo de la superfi-
cie se gira la botella hacia el agua de manera que
la boca del frasco quede contra la corriente, en
este momento se destapa. Si no hay corriente, se
origina empujando la botella horizontalmente en
contra de la mano. La botella se saca a la superfi-
cie después de ser tapada en el fondo.
Aparatos para toma de muestras
En aquellos casos en los cuales se requiere reco-
lección de muestras de fondo o de perfiles vertica-
les, se usan aparatos especiales que permiten la
remoción mecánica de la tapa dentro del agua a
diferentes profundidades. Existen varios descritos
en la literatura (Zo-Bell y Van Dorn). En general,
los muestreadores consisten en una botella estéril
con tapa de caucho integrada dentro de una es-
tructura metálica que contiene un cable y un men-
sajero. El agua es succionada a la botella como
consecuencia del vacío parcial creado cuando se
sella la unidad en el autoclave (Masón, 1 984).
Las tomas de sedimento se hacen con aparatos
especiales de acero inoxidable que se pueden
adaptar con una bolsa estéril, una cuerda de nylon
cierra la bolsa una vez que la muestra ha sido to-
mada.
Las muestras deben llegar al laboratorio lo más
pronto posible y se deben mantener siempre refri-
geradas. Las que se van a cultivar se procesan
máximo 6 a 8 horas después de su toma, algunos
laboratorios son menos exigentes y aceptan hasta
24 horas y excepcionalmente 48 horas. Las mues-
tras que se preservan (formalina o gluteraldehido}
se fijan inmediatamente en campo.
La preservación en campo debe ser INMEDIATA
para evitar cambios en el número, el tamaño y la
forma. Los fijadores frecuentemente empleados son
21amaño de (o muestra. Debe ser lo suficientemente grande para realizar todas las pruebas requeridas, preferiblemente no menor a 250 mi.
el formaldehido (FMA) que es un gas por encima
délos -21°C en tanto que la formalina es la for-
ma líquida disponible. Debido a que la
autofluorescencia de la clorofila puede decaer
después de 24 horas de la preservación con FMA,
es mejor utilizar gluteraldehido, la concentración
usada es al 2.5%. Antes de su empleo se debe
filtrar con membrana de 0.2 /Jm. Es mejor prepa-
rar el preservativo en pocas cantidades ya que se
recomienda usar fresco.
MÉTODOS PE LABORATORIO
En general los métodos usados deberían permitir
saber: Cuáles microorganismos hay (IDENTIFICA-
CIÓN), cuántos hay (CONTEOS) y qué están ha-
ciendo (ACTIVIDAD).
IDENTIFICACIÓN:
Lo primero que hay que señalar es que sería difícil,
costoso, engorroso y consumiría gran cantidad de
tiempo identificar todos los microorganismos pre-
sentes en una muestra determinada. Un estudio
serio y relevante define cuál grupo es el que se
quiere conocer y así se busca el método más ade-
cuado para cada uno, no existe hasta el momento
un sólo método que los identifique a todos.
Los microorganismos más conocidos del agua son
los denominados indicadores de calidad sanitaria
(alóctonos). Entre ellos se conocen varios grupos
como los indicadores de aguas residuales que
incluyen a los coliformes totales, los fecales, los
enterococos y el C/osfrid/'um perfríngens. En algu-
nos países se usan estos indicadores en conjunto
con la Demanda Bioquímica de Oxígeno, DBO5,
para estudiar la calidad del agua (Fernández-
Alvarez, 1991; Kagacu, 1992).
Los indicadores de aguas recreacionales, según
APHA-AWWA-WPCF, (1995) son las bacterias
heterótrofas, Pseuc/omonas a eruginosa,
Sfaphy/ococcus aureus (no de rutina), los
enterococos así como los coliformes totales y
fecales. Para aguas potables se utilizan los
17
Manual de Métodos en Limnología
coliformes totales, Escherichio coli y algunos
bacteriófagos. La Organización Mundial de la Sa-
lud propuso en 1993 tres grupos de bacteriófagos,
los colifagos somáticos, los bacteriófagos RNA - f
específicos y los bacteriófagos de Bacfero/'des
fragi/ís. Finalmente, según Paul et al, (1995), se
pueden utilizar como indicadores de abundan-
cia microbiana total en ambientes acuáticos el
conteo viral directo, el conteo bacteriano directo,
la determinación de la clorofila y adicionalmente
en aguas marinas la determinación de vibriófagos
marinos. Como se ve en algunos de los casos an-
teriores se combina la identificación cualitativa con
la abundancia.
CONTEOS:
Tradicionalmente los métodos que miden abun-
dancia se clasifican en los que cuentan células y
aquellos que determinan cantidad por la medi-
ción de la actividad y/o la masa celular.
Métodos de conteo celular
El método de conteo celular directo más utilizado
en la actualidad es la técnica de epifluorescencia
con naranja de acridina (acridine orange, AO) o
con 4,ó-díamidino-2-fenilindol (DAPI). Los méto-
dos de conteo celular indirecto incluyen el creci-
miento de las bacterias en medios de cultivo, estos
últimos han entrado en desuso para la microbiolo-
gía acuática puesto que se ha demostrado que
muchas bacterias acuáticas autóctonas no crecen
en ellos, además del descubrimiento en 1 982 de
las formas viables pero no cultivables (Colwell et
al., 1985). Sin embargo, los métodos de cultivo
tienen su mayor aplicación en la medición de los
indicadores ya mencionados en la sección ante-
rior. Los nombres de estos métodos son familiares
para la mayoría de los lectores y entre ellos se in-
cluyen procedimientos como el número más pro-
bable (NMP), el recuento standard en placa, el
recuento por los métodos de siembra en superficie
y todos aquellos procedimientos que utilizan fil-
tros de membrana.
Técnica de epifluorescencia para el
conteo bacteriano
El procedimiento de epifluorescencia permite el
recuento de todas las bacterias presentes en un
volumen determinado de agua. Según Turley,
(1 993) las técnicas de conteo microscópico de las
muestras de agua coloreadas con fluorocromos que
tiñen los ácidos nucleicos como la naranja de
acridina y el DAPI son esenciales para estudiar y
enumerar las poblaciones del bacíerioplancton
además que son métodos utilizados de rutina en
varias partes del mundo.
En el laboratorio de Microbiología de la Universi-
dad Jorge Tadeo Lozano, se está usando esta téc-
nica desde 1996, cuando la Universidad y
Colciencias cofinanciaron un proyecto de investi-
gación denominado "Evaluación de la población
bacteriana total en tres cuerpos de agua lénticos
mediante la técnica de epifluorescencia" (Canosa
y Pinilla, 1998, 2001). La validación del procedi-
miento incluyó la metodología sugerida por Hobbie
et al., (1 977), las modificaciones establecidas por
Kepner y Pratt, (1 994), lo aprendido en las Uni-
versidades de Porto y de Santiago de Compostela
así como los cambios establecidos en el labora-
torio debido a las situaciones particulares en-
contradas (Ver anexo, foto 6 y 7}.
Observaciones generales acerca de la
técnica
Todas las muestras de agua son preservadas y
refrigeradas entre 4-5°C en oscuridad. No se han
observado diferencias significativas en muestras fi-
jadas, refrigeradas y mantenidas en oscuridad por
períodos de cuatro meses.
Dispersión y homogenizac/ón: Las muestras deben
ser bien agitadas, mínimo 30 veces antes del uso.
Esta actividad debe tenerse en cuenta en cada paso
(diluciones, preparación del filtrado etc.). La ma-
yoría de autores recomiendan para eliminar los
grumos, la agitación mecánica con vortex, sin
embargo en ciertos casos se recomienda el uso de
pirofostato tetrasódico y/o sonificación (Kepner y
Pratt, 1 994; Velji y Albright, 1 986).
Diluciones: Las muestras turbias deben ser diluidas
de tal modo que se tengan alrededor de 20 a 30
células por campo, si quedan más y se puede con-
tar se hace, teniendo presente diluir la muestra del
mismo origen en la siguiente ocasión, si no es así,
se debe repetir la prueba. En la mayoría de aguas
naturales oligotróficas no se diluye, si son
mesotróficas o eutróficas hay que reunir informa-
 2. Métodos pora el estudio del bacteñoplancton en sistemas epicontinentales
ción en un premuesfreo para saber las diluciones
de trabajo.
Fluorocromos y tiempo de exposición: Muchos au-
tores trabajan con naranja de acridina para el
conteo de las bacterias acuáticas, en concentra-
ciones que varían entre 1 O y 1 00 ¿L/g/ml, la última
concentración es la más usual. Asimismo los tiem-
pos de contacto incluyen desde 5 hasta 15 minu-
tos. Sin embargo, es importante tener en cuenta el
tipo de muestra para determinar la concentración
y el tiempo de contacto adecuado. La presencia
de sedimentos requiere concentraciones más al-
tas. Algunos autores recomiendan usar DAPI en
lugar de AO cuando se tiene interés en organis-
mos fotótrofos, puesto que la AO puede enmasca-
rar la autofluorescencia de la clorofila.
Filtración: Después que la muestra o su dilución
ha estado en contacto con el fluorocromo se filtra
un volumen conocido a través de filtros de mem-
brana de 0.2 jL/m de diámetro de poro, la fuerza
de la presión de vacío aplicada debe ser mínima
para evitar rompimiento de las células, por ello se
usan alrededor de 1 00 mm de Hg.
Aceite de inmersión: Los filtros con las bacterias
retenidos son colocados entre lámina y laminilla
usando para ello un aceite de inmersión de baja
fluorescencia (Olympus AX9Ó02). El aceite es sen-
sible a la luz, por lo cual es recomendable mante-
nerlo en lugares oscuros. Después de utilizarse se
guarda bien tapado en nevera y en su caja.
Conteo: El número de bacterias se determina en
áreas del filtro seleccionadas al azar con ayuda
de una retícula colocada en el ocular del micros-
copio. Los conteos deben ser obtenidos de varios
campos, cubriendo la mayor área del filtro. Cuan-
do se presentan partículas opacas y grumos la
mayoría de los autores recomiendan contar el
número de bacterias presentes en la superficie y
simplemente doblan el número al informar, asu-
miendo que existe la misma cantidad de células
por ambos lados de cualquier partícula mineral o
detrítica. La precisión de) recuento depende del
número de bacterias contadas, la mayoría de los
investigadores cuentan mínimo 400 células por fil-
tro (entre 30 y 50 células por campo o retícula),
En el protocolo de trabajo del Laboratorio de Mi-
crobiología de la Universidad Jorge Jadeo Lozano
(Canosa, 2001 ) se establece que como mínimo se
cuentan 30 campos porfiltro que se eligen al azar.
Primero se hace un reconocimiento general del fil-
tro que se recorre en zigzag para observar la distri-
bución general de las células. Se cuentan 1 O
campos al azar y luego en cruz imaginaria se cuen-
tan los otros 1 O campos (5 verticales y 5 horizon-
tales).
Si en la preparación quedan menos de 20 células
por campo se cuentan más campos. Se seleccio-
nan para el conteo todas las células que aparecen
naranjas, rojizas o verdes brillantes y sólo aque-
llas cuya morfología sea claramente bacteriana,
se tiene en cuenta tamaño, forma y agrupación.
En los sistemas olígotróficos marinos las bacterias
dominantes pueden ser ultramicrobacterias meno-
res de 0.3 /Jm de diámetro, estas bacterias crecen
lentamente pero no aumentan su tamaño aún cre-
ciendo en medios ricos en nutrientes. En agua de
embalses, las células bacterianas con un diámetro
menor a 0.1 8 jL/m son el 20 %, mientras que el
diámetro de la mayoría está entre 0.09 y 0.25 pm,
lo cual significa que se pueden observar tamaños
tremendamente pequeños.
8/anco: En cada prueba se debe correr un blan-
co. Este blanco asegura la ausencia de células en
las soluciones y los aparatos usados. El número de
células obtenidas del blanco debe restarse del nú-
mero de células obtenidas en la muestra. En au-
sencia de contaminación de los reactivos la
cantidad de las células del blanco debe ser menor
al 5 % del número total de células de la muestra.
Cálculos: Se debe contar lo más pronto posible,
idealmente el mismo día que se prepare la lámina.
si ello no es posible se guardan las preparaciones
en refrigeración y oscuridad. Para calcular la den-
sidad bacteriana de la muestra original se necesi-
tan conocer los siguientes datos:
• El área efectiva de filtración del túnel, en la
se usa "\ mm.
El área del campo o el de la retícula utilizada
para el conteo (en la UJTLse utiliza una retícula
de 10 mm de lado, cuando se coloca en el
ocular (10/100), Área - I2 A - 0.1 , por lo
19
Manual c/e Métodos en Limnología
tanto el área de la retícula cuando
2
se usa el
objetivo de 1 OOX es de 0.01 mm .
• El número de células por retícula con ayuda
de un contador de células.
N° células / mi = N * F * 1 / (V * D)
En donde:
N = Número de células promedio por retícula.
F — Área de filtración/Área de la retícula
220.98/0.01= 22698
Área de filtración = Yl? = 226.98
D — Inverso de la dilución
V = Volumen filtrado
MEDICIÓN DE ACTIVIDAD
Determinación de la biomasa
La biomasa de una población es quizás el
parámetro más básico que se pueda considerar
en ecología microbiana, pues si se conoce, se pue-
de saber la actividad potencial de esa población
en el ambiente así como su potencial como fuente
de alimento para cadenas tróficas superiores
(Hobbie, 1993; Kirchman, 1993).
Uno de los métodos más populares es la estima-
ción de la biomasa bacteriana por medio de la
medición del volumen celular con el conteo celu-
lar. Las determinaciones del biovolumen celular fre-
cuentemente emplean métodos de microscopía de
epifluorescencia y microscopía electrónica. Actual-
mente ha tenido gran aceptación la combinación
de epifluorescencia y análisis de imagen, este pro-
cedimiento permite realizar medidas densitométri-
cas y geométricas de imágenes de cualquier tipo.
Su principal aplicación es en el campo de la
microscopía cuantitativa en el cual suministra da-
tos rápidos, seguros y estadísticamente significati-
vos además ha reemplazado la subjetiva
microscopía tradicional. Algunos autores han es-
tablecido relaciones entre el biovolumen y la
biomasa puesto que muchos estudios buscan co-
nocer la biomasa bacteriana en forma de carbón.
En el procedimiento, primero se determina e!
biovolumen de las células bacterianas debido a
que este parámetro es más fácil de obtener a par-
tir de las dimensiones de los organismos observa-
dos (Norland, 1993).
20
Conteo de bacterias viables
El conteo de bacterias viables (DVC), propuesto
por Kogure, Simidu y Toga, (1 978), busca contar
las bacterias del agua activas en el momento del
muestreo a diferencia con el conteo bacteriano
total con el cual se cuentan todas las bacterias
presentes (vivas, muertas, cultivables, no cultiva-
bles, activas etc.). El proceso general consiste en
adicionar a una muestra extracto de levadura
(0.025%) y ácido nalidíxico (0.002 %), en teoría,
las bacterias activas comen, aumentan de tamaño
y se preparan para su división que es impedida
por el antibiótico. Posteriormente se realiza la téc-
nica de epifluorescencia, teniendo en cuenta de
contar solo las células alargadas y gordas que
fluorescen rojo naranja. El conteo se hace inme-
diatamente después (máximo 5 minutos) de haber
preparado las láminas. En el laboratorio de Mi-
crobiología de la UJTL se han llevado a cabo ex-
perimentos desde 1 996 para validar esta técnica.
Medición de actividad respiratoria con el
método de reducción de sales de
tetrazolio
El análisis de la actividad bacteriana respiratoria,
es una de las herramientas de la ecología
microbiana acuática que suministra información
acerca del estado fisiológico de las bacterias en
los lagos. Esta actividad respiratoria puede ser es-
tudiada ín s/tu por la reducción del INT (2-p-
iodofenil 3-p-nitrofenil 5-fenil tetrazolio cloruro) o
del CTC en cristales rojos de formazan insolubles
en agua. El método del INT aunque ha sido bas-
tante útil, presenta varias dificultades para visuali-
zar las bacterias en filtros de membrana y otras
superficies opacas, normalmente se observa en
microscopía de campo bilí ante (Posch et al., 1 997)
en tanto que el CTC (5- ciano-2,3-ditolil tetrazolio
cloruro) es empleado en la enumeración directa
por microscopía de fluorescencia de las bacterias
con actividad respiratoria en muestras ambienta-
les. Este colorante en su estado oxidado es casi
transparente y no fluoresce, pero es fácilmente re-
ducido vía actividad de transporte de electrones
en CTC-formazan insoluble y fluorescente el cual
es acumulado intracelularmente. Las bacterias con
el CTC son visualizadas por microscopía de
epifluorescencia en preparaciones húmedas sobre
 2. Métodos pora el estudio del bacterioplancton en sistemas epicontinentales

