TERAPIA GENICA

Por eso la llamamos la terapia génica, por ser una terapia q afecta los genes.
Normalmente el objetivo es repararlos o introducir una copia para que la proteína
de este nuevo gen se exprese y sea una proteína normal, la terapia génica
comenzó hace muchos años, en un hecho histórico el 14 de dic de 1990, hace 10
años, por primera vez se introdujo una serie de investigadores un gen corrector de
una enfermedad genética, en una niña q poseía este defecto, este gen era uno q
codificaba por la enzima adenosin desaminasa cuya defecto o sea la no expresión
de este gen generaba el síndrome de imunodeficiencia severa adquirida o
inducida, este síndrome de inmunodeficiencia combinada severa (SCDI), este
síndrome pues hacia q los niños o las personas que sufren de esta enfermedad no
puedan vivir en ambientes normales y tengan q vivir en ambientes aislados, q los
llaman niños burbuja, porque en las cuales ese es su universo, tales de esas
burbujas que tienen problemas en poder responder tienden a las infecciones en
interacciones con el ambiente, estas personas normalmente después de cierto
tiempo muere por su incapacidad de poder tener su sistema inmunológico lo
suficientemente preparado para responderá a este tipo de infecciones, por lo tanto
esta era una enfermedad letal, una enfermedad en la cual si el niño no vivía en
estas burbujas aislada lejos de sus semejantes y del ambiente, en etapas muy
tempranas de la vida moria.
Esta niñita q se llama Ashanthi De Silva, tiene aproximadamente 22 años, es
pianista, lleva una vida casi normal porque recibió una copia normal del gen q
codifica por la adenosin de aminasa ada, ese es básicamente fue el primer
ensayo exitoso de terapia génica que se reporto en el mundo, a partir de esto se
ha venido trabajando en otras enfermedades como la fibrosis quística, y otras
enfermedades como el cáncer y muy recientemente para combatir el VIH sida, se
esta montando protocolos de terapia génica.
Hay la niña tiene 12 o 14 años, ya extralimito entre comillas la expectativa de vida
porque normalmente estos niños mueren hacia los 5 u 8 años de edad, y como les
dije ella ya tiene 22 años y es una mujer normal.

básicamente el diseño de todos los experimentos de enfermedad genética con

llevaron a una área muy grande de la medicina de la terapéutica, llamada terapia
molecular, q es la terapia molecular?, pues es el diseño de nuevas moléculas de
ADN, RNA proteínas y otros compuestos, con base en el conocimiento de la
estructura y función de blancos moleculares cuya función q quiere modular, con el
fin de poder tener el efecto terapéutico genético, esto cambia un poco la forma de
tratamiento, porque el resultado de la terapia molecular seria restaurar el
metabolismo normal asociado a ese blanco molecular hacia la cual se dirige la
terapia.

Entonces esta terapia molecular surge del diseño de proteína recombinante, q se

utiliza entonces, la terapia molecular incluye la manipulación de DNA, la
manipulación metabólica para q se pueda hacer ajustes en cierta vías
metabólicas, la manipulación de la señalización celular a través de receptores
internos y externos de la célula y lógicamente el remplazo de enzimas anormales,
por una terapia q se llama terapia de remplazo enzimático.

La manipulación del DNA mediante multiplicación, introducción o suprecion de una

función, es la función de la base de la terapia génica, porque la terapia génica
consiste en modificar, introducir o suprimir una función normalmente cuando ya
no esta deseada.

Ya manipulación por restricción de la dieta, reemplazo de metabolitos o cofactores

o inhibición de las rutas metabolicas o la repleción de metabolitos toxicos es lo q
llamamos la manipulación metabolica q tiene mucho q ver con ciertas protocolos
de clonación.

Y el reemplazo de proteínas intracelulares, suministrada via extracelular a nivel

sistémico o dirigida hacia un blanco especial celular es lo q se llama terapia de
reemplazo, esas tres terapias hacen parte de ese gran conjunto de tratamientos
terapéuticos.

