MUESTRA “A”
Tinción Gram
La tinción Gram permite diferenciar entre bacterias Gram
positivas y gramnegativos, las cuales tiñen distinto debido a
las diferencias en la composición de sus paredes celulares.
Consta de las siguientes sustancias:
• Cristal violeta: Tiñe la pared celular de gramnegativos y
Grampositivas
• Lugol: El I2 sirve como “mordiente”, fija el cristal violeta
• Alcohol – acetona: Decolora o quita el cristal violeta.
• Fucsina o safranina: colorean a las gramnegativas
PROCEDIMIENTO
• Realizar una extensión de la muestra A sobre un portaobjetos
• Con ayuda de una pinza de madera coja el portaobjeto por uno de los
extremos y hágalo pasar sobre el mechero hasta secar la muestra (no
quemar)
• Cubrir todo el portaobjeto que contiene la muestra con violeta de genciana
y dejarlo reposar por 1 minuto.
• Enjuagar (con mucho cuidado) la lámina con agua destilada.
• Cubrir todo el portaobjeto que contiene la muestra con lugol, dejarlo reposar
por 1 minuto.
• Enjuagar la lámina con agua destilada.
• Cubrir todo el portaobjeto que contienen la muestra con la mezcla alcohol-
acetona por unos segundos.
• Enjuagar la lámina con agua destilada.
• Cubrir todo el portaobjeto que contiene la muestra con fucsina o safranina
y dejar que actúe por 1 minuto.
• Enjuagar la lámina con agua destilada
• Coloque encima de la muestra, en la zona con menos grumos, la lámina
cubre objeto
• Encima del cubreobjetos añade una gota de aceite de inmersión y observa
al microscopio con el objetivo 100´.
 MUESTRA “B”
Tinción Gram
La tinción Gram permite diferenciar entre bacterias Gram
positivas y gramnegativos, las cuales tiñen distinto debido a
las diferencias en la composición de sus paredes celulares.
Consta de las siguientes sustancias:
• Cristal violeta: Tiñe la pared celular de gramnegativos y
Grampositivas
• Lugol: El I2 sirve como “mordiente”, fija el cristal violeta
• Alcohol – acetona: Decolora o quita el cristal violeta.
• Fucsina o safranina: colorean a las gramnegativas
PROCEDIMIENTO
• Realizar una extensión de la muestra A sobre un portaobjetos
• Con ayuda de una pinza de madera coja el portaobjeto por uno de los
extremos y hágalo pasar sobre el mechero hasta secar la muestra (no
quemar)
• Cubrir todo el portaobjeto que contiene la muestra con violeta de genciana
y dejarlo reposar por 1 minuto.
• Enjuagar (con mucho cuidado) la lámina con agua destilada.
• Cubrir todo el portaobjeto que contiene la muestra con lugol, dejarlo reposar
por 1 minuto.
• Enjuagar la lámina con agua destilada.
• Cubrir todo el portaobjeto que contienen la muestra con la mezcla alcohol-
acetona por unos segundos.
• Enjuagar la lámina con agua destilada.
• Cubrir todo el portaobjeto que contiene la muestra con fucsina o safranina
y dejar que actúe por 1 minuto.
• Enjuagar la lámina con agua destilada
• Coloque encima de la muestra, en la zona con menos grumos, la lámina
cubre objeto
• Encima del cubreobjetos añade una gota de aceite de inmersión y observa
al microscopio con el objetivo
 MUESTRAS “C” y “F”

PROCEDIMIENTO
Tinción Lugol
• Colocar la muestra C en una luna de reloj.

- Agrega 10 gotas de Lugol, déjala reposar por 5 minutos.

- Enjuagar la lámina con agua destilada, evitando que se
desprenda el preparado.
- Coloque encima de la muestra la lámina cubreobjetos
(con mucho cuidado)

• Observar al microscopio en 100X y 400X.

Protozoarios con lugol Célula vegetal con lugol

El Lugol es una solución compuesta por yodo (I2) y

yoduro de potasio (KI). Se emplea como desinfectante y
antiséptico. En el laboratorio sirve para teñir el núcleo de
las células, haciéndolo más visible al microscopio. Las
muestras se observan de color pardo – marrón.
 MUESTRA “D”
Tinción con azul de metileno
El azul de metileno es un colorante básico que tiñe el núcleo de
las células debido que ahí hay ADN, la cual es una sustancia
ácida. Se utiliza para observar la viabilidad celular, las células
vivas no se tiñes porque puede metabolizar el colorante mientras
que las células muertas se tiñes de azul. En la imagen se muestra
la tinción de células epiteliales.
PROCEDIMIENTO
• Sobre una lámina portaobjetos limpia realizar una
extensión delgada y uniforme de la Muestra D que se te
brinda en un hisopo.
• Cubrir la muestra con un colorante básico: azul de
metileno por 10 minutos.
• Enjuagar con cuidado, sin perder la muestra.
• Colocar una lámina cubre objetos. Observar a 100X y
400X.
 MUESTRA “E”

PROCEDIMIENTO
Tinción Giemsa
• Colocar una gota de la Muestra E en el tercio externo de
una lámina portaobjetos limpia y seca.
El colorante Giemsa está formado por Azul de Metileno y sus
derivados básicos (azur A, B y C), y el colorante ácido Eosina. El • Con otra lámina
azul de metileno y sus derivados son básicos y se unen a los portaobjeto y en posición
componentes ácidos de las células (núcleo, ADN, proteínas adecuada (ángulo de
ácidas, etc.) que tiñen de un color rojo púrpura. La eosina se une 45°) hacer contacto con
a los componentes básicos de la célula, como por ejemplo la la muestra tratando de
hemoglobina y los tiñen de color rojo – rosado. La tinción Giemsa que ésta se extienda a lo
sirve para diferenciar entre los glóbulos rojos y los glóbulos largo de la arista de
blancos presentes en la sangre. Como los glóbulos contacto (ver imagen).
rojos no tiene núcleo se observan rojos – rosados. En la imagen
se muestra la tinción de la sangre.
• Realizar un frotis rápido y uniforme. Fijar a temperatura
ambiente, es decir cubrir el preparado con el colorante
Giemsa, agregando seguidamente doble volumen de
agua destilada.

• Colorear 15 minutos, lavar al chorro y secar al mechero

con mucho cuidado de no quemar la muestra.

• Agregar una gota de aceite de inmersión y observar con

objetivo de inmersión.