superficies de filtros de membrana de
policarbonato, cuando se contracolorea a las
muestras tratadas con CTC con DAPI se pueden
enumerar en la misma preparación las
subpoblaáones totales y activas.
NUEVOS MÉTODOS
Técnicas moleculares en preguntas
ecológicas:
Áreas fuertemente relacionadas de la taxonomía
bacteriana, la diversidad genética, la adaptación
y la evolución han tenido una mejor perspectiva
debido al uso de estos métodos. Las nuevas tec-
nologías como la reacción en cadena de la
- polimerasa (PCR), la técnica de bidridización fluo-
rescente in s/fu (FISH) y pruebas con
oligonucleótidos usando el ARNr 1 65, han permi-
tido la enumeración de taxones específicos dentro
de una población bacteriana mixta (Ravenschlag
etal., 2001). Adicionalmente se sabe que sólo el
10 % de las bacterias acuáticas han sido cultiva-
das con éxito (Eilers etal., 2000; Tañí et al., 1 998;
Becker et al., 2000), como por ejemplo un grupo
de taxones denominado el grupo "SAR" descrito
por Giovannoni et al. (1 990) que ahora se sabe
tiene una amplia distribución en el océano pero
era desconocido y nunca se había cultivado, o los
hallazgos en un manantial caliente en el cual nin-
guna de las secuencias 1 OS rRNA encontradas con
técnicas moleculares fueron idénticas a los aisla-
mientos realizados con anterioridad en los mismos
sitios (Skirnisdottir, etal., 2000), los nuevos hallaz-
gos llevan a concluir que los cultivos han sido una
sub-representación muy gruesa o tosca de la di-
versidad microbiana en la naturaleza.
AGRADECIMIENTOS
Estos trabajos se han realizdo gracias al apoyo de
la Universidad Jorge Tadeo Lozano y Coláencias.
La autora agradece la colaboración invaluable de
la vicerectoría académica, los miembros del Cen-
tro de Investigaciones Científicas, laboratorios y
facultad de Biología Marina de la Universidad.

REFERENCIAS CITADAS

American Public Health Association (APHA), American Water Works Association (AWWA) & Water
Pollution Control Federation (WPCF). 1995. Standard Methods for the Examination of Water and
Wasíewater. 1 9th ed. Víctor Graphics. Baltimore. USA.

Becker, S.; Boger, R; Oehlmann, & Ernst. R.A. 2000. PCR bias in ecological analysis: A case study for
quantitative Taq nuclease assay ín analysis of microbio! communities. Applied and Environmental Microbioiogy.
66(11): 4945-4953.
Canosa, A. 2001. Técnica de Epifluorescencia para el Coníeo Bacteriano. Conteo de Bacterias Viables.
Manual Instructivo de Técnicas en el Laboratorio de Microbiología, Universidad Jorge Tadeo Lozano. Bogotá.

Canosa, A. & Pínula, G. 1998. Evaluación de la población bacteriana total en tres cuerpos de agua
lénticos mediante la técnica de epifluorescencia. Informe Final. Proyecto Coíinanáado por COLCIENCIAS
y la UJTL

Canosa, A. & Pinilla, G. 2001. Total bacterial population in three lentic water bodies of the Colombian
Andes using the epifluorescence technique. Lakes & Reservoirs: Research and Management. 6(2): 1 1 69-1 74.
Colwell, L.; Brayton, R; Grimes, D.; Roszak, D.; Huq, S. & Palmer, L. 1 985. Viable but non-culturable
Vibrio cho/erae and related pathogens in theenvironment: Irnplicattonsforthe reléase of geneticallyengineered
microorganisms. Biotechnology. 3: 817-820.

21

INTRODUCCIÓN
Los sistemas lénticos, son prototipos de ecosiste-
mas acuáticos epicontinentales, los cuales presu-
ponen una extensión y una profundidad mínima
suficientes para desarrollar, en algún momento del
ciclo estacional, una c//na (termoclina, picnoclina
o oxíclina) que contribuya al aislamiento relativo
de las capas profundas con las superficiales
(Margalef, 1983).
En estos se pueden identificar zonas o regiones
lacustres (Figura 3.1). Por ejemplo, la zona litoral,
la zona profunda o béntica y finalmente, la zona
de aguas libres, limnética o zona pelágica, donde
!a región litoral y profunda tienen menos influen-
cia. Esta última, es el habitat del fitoplancton ya
que es el área donde está suspendido y donde se
realiza por fotosíntesis la fijación del carbono inor-
gánico.
La columna de agua de la zona pelágica contiene
materia particulada en suspensión conocida co-
lectivamente corno seston. El seston, se divide en
materia particulada viviente (bioseston) y no viviente
(abíoseston o tripton).
Los componentes del bioseston son el necton y el
plancton. El necíon comprende los organismos gran-
des, tales como peces, los cuales se mueven inde-
pendientemente del movimiento turbulento del agua.
En el plancton los prefijos fito o zoo denotan los
tipos alga o animal, respectivamente. El término
fitoplancton se asigna a un grupo de microorga-
nismos foto autótrofos o en algunos casos
heterótrofos, los cuales desarrollan parcial o tota I-
'Profesor Asociado, Departamento de Biología, Universidad Nacional ds Colombia - Pontificia Universidad Javeriana,
e-ma//: ¡donato@c('encías, unal.edu.co
Jfion Cn. Donato R.
mente sus ciclos de vida en aguas abiertas de la
zona pelágica de mares, lagos, lagunas y ríos
(Reynolds, 1997).
El objetivo de estas páginas es el de presentar de
una manera sintética los métodos y las técnicas
usualmente empleadas para el registro o estudio
del fitoplancton.
1
CONSIDERACIONES PRELIMINARES
A pesar de las múltiples dificultades e incluso los
numerosos interrogantes, se considera que para
conseguir resultados óptimos es importante abor-
dar y resolver antes del muestreo tres temas cen-
trales:
A. Reconocer la importancia de la escala
ecológica de las algas del fitoplancton.
B. Precisar las etapas de trabajo que van desde
el planteamiento de la pregunta de investiga-
ción o la(s) hipótesis, hasta la fase de interpre-
tación de datos,
C. Conocer algunos aspectos del entorno físico.
EL PROBLEMA DE LA ESCALA Y EL OBJETO
DE ESTUDIO
Los sistemas ecológicos son dependientes de la
escala de observación debido a que sus elemen-
tos ínteractúan de acuerdo con el tamaño físico
del sistema (Alien & Hoekstra, 1992). Un bosque
tropical y el fitoplancton de un lago presentan as-
pectos fisiológicos distintos como consecuencia de
las diferentes variables ambientales y de las veloci-
dades de los procesos del sistema.
23
Manual de Métodos en Limnología
Una vez se tiene en claro el objeto de la investiga-
ción, es necesario establecer en que escala tem-
poral se puede observar el fenómeno. Se debe
definir cual es la frecuencia de observación del sis-
tema y el tiempo total de observación. La frecuen-
cia de observación del sistema depende de los
procesos de interés y puede ir de minutos, meses a
años. Las escalas espaciales se relacionan con la
delimitación del objeto de estudio y su resolución
permite establecer para un mismo tiempo, cual es
el punto de muestreo, número y el tamaño de las
muestras necesarias para garantizar la
representatividad del sistema.
Otro aspecto importante al abordar el estudio de
la comunidad del fitoplancton es definir el objeto
c'e estudio. Una definición, es la descripción for-
jl de una discontinuidad que permite al obser-
vador afrontar la investigación al disminuir la
subjetividad (Alien & Hoekstra, 1992). Es funda-
mental el planteamiento previo de la pregunta de
investigación e hipótesis, así como definir previo al
comienzo de la investigación los temas de estudio
re'nc'onados con el fitoplancton.
EL ENTORNO FÍSICO COMO CRITERIO
INICIAL PARA DEFINIR LA TOMA DE
MUESTRAS
Perfiles verticales ín situ de temperatura,
conductividad, oxígeno y pH.
Uno vez establecida la estación correspondiente al
punto más profundo (parte iimnética o de aguas
Irires) se realiza hasta la máxima profundidad po-
Je, perfiles verticales de oxígeno (O2), Tempera-
tura (°C), conductividad (/jS. crrr1), y pH. Se estima
el valor de ía transparencia (m) con el disco de
Secchi (Capítulo 1).
Con los datos obtenidos en los perfiles de oxíge-
no, conductividad y temperatura:
o-. Se elaboran gráficas de profundidad (m) v$. tem-
peratura, conductividad y oxígeno disuelto.
b-. Se calcula con el valor de transparencia (me-
dida con el disco de Secchi) el tamaño de la
capa fótica (generalmente este se obtiene mul-
tiplicando por 1.7 la profundidad a la cual se
deja de observar el disco).
24
Er
c-. Con las gráficas elaboradas se precisa la po- ce
sición de la capa fótica, termoclina, pr
quimioclina y la oxíclina. de
Estos datos son determinantes para corregir el di- er
seño de muestreo, puesto que el conocimiento de
y
la profundidad a la cual se desarrolla la termoclina, N
oxíclina o el tamaño de la capa fótica es funda- di
mental para el planteamiento de la pregunta de le
investigación a desarrollar.
R.
s<
MÉTODOS DE CAMPO _ y
M
Para la toma de muestras directas que frecuente- d
c
mente se utilizan para el análisis cuantitativo se
n
utiliza un muestreador no metálico denominado
c
botella de Van Dorn (Figura 3. 2. A) la cual consiste
t
de un mecanismo muy sencillo para su operación.
La botella puede ser vertical u horizontal.
La botella se baja lentamente a una profundidad
definida y en lo posible sin generaríurbulencia, Se
deja suspendida por unos segundos sobre el pun-
to de registro, luego se cierra empleando un men-
sajero. En lo posible se incluyen muestras de las
profundidades que corresponden a la capa fótica,
epilimnion, termoclina, posición de la oxíclina,
posición de la quimioclina (sí la hay), metalimnion
e hipolimnion (Figura 3.1). En el recipiente previa-
mente rotulado e identificado se fijan las muestras
con Lugol (Solución de Yoduro de Potasio), adicio-
nando 1 mi por cada 1 00 mi. de muestra.
En orden a estudiar el número de especies del
fitoplancton y también para obtener las especies
raras se utilizan redes de plancton (Figura 3.2.B),
las cuales están fabricadas de seda o nylon y con
un tamaño de poro que puede variar entre 20 a 50
Con las redes se pueden hacer arrastres ya sea
verticales u horizontales (si la columna de agua
está mezclada), pero si esta estratificada, una red
pesada puede ser bajada a una profundidad co-
nocida y entonces se hala a la superficie de modo
que se hace un muestreo en diferentes partes de la
columna de agua.

En otro frasco previamente enumerado e identifi-
cado se vierte el contenido de la muestra y se
preserva con una solución de Transeau (solución
de agua destilada, etanol al 90% y formol al 40%
en proporciones 6:3:1), añadida en volumen 1:1
y se asegura que quede herméticamente cerrado.
No olvide consignar el tipo de muestra (malla o
directo), sitio, fecha de toma de la muestra y co-
lector.
Recuerde que los muéstreos con redes son muy
sesgados pues se pierden las algas del picoplancton
y el ultraplancton (algas del fitoplancton < de 20
¿Jm), las cuales pueden ser importantes en la pro-
ductividad de algunos sistemas acuáticos. A pesar
de lo anterior, la técnica de muesíreo con red es
muy valorada para esquematizar la distribución
geográfica de grandes especies pero no para ob-
tener información del fitoplancton como un todo.
MÉTODOS DE LABORATORIO
Para la determinación e identificación taxonómica
de las especies del fitoplancton se utilizan claves
regionales o entre otras las siguientes: Parra ef a/.,
(1982a, 1982b, 1 982c, 1983), Comas (1996),
González & Mora - Osejo (1 996), Coesel (1 997),
Metzeltin & Lange - Bertalot (1 998). Para la obser-
vación microscópica de diatomeas y dinoflagelados
se requiere un proceso de lavado (oxidación de la
materia orgánica) previo, para ello se emplea, entre
otras, la técnica propuesta por Renberg (1981).
Para el análisis cuantitativo se utilizan cámaras de
sedimentación y un microscopio invertido (Figura 3.3).
La sedimentación y el conteo de los organismos se
realizaran de acuerdo con las recomendaciones de
Lund ef a/., (1 958) y Weízel & Likens (2000).
Para ei caso del fitoplancton los conteos se reali-
zaran a óOOx para tener en cuenta las especies de
ultraplancton y microplancton. Es importante ha-
cer conteos superiores a 400 individuos de la es-
pecie más representativa. Una vez obtenido el
3. Métodos poro el estudio de! fitoplancton en sistemas /enf/cos
número de la especie más representativa se reali-
za un conteo a 1 50 x para considerar las especies
de mayor tamaño. Los valores de abundancia en
células mi'1 se estiman con la siguiente fórmula
(Weizel & Likens, 2000)
No. de células contadas x área total de la cámaro
No. Células ml*|-' =
Área de un campo x No, de cornpos contados
x Volumen de muestro sedimentada.
Para describir la distribución vertical del plancton
se elaboran figuras a partir de programas de Surfer
o Tilia.
MANEJO E INTERPRETACIÓN DE PATOS
Para calcular índices de diversidad o de riqueza de
especies puede usarse paquetes estadísticos como
Biodiversity Pro, Pc-ord, Biotools, entre otros.
Si el objetivo es encontrar diferencias verticales en
la abundancia o la biomasa del fitoplancton de
significancia estadística pueden aplicarse análisis
sucesivos de varianza (ANOVA, MANOVA) tenien-
do en cuenta tanto las variables ambientales estu-
diadas de los perfiles o de otras como la
concentración de nutrientes. Para conocer con
mayor exactitud las diferencias significativas de las
variables medidas y estimadas se realiza un t-test
de comparación entre medias.
SI esta a su alcance, utilice otros métodos de orde-
nación complementarios para simplificar el proce-
samiento de datos. Siga las recomendaciones de
Boxef oí, (1 978); Krebs (1 989); Ludwing & Reynolds
(1 988); ter Braak (1 987,1 990, 1 995); Legendre &
Legendre (1998).
AGRADECIMIENTOS
A Carlos Rivera R. Docente Departamento de Bio-
logía de la U. Javeriana por los aportes al docu-
mento.
25