Podemos decir q la terapia génica es la introducción de genes terapéuticos para

corregir una función q esta suprimida o esta dañada.
El concepto de gen terapéutico, es un gen funcional que codifica una proteína
normal y q puede ser expresada bajo los controles de transcripción y traducción de
la célula veraniega. Lógicamente este gen terapéutico tiene q ser muy conocido y
saber como se expresa, q efectos tiene la sobreexpresión de este gen,
actualmente la terapia génica ha sido aplicada a enfermedades mono génicas con
algún éxito, digamos q enfermedades mono génicas son aquellas cuya base
fundamental o su histología es la mutación de gen q produce una proteína q no
normalmente no funciona, enfermedades q ya se conocen como errores innatos
de metabolismo y otras enfermedades, sin embargo recientemente se esta
aplicando para unas condiciones patogénicas mas complicadas como el cáncer, y
aun para el combate por la infección de VIH, se esta trabajando en poder afinar
ciertas metodologías para aproximarse a una serie de enfermedades que hoy en
dia produce muertes muy tempranas, por ejemplo la fibrosis quística, q afecta
mucho la función respiratoria, pero también tiene consecuencias génicas graves,
y los niños no llegan a los dos años de edad, y otras como la q son enfermedades
q se encuentran en la tercera o cuarta década de la vida también son objeto de
este tipo de tratamiento.
Si hoy en día hay 4 o 5 enfermedades q están siendo muy estudiadas pues al idea
es q esto transcienda a otras enfermedades.

Esa expresión de un nuevo gen, porque es un nuevo gen que va a reemplazar el

gen q esta alterado, se llama gen terapéutico, lógicamente tiene modificado la
alteración de ese metabolismo dañado y el reemplazo de ese gen por la función
normal conlleva a restablecimiento de esa condición normal metabólica.
Debemos dejar de pensar q un gen produce una enfermedad, no el comanda el
disparo inicial para q una cascada una red regulatoria de genes pueda generar un
metabolismo anormal o sea que un efecto en un gen como el T53 es un gen sujeto
de tumores, pues genera una cascada de regulatorias q suprime una función de
genes asocial por lo tanto se produce el cáncer, o sea q si ataco el gen 53 u otros
genes de alguna manera estoy afectando toda una red de muchos genes q esta
precisamente regulado por este. Esto ha complicado mucho la terapia génica
porque al principio se creía q usted si produce ese gen tiene la respuesta
inmediata q será la restauración normal, pero en muchos casos hay unas redes de
genes y expresión de genes muy específicos q se afectan por la introducción de
estos.

Existe dos tipos de terapia génica q es posible hacer

La terapia génica a nivel somático q permite introducir ese ADN, ese gen en
células somáticas y de esa manera no se transmite a la descendencia
simplemente se produce un restablecimiento de la función somática, del individuo
q va a recibir esa terapia
Terapia génica Germinal tiene mucho q ver con los gametos, o sea la corrección
de estos genes en células gameticas, pues trae como consecuencias q se pueda
heredar, esa corrección y la descendencia va a tener ese gen terapéutico, el
problema en estos momentos es q solamente se hace terapia génica somática,
porque existe riegos muy altos q al manipular la línea germinal, pueda perder una
serie de funciones sistémicas, todos estos experimentos aprobados por diferentes
entidades solo aprueba la somática, irónicamente hay una comisión ética de
experimentos ético para realizar la terapia génica a nivel germinal. Posiblemente
en un futuro cuando se conozca un poco más todo el funcionamiento se pueda
liberar este tratamiento.
Modalidades de terapia génica
 HEREDITARIAS MONOGENICAS
Reemplazo de un gen defectuoso (cirugía genética) para enfermedades
hereditarias mono génicas. Q al determinar q tipo de gen esta alterado por
ejemplo el de ADA se puede reemplazar y de esa manera se restablecería
la ruta metabólica. También el de fibrosis quística y otras enfermedades q
su etiología primaria es un defecto de un gen q modifica una enzima y su
carencia produce una enfermedad.

 INTRODUCCION DE SECUENCIAS REGULADORAS

Manipulación para aumentar la expresión de genes, por ejemplo la
introducción de moduladores de expresión de citocinas mediante la
introducción de promotores fuertes, cajas reguladoras, hacen q la
transcripción de esos genes reguladores aumenten, hay el problema es q
se transcribe el gen pero el mensajero esta en poca cantidad y no alcanza a
suplir las necesidades de la proteína para la célula. La introducción de
elementos reguladores y modulares busca incrementar la transcripción de
esos productos génicos.