INTRODUCCIÓN
En la mayoría de ambientes acuáticos el
zooplancíon está conformado por protozoarios de
vida libre y por varios grupos de metazoarios entre
los que se destacan los rotíferos, microcrustáceos
y larvas de dípteros caobóridos. Las fracciones de
tamaño de los individuos de esta comunidad co-
rresponden a microplancton (50 a 500 ¡Jm) y
macroplancton (> 500
Los ambientes tropicales expresan una menor di-
versidad de especies en las c o m u n i d a d e s
zooplanctónicas respecto de sistemas de latitudes
mayores, además parece que este fenómeno se
acentúa con la mayor cercanía a la franja ecuato-
rial (Dussartef oí. 1984). Sin embargo en ambien-
tes acuáticos tropicales localizados en zonas de
baja altitud, menos de 1 000 msnm, correspondien-
tes a madreviejas o planos de inundación, la di-
versidad de rotiferofauna es considerablemente
mayor.
La estructura de la comunidad zooplanctónica en
los trópicos, se puede relacionar con el nivel trófico
del ecosistema, ya que este refleja el grado de com-
piejidad de la trama de flujo energético dentro del
sistema. Es así como los rotíferos tienden a domi-
nar el plancton en sistemas eutróficos y los crustá-
ceos en sistemas oligo-mesotróficos (Margalef
1983 y Sendacz ef ai, 1985). La acción del
zooplancton sobre la dinámica de los materiales
en suspensión (sestón) y la depredación por peces
define su rol en la red trófica de los sistemas acuá-
ticos.
El plancton animal está mejor representado en cuer-
pos lénticos, sin embargo, la capacidad de des-
' Profesor Asisfenfe Escuela de Biología - Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia, ñora no urfataci-lim nos.org
Nelson Javier Aranguren Riaño
plazamiento y las diferencias en las preferencias y
uso de los recursos, característicos de cada espe-
cie o de alguna de las fases de desarrollo de sus
individuos, dificultan establecer patrones de distri-
bución espacio-temporal. Estas propiedades son
de gran importancia a la hora de estructurar el dise-
ño muestreal sobre la comunidad y estimar de for-
ma objetiva relaciones ecológicas dentro de los
ecosistemas.
El estudio de plancton en ríos presenta un desarro-
llo más reciente. En Colombia ha tomado gran in-
terés el estudio del poíamoplancton especialmente
la fracción que se logra establecer en las llanuras
aluviales anexas al cauce principal.
CONSIDERACIONES PRELIMINARES
La mayoría de estudios en plancton se basan en la
obtención de fracciones o muestras representati-
vas de la comunidad, obtenidas del ambiente que
las alberga. El sentido de la colección de las mues-
tras y !a metodología empleada dependen funda-
mentalmente de:
1. Objetivo de la investigación.
2. Condiciones del ambiente objeto de estudio
(morfometría, dinámica hidrológica, estado
o nivel trófico).
3. Tipo o necesidad de información: descriptiva
y/o funcional.
4. Disponibilidad logística, de tiempo y
presupuestal.
La representatividad de las muestras o fracciones
del universo de información, está determinada por
las siguientes condiciones:
29
f Contener todas las espedes presentes en el
ambiente en un momento dado.
La densidad de organismos en la muestra de-
berá permitir estimar la densidad original me-
diante prospecciones sencillas.
Los organismos colectados se preservan sin que
se alteren considerablemente las condiciones
de evaluación biológica posterior.
Preguntas comunes en estudios de zooplancton
¿Qué taxa específicos conforman la comunidad?
¿Cual es la relación de abundancia de estas espe-
cies?
¿Cómo es la distribución espacio-temporal de las
poblaciones?
¿Qué vínculo sínecológico presenta cada una de
las especies?
Para resolver estas preguntas existen cuatro tipos
básicos de muestreo
" Cualitativo
• Cuantitativo
• Distribución vertical y horizontal
• Moniforeo espacio-temporal
Contexto del muestreo
Es indispensable considerar la naturaleza
mulrivarible y multidímensional de los ambientes
acuáticos a la hora de planear Ja investigación, de
tal forma que haya claridad y concordancia entre
los objetivos, los métodos y la interpretación de la
información. Esto garantiza la confiabilidad de los
resultados y sus implicaciones.
El siguiente esquema representa un modelo senci-
llo de la comunidad planctónica en el marco de
un ambiente multidimensional y multívariable, en
donde se han seleccionado algunas de las varia-
bles más significativas del ambiente del zooplancton
en un momento determinado.
Como se muestra en el modelo, el ambiente del
zooplancton está constituido por variables de na-
turaleza física, química y biológica, que pueden
tener diversos grados de expresión o significancia
sobre la comunidad en el marco espacial (hori-
zontal y vertical) y temporal (ciclo nictemeral, ciclo
estacional, otros). La figura 4.1 representa un ejem-
plo de la variación de la intensidad del muestreo
en función de la velocidad del viento y profundi-
dad, variables generadora de heterogenidad am-
biental.
MÉTODOS DE CAMPO
Se conocen diversos procedimientos y equipos para
obtener las muestras de plancton, se debe aclarar
que no hay un modelo simplificado y unificado de
colección, estas están definidas por el objetivo del
estudio y el tipo de ambiente a muestrear. Por ello
se hará mención de las técnicas cualitativas y cuan-
titativas de más amplio uso en campo.
MÉTODOS CUALITATIVOS
Estos pretenden obtener muestras de organismos,
de tal forma que allí estén representadas la totali-
dad de los taxa de la comunidad. El éxito de estos
procedimientos radica en poder explorar el am-
biente considerando los diferentes compartimentos
espaciales donde se localizan los individuos, me-
díante colectores de fácil, eficiente y rápido uso.
1. Redes: Se considera el método más usado para
obtener información de la composición de la co-
munidad zooplanctónica. Consiste en un colector
de forma cónica, compuesto por una línea o cuer-
da de arratre, una boca o entrada de agua, una
tela o red malla y un recipiente colector (Ver figura
3.2A del capítulo anterior). Para el zooplancton se
recomiendan los siguientes diámetros de poro de
la red de filtración:

Protozoos: 20
Rotíferos y formas larvales de microcrustáceos:
45 a
Copépodos y Cladóceros: 60 a 1 25/Jm.
Para garantizar esta colección, debe considerarse
el tamaño de los organismos, de tal forma que el
tamaño del poro no deberá superar el 75% de la
fracción más pequeña de tamaño de los organis-
mos del plancton a estudiar (Boltovskoy, 1 995}.
La forma de emplear las redes consiste en realizar
arrastres horizontales y verticales en eí seno del
cuerpo de agua, de íal forma que se explore la
mayor cantidad de espacio en el cuerpo de agua,
portante estos arrastres se expresan en una mues-
tra integrada.
Se recomienda realizar los arrastres lentamente,
sujetar un lastre a la red para facilitar el hundi-
miento, lavar periódicamente la red entre los arras-
tres para evitar reducir la eficiencia por obstrucción
de los poros, asegurar la cuerda de la línea de
arrastre al bote o a un lugar firme y seguro, no
generar turbulencia o resuspensión adicional de
sedimentos.
*Ventajas: Permite tomar muestras representativas,
suficiente cantidad de muestra, presupuestalmente
son accesibles y de fácil manejo.
*Desventa¡as: No se puede estimar con precisión
el volumen de agua filtrado, individuos pequeños
o frágiles se pueden deteriorar, no se pueden tra-
bajar a grandes profundidades y pueden ser cau-
sa de evasión en alguna fracción del zooplancton.
2. Bombas de Succión: Sistema compuesto poruña
pequeña bomba de vacío sumergible o manipulda
desde la superficie, con una manguera a través de
la que se succiona líquido de una profundidad
determinada, para luego ser colectada y preserva-
da. Opcional filtración del líquido por la red.
^Ventajas: Permite estudios de microdistríbución,
toma simultánea de agua para análisis físico-quí-
micos, cálculo de volumen filtrado preciso, se evi-
ta la colmatación, exploración de áreas de difícil
acceso.
jfiü
4. Metodología zooplancton
*Desventajas: Causa deterioro del material bioló-
gico, el tamaño muestreal es menor en compara-
ción con la red, favorece la evasión, no se puede
trabajar a grandes profundidades.
3. Botellas: Son recipientes de forma y volumen
variable, Wetzel y Likens (2000) mencionan las más
comunes: tipo Van Dorn (Van Dorn 1 95ó) (Ver
anexo, foto 2) y tipo Schindler (Schindler 1969)
(Figura 4.2). Se sumergen abiertos a la profundi-
dad deseada y luego se activa un sistema de cierre
controlado desde la superficie (Figura 3.1).
Se recomienda sujetar lastres para evitar la irueríe-
rencia por deriva, o considerar el ángulo de des-
viación de la línea del colector para realizar los
ajustes sobre la profundidad a la que se efectúa la
colecta: P — L * eos. ángulo ( P — profundidad,
L= longitud de la línea, ángulo— ángulo formado
respecto de la perpendicular a la superficie).
*Ventajas: Conocimiento exacto del volumen
extraído, facilidad de operación, no huy
colmatación ni deterioro considerable del material
biológico. Eventualmente podría servir para temar
muestras de gran profundidad.
^Desventajas: Maneja volúmenes pequeños y fa-
vorece la evasión.
En algunos casos, especialmente para coleccionar
organismos pequeños o frágiles, como rotíferos
con lóricas delgadas y protozoos ciliados, se hace
necesario realizar colecta directa de agua sin rea-
lizar filtración a través de la red o someterlos a la
presión consecuente de la bomba de succión.
MÉTODOS CUANTITATIVOS
Los métodos cuantitativos son considerados cuan-
do se requiere estimar la densidad de las pobla-
ciones que conforman la comunidad u otru
propiedad de las poblaciones como la expresión
de biomasa. Para ello se debe referenciar el nú-
mero de individuos o su peso, respecto al volu-
men real de agua filtrada o colectada.
No es fácil estimar estos valores, debido a que en
campo existen múltiples factores que influyen so-
bre la cantidad de organismos colectados, entre
los más importantes podemos referenciar: tipo de
31
Manual de Métodos en Limnología
patrón de distribución espacial de la población por
parches o de contagio, baja o pérdida de la efi-
ciencia del colector y evasión de los organismos.
En cuanto al patrón de distribución, este deberá
ser definido con anterioridad al muesfreo, sin em-
bargo es conocido que distribuciones aleatorias y
uniformes son poco comunes en poblaciones
zooplanctónicas (Tonolli 1 971; Levin y Segal 1 976
en: Wetzel y Likens 2000).
Brower, Zar y von Ende (1 989), nos presentan dos
técnicas comunes para definir el patrón de distri-
bución de la población y así orientar el diseño de-
finitivo del muestreo cuantitativo:
Técnica de examen gráfico: se fundamenta en
el modelo matemático de distribución aleatoria
de una población propuesto por Poisson, se-
gún el cual en una población con un prome-
dio de individuos por cuadrante definido y en
un arca específica, existen una serie de pro-
babilidades teóricas que explicarían su distri-
bución de forma aleatoria.
Técnico el? varianza relativa: en una pobla-
ción con una distribución de tipo aleatorio, el
promedio cío individuos por cuadrante es igual
a la varianza de la población:
O /
Aleatorio: sv /Jm ~ 11
I ¡niforme; sVjUm < 1
Agregada: sV/Jm > 1
Respecto a la eficiencia del colector, inicialmente
In selección del instrumento de colecta se basa en
¡n precisión en la medida de! volumen filtrado, así
¡os botellas y las bombas de succión serán los más
recomendables. Eventualmente las redes pueden
ser usadas si se cuenta con flujómetros que sirven
para estimar el volumen real filtrado durante el
arrastre. Boltovskoy (1995) presenta una serie de
consideraciones en caso de optar por las redes de
plancton como método de muestreo cuantitativo.
!.i volumen extraído para que sea representativo,
depende fundamentalmente de los tamaños
poblacionales, así para ambientes con densida-
des bajas (p.e. ambientes oligotróficos) volumen
superior a 20 litros, para densidades altas (p.e.
32
ambientes meso-eutróficos) volumen entre 5 y 1 O
litros. En ríos, este volumen debe ser considerable-
mente mayor debido a las bajas densidades
poblacionales, Paggi (1984) en un estudio de
plancton del río Paraná filtra aproximadamente 1 00
litros de agua del sistema por cada muestra.
La evasión de los organismos del plancton es in-
eludible, estos tienden a moverse, aunque unos
más que otros, y detectan cambios en la frecuen-
cia de onda del agua, así como variaciones en la
presión. Tomar una serie de muestras en número
suficiente para alcanzar una condición de homo-
geneidad de varianza en las densidades
poblacionales en un lugar y momento dado, servi-
ría para subestimar este factor como condicionante
en la cuantificación.
Preservación y transporte de las muestras
Las muestras de zooplancton son usualmente pre-
servadas con formalina neutralizada (Formaldehido
40%) hasta lograr una concentración cercana al
4%, también se usa etanol 70%, ácido acético,
solución Bouin, enfriamiento de la muestra. Algu-
nos ciliados y rotíferos se desintegran en formalina,
por lo que para ellos se recomienda el lugol como
preservante. En algunos casos (rotíferos y protozoos
ciliados) se hace necesario mantener muestras vi-
vas o narcotizadas para no causar deterioro en las
estructuras usadas en la determinación de las es-
pecies.
Se pueden implementar métodos para narcotizar
los individuos y así garantizar una mejor preserva-
ción:
Reducción de la temperatura del agua de la
muestra
Reducción de la concentración de Oxígeno
disuelto (por leve calentamiento)
Exceso de Dióxido de Carbono (Soda)
Cloruro de Magnesio
Sí el objetivo del trabajo es definir la relación
biomasa/densidad, debe considerarse el efecto del
preservante en la estimación del peso corporal,
especialmente cuando se evalúa el peso seco.
Dumont ef a/. (1975) sugieren el formaldehido
como el método de preservación que menor per-

dida de peso ocasiona sobre los organismos,
aproximadamente un 1 O a 20%, el etanol genera
una pérdida altamente significativa y progresiva en
el tiempo 40% y más. Por ello se recomienda el
uso de muestras frescas o con pocos días de pre-
servación cuando la intención es medir este
parámetro.
El transporte debe realizarse de tal forma que la
agitación de la muestra no favorezca el desprendi-
miento de estructuras o el fraccionamiento de los
individuos. Esto se puede minimizar evitando dejar
cámaras de aire en los frascos colectores de muestra.
MÉTODOS DE LABORATORIO
En el laboratorio se realizan básicamente tres acti-
vidades:
1. Identificación de los taxa colectados, para lo
cual de usarán las claves especializadas loca-
les y los reportes de distribución de las espe-
cies.
2. Estimación de las abundancias poblacionales.
3. Estimación de la biomasa corporal por gru-
pos taxonómicos y/o fases de desarrollo larval.
Estimación de la abundancia
En las muestras de zooplancton se recomienda
contar la totalidad de los individuos cuando las
densidades son bajas y recurrir al submuestreo o
alícuotas de la muestra cuando las densidades son
altas. Sin embargo, la técnica de cuantificaáón
varía según el grupo de estudio:
- Rotíferos, Protozoos y Formas larvales de
microcrustáceos: Cámaras de sedimentación o
Cámaras tipo Sedgwick-Rafter, bajo observación
en el microscopio invertido o convencional res-
pectivamente (Figura 4.3). El volumen a decan-
tar ( 5 a 1 O mi eutrófico, 50 a 100 mi
oligotrófico) y si es el caso la dilución (50 ;1 00
o 200 mi), así como el volumen a depositar en
la cámara S-R (0,1 ; 0,2 ; 0,5 mi) dependerá
de la concentración de los organismos.
- Crustáceos: En discos de Petri con fondo
reticulado o en cámaras tipo Bogorov con tabi-
4. Metodología zooplancton
ques separadores, bajo observación al
estereoscopio (Paggi y Paggi 1 995).
Wetzel y Likens (2000) establecen en 1 00 el nú-
mero mínimo de individuos contados de la pobla-
ción más abundante para que el contéo sea
representativo. Es decir, que al llegar a este valor
se detendría el canteo y se haría un cálculo
aproximado de la cantidad de submuentra que los
contiene, para luego realizar la prospección al
número total de individuos contenidos en esta.
Pasos a seguir:
1. Determinación del volumen de la muestra
2. Homogeinización de la muestra
3. Extracción de cada submuestra, mínimo cinco
(Wetzel y Likens 2000) y canteo
4. Retorno de la submuestra a la muestra para
evitar alteración de su volumen y de las pro-
babilidades de expresión cuantitativa de cada
población
5. Cálculos
MANEJO E INTERPRETACIÓN DE DATOS
Si en la muestra se ha logrado una buena
homogeinización se esperaría obtener una media
igual a la varianza, es decir una distribución al azar
en el número de individuos por submuestra, lo que
permitirá hacer la propección hacia la densidad
de organismos en el volumen total.
# ¡nd./ volumen submuestras (5) — > # ind. /volumen muestra
# ¡nd. / litro <— Volumen de agua filtrado en litros
Estimación de la Biomasa
En caso de evaluar la biomasa por peso, se reco-
mienda estimar el peso seco de cada taxón seleccio-
nando individuos portada. Se utilizan entre 50 y 2000
individuos, de acuerdo al mayor o menor famaño
corporal para obtener pesos representativos.
Los individuos seleccionados se lavan con agua
destilada y se colocan en pequeñas cápsulas de
papel de aluminio previamente pesadas. Estas se
33
Manual de Métodos en Limnología

colocan en discos de Peíri y se secan durante 24 - La estimación de la biomasa es difícil y en muchos

48 horas a 00 °C, se enfrian en desecador duran-
te una hora y se pesan (mínimo en ires ocasiones)
en la balanza de precisión (0,00001 g). Es impor-
tante realizar el proceso a partir de muestras fres-
cas, de lo contrario se debe considerar el efecto
del líquido preservante sobre el valor estimado.
Se puede estimar la biomasa por pesaje directo o
por estimación indirecta a través de la relación lon-
gitud/peso, definida por una ecuación de regre-
sión conocida previamente para la especie
respectiva. Dumont era/. (1 975) presentan la rela-
ción entre la longitud corporal en mm y el peso
corporal en /Jg para varias especies de rotíferos,
cladóceros y copépodos de aguas continentales.
En copépodos es posible construir la ecuación de
la regresión considerando la longitud en los dife-
rentes estadios de desarrollo (nauplios,
copepoditos, adultos) y los huevos. En cladóceros
se hace la relación considerando la longitud de
los juveniles. Se aclara que las ecuaciones de re-
gresión son útiles para realizar seguimiento a la
biomasa en el ambiente para el cual se definió
dicha ecuación, por lo tanto deberán realizarse
ajustes a ¡a misma en el tiempo y cuando se desea
aplicar en otros cuerpos acuáticos donde se en-
ciimtre la especie.
casos presenta un grado significativo de sesgo, más
cuando se trabaja con organismos de pequeños y
vanados tamaños como los rotíferos, es así como
Ruttner-Koíisko (1977) propone un método más
eficiente y preciso, la estimación de la biomasa a
partir de la relación volumen corporal/peso en
rotíferos, actualmente considerados una fracción
importante y desconocida en la productividad de
los ambientes acuáticos.
El interés fundamental de estimar la biomasa es
poder usar esta información para determinar el vín-
culo del zooplancton con los procesos productivos
y metabólicos del ambiente acuático, lo que con-
diciona una labor de investigación interdisciplinar
seguramente con resultados más exitosos y objeti-
vos dentro de la concepción de ecosistema.
Para la evaluación de la productividad secundaria
se recomienda consultar Dowhing & Rigler (1 984)
AGRADECIMIENTOS
Agradezco al profesor Santiago Gaviria por su
constante asesoría. A mis estudiantes de la
profundización de la UPTC.

BIBLIOGRAFÍA

Brower, J. Zar, J & C. Von Ende, 1 989, Field And Laboraíory Methods For General Ecology. Third Edition.
VVm.C. Brown Publishers. Dubuque. Usa.
Bolfovskoy, D, 1995. Colección De Plancton. En; Lopreío, E & G. Tell (Editores). Ecosistemas De Aguas
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(C

34

" ' ••'.•-í!r*aAi'*&t&»*¿ . ---IXH


INTRODUCCIÓN
Los macrófitos acuáticos constituyen un grupo na-
tural representado por muy diversos taxones, loque
lo hace un conjunto heterogéneo, difícil de abor-
dar, especialmente en los aspectos de colección y
preparación de especímenes. A grandes rasgos,
dependiendo de la forma de vida general (biotipo),
se pueden distinguircinco grandes grupos de plan-
tas harbáceas acuáticas y palustres: Macrófitos
errantes emergidos (Acropleustófitos) y sumergidos
(Mesopleustófitos), enraizados sumergidos
(Hyphydata), enraizados de hojas flotantes
(Ephydata), enraizados emergentes (Helófitos) y los
que se encuentran adheridos al substrato
(Haptófitos). Para estos se hacen a continuación
algunas observaciones breves de colecta y manejo
del material.
En general la colección de especímenes vegetales
es esencial para la investigación taxonómica. Como
tal delimitan las especies y documentan su variabi-
lidad, representan la fuente primaria de los estu-
dios florísticos y de la descripción de comunidades,
además de ser la principa! referencia de muchas
investigaciones experimentales. Los ejemplares
ideales para la identificación taxonómica son los
que representan la planta intacta y completa. Asi-
mismo, se deben coleccionar ejemplares suficien-
temente representativos, con cuatro a cinco
duplicados para su estudio conservación y dona-
ción o intercambio.
Las recomendaciones para la colecta de plantas
en general se pueden aplicar igualmente a los
macrófitos acuáticos y palustres. Instrucciones más
'Biólogo, M Se. Vegetación Acuática y Palustre de Colombio, Aparrado Aéreo 92981, Sanfafé de Bogofc, Colombia. uscfimJdt(g)ocl-<tmnos.org
Por : Uc/o Schm'tdt-Mumm
detalladas se encuentran en Engelmann (1 986) y
Marzocca (1985). Fosberg & Sachet (1965),
Fidalgo & Bononi (1984) y Lot & Chiang (1980)
también incluyen varias anotaciones relacionadas
con la colecta de macrófitos acuáticos.
CONSIDERACIONES PRELIMINARES
En resumen, se deban colectar las partes subterrá-
neas como raíces, rizomas o bulbos, Es esencial
una cantidad representativa de hojas y estructuras
fértiles. Son especialmente importante las flores,
frutos (maduros) y semillas debido a que la mayo-
ría de las claves taxonómicas hacen uso de las
características reproductoras. Los materiales nece-
sarios para efectuar el muestreo se pueden ver en
la Figura 5.1 . En lo posible se deben seleccionar
varios individuos que representen las diferentes fu-
ces del ciclo vital de la plantas. Una vez prensadas
y secas, los ejemplares deben mostrar la mayor
cantidad de información posible con relación a la
forma de la planta viva y deben ser además repre-
sentativas de la población. Retire la materia orgá-
nica muerta y lave bien las raíces.
Por lo general, la prensa de campo consta de listo-
nes de madera (liviana) entrecruzados y sujetos con
amarraduras que permiten ajustar tanto el grosor
del paquete de plantas como la presión sobre las
mismas. El orden del material secante en la prensa
corresponde primero a cartón corrugado, luego
sigue un pliego de papel periódico doblado den-
tro del cual viene la planta a prensar, si son delica-
das adicionalmente se colocan entre papel secante.
Por último, se coloca nuevamente cartón
37
Manual de Métodos en Limnología
corrugado, una planta y así sucesivamente. No es
recomendable armar paquetes demasiado grue-
sos; en estos las plantas que se encuentran en la
mitad tienden a dañarse con facilidad. Utilice tinta
indeleble para marcar cada pliego de periódico
con su número de colección.
Después de prensar las plantas por algún tiempo
se hace necesario cambiar el cartón corrugado, el
periódico y el papel secante humedecido. En el
Campo esta operación se debe realizar a diario,
por lo cual es conveniente llevar el suficiente ma-
terial secante. De otro lado, la presión de prensa-
do debe ser moderada, se recomiendan entre 1 O y
18 kg, máximo 23 kg para no dañar las estructuras
más delicadas de las plantas o para evitar que se
adhieran demasiado al papel. En el laboratorio, el
secado definitivo por calor generalmente se reali-
za en hornos diseñados para tal, también en estu-
fas caseras, sin embargo en todos los casos se debe
considerar que la excesiva temperatura puede da-
ñar ciertos ejemplares, estos se vuelven quebradi-
zos o perder el color natural. Se recomiendan de
60° a 90° centígrados con frecuente cambio del
material secante.
En la colecta y preservación de los macrófitos
acuáticos también existen puntos de vista encon-
trados. Por ejemplo Michelis (1 981) propone con-
servar los especímenes en glicerol acuoso al 50%
(v/v) antes de proceder a prensados. Sin embargo
Haynes (1 984) ve poco objeto el transportar gran-
des cantidades de glicerol en largas salidas de
campo y considera que se obtienen ejemplares de
herbario de igual o mejor calidad mediante las téc-
nicas tradicionales de prensado. De otro lado
Ceska & Ceska (1986) no recomiendan el uso de
alcohol, glicerol, formol u otros químicos para tra-
tar las plantas antes de ser prensadas debido a
que disuelven los pigmentos muchas veces reque-
ridos para la identificación de algunas especies.
MÉTODOS PE COLECTA POR BIOTIPO
Pleusfófitos
Las plantas errantes emergentes de mayor tama-
ño, como son E/cfWn/'a crass/pes, Cerafopfen's
pfer/c/ofdes, P'tstia stratiotes o Limnobium
38
/aevigafum, requieren la eliminación de las partes
muertas al igual que hojas, tallos y raíces excesi-
vas. También se recomienda realizar pequeñas in-
cisiones en las hojas o peciolos inflados para
facilitar el aplanamiento de la planta. En estado
juvenil C pferic/o/c/es y L. laevigatum se presenta
solamente con hojas en rosetas flotantes. Para C.
pfenc/o/c/es las hojas emergentes son además
dimorfas, las estériles pinnadas con anchos folíolos
y las fértiles más divididas con folíolos angostos.
Las plantas errantes emergentes de menor tamaño
(Ricdocarpus, Azolla, Salvinia, Phyllanthus, Lemna,
Spirodeia) se obtienen mejor con una malla de
acuario, la cual facilita además la eliminación de
hojas, pequeñas ramas u otros elementos extraños
antes de conservar el material en frascos plásticos
con alcohol comercial (75%). Esto facilita la poste-
rior identificación taxonómica y la separación del
material en sus respectivas especies. Para prensar
el material botánico de manera tradicional entre
cartulina y papel secante se recomienda emplear
el método de flotación detallado en Haynes (1 984).
No se recomienda preservar el material en formol
(Ceska & Ceska 1986).
Las anteriores anotaciones también son válidas para
las plantas errantes sumergidas de tamaño peque-
ño (Ricdo, Wolffio, Wolffiella), sin embargo en las
especies de mayor tamaño (Utricularia,
Ceraiophyllum) es recomendable lavar con cuida-
do el ejemplar en el lugar mismo para retirar las
algas mucilaginosas y otros materiales adherentes,
y luego prensar con poca presión la planta entre
papel secante por varías horas (4 a 6 horas) a tem-
peratura ambiente. Posteriormente se prensa de
manera tradicional (Haynes 1984).
Rizófitos Sumergidos
Las plantas enraizadas sumergidas por lo general
se prensan directamente en el lugar de colecta
mediante el método de flotación, sea directamen-
te sobre papel periódico (Haynes 1 984) o papel
blanco de altas calidad (Ceska & Ceska 1986).
Las plantas con abundante mucilago o algas ad-
heridas se recomienda un cuidadoso lavado en el
lugar y el prensado en papel secante según las
indicaciones presentaaas anteriormente para las
errantes sumergidas de mayor tamaño.
 5. Métodos para el estudio taxonómico de macró/ifos acuáticos y palustres

En cuanto a las algas macroscópicas de aguas
dulces (Chora, Nitelta] se recomienda la colecta
por el método de flotación y prensado entre papel
absorbente. Para la conservación en líquido Gon-
zález-González & Novelo-Maldonado (1986) y
Wood & Imahori (1 965) recomiendan el formol al
4% por volumen, FAA (Formol, ácido acético gla-
cial, alcohol) o 6:3:1 (solución de Transeau; 6
partes de agua, 3 partes alcohol etílico de 96°. 1
parte de formol).
Rizófitos de Hojas Flotantes
Especies delicadas, particularmente aquellas que
presentan tanto hojas sumergidas como flotantes
(Eichhomia, Cabomba, Callitríche), se colectan y
prensan de acuerdo el método de flotación ante-
riormente mencionado. Sin embargo, algunos
miembros de los géneros Nymphaea o Victoria son
de considerable tamaño y difíciles de prensar. En
} estos se requieran de 1 a 3 hojas y las flores y
frutos partidos por la mitad para mostrar las es-
tructuras internas.
Rizófitos Emergentes
Gran parte de las plantas enraizadas emergentes
de menor talla no requieren de técnicas especiales
y se pueden tratar como la mayoría de las plantas
herbáceas terrestres, Cuando la plantas son de gran
talla, como en el caso de Jypha, Sdrpus, Tholio,
Montrichardia y otras Aracea, es aconsejable do-
blar o fragmentar el ejemplar y prensar las partes
representativas por separado. En muchas especies,
especialmente Ludvwg/a, es necesario realizar un
secado rápido para prevenir la caída y desarticu-
lación de las hojas y flores.
Haptófltos
Sin excepciones las especies de la familia
Podostomaceae viven en aguas de Corrientes ve-
loces sobre substratos rocosos, especialmente en
cascadas y raudales. Se presentan firmemente ad-
heridas al substrato mediante pelos radicantes o
por estructuras especializadas llamadas hapterios,
ambos de los cuales secretan una substancia ad-
herente que fija la planta a la roca. Las hojas su-
mergidas son muy delgadas y flexibles y se
encuentran frecuentemente dañadas por la acción
de las Corrientes, Sin embargo, la alia capacidad
de regeneración le permite a la planta sobrellevar
los daños. Durante aguas altas las plantas crecen
vegetativamente y cuando disminuyen los niveles
en la época de sequía comienza la floración y en
algunos casos se pierden las hojas. La mejor ma-
nera de preservar los especímenes es la de colec-
tar ambas faces y cansen/arlasen alcohol (60-70%),
en formol al 4% o en una mezcla de estos (Van
Royen 1951).

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Fosberg, F. R. &M. H. Sachet. 1 965. Manual for tropical herbaria. International Bureau for PlantTaxonomy
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39