 OLIGONUCLEOTIDOS ANTISENTIDO
La expresión de ciertos oncogenes es la base del cáncer, entonces la
supresión de la expresión de esos genes es una posible forma de revertir el
 efecto del regulante q tiene la transformación celular, entonces hay se
utiliza oligonucleótidos anti sentido, es una manera de introducir pedazos
de DNA q sean complementarios a RNA mensajeros para q al restablecer
una doble cadena ese no pueda ser procesado o producido.

 INTRODUCCION DE UN GEN NO HUMANO

Introducir un gen no humano para crear condiciones de resistencia a
metales, antibióticos, patógenos, q hoy en día se esta trabajando para la
malaria y otro tipo de enfermedades donde la interaccion entre un parasito
y el humano genera ciertas condiciones patológicas.

El problema central de la terapia génica es transferir genes, es entregar genes

terapéuticos en la forma como vimos anteriormente utilizando unos sistemas de
transferencia,
 VIRUS
Son los mas utilizados son los virus, o sea el diseño de todos virales q se
pueda descargar genes terapéuticos al sistema blanco es uno de los
objetivos q la terapia persigue. Adenovirus Retrovirus Virus
Adenoasociados (AAV) Herpes Virus
El diseño nuestro trabaja en vectores muy especiales para q puedan
entregar genes a células muy especiales.
 QUIMICOS
Permitiendo q la célula blanco deje entrar el gen terapéutico mediante el
fosfato Cálcico, Medios Catiónicos o Polietilenglicol
 FISICOS
La Electroporación q es abrir huecos en la membrana plasmática a
diferencias de potencial eléctrico para permitir q por esas compuertas entre
construido el DNA o el Disparo de macropartículas de oro recubiertas por
DNA impactan el núcleo y puedan entregar al núcleo y se de la expresión
de genes.
 FUSION
Nuevo sistema Liposomas q son justamente proteletas o sobre agregados o
fosfolipidicos q de alguna forma se llenan con construidos terapéuticos y
remueven la fusión de las células, q tiene una ventaja muy grande y es q se
puede colocar liposomas para q señalice las células blanco.
Tiene un problema muy grave y es q la descarga del DNA en el citoplasma
tiene q llegar al núcleo y se debe producir una serie de trucos para q llegue
al núcleo y pueda ser aceptado por la maquinaria.

Los avances se han dado con el desarrollado de vectores virales, q provienen de

adenovirus, de retrovirus, de virus adenoasociados y el manejo de algunos
vectores derivados de los herpes como una via de poder introducir genes en el
sistema nervioso central, los virus del herpes tienen un neurotropismo a través de
la células germinales y por eso es q producen largas latencias de infección celular.
Los propósitos generales de alguna manera es construir un virus recombinate por
las técnicas q hay, hacer ese virus pueda entrar en la celula y descargar ese
construido terapéutico en el núcleo de la celula, para lograr q se incorpore en su
maquinaria sintética y a nivel de transcripción y deglosamiento de mensajeros
para q pueda ser traducida la proteina de esa manera manera remplazamos una
proteína pero dejamos la q esta allí el gen alterado queda allí pero le hemos
colocado una copia por lo tanto hemos hecho una relación de dominancia osea el
gen normal domina el alterado q ahora queda en condición de recesivo. Se puede
hacer en cualquier tipo de celula conservando el estilo metabolico y el estilo de
expresión de esa celula, para el SNC se utiliza vectores con herpes porq utiliza
una característica fundamental de ese virus q es la genodotropismo, anovirales a
pulmon, de todas maneras el efecto es reparar y hacer q la proteína se exprese
para normalizar la función, en muchos casos la función debe hacerse mu
temprano en desarrollo , ya q muchas de las funciones genéticas producen retardo
mental, en el desarrollo mismo del sistema nervioso y cuando el niño nace ya
tiene un retardo avanzado y lo q hace a esa es q se mejore un poco pero no se
logra la condición normal, esto lleva q entre mas temprano se haga la terapia
génica en el desarrollo embrionario, menos efectos patológicos va a tener el niño.
Hoy en día se hace en fetos o embriones.
Los vectores El virus de tipo silvestre se modifica para producir un vector vira l q
sea seguro en lo q ustedes estudien y q logre una transferencia génica.