INTRODUCCIÓN
^_ La comunidad de macrófitos acuáticos alberga una
variada y numerosa fauna de organismos asocia-
dos a sus partes sumergidas y emergentes, que des-
empeña un importante rol ecológico en los sistemas
lénticos. Esta comunidad está compuesta princi-
palmente de invertebrados acuáticos como
anélidos, insectos, moluscos, crustáceos y arácni-
dos, los cuales forman parte de una estructura
trófica compleja que incluye peces, anfibios, repti-
les y aves (McCafferty, 1981).
Esta biota, al igual que la de cualquier ecosistema,
está compuesta por unidades funcionales de es-
pecies con interdependencia nutricional (Colé,
1988), constituyendo una red trófica, que puede
ser definida como un conjunto de poblaciones que
subsisten utilizando un mismo conjunto de recur-
sos (Margalef, 1983). Así, el reconocimiento de
las rutas tróficas puede basarse principalmente en
el tipo de dieta presentado por los taxa y, en algu-
nos casos, el hábito alimenticio asociado al sustrato
en el cual el alimento está disponible (Callista &
Esteves, 1998).
Sin embargo, los aportes en biomasa y la estructu-
ra trófica de la comunidad de macroinvertebrados
asociados a macrófitos, han sido temas poco es-
tudiados en regiones neotropicales. La mayoría de
los estudios han sido de carácter general o exclusi-
vamente taxonómicos (Junk, 1973, 1997; Fittkau
'.Ecóloga. Pontificio Universidad Joveriano. ongelobolivar@acl-limnos.org
. Laboratorio de Zoología y Ecología Animal. Universidad de los Andes. gri¿edjj@gcl-J¡fnnQ5,Qfg
Angela Bolívar García &
Guillermo Rueda-Delgado
etal. 1975, en Esteves, 1988; Reiss, 1977; De
Neiff, 1990; Wais, 1990; Callista & Esteves, 1998)
En este capítulo se presenta una metodología ajus-
tada a las particulares características del habitat
de esta comunidad, sugiriendo una vía de inter-
pretación de los datos obtenidos para su estudio
con base en la estimación de biomasa.
CONSIDERACIONES PRELIMINARES
Debe efectuarse de manera preliminar la caracte-
rización de los tapones de macrófitos en los que se
realizará el muestreo partiendo de su tipificación
general con base en biotipos y fisiotipos (Schmidt
Mumm, 1 988). Esta caracterización debe, preferi-
blemente, ir acompañada de la identificación taxo-
nómica de la comunidad de macrófitos acuáticos,
medición de sus dimensiones, organización de las
especies y de su estado de desarrollo (Capítulo 5).
Igualmente es conveniente acompañar el muestreo
con una caracterización física y físico-química del
sistemas en estudio, registrando datos de: profun-
didad, ancho, velocidad de la corriente, caudal,
pH, transparencia, temperatura, conductividad,
oxígeno disuelto, porcentaje de saturación de oxí-
geno, DQO, DBO (capítulos 1 y 7). Las medicio-
nes físicas-químicas del agua deben ser
preferiblemente obtenidas bajo la zona litoral y
limnetica de cada tapón.
Manual de Métodos en Limnología
BIOMASA
Existen muchos métodos para expresar la biomasa,
entre los cuales están el peso húmedo, peso seco y
peso seco libre de cenizas. El peso húmedo no re-
quiere tratamiento especial.
Eí peso seco se obtiene secando en horno de 80 a
1 05°C hasta la obtención de una masa constante.
Sí se pone la muestra seca en una mufla a 500°C,
se obtiene e! peso de las cenizas, y la diferencia
entre los dos valores obtenidos constituye el peso
seco libre de cenizas. En este método se libera CO2
del MgCO3 y del CaCO3, dejando MgO y CaO,
también puede perderse algo de sodio y de potasio,
reduciendo la precisión del análisis (Colé, 1 988).
La simple conversión de peso seco a húmedo está
sometida a grandes errores debidos a las diferen-
cias del promedio del contenido de agua de varios
grupos de fauna (Junk, 1 973). Mientras que la di-
ferencia entre el peso seco y el de las cenizas ("pér-
dida por ignición") constituye una aproximación al
contenido orgánico, llamado peso seco libre de
cenizas, que es el que queda disponible para otros
niveles en la cadena trófica (Klemm., etal, 1 990).
MÉTODOS DE CAMPO
Una vez caracterizado los tapones, las muestras se
obtienen a lo largo de transectos que abarquen
diferentes sectores dentro de éste. Es recomenda-
ble, en el caso de los tapones de macrófitos
enraizados con tallos y hojas flotantes, realizar la
colecta entre la zona litoral (parre interna) y
limnética (parte externa) de cada tapón de
macrófitos. En el caso de praderas flotantes las
muestras aecen, en lo posiDie y aepenaíenao ae
sus dimensiones, obtenerse del centro a los límites
de! tapón.
La obtención de muestras siguiendo este procedi-
miento se hace con el fin de abarcar una probable
heterogeneidad en la distribución de la comuni-
dad de invertebrados asociados, en razón a
gradientes espaciales en la comunidad de
macrófitos.
Se utiliza como herramienta de muestreo una red
cuadrangular de 20 cm. de lado, con una malla
de 250 /Jm, unida a un mango rígido de aproxi-
madamente un metro de largo. La red se sumerge
y desplaza lentamente un metro aproximadamen-
te desde fuera hacia dentro del punto en el que se
obtendrá la muestra; una vez allí se sube rápida-
mente evitando la huida de muchos organismos
(Figura 6.1).
Cuando la boca de la red sale a la superficie, con-
teniendo el material depositado en la parte sumer-
gida de la planta, se cortan y retiran, en el caso de
las macrófitos enraizados, todas las partes emer-
gentes de la planta, que sobresalen por los lados y
por encima del marco de la red. Inmediatamente,
el material obtenido, estando aún dentro de la red,
se lava, sumergiendo y moviendo la red dentro del
agua, desprendiendo los sedimentos finos que se
encuentran adheridos.
En el caso de los macrófitos errantes, estos que-
dan dentro de la red, de modo que tanto el
macrófito como el material asociado se pasa a una
bandeja blanca, donde se examina y se colecta
con pincel el material adherido a cada parte de la
planta. En iodos los casos, tallos y hojas emergen-
tes se desechan posteriormente.
El material colectado en la red, se pasa a un reci-
piente plástico, de boca ancha, volteando la red
dentro del mismo. El material que queda adherido
a la red se toma con pincel y se introduce también
en el frasco. La muestra así obtenida se preserva
con alcohol al 96 %, o en su defecto con formo! al
5%, en una cantidad proporcional a su tamaño.
Métodos de preservación especiales para los dife-
rentes grupos de la comunidad pueden ser consul-
tados en Klemm. ef. al. (1 990).
ñ'naYmenfe, (os recipientes se marcan con un códV-
go correspondiente a la secuencia que se lleva en
la libreta de campo en la que se consignan datos
como: localización, fecha, hora, punto de
muestreo, tipo de macrófito acuático y demás da-
tos de la caracterización del tapón.
MÉTODOS DE LABORATORIO
Cada muestra se coloca sobre un colador de boca
ancha con malla de 250 pm. Se lava con agua
 6. Métodos para el estudio de la comunidad de macroinveríebrados asociados a macrófitos
corriente, con el fin de retirar los sedimentos finos
que aún quedan en la muestra. El frasco se juaga
para retirar el material que permanece pegado en
sus paredes, el cual se introduce también al cola-
dor con ayuda de un pincel. Una vez la muestra
está limpia se introduce nuevamente en el frasco y
se agrega alcohol al 70%.
Las muestras pueden ser cuarteadas en submuestras
con el fin de utilizar estas para diferentes propósi-
tos como: mediciones de Biomasa, definición de
la estructura trófica, riqueza, diversidad, etc. Mé-
todos de cuarteo pueden ser consultados en Wefzel
&Likens(2000).
Finalmente se hace la separación de los organis-
mos del material vegetal colectado, agrupando los
organismos por niveles taxonómicos superiores (fa-
milias y órdenes}, para luego identificar hasta el
mínimo nivel taxonómico posible o el requerido de
acuerdo a los propósitos de la investigación. Para
la identificación taxonómica y verificación de la
distribución neotropical, pueden usarse entre otras
las claves de Me. Cafferty ( 1 9 8 1 ) , Merrit &
Cummins (1988), Brinkhurst & Márchese (1989),
Hulbert eí al (1992), Gaviria (1993), Lopretto &
Tell (1995)
ESTIMACIÓN DE BIOMASA
Para la medición de biomasa inicialmente los or-
ganismos destinados a este análisis se deben reti-
rar del alcohol con pinzas y pasarlos por papel
secante, una vez se ha retirado todo el alcohol de
estos organismos se pesan para obtener así su peso
fresco.
Posteriormente, se obtiene el peso seco calentan-
do los organismos a 1 05°C, durante 4 horas y se
establece la diferencia en peso de la muestra seca
con respecto al peso fresco. Esta medida, sin em-
bargo, debe ajustarse ya que en promedio los in-
vertebrados preservados en alcohol pierden el 25%
de su biomasa expresada como peso seco (Wetzet
&Likens, 2000).
Posteriormente la misma muestra con la que se
obtuvo el peso seco se lleva a 500°C durante 1
hora, y luego se establece la cantidad de materia
orgánica removida calculando la diferencia con el
peso seco, obteniendo así el peso seco libre de
cenizas (Klemm., et al, 1990).
Algunas recomendaciones en
laboratorio para el secado y peso de las
muestras son
• El tiempo que requieren las muestras en el
horno debe ser exacto.
• Las muestras se deben dejar reposar en el hor-
no hasta que la temperatura baje, porque fuera
absorben humedad rápidamente.
• Los recipientes en los cuales se secan y pesan
los organismos, se deben manipular con pin-
zas para que no absorban humedad.
Ampliaciones respecto al método pueden ser con-
sultadas en Klemm et. al. (1 990), Wetzel & Likens,
(2000).
MANEJO E INTERPRETACIÓN DE DATOS
Los resultados de abundancia y biomasa de esta
comunidad se expresan por unidades de área
(Benke, 1 993}. Sin embargo, es importante consi-
derar que la presentación de estos resultados por
unidad de área no resulta satisfactoria en el caso
de los macroinvertebrados asociados a macrófiíos,
debido a que una expresión en unidades de super-
ficie reduce, de manera considerable, las eviden-
tes diferencias en la disponibilidad tridimensional
de habitat que brinda el Material Vegetal Sumergi-
do (MVS) de diferentes tapones de macrófitos acuá-
ticos, e incluso en diferentes áreas del mismo tapón.
En otras palabras, las muestras obtenidas a partir
de redes que limite la misma unidad de superficie
(m2), pueden abarcar diferentes niveles de desa-
rrollo de las partes sumergidas de las planta y dis-
fintas cantidades o estados de descomposición de
los fragmentos de material vegetal asociado, ob-
teniendo, por lo tanto, muestras con porciones di-
ferentes de MVS usados por los organismos
asociados.
Se propone como estrategia alternativa de presen-
tación de los resultados la expresión de densidad
y/o biomasa de cada grupo taxonómico por Kilo-
gramo de peso fresco del Material Vegetal Sumer-
gido (# ind./Kg MVS y/o gC/Kg MVS,
43
Manual de Métodos en Limnología

respectivamente), obtenido en la unidad de aplicación de índice de disimilaridad como Bray

muestreo. El peso fresco de este material se obtie-
ne in situ usando balanzas de campo convencio-
nales.
De igual forma, dada la mencionada importancia
como mediadores de la red trófica de los ecosiste-
mas acuáticos de esta comunidad, resulta conve-
niente, dependiendo de los objetivos y alcances
de la investigación, la expresión de los resultados
a partir de la asignación al grupo taxonómico del
rol trófico predominante en el grupo.
Esta asignación debe efectuarse solo en los casos
en que se tenga certeza taxonómica en la identifi-
cación de los grupos, lo que en (a mayoría de ca-
sos implica su determinación a nivel de género o
especie, y deben considerarse en todos los casos
los múltiples vacíos de conocimiento sobre la
autoecología de ios invertebrados neotropicales.
Pora la designación de algunos taxa a grupos fun-
cionales de invertebrados dulceacuícolas puede
consultarse Merrit & Cummins (1 988),
Para establecer variaciones a nivel espacial y tem-
poral de los resultados, estos pueden compararse
mediante análisis de clasificación basados en la
Curtís, generando un dendrograma de asociación
jerárquica, mediante el método de agrupación
UPGMA, para roles tróficos, íaxa y estaciones en
cada caso. Igualmente se puede utilizar métodos
de análisis multivariado como los de Correspon-
dencia Canónico (ACC) o sin Tendencia (DCA).
Ventajas y desventajas de estas y otras herramien-
tas de interpretación de resultados, así como sus
fundamentos numéricos, requerimientos y limita-
ciones pueden ser consultados en Beals (1984),
Washington (1984), Ludwing & Reynolds (1988),
NABS(1993).
AGRADECIMIENTOS
A los coordinadores del proyecto "Peces de la re-
gión de Leticia: Ecología Trófica": ía Universi-
dad Nacional de Colombia, Instituto de
Investigaciones Amazónicas Imani (sede Leticia), el
Museo de Historia Natural de Madrid y de la Uni-
versidad de Sevilla (España) y al Programa Ibero-
americano de Ciencia y Tecnología para el
Desarrollo (OTEO), por el financiamiento del pro-
yecto del cual surge las recomendaciones
metodológicas aqui planteadas.

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INTRODUCCIÓN
Los ríos son sistemas dinámicos cuyas comunida-
des responden espacial y temporalmente a la inte-
racción entre los factores externos, determinados
por su cuenca de drenaje; e internos, definidos por
las características del cauce y su valle. Debido a
esto se ha considerado al río como un elemento
enlazador de un gran sistema, "el valle" (Hynes
1975}.
De acuerdo al tamaño y tipo de ambiente lótico en
estudio, los factores externos e internos generan a
nivel espacial y temporal un mosaico no continuo
de condiciones bióticas y abióticas (Resh ef al.
1988, Ward 1989, Junk 1997, 1998), determi-
nando la distribución contagiosa de sus poblacio-
nes, en especial las relacionadas con el fondo
(Rossember & Resh 1 983, Wetzel & Likens 2000,
Alian 1995}.
Esta es la razón básica por la cual la valoración de
los factores externos e internos (dimensión física),
es primordial a la hora de definir el diseño y selec-
ción de las estaciones y puntos de muestreo para
el estudio de comunidades fluviales.
Sin embargo, son múltiples las dificultades que se
enfrentan al abordar el estudio de las condiciones
físicas de un río, en particular por la escasa tradi-
ción en la inclusión de este aspecto en los estudios
de ríos Colombianos (y en la mayoría de países
del norte de Suramérica (Cushing et al 1 995) y las
limitaciones logísticas comunes en nuestro medio.
'M, Se. filología. Laboratorio de Zoología y Ecología Animal. Universidad de los Andes grueda&uniandes.edu.co
- ••
Gu/'//ermo Rueda-Delgado
Foreste motivo, en este capítulo se detallan algu-
nos aspectos físicos a ser considerados en el estu-
dio de comunidades bénticas que resultan útiles
para obtener más y mejores herramientas de aná-
lisis, bien sea en investigaciones básicas, de
bioindicación o en estudios ambientales.
CONSIDERACIONES PRELIMINARES
Cualquier aproximación a ía interpretación de la
dinámica de un río requiere estudios extensos en
el tiempo y espacio. Sin embargo, la extensión en
el tiempo y espacio de estas investigaciones de-
pende como siempre de los objetivos, alcances y
presupuesto disponible. En cualquier caso, para
desarrollar estudios puntuales o a gran escala, el
procedimiento básico para definir, diseñar y ejecu-
tar el muestreo de un ambiente lótico puede ser el
siguiente:
FASE EXPLORATORIA
Se inicia con la búsqueda de información secun-
daría básica (ampliable durante la fase de
profundización), en especial cartografía general
actualizada de la zona, estableciendo rutas de ac-
ceso, poblados y zonas de interés, entre otras. Con
esta base se desarrolla una "salida de reconoci-
miento" al sector de estudio.
Es recomendable que dicha salida se desarrolle,
especialmente si se estudiará la cuenca media y
baja del río, durante la transición entre el periodo
de aguas bajas al periodo de aguas altas, con el
47
Manual de Métodos en Limnología
fin de garantizar el acceso a las estaciones de
muestreo y la representatividad de los ambientes
seleccionados de ¡as condiciones globales del sis-
tema.
Para establecer este momento se consulta la infor-
mación sobre el comportamiento de lluvias en las
diferentes regiones y niveles de los principales ríos
del país en diferentes sectores de su cuenca. Esta
información es publicada y actualizada diariamente
para varias estaciones en las principales cuencas
del país por el IDEAM y puede ser consultada a
través de su página en internet www.ideam.gov.co.
FASE DE PROFUNDIZACIÓN
Dependiendo de los objetivos, profundidad y tiem-
po durante el cual se desarrollaran los estudios,
son aconsejables los siguientes procedimientos,
tendientes a obtener muestras representativas del
sector de estudio.
Documentación
Se requiere el análisis detallado de toda la infor-
mación secundaria disponible y particularmente la
de carácter cartográfico, aéreo fotográfico y satelital
del sector de estudio; al igual que los registros cli-
matológicos e hidrológicos existentes. Se parte de
la descripción global de la cuenca a nivel
morfológico, geológico y de cobertura vegetal en-
tre otros, reduciendo la escala hasta lograr, de ser
posible, una interpretación cartográfica detallada
de los sectores en los que se desarrollara el
muestreo, incluyendo, si es el caso, la planicie de
inundación.
La información detallada previamente es verifica-
da, ampliada o modificada con base en la etapa
de definición en campo de las estaciones de
muesíreo.
Diseño de muestreo
En general, existen dos procedimientos de
estudios de un río: En el primero se sigue una masa
de agua a lo largo de su recorrido, determinando
variaciones de sus características en diferentes pun-
to a lo largo de su cauce. Este procedimiento, co-
nocido como de "Lagrange", no es el más común.
48
La mayoría de estudios evalúan variaciones en el
tiempo de las características limnológicas del sis-
tema en sectores fijos llamados, en general, esta-
ciones. Este procedimiento, conocido como de
"Eu/er", es el más frecuentemente utilizado y es al
que nos referiremos.
En caso de que el estudio se relacione con un pro-
yecto de desarrollo, es posible tener como punto
de referencia el esquema de cuestionamieníos bá-
sicos propuesto por la NABS (1993), que facilitan
la toma de decisiones respecto al diseño de
muestreo y ubicación de estaciones (Ver anexo,
Cuadro 5).
Las preguntas pueden ser ajustadas a casos parti-
culares o pueden efectuarse diseños de muéstreos
extensivos tendientes af conocimiento de una cuen-
ca, por ejemplo. Sea cual fuese el caso, el siguien-
te paso es definir las estaciones para los muéstreos.
Selección de estaciones
Dependiendo la amplitud del sector de estudio, es
conveniente diferenciar sectores del valle con base
en su altitud, pendiente, geología, cobertura ve-
getal, estructura del cauce, usos del suelo, dedica-
ción de las aguas y otros aspectos pertinentes. Un
ejemplo de este tipo de sectorización es propuesto
por Rueda-Delgado & Duque (1998).
Para cada sector se identifican los ambientes flu-
viales que puedan generar diferencias en la com-
posición taxonómica y/o en la abundancia de los
taxa de la comunidad béntica y de la mayoría de
comunidad fluviales. Algunos de los aspectos a
tener en cuenta en la identificación de estos am-
bientes fluviales son:
Formas del /echo : El lecho de un río es el reflejo
de la interacción de las cuatro dimensiones de los
ambientes lóticos (lateral, longitudinal, vertical y
temporal) (Ward, 1989). Dicha interacción deter-
mina la distribución en parches de las comunida-
des lóticas, en especial las bénticas, siguiendo el
mosaico de condiciones ambientales favorables
para cada población.
Estas formas del lecho corresponden en sentido
longitudinal a UMBRALES (elevaciones del lecho
en las que generan los conocidos rápidos o rau-

dales), HOYAS (zonas más profundas y de movi-
mientos erráticos del agua en los que tienden a
formarse remolinos) y TRAMOS DE PROFUNDI-
DAD MEDIA. Estos últimos sectores se presentan
en los tramos rectos del río, no son ni tan elevados
como los umbrales ni tan profundos como las ho-
yas, y por lo tanto el flujo del agua se aprecia mas
regular, siendo lugares ideales para efectuar me-
diciones de caudal y de características
fisicoquímicas del agua (Figura 7.1).
En sentido transversal, las formas del lecho de un
río corresponde a las variaciones entre la ribera
¡zquierda-centro-ribera derecha (de acuerdo al
sentido de la corriente). Sin embargo, dependien-
do del tipo de río (Ver anexo, cuadro 6) y de las
características del valle, esta dimensión puede in-
cluir en sectores trenzados del río un cauce princi-
pal, cauces secundarios y cauces transversales,
cada uno de ellos con sus propios ambientes flu-
viales (Rueda-Delgado, 1998).
'*•
Igualmente, en la llanura de inundación de un río
es posible distinguir en sentido transversal, a de-
más de cauces primarios y secundarios, lagos de
inundación y otros ambientes fl u vio lacustres con
diferentes grados de relación con el ambiente lótico.
Estos ambientes pueden ser lagos de conexión di-
recta, indirecta, canales, entre otros (Drago, 1 989).
Estos ambientes se conocen regionalmente como
chuquias, morichales, ciénagas, madreviejas y ca-
ños (Rueda-Delgado & Duque, 1 998) y cada uno
de ellos debe ser considerado en la caracteriza-
ción general de este sector del río (Figura 7.2).
Las formas del lecho se determinan mediante me-
diciones con ecosonda en transecta transversales
y longitudinales (Ver anexo, foto 8). En ambientes
poco profundos varas rectas y largas sumergidas
en perfiles transversales pueden brindar informa-
ción aproximada de la forma del lecho de un río.
En los lagos, de no contar con ecosonda, cuerdas
con plomadas pueden servir de indicadores aproxi-
mados de la profundidad.
Los datos de profundidad son convertidos a ma-
pas batiméíricos transversales y longitudinales a
partir de los cuales se seleccionan zonas para el
reconocimiento preliminar de la estructura del le-
cho, composición granométrica y contenido de
7. Métodos paro el estudio de comunidades bénticas fluviales
materia orgánica de los sedimentos si es pertinen-
te.
Condiciones hidráulicas: Diversos estudios mues-
tran que la distribución del beníos obedece a los
distintos microhábitat generados por variaciones
hidráulicas de las corrientes. Estas diferencias hi-
dráulicas ocasionan distribuciones diferenciales de
fitoperifiton, sustratos y materia orgánica (Statzner
& Higler, 1988; Ezcurra de Drago et.al, inédito).
Para su determinación, se efectúan mediciones de-
talladas de velocidad en sentido vertical en las ri-
beras y centro de los umbrales y hoyas
seleccionados para el muestreo. La profundidades
a las cuales se efectúan las mediciones pueden ser
cada 1 O cm a cada metro dependiendo de la pro-
fundidad, siendo importante detallar las diferen-
cias de velocidad cerca del fondo.
La velocidad y otras características medidas pue-
den ser expresadas a través de índices hidráulicos
como el número de Reynols, tensión de corte o
índice de estrés hidráulico (Alian, 1 995).
Factores bióticos: La vegetación riparia, rudera!,
inundable y la comunidad de macrófitas acuáticas
son el factor biótico principal en la formación de
habitat. Esto debido a su aporte de Materia Orgá-
nica y al efecto de sombra que esta tiene sobre el
lecho y en el desarrollo de otras comunidades,
como el perifiton. Por lo tanto, debe evaluarse la
localización y características de la vegetación te-
rrestre, los límites y características de las praderas
acuáticas y de la vegetación terrestre inundable,
en el caso de la planicie de inundación.
Frecuencia de Muestreo
Un estudio que pretenda caracterizar la comuni-
dad béníica de un río debería efectuarse durante
los cuatro momentos característicos del ciclo
hidrológico de un río:
1. Aguas bajas: Período de sequía en el que solo
los cauces más profundos mantienen el flujo
de agua y por ende en las planicies de inun-
dación los ambientes fluviolacustres se desco-
nectan del río.
2. Aguas en ascenso (ascenso del nivel del río).
Inicio del período de lluvias en el que el cau-
49
Manual de Métodos en Limnología
dal se incrementa. En la cuenca baja, el agua
ahora fluye además por los cauces secunda-
rios y menores del río y por los caños hacia las
lagunas (ascenso encauzado). Al final de este
período el río a superado el limite encauzado
y se desborda, iniciando el período de inun-
dación.
3. Aguas altas: Período de altas lluvias durante
el cual se obtienen los máximos caudales. En
los ríos con llanura aluvial es superado el limi-
te más alto del cauce (albardón), generándose
la inundanción de ecosistemas hasta el mo-
mento terrestres y de los ambientes
fluviolacustres cercanos al cauce del río, en
períodos ordinarios de inundación y de lagu-
nas lejanas en crecientes extraordinarias {pe-
ríodos de retorno). En este período la planicie
inundable se aprecia en toda su magnitud.
4. Aguas en descenso: Finales del período de llu-
vias. Este ocurre inicialmente en condiciones
aún de inundación (descenso en desborde) y
finalmente por los caños de conexión desde
las lagunas hacia el río (descenso encauza-
do); llegando nuevamente al mínimo nivel del
río, lo que en algunos casos genera la desco-
nexión con el cauce de los ambientes
fluviolacustres de la planicie de inundación.
Debe tenerse en cuenta que las variaciones de ni-
vel de un gran río no dependen de las lluvias loca-
les sino del comportamiento de las lluvias en toda
la cuenca previa. La intensidad del muestreo, por
su parte, depende, como ya se comentó, de los
objetivos del estudio, la capacidad de trabajo,
posibilidades logísticas y el presupuesto.
Finalmente, es importante considerar que los
muéstreos de la comunidad béntica no pueden
definirse estrictamente como cuantitativos, debido
al tradicional uso de unidades de muestreo que
limitan áreas del lecho o del cauce en las que que-
dan incluidos sustratos tridimensionales, que brin-
dan áreas de colonización efectivas diferentes, a
pesar de estar limitadas por una misma unidad
superficial (Klemm el. al. 1990, Kathman &
Brinkhurst 1 991, Rosemberg & Resh 1 993).
50
MÉTODOS DE CAMPO
La distribución de las poblaciones en los ríos no es
homogénea, por el contrario ésta se acumula en
sectores específicos generando parches en razón
a la expresión diferencial de los factores ambien-
tales propicios para el desarrollo de los diferentes
estadios de los organismos acuáticos (NABS 1 993,
Prat&Ward, 1994).
En este sentido, en cada una de las zonas de
muestreo seleccionadas se tomarán diferentes si-
tios que corresponden a las áreas identificadas
como formadoras de ambientes fluviales (formas
del lecho, variaciones hidráulicas, crecimiento de
vegetación) siendo factor de estratificación del
muestreo (EPA 1997) la profundidad.
Es aconsejable adoptar como criterio general para
la obtención de muestras cuantitativas la reduc-
ción y unificación de áreas de muestreo y el au-
mento en el número de repeticiones. En cada punto
de muestreo debe obtenerse un número igual de
repeticiones, que se analizan de manera indepen-
diente, la definición del número de muestras pue-
de consultarse en Elliot (1 977), Rosember & Resh
(1 993). Un ejemplo de la selección de puntos en
ambientes fluviales típicos se muestra en la (Figura
7.1 y 7.2).
Para cada punto de muestreo se consignarán da-
tos básicos como tipo de sustrato, intensidad de la
corriente, acumulación o no de material alóctono
y color del agua, un ejemplo de formato de cam-
po puede verse en el cuadro 7 (Ver anexo cua-
dros).
REDES
Cada vez es menos frecuente el uso de redes tipo
Surber (Ver anexo, foto 9} para el muestreo cuanti-
tativo en sustratos rocosos o duros de los ríos, da-
dos los diversos inconvenientes inherentes al
muestreo de sustratos tridimensionales limitados por
un área bidimensional y la pérdida y maltrato del
material al lavar los sustratos y acumular la mues-
tra en el fondo de la red (Klemrrt ef oí. 1 990). Sin
embargo, de efectuar un muestreo con redes tipo
Surber resulta adecuado componer la muestra de

diferentes submuestras pequeñas (por ejemplo cua-
tro subcuadrantes de! área delimitada por la Surber
tradicional de 33 cm de lado o construir redes con
marco de 10a 1 5 cm de lado). Estas submuestras
son retiradas del mismo ambiente fluvial, Depen-
diendo de la amplitud de los cauces pueden to-
marse de una a tres áreas compuestas, obteniendo
de cada punto de cada estación varias réplicas
para análisis cuantitativo.
Un método alternativo es el uso de pequeñas re-
des manuales (Merritt & Cummins 1988), con las
que se obtiene muestras provenientes de diferen-
tes unidades formadoras de habitat de cada am-
biente fluvial. Este método corresponde a un
muestreo cualitativo, sin embargo, es posible efec-
tuar comparaciones estandarizando el número de
colectores y el tiempo de colecta (Figura 7.1 B).
DRAGAS
Los muéstreos convencionales en sustratos blan-
dos del lecho de los ríos pueden efectuarse con
dragas tipo van-benn o Jamura, que gracias a su
peso y cierre inmediato podría facilitar la extrac-
ción de material dragable. Para la obtención de
muestras de los sistemas fluviolacustres de la lla-
nura aluvial resultan ideales las dragas pequeñas
(generalmente de 1 5 a 25 cm. de lado) (Ver anexo,
foto 1 0). Otro método que puede resultar conve-
niente es e! uso de corazonadores (Weízel & Likens,
2000) .
-.
TUBOS RUEMMER:
Una alternativa creada por Daniel Emmerich y
Guillermo Rueda-Delgado en el Laboratorio de
Zoología y Ecología Animal de la Universidad de
los Andes, que ha dado buenos resultados para
extraer sedimentos blandos a poca profundidad,
es usar tubos de PVC a manera de corazonadores
(corel).
Para ello se cortan tubos de 1,5 pulgadas de diá-
metro en segmentos de 50 cm de largo. A cada
segmento se unen acoples de rosca hembra y
macho en sus extremos y se les hacen marcas cada
5 cm. Una vez en el sitio de muestreo, se mide la
profundidad y se acoplan tantos segmentos como
sea necesario de tal forma que el acople llegue
7. Métodos para el estudio de comunidades tarificas fluviales
hasta los sedimentos y sobresalga superficialmen-
te unos 20 a 40 cm. Antes de sumergir el acople
se cierra en el extremo final con un tapón de tube-
ría, mientras que en extremo que se enterrará en el
sedimento puede instalarse una bolsa plástica que
envuelva 5 a 1 O cm del tubo (Figura 7.3).
El tubo Ruemmer se sumerge cerrado, dirigiéndo-
lo verticalmente hacia el sedimento. Alcanzado e!
fondo, se entierro 5 a 1 O cm en el sedimento, se
retira el tapón en el extremo opuesto y se coloca
nuevamente. El montaje se saca del agua en for-
ma vertical y el corazón de sedimento traído en el
extremo enterrado en el sedimento se vierte en una
red para ser tamizado en campo.
Tamizado de muestras
Lo ideal es contar con una red con malla de 250
mieras. Una red de este estilo puede fabricarse a
partir de tela de nylon usada para estampados.
Cada muestra de material dragado, obtenida con
la draga, corazonador o tubos Ruemmer por cada
punto, se vierten en esta la malla directamente, o
se pueden acumular temporalmente en un platón
plástico y fácil de manipular, para luego colocarlo
todo en la malla.
Una vez el sedimento se encuentre en la malla,
ésta se sumerge y con movimientos laterales bajo
el agua se lava el material acumulado internamente
hasta que la gran mayoría de sólidos finos, que se
observan en el agua como una nube negra o gris,
salga de la muestra.
La muestra lavada se acumula en la parte inferior
de la red salpicándole con agua. El cono o acumulo
de sedimento de la parte inferior se cierra dando
vueltas a la malla. Se introduce por el lado opues-
to el frasco plástico de boca ancha (de 1 libra)
hasta que la boca quede en contacto con el mate-
rial acumulado, se suelta la malla y se voltea el
contenido en el frasco. Se lava lo mejor posible
sobre el frasco y la muestra se preserva y rotula.
Preservación Rotulado y envío de
muestras:
Idealmente las muestras deben ser preservadas con
alcohol de rentas o al 96%, sin embargo es posi-
ble preservarlas con formol al 1 O %.
Monual de Melados en Limnología
La muestra debe estar rotulada externamente con
código, lugar, fecha y método de colecta. El códi-
go corresponde al mismo de la tabla en la que se
consignan los datos físicos, químicos y biológicos
del lugar de toma de muestra (cuadro 3). Este có-
digo se escribe en papel pergamino a lápiz o
rapidógrafo de tinta indeleble y se coloca dentro
del frasco, finalmente este frasco puede colocarse
en bolsas gruesas de plástico con cierre hermético
para su envío.
Las muestras se transportan en neveras de icopor
en la que se deposita la planilla de registro colo-
cada en sobre de manila protegido con plástico
de la humedad.
ANÁLISIS DE GRANULOMETRIA Y
MATERIA ORGÁNICA EN SEDIMENTOS
Este tipo de análisis son fundamentales en la inter-
pretación de resultados biológicos y posteriormen-
te como indicadores del estado de los ecosistemas.
Para ello se obtienen con draga, tubos o cualquier
equipo muestras de los sedimentos blandos de cada
estación en los que se efectuaron los demás
muéstreos limnológicos, integrando una muestra
de unos 250 a 400 gr. de sedimento. El sedimento
NO SE FILTRA y se coloca en frascos o bolsas con
la menor cantidad de agua posible.
Las muestras deben permanecer refrigeradas has-
ta su análisis en laboratorio, sin embargo si se di-
ficulta este procedimiento resulta viable rociar la
muestra con formo! y así reducir la acción de mi-
croorganismos sobre la materia orgánica allí acu-
mulada. El análisis granulométrico y de contenido
de materia orgánica puede efectuarlo laborato-
rios de suelos siguiendo los procedimientos típicos
para este tipo de análisis. El contenido de materia
orgánica se expresará como gramos de carbono
en 1 00 gramos de sedimento (gC%) por calcina-
ción de la muestra durante 10 minutos a 500°C.
MÉTODOS EN LABORATORIO:
Una vez en el laboratorio las muestras son nueva-
mente tamizadas (mallas de poro de 230 /Jm) y
tinturadas con solución diluida de rojo de metilo.
52
Un día después los organismos son separados bajo
lupa y colocados en viales de vidrio con alcohol al
70%, para su posterior determinación.
Métodos de separación por flotación usando solu-
ciones saturadas de azúcar, sacarosa o sal (dilui-
das en agua hasta obtener una densidad de 1.12
a 1.1 3 g/ml), mezcladas con la muestra en pro-
porción 5:1 a 10:1, has sido frecuentemente re-
comendados (Wetzel & Likens 2000). Sin embargo,
su uso no resulta del todo práctico en muestras
con alta proporción de material vegetal particulado,
como las obtenidas en pequeños ríos de montaña
o en ambientes fluviolacustres de la llanura de inun-
dación, ya que éste flota con los invertebrados a
separar.
La muestra puede ser separada en su totalidad o
cuarteada con el fin de destinar cada unidad de
muestreo a diferentes análisis. Existen diferentes
métodos de cuarteo, que en general consisten en
la homogenización de la muestra, agregando agua
y agitándola suavemente sobre una bandeja o un
recipiente de gran capacidad para luego dividirla
en cuatro partes iguales de las cuales se escogen
una o dos unidades al azar para cada análisis
(Wetzel & Likens 2000).
Para los estudios taxonómicos, se analiza el total
de la muestra (o la cantidad destinada a tal fin)
bajo estereomicroscopio de tipo convencional y se
identifican los individuos al máximo nivel
taxonómico posible dependiendo de la literatura
disponible para cada grupo. De las morfoespecies
se efectúan descripciones e ilustraciones de los
caracteres diagnósticos.
En el caso específico de las larvas de quironómidos,
las cápsulas cefálicas se aclararán con KOH. En
cuanto a los oligoquetos, la determinación de los
especímenes se adelanta con individuos maduros.
Para la identificación de estructuras reproductivas
se usa lactofenol como adorador (Brinkurst &
Márchese 1989).
Para la identificación taxonómica y verificación de
la distribución neotropical del Macroinvertebrados
bénticos pueden usarse entre otras, las claves
de Merrit & Cummins (1988), Brinkhurst &
Márchese (1 989), Flint, Jr. (1 991), Spangler (1 989,
 7. Métodos para el estudio de comunidades bénttcas fluviales