Q tipo de vectores se utiliza, aquí tenemos el principio de construcción de un

vector viral, básicamente es producir un virus defectuoso por remplazamiento de
partes o material genético del gen corregido, y como ha perdido su replicación
necesita de un gen ayudante, hace una conexión inicial donde el virus q si replica
promueve q se replique el gen defectuoso, pero el virus defectuoso empaqueta en
capsulas el virus normal, y asi se puede definir y diferenciar cada virus, cuando ya
se tiene esta población de virus corregidos el paso es infectar una celula blanco, y
se debe tener presente q tipo de virus se ha utilizado y a q célula va hacer efecto,
ya el diseño de cada vector depende hacia donde se va a dirigir la terapia y donde
esta localizado.

Entre estos vectores los adenovirus tienen una ventaja muy grande q producen
efectos citopaticos bajos, no alteran mucho el funcionamiento de la celula, pero
tienen una desventaja q ellos no se integran, por lo tanto quedan como efisomas
de replicación independiente dentro del nucleo, pueden tener mas o menos una
capacidad de transporte de 4 a 8000 pares de bases, en cambio los herpes tres
virus transportan 20000 pares de bases a pesar de no integrase y su desventaja
es q tienen efectos citopatico muy altos, hay 2 grupos q si se integran y son los
retrovirus y adenoasociados, al integrase pasan a ser elementos genéticos de
genoma de la celula, pasan a expresarse bajo las reglas de expresión de esa
celula. los adenoasociado, son pequeños con efectos citopaticos muy bajos y
permiten integrar hasta 4000 pares de bases de DNA, donde se sabe a prioi
donde se van a integrar siempre en el cromosoma 19 y los retovirus de 4 a 8000
pares de bases pero uno no sabe a priori donde se van a integrar, mas o menos
regional pero no exactamente.
Virus derivados de la vaccinia no se integra, pero permite descargar de 25000 a
75000 pares de bases, su efecto citopatico es muy alto, puede haber una
recombiancion de virus por ser tan grande donde se puede producir
recombinantes no deseados q puede complicar la terapia.

Vectores virales de adenovirus se deriva básicamente de adenovirus 5, las cuales

se ha reeplazado todo esta región temprana de 1 a 2 por el gen corrector y se va a
producir una deleccion de región E3, la región E3 en el virus normal significa un
tropismo de células posteriales, si se quiere un vector q no sea trópico se elimina
la región E3 y al eliminar la región 1 y 2 se elimina unas proteínas de replicación
del virus y produce un vector no replicante y lo reemplaza por ese tipo de vector, la
mayoría se deriva de tipo 5 y se utiliza para la corrección de GPFR q es el gen
alterado de la fibrosis quística, y es un gen q se expresa en la función del epitelio
pulmonar y los niños tienen problemas respiratorios fuertes donde la muerte se
produce por paro respiratorio o fallas renales, algunas medicinas minimizan un
poco el efecto pero la expectativa de vida es muy baja.

Todo adenovirus el objetivo es quitar los genes de replicación q están en la

regiones tempranas de 1ª 1b y E2 y de esa manera se obtiene un virus defectuoso
no replican y por eso se pueden obtener estos virus terapéuticos. Las células
blanco de esto virus pueden estar activamente dividiéndose o en proceso de
división y es una ventaja muy grande para poderlo diferenciar y se le puede hacer
la entrega de ese gen en células q no se están dividiendo. El ciclo vital de este
virus es básicamente hace q el virus valla directamente al núcleo y entonces el
DNA del virus se convierta en un efisoma( pedazo genético q no se replica), esta
terapia debe mantenerse para q a sucesivas replicaciones no se pierda por efecto
de efisoma. Es muy utilizado para tejidos no replicantes y así el DNA se puede
mantener por mucho tiempo.
Todas las terapias génicas debe asegurar q lo q se esta entregando se exprese,
de tal manera q se comience a transcribir
VENTAJAS:
 El tamaño del inserto puede ser mayor a 8 Kb
 Alta eficiencia de Transducción
 Infecta células que estén o no en división (amplio rango)
 Titulo viral alto (1010–1013)

DESVENTAJAS
 La expresión es transitoria (el DNA viral no se integra)
 Liberación in vivo limitada por la respuesta inmune del hospedero

APLICACIONES
 Suministro de genes a células epiteliales (epitelio respiratorio y
gastrointestinal: Fibrosis Quística)
 Vacuna Genoterápica
 Algunos tumores.
Los vectores retrovirales se derivan de los retrovirus, la retrotransfusion hace q se
produzca un CNA q se integra a la celula y genera una condición mas estable en
términos de replicación porque pasa a ser un pedazo de de DNA integrado
covalentemente en el programa celular. Una desventaja esq no se sabe a priori
donde va a integrarse.