1991)Dominguez et. al (1992), Gaviria (1993), Análisis de la organización macrotaxonómica

Hulbert (1 992), Muñoz (1 997), Villareal y Gonzá-
lez (1997) Rojas y Zuñiga (1997) en SOCOLEN
(1 997), Fernández & Domínguez (2001).
MANEJO E INTERPRETACIÓN DE DATOS
Las condiciones que son evaluadas de forma des-
criptiva conforman la base de interpretación de los
resultados, utilizando como herramienta la infor-
mación numérica obtenida.
Existen múltiples vías de análisis y e interpretación
de los resultados cuantitativos y cada una ha sido
utilizada de forma diversa por los autores. Sin em-
-_. bargo todos tienen un propósito común: Identifi-
car las asociaciones de especies representativas de
los diferentes sectores del río o de los ambientes
dentro del plano de inundación (Márchese &
Ezcurra de Drago 1 992 ; Cushing, 1 995).
Podemos dividirlos en tres aspectos :
1. Análisis a través del uso de índices de infor-
mación numérica (Washington 1984).
y funcional, con base en la aplicación de índi-
ces de similitud y afinidad de los grupos fun-
cionales y taxonómicos representativos (Klemm
et o!. 1 990, Kathman & Brinkhursf 1991, NABS
1993, Rosemberg & Resh 1993, Rueda-Del-
gado 1998).
Ordenaciones a partir de análisis de correspon-
dencia entre los cuales los más comunes son el
Detrended Correspondence Anal/sis -DCA o
DECORANA-(Análisis de Correspondencia Sin
Tendencia) y el Análisis de Correspondencia
Canónico (Canonical Correspondence Análisis)
(Ludwing & Reynolds 1 988)
AGRADECIMIENTOS
A los investigadores del INALI (Argentina) Inez Es-
curra de Drago, Edmundo Drago y Mercedes
Márchese por ser los motores académicos de lo
escrito en este capítulo. Especial agradecimiento a
mis estudiantes y colegas con los que he discutido
los métodos aquí expresados.

BIBLIOGRAFÍA

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Amores C. Et G.E. Peffs, 1993. Hydrosysfemes Fluviaux. De. Masson. Paris.

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Benke, A. C. 1 993. Concepts And Patterns Of Invertebrates Production In Running Waters. Verh. Internat.
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Brinkhurst, R. O. & M. R. Márchese, 1989. Guía Para La Identificación De Oligiquetos Acuáticos Conti-
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Cushing, C.E.; K. W. Cummins & G.W, Minshall, 1995. RiverAndStream Ecosysíem. ed. David Goodwall-
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Elliot, J.M, 1 977 Sorne Meíhods ForThe Statistical Análisis Of Samples Of Benthics Invertebrates. Scientific
Publication.

53
 .•„"' fi:>'¡-
INTRODUCCIÓN
Los peces se capturan para muchos propósitos:
levantamientos de inventarios de especies, estudios
taxonómicos, evaluaciones poblacionales y de re-
cursos pesqueros. Desafortunadamente no existe
un método de captura con propiedades mágicas
que sirva para ser aplicado en cualquier investiga-
ción y bajo cualquier condición de campo. Foresta
razón, para el estudio de los peces continentales
se emplean una gran variedad de métodos de cap-
tura y su utilización depende en últimas de los ob-
jetivos particulares de cada investigador.
Cuando se hace referencia a las metodologías para
el estudio de los peces de agua dulce, los temas
pueden ser tan extensos y vanados en cuanto a las
técnicas de captura y de laboratorio que escapan
a la intención de este capítulo. El propósito de este
escrito, es reunir y presentar de manera rápida los
técnicas más usuales para campo y laboratorio,
desde el punto de vista de la experiencia de la
Unidad de ictiología del Instituto de Ciencias Na-
turales de la Universidad Nacional de Colombia, y
no pretende por tanto ser un compendio exhausti-
vo del tema. Busca más bien servir como una pri-
mera aproximación a investigadores que se inician
en el tema, mediante la exposición rápida de los
métodos y referencias bibliográficas donde pue-
den consultarse en detalle.
CONSIDERACIONES PRELIMINARES
Todos los métodos de pesca presentan ventajas y
desventajas inherentes a ellos, tanto en términos
' Biólogo. Instituto de Ciencias Naturales, Universidad Nacional de Colombia. imo(ico@cfencfgs.unal.edu.co
Biólogo. Departamento de Biología. Universidad Nacional de Colombia, ggalvis&ciendas.unal.edu.co
José ¡van Mojica , Germán Go/w's
de facilidad de uso, come de efectividad y de se-
lectividad en las capturas. Siempre que se utiliza
un método de pesca ocurre un sesgo tanto en cuan-
to a las especies que se colectan, como a las tallas
de los peces y por tanto es posible que solo se
capture una fracción de la población entera. Por
esta razón, es muy importante que antes de iniciar
los muéstreos, se seleccionen los métodos de cap-
tura que más se ajusten a los alcances de la inves-
tigación. En el caso de los estudios de inventarios
ictiológicos en que se requiere la colecta del ma-
yor número de especies posibles, es conveniente
combinar diferentes arfes de pesca a fin de mini-
mizar los sesgos de muestreo propios de cada arte.
En casos en que el estudio se enfoque hacia una
especie en particular, es valido utilizar artes muy
selectivas, como por ejemplo los anzuelos o tram-
pas.
Ambientes: Los diferentes ambientes acuáticos
pueden restringir el uso de uno u otro arte de pes-
ca. Por ejemplo las atarrayas resultan inapropiadas
para ambientes de palizadas o de aguas profun-
das.
Horas de pesca: Todas las especies de peces pre-
sentan ritmos diarios de actividad en los cuales al-
ternan los períodos de alimentación y
desplazamiento con momentos de inactividad. En
términos generales y de acuerdo con los momen-
tos de actividad las especies pueden catalogarse
como de hábitos diurnos o nocturnos. En muchos
casos las especies se mantienen durante las horas
de inactividad refugiadas en cuevas o palizadas
de difícil acceso. Los peces son más susceptibles
de capturar durante los períodos de actividad, En
59
Manual de Métodos en Limnología
consecuencia es muy importante tener presente este
fenómeno al momento de efectuar las labores de
pesca, puesto que dependiendo de si se hacen en
horas del día o de la noche, se tenderá a sobrees-
timar uno u otro tipo de especies. Por esta razón,
durante los muéstreos que se realizan con fines de
inventarios es recomendable pescar a diferentes
horas del día y de la noche, especialmente duran-
te los momentos de transición como el amanecer y
el atardecer, períodos del día en que se traslapa la
actividad de los diurnos y los nocturnos.
Muchas artes de pesca, especialmente las redes
son más eficientes en la noche, pues cuando el
agua tiene alguna transparencia, resultan dema-
siado visibles para los peces en horas de luz. En
general, en las noches despejadas y de luna llena,
cuando los peces nocturnos disminuyen su activi-
dad, es difícil capturarlos con la mayor parte de
las artes.
No todas las artes de pesca pueden utilizarse en
cualquier tipo de ambiente. Así por ejemplo, resul-
ta prácticamente imposible el uso de chinchorros,
redes agalleras en aguas torrentosas. O de
atarrayas en palizadas o ambientes llenos de obs-
táculos. En el caso de las redes agalleras, son más
efectivas en horas de luz, las de filamentos trans-
parentes que las de color, a menos que el agua
sea excesivamente turbia.
Concepto de muestra: Hay dos maneras de rea-
lizar colecciones para Inventariar las especies de
peces de un lugar: Una, colectar todos los peces
con diferentes artes de pesca y luego reunir todas
las capturas en una sola muestra. En este caso,
luego de efectuar la determinación taxonómica de
los individuos capturados se tendrá una lista de las
especies del lugar y unos valores únicos de sus
abundancias respectivas.
Otra, empleando el concepto de réplicas, en don-
de se tornan varias muestras que se trabajan por
separado. Con esto se logra avanzar más allá del
simple listado de las especies y se pueden aplicar
técnicas estadísticas y calcular estimaciones de atri-
butos con valores de dispersión de índices tales
como la riqueza de especies, índices de diversidad
(Colwell y Coddingfon 1994). Los programas de
60
computación para la estimación de la riqueza de
especies pueden ser obtenidos libremente en
Colwell (1997).
Muestra es una serie de individuos capturados en
un mismo sitio en un mismo intervalo de tiempo en
una fecha determinada. Cada investigador debe
definir lo que va a considerar como muestra. Pue-
de ser por ejemplo, los peces capturados con un
determinado arte de pesca durante un lapso de
tiempo, o bien la suma de todos los individuos cap-
turados con diferentes artes. Para que sean com-
parables entre sí es importante que todas las
muestras sean tomadas con las mismas artes y con
igual intensidad de pesca.
Con el fin de estandarizar los esfuerzos de pesca
para la obtención de las muestras, existen nume-
rosos procedimientos, básicamente derivados de
evaluaciones de las grandes pesquerías marinas,
que cuentan con un conocimiento de muchos años
tanto de la biología de las especies como de sus
desplazamientos y utilizan procedimientos mate-
máticos que se ajustan a fas artes que ellos em-
plean. Tratar de acomodar estos modelos
matemáticos a cualquier condición y tipo de arte
en aguas continentales, requiere de una buena
dosis de sentido común.
En muchos casos, especialmente si el investigador
no posee experiencia de campo, es conveniente
tener en cuenta los conceptos de los pescadores
locales para determinar las zonas de pesca, pues
la distribución de peces nunca es uniforme y ellos
normalmente conocen los sitios preferidos por las
especies.
MÉTODOS DE CAMPO
Observaciones bajo el agua
No siempre se requiere capturar los peces para su
estudio. Cuando las condiciones de transparencia
y visibilidad de las aguas lo permiten, pueden usarse
técnicas de observación directa bajo el agua, de
mucha aplicación en investigaciones referentes con
el comportamiento y la distribución de los peces.
Estas técnicas requieren experiencia para el reco-
nocimiento visual de las especies, pero tienen como