Existen 2 tipos de retrovirales

 El pro virus es un DNA q ha sido integrado covalentemente por una enzima
viral q es la integrasa dentro de porciones del genoma de la celula.
 Derivados de MoMLV q possee un promotor, cuantro entra en fase con el
gen q se esta clonando hace q se exprese.

Los vectores derivados del VIH, tiene todo un construido q se le ha quitado la

parte de la región reguladora y se ha reemplazado por genes correctores
terapéuticos y se ha colocado el promotor del adenovirus, en este caso el objeto
es introducir una fusión para predicciones de donde ha saltado este retrovirus. Son
un problema por no ser predecibles y en estas personas q reciben la terapia al
tiempo hay un riesgo aumentado de de desarrollar leucemia principalmente por ser
vectores dirigidos a linfocitos.
VENTAJAS
Integración en el genoma del hospedero –expresión estable del transgen
Alta eficiencia de Transducción
Sistemas extremadamente bien estudiados

DESVENTAJAS
Integración al azar -Mutagénesis Insercional
Títulos virales bajos (106–107)
Requieren células en división para realizar la infección (Exc.:HIV)

APLICACIONES
Pueden ser usados en protocolos tanto in vivo como ex vivo

HERPESVIRUS Poco trabajado en humanos ya q su genoma es muy grande de

150 mil pares de bases, muy complicado porq tienen periodos de latencia, poseen
neurotropismo pueden inyectar células q se dividen y células q no, esta terapia es
una esperanza para descartar genes terapéuticos en el sistema nervioso central,
tiene 2 terminales repetidas largas y 2 terminales repetidas intermedias o cortas,
es muy complicado trabajar con ellos pero se ha localizado secuencias de
expresión en la porción UL( región única del lado izquierdo) para q atraves de los
construidos puedan expresarse genes correctores . no se ha ensayado en
humanos, pero pueden ayudar en un futuro con enfermedades degenerativas del
cerebro como el parkinson.

VENTAJAS
Período de latencia dentro de su ciclo de replicación
Genoma grande (alta capacidad de inserto 25 Kb)
Titulo viral alto (109–1010)

DESVENTAJAS
Mantienen su capacidad lítica
Su gran tamaño representa un problema a la hora de construir un vector
Baja eficiencia de Transducción

APLICACIONES
Enfermedades del Sistema Nervioso Central

CARACTERISTICAS DESEABLES EN UN VECTOR DE TRANSFERENCIA

Deben resultar ser sistemas seguros
Introducción precisa, eficaz y estable del transgen
Altos títulos o concentración (>108partículas/mL)
Método de reproducción conveniente, reproducible y rentable
Transgen que responde a sus elementos reguladores
Habilidad para infectar tipos celulares específicos
No provoque una reacción inmune

Terapia génica somatica in situ, en esta terapia se inyecta el construido

terapéutico directamente en los tejidos q se quiere corregir.
Desventajas
Baja eficiencia menos del 20%va a caer dentro del nucleo y se deben hacer
refuerzos, pero resulata muy conveniente cuando se conoce el origen especifico
de los defectos.

Terapia génica somatica ex vivo

Se tiene q sacar muestras celulares de la persona q va a recibir la terapia, estas
muestras se proliferan en medios de cultivo y utiliza el construido terapéutico para
infectar esas células ex vivo, se corrige el defecto y posteriormente se transplanta
esas células en el tejido donde esta el defecto.no hay rechazo por ser homologo.
En la fibrosis quística se utiliza los vectores adenoviorales, pero como los niños
deben ser sometidos a inmunodepresión se dificulta su manejo.
Vectores lentivirales antisentido estos no se leen 3`5`sino al contrario, en el
momento en q el mensajero va a ser traducido se `produce una doble cadena y ya
no puede entrar.

Un adenovirus asociado a un gen muy simple q solo posee 2 genes y 2

secuencias de inserccion terminal por lo tanto el puede integrarse dentro del
genoma, no puede entrar solo debe hacerlo con un ayudante, no produce
enfermedades, tiene una tasa de replicación baja, se puede proliferar.