ventaja el no causar alteración a las comunidades
respectivas. Los muéstreos de peces continentales
basados en la observación son derivados de los
desarrollados para ambientes marinos, principal-
mente en arrecifes de coral. En general se basan
en inmersiones en las que realizan recorridos en
transectos (previamente establecidos o al azar),
contando el número de peces a medida que se
avanza en el recorrido y anotando la información
en tabletas para escritura bajo el agua (Cailliet, ef.
al., 1 986). Es usual combinar las técnicas de ob-
servación con fa toma de muestras para corrobo-
rar el reconocimiento de las especies. Una
descripción detallada de las metodología y aplica-
ciones se encuentra en: Dollof, et. al. (1996),
Heggenes, ef. a/. (1 990), Helfman (1 983), Casaíti
y Castro (1988), Lasso, eí.al. (en prensa),
Nakamuraef. al. (2000).
Las artes de pesca
Redes: Son las artes de pesca de mayor uso tanto
para capturas comerciales como investigativas. A
esta categoría pertenecen los chinchorros,
trasmallos o redes agalleras, atarrayas, copones,
¡amas, barredoras, entre otras. Dependiendo de
su forma de uso, se clasifican en pasivas o activas.
En el primer caso las redes se dejan extendidas en
el agua y se revisan periódicamente para colectar
los ejemplares capturados. En el segundo, requie-
ren ser manipuladas permanentemente, como las
atarrayas, chinchorros y los arrastres. Todas las re-
des seleccionan las especies por tallas en función
del tamaño de ojo de la red. Cuando se espera
obtener muéstreos representativos de toda la po-
blación, es conveniente combinar redes con distin-
tos tamaños de ojo de malla.
Trampas: A esta categoría pertenecen los diferen-
tes tipos las nasas, que son elaboradas de una
infinidad de materiales y formas, principalmente
de madera, bejucos, tejidos y mallas metálicas. En
términos generales se trata de implementos que
permiten la entrada de íos peces atraídos por al-
gún tipo de sebo, pero que impiden su salida. El
tamaño de la apertura y el tipo de carnada deter-
minan las especies y el tamaño de ejemplares cap-
turados. Estas trampas se sumergen y deben ser
revisadas periódicamente. Los lugares donde se
8. Méfodos paro el estudio c/e los peces continentales
coloque debe ajustarse a los ambientes y a las es-
pecies que se desea capturar.
Anzuelos: Este es el método menos usado en es-
tudios de inventarios taxonómicos, debido a su alta
selectividad y baja eficiencia. El tamaño del an-
zuelo, la carnada, el sitio y la profundidad deter-
minan las presas a capturar. A fin de mejorar su
eficiencia es usual colocar líneas con muchos an-
zuelos a la vez y se conocen comúnmente como
palangres o espineles, dependiendo de la región
del país. Los anzuelos al igual que ¡as nasas son
inadecuados para captura de especies herbívoras
o detritívoras.
Arpones y flechas: Su uso es restringido a ciertas
zonas del país, pues su uso requiere de mucha
habilidad y conocimiento de los hábitos de los pe-
ces. Aunque estas artes son muy poco utilizadas
en estudios ictiológicos, Rodríguez (1 999) presen-
ta un buen ejemplo de su uso.
Sustancias químicas: Muchos productos quími-
cos particularmente la rotenona, poseen propie-
dades tóxicas para los peces y actúan como
venenos o anestésicos. El empleo de este tipo de
sustancias es un método muy efectivo para los
muéstreos de peces, especialmente en cursos de
agua pequeños como caños o en pocetas aisla-
das. Las especies crípticas que no son de fácil cap-
tura por otros métodos, son particularmente
susceptibles de colectar, aunque existen algunas
especies que relativamente resistentes a este tipo
de sustancia, por tener mecanismos de respiración
aérea u otras causas.
A esta categoría de ictiocidas pertenecen los
barbascos extraídos de plantas. Los más comunes
se extraen de raíces de plantas del género Derris,
que íradicionalmente han sido de amplia utiliza-
ción por los indígenas suramericanos. Su principio
activo es fa rotenona que actúa como un
vasoconstrictor que inhibe la absorción del oxíge-
no en la branquias y los peces mueren por asfixia
rápidamente. Algunos de estos barbascos de plan-
tas actúan de forma diferente, como es el caso de
la savia del fique, cuyo efecto es simplemente cáus-
tico.
61
Manual de Méiodos en Limnología
Debido a la efectividad de estas sustancias para
los muéstreos de peces, su uso esta restringido por
las autoridades ambientales y su utilización debe
realizarse muy cuidadosamente y solo cuando
sea absolutamente necesario, pues puede cau-
sar mortalidades masivas o el envenenamiento to-
tal de un curso de agua. Aún en la mayoría las
culturas indígenas del país, el empleo de los
barbascos no es indiscriminado y está restringido
a prácticas chamanísticas.
Referencias de estas sustancias y de su empleo
pueden encontrarse en: Bell, (1967), Blasiola
(1 977), Gibson (1 967), Meyer ef al. (1 976). Arias
ef a'. (1 980) realizan una recopilación donde ana-
lizan las diferentes plantas usadas en Colombia
como barbascos.
Electricidad: La pesca con electricidad es un mé-
todo muy utilizado para las estimaciones de la com-
posición de especies y su abundancia, en
comunidades de peces, especialmente en quebra-
rlos o caños(Cailliet, ef. al., 1986), pero curiosa-
mente muy poco difundido en Colombia. Se basa
en hacer fluir una corriente eléctrica entre dos elec-
trodos que se colocan en el agua. Puede utilizarse
una fuente portátil de corriente alterna o continua.
En el primer caso, los peces sufren un choque eléc-
trico que los paraliza momentáneamente (rara vez
los mata). En el segundo, hace que los peces se
dirijan hacia el electrodo positivo.
La ventaja de este método radica en que los peces
rara vez sufren lesiones durante su captura, por
tanto no se requiere sacrificar los animales. Permi-
te por tanto capturarlos, medirlos, pesarlos e in-
cluso marcarlos para estudios de captura -
recaptura.
La principal desventaja radica en que solo es efi-
ciente en aguas de conductividad eléctrica media
(60 a 500 jUS/cm), y es usual obtener valores más
bajos de este rango en aguas claras y negras (se-
gún la categorías de Sioli, 1 975 ) en extensas zo-
nas del país, como la Amazonia y Orinoquia.
Lobón-Cervia (1991) presenta los planos para la
construcción de los equipos, así como una intere-
sante discusión sobre los métodos y técnicas utili-
zados en estudios de ecología de peces.
62
Fijación de los peces:
Los ejemplares colectados siempre deben ser ma-
nipulados con cuidado para evitar su deterioro.
Los peces deben conservarse completos y sin muti-
laciones. Evite romper las espinas de las aletas en
caso de que las haya, así como también trate de
que los peces con escamas no las pierdan por la
manipulación excesiva. Recuérdese que en los
bagres, la morfología de las 'espinas' de las ale-
tas es casi siempre un carácter taxonómico impor-
tante y en los peces con escamas los conteos de
éstas se requieren para diferenciar las especies.
Igualmente, evítese romper las aletas pues sus di-
mensiones son un carácter determinante.
Los peces una vez capturados deben fijarse lo más
pronto posible para detener la actividad de las
enzimas digestivas y poder así ser utilizados para
futuros estudios de los contenidos estomacales. Para
esto es recomendable introducir los peces vivos en
una solución de formo! al 1 0%. Si se usa una con-
centración mayor, los tejidos se enduren demasia-
do y luego se dificulta el trabajo en laboratorio. Si
se baja la concentración existe el riesgo de que e!
material quede con una fijación deficiente y se
descomponga. Cuando los peces se fijan vivos,
ingieren esta solución, lo que ayuda a la fijación
rápida de las visceras. En peces pequeños, inferio-
res a los 1 O cm de longitud, la cantidad de formo!
que tragan es generalmente suficiente para obte-
ner un buen fijado, salvo es especies muy rollizas.
Estos y los peces superiores a este tamaño deben
ser inyectados directamente en la cavidad abdo-
minal y en la musculatura de sus costados con una
solución de formol puro (37%) una vez muertos.
Cuando se realizan inventarios taxonómicos es
importante fijar en campo todo el material colec-
tado. Al descartar ejemplares colectados se puede
estar dejando especies por fuera del inventario,
pues muchas de ellas sólo se logran diferenciar de
otras luego de realizar un trabajo taxonómico mi-
nucioso en laboratorio.
Es importante que el material sea fijado en un reci-
piente apropiado al tamaño de los peces para evi-
tar que queden torcidos. Para lograr una buena
fijación de los tejidos, los peces deben permane-

cer sumergidos en formol al 1 0% por lo menos
durante cuatro días antes de pasarlas a alcohol.
Procure rotular las muestras adecuadamente. Para
esto, utilice papel pergamino grueso y tinta china
o marcador indeleble para escribir en ellas. Es fre-
cuente que las etiquetas de papel se deslían con el
tiempo y se pierda la información inscrita en ellas.
Por esto es recomendable no escatimar esfuerzos y
colocar por lo menos dos etiquetas por muestra.
Las etiquetas deben como mínimo contener la si-
guiente información: Localidad, sitio de captura,
fecha, hora de pesca, tipo de ambiente, arte de
pesca y colectores.
Los peces fijados en formol no pueden ser utiliza-
dos paro análisis moleculares, debido a que esta
sustancia actúa denaturando las proteínas. Para
este tipo de análisis es preciso preservar los peces
o sus muestras de tejido en soluciones salinas apro-
piadas para este fin, alcohol etílico absoluto o
deshidratadas.
Registro fotográfico: Los colores de los peces tien-
den a desaparecer rápidamente una vez se fijan y
con el paso del tiempo sólo se conservan los colo-
res oscuros como las tonalidades negras o cafés.
La gama de los amarillos, verdes, azules o rojos
desaparecen. Por esto es importante tomar el re-
gistro fotográfico de los especímenes vivos o re-
cién fijados, y se recomienda que sea con películas
a color. En caso de usar películas a blanco y negro
perderá iodo su esfuerzo.
Transporte al laboratorio:
Los peces se sacan de la solución de formol y se
dejan escurrir. Posteriormente se recomienda
empacarlos envueltos en toallas de papel hume-
decidas con un chorríto de formol puro y en doble
bolsa plástica, bien cerradas. De esta manera, se
minimiza el peso de las muestras y se evita el ries-
go muy frecuente de que se perforen las bolsas y
se riegue el formol. Procure no transportar los pe-
ces en bolsas o en los tradicionales tarros de
Chocolisto o Avena Quaker llenos de formol: re-
cuerde que estos últimos no fueron diseñados para
contener líquidos. Para transportar las muestras de
peces al laboratorio se usa recipiente plástico de
sello hermético, las canecas vacías de pintura son
muy apropiadas para esto.
8. Métodos poro el estudio de los peces continentales
MÉTODOS DE LABORATORIO
Conservación del material
El formol es una sustancia apropiada para fijar el
material, pero no sirve para conservarlo a largo
plazo. Con el tiempo, el formol cristaliza los teji-
dos y los ejemplares se deterioran. Por esta razón,
para la conservación a largo plazo de los peces se
requiere lavar el formol de los tejidos. Posterior-
mente se pasan a una solución de alcohol etílico
al 70%, en la que pueden conservarse en buen
estado por muchos años.
La extracción del formol de los tejidos de los peces
se realiza mediante una serie de lavados con agüe
corriente. Durante unos cuatro o cinco días, las
muestras de peces se depositan en recipientes des-
tapados y con abundante agua. Se cambia el agua
dos veces por día, hasta cuando no sea evidente
el olor del formol. En este punto, el material es
depositado en frascos de vidrio con alcohol 70%,
No se debe sobrepasar esta concentración de al-
cohol pues los tejidos de los peces se deshidratarán.
Estudio de aspectos tróficos
El conocimiento de los hábitos alimenticios permi-
te entender un aspecto fundamental de la biología
de las especies: los requerimientos nutn'cionales,
así como las ¡nterrelaciones entre los peces y los
estados tróficos de los ambientes acuáticos. Así, el
estudio de la dieta basado en el anáfisis de los
contenidos estomacales es ahora una práctica usual
en los trabajos de ecología de peces, (Hyslop
1 990). Para esto se han desarrollado una serie de
técnicas, que van desde las más simples como la
observación directa de los contenidos estomaca-
les y su cuantificación, hasta las muy sofisticadas
como la calorimetría, estudio de proteínas, uso de
isótopos marcadores.
Para la estimación o cuantificación de los conteni-
dos estomacales, existen métodos de ocurrencia,
numéricos, volumétricos, gravirnétricos, o de esti-
mación subjetiva, que permiten tener una visión
de los aspectos tróficos de las especies. La utiliza-
ción de cada uno de estos métodos depende en
últimas de los objetivos del estudio, del tiempo y
paciencia disponibles.
63
Manual de Métodos en Limnología
Para una explicación de los métodos más frecuen-
tes y de su aplicación consúltese a Knoppel (1 970),
Windell (1971), Hyslop (1980), Pre¡ y Colomine
(1981), Gaivis ef. ai (1989), Matrero (1994) y
Arnundsen ef. al. (1990).
Estudio de aspectos reproductivos
Cuando se estudian los aspectos reproductivos de
los peces se hace referencia a una serie de facto-
res importantes en la biología de las especies tales
como, proporción de sexos, fecundidad, tallas de
la primera madurez sexual, estrategias
reproductivas, épocas de maduración sexual, en-
tre otros. El conocimiento de estos aspectos es su-
mamente importante en estudios de dinámica de
poblaciones, productividad pesquera o estimacio-
nes poblacionales.
I os tros aspectos básicos de establecer son la de-
lerminación del sexo, la fecundidad y los estadios
de madurez sexual.
Determinación de sexos: Es relativamente fácil
dn csiabiecer en fresco en los individuos maduros.
Los ovarios maduros ocupan gran parte de la ca-
vidad abdominal y se distinguen por su coloración
amarilla, rosada o naranja y los óvulos casi siem-
pre se distinguen a simple vista. Los testículos ma-
duros usualmente presentan forma tubular y son
de un color blanco o crema. En individuos jóvenes
o de estadios inmaduros cuando las ganadas son
muy reducidas, la determinación del sexo debe
hacerse con cortes histológicos.
Los adultos de las especies que presentan
dimorfismos sexuales externos son también fácil-
mente reconocibles. Por ejemplo, en ciertas espe-
cies de Loricaridos los machos desarrollan
penachos de espinas en el opérculo o en el rostro.
Igualmente, en algunas especies de Siluriformes
(bagres), los machos modifican u ornamentan el
primer radio de la aleta dorsal. En los
Characiformes son menos frecuentes los
dimorfismos, pero en casos como en los
Bocachicos, las hembras son más grandes y volu-
minosas que los machos.
Fecundidad: Hace referencia al número de hue-
vos que porta una hembra madura y es por tanto
64
. . ,
un indicativo del potencial reproductivo de una
especie o población. Cuando son pocos se deter-
mina contando directamente el número de huevos
de los ovarios de una hembra, de lo contrario se
hacen estimaciones volumétricas, gravimétricas a
partir de submuestras. Es conveniente además
medir el diámetro de los huevos de diferentes par-
tes del ovario. Cuando se obtienen diámetros cre-
cientes desde la periferia hacia el interior o desde
la parte anterior a la posterior del ovario, es indi-
cio de que la especie presenta desoves parciales o
espaciados en el tiempo. Igualmente, cuando los
huevos son grandes y de número reducido, se pue-
de presuponer algún tipo de cuidado parentai.
Cailliet et al (1 986) presentan de manera detalla-
da las metodologías usuales en este tipo de estu-
dios.
Estadios de madurez: Se han propuesto diferentes
escalas macroscópicas para establecer el estado
de maduración sexual de los peces. La de mayor
uso en nuestro país ha sido ía propuesta por
Nikolsky (1903), quien define los siguientes seis
estadios de madurez para machos y hembras:
Estadio I. Individuos jóvenes que aún no han en-
trado a la fase reproductiva
Estadio II. Quiescentes. Los gametos aún no han
comenzado a desarrollarse o ya han sido expulsa-
dos y los ovarios y testículos de encuentran en es-
tado de reposo. Las ganadas son pequeñas y los
óvulos no son visibles a simple vista.
Estadio III. En maduración. Ganadas de tamaño
aumentado, los óvulos son visibles a simple vista.
Testículos de color crema.
Estadio IV. Maduros. Gametos maduros. Las
ganadas adquieren su tamaño máximo, pero los
óvulo o esperma no son expulsan cuando se apli-
ca una presión leve en el abdomen.
Estadio V Reproducción. Los gametos son expul-
sados cuando se aplica una presión suave en el
abdomen.
Estadio VI. Desovados. Los gametos han sido ex-
pulsados. Ganadas flácidas con apariencia de
sacos vacíos. Usualmente con óvulos o esperma
remanente.

Galvis et al. (1 989) han propuesto una escala sim-
plificada con sólo cuatro estadios. En cualquier
caso, los estadios son de fácil estimación en cam-
po en individuos sin fijar, pero en se dificulta en
ejemplares preservados, por esto se recomienda
hacer las observaciones de madurez directamente
en campo en ejemplares frescos.
Transparentación: Las técnicas de transparentó-
ción y coloreado de estructuras óseas es de gran
aplicación en los estudios taxonómicos. Se trata
básicamente de un proceso de aclaración de los
tejidos musculares de un espécimen y una poste-
rior tinción de los huesos y cartílagos con coloran-
tes específicos. Aunque se han desarrollado muchas
técnicas para esto, a continuación se presenta una
particularmente simple y rápida, útil para la obser-
vación de huesos en ejemplares de tamaño pe-
queño o mediano, (Rayero, R. com. pers.):
a. Fije los tejidos del ejemplar en una solución
formo! al 1 0% durante cuatro o cinco días. Si
dispone de especímenes de colección en al-
cohol obvie este paso,
b. Lave el ejemplar con abundante agua corrien-
te y luego con agua destilada.
c. Colóquelo en una solución de KOH al 1 % más
tres gotas de peróxido de hidrógeno y déjelo
en ésta, hasta que los ojos adquieran un color
ámbar (aproximadamente de 1 2 a 24 horas).
d. Lave con agua destilada y coloque el espéci-
men durante una hora o dos horas en una
solución de borato de sodio saturado.
e. Transfiera a una solución saturada de borato
sodio más tripsina (aprox. VA de cucharada
pequeña). Para que la tripsina actúe, coloque
el recipiente bajo una lámpara o fuente de
8. Métodos paro el estudio de los peces conf/nenía/es
calor de tal manera que mantenga una tem-
peratura constante entre los 26 a 30 °C. Y
espere a que la musculatura se ponga flácida
y transparente (normalmente entre 1 2 a 24
horas).
f. Tinción; enjuague con agua destilada y coló-
quelo en una solución de KOH a l l % y agre-
gue rojo de alizarina hasta que la solución
obtenga el color rojo púrpura. Deje el espéci-
men allí hasta que los huesos se tiñan com-
pletamente ( 1 2 o 24 horas). Lave
cuidadosamente con agua destilada.
g. Conserve el espécimen en un recipiente con
glicerina pura.
Para la tinción conjunta de huesos y cartílagos
consúltese a Dingerkus y Uhler (1 977).
Taxonomía
Desafortunadamente no existe un libro único que
permita hacer las determinaciones taxonómicas de
las especies de peces dulceacuícolas del país. Y
aunque la información se encuentra dispersa en
innumerables publicaciones, no siempre de fácil
consecución, a manera introductoria pueden
consultarse los siguientes trabajos de carácter ge-
neral o regional:
Eigenmann (1912,1918,1922), Fowler (1943),
Miles, (1943a, 1943b), Schute (1944a, 1944b),
Dahl (1971), Gery (1977), Castro (1980, 1994),
Burguess (1989), Vargas (1989), Thaphorn (1992),
Mago-Leccia (1 994), Galvis et al (1 997).
Finalmente, se recomienda la lectura de Caílliet
et. al. (1986), quienes presentan de manera muy
didáctica y en profundidad, los métodos de cam-
po y laboratorio más usuales.
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