UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTÍN

FACULTAD DE INGENIERÍA DE PROCESOS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA QUÍMICA

BIOPROCESOS INDUSTRIALES

LABORATORIO NRO. 2

“CULTIVO DE CÉLULAS”

GRUPO DE LABORATORIO: B-3

HORARIO: MARTES 10:40-12:20 P.M.

ALUMNA:

 Rodríguez Serveleón Nathaly Sulamita

AREQUIPA-PERÚ

2020
 LABORATORIO NRO. 2

“CULTIVO DE CÉLULAS”

1. Según la concentración de este medio, clasifíquelo de acuerdo a su origen: 5gr. de

glucosa, 1 gr. de cloruro de amonio, 1 gr. de fosfato di ácido de potasio, 0,3 gr. de
sulfato de magnesio, 5 gr. de extracto de levadura y 1 litro de agua destilada.

 5 gr de glucosa: complejo
 1 gr cloruro de amonio: sintético
 1 gr de fosfato di acido de potasio: sintético
 0.3 gr de sulfato de magnesio: sintético
 5 gr de extracto de levadura: complejo
 1 litro de agua destilada: sintético

2. Calcule cuántos gramos de agar-agar se necesitan para preparar 125 ml de medio de

cultivo sólido. ¿Qué porcentaje P/V se utilizó?
El agar-agar menciona que 23 g en 1000 ml. Entonces para 125 ml hacemos nuestros
cálculos.
23𝑔 → 1 𝐿
𝑋𝑔 → 0.125 𝐿
𝑋𝑔 = 2.875 𝑔
En porcentaje peso/volumen
𝑃 𝑔 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
% = ∗ 100
𝑉 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
𝑃 2.875 𝑔
% = ∗ 100
𝑉 125 𝑚𝑙
𝑃
% = 2.3%
𝑉
3. ¿Cómo se esteriliza un medio de cultivo y para qué?
La esterilización es el proceso por el cual se destruyen o remueven células vivas, esporas
de hongos, endosporas bacterianas, virus y viroides mediante el uso de agentes físicos o
químicos. Entre algunas de ellas tenemos:
  Esterilización por flameado: es un procedimiento simple y eficaz, consiste en la
exposición de un objeto al efecto de la llama hasta la incandescencia. Se esteriliza
de esta forma, por ejemplo: ansas de cultivo de siembra.
 Incineración: es el mejor sistema para esterilizar todos aquellos productos en los
que no importe su destrucción, por ejemplo: material biológico.
 Estufa: calor seco a alta temperatura, 20 minutos durante 180℃, 60 minutos a
160℃, siendo suficiente la esterilización durante 60 min a 100-140℃, se lo utiliza
para esterilizar material de vidrio.
 La esterilización por calor húmedo: es mucho más rápida y eficaz que el calor
seco debido a que las moléculas de agua desnaturalizan las proteínas de forma
irreversible mediante la rotura de las uniones H entre los grupos peptídicos a
temperaturas relativamente bajas.
 Autoclave: horno a presión consiste en una cámara en la que el aire puede ser
sustituido por vapor de agua sometida a presión, se opera a 121℃ a 1 atm de
presión durante 20 min. De esta forma se consigue destruir todas las formas
vegetativas y esporas. Se le utiliza para esterilizar todo material resistente a esta
temperatura y es muy utilizado para la esterilización de medios de cultivo.

La esterilización es utilizada con objetivo de que los resultados que se obtengan

correspondan al microorganismo o microorganismos que están presentes en la muestra
que se estudia y no a contaminantes procedentes del medio o materiales que puedan
desarrollarse y falsear las pruebas.

4. ¿Qué tipo de medio es el agar nutritivo, y que microorganismos pueden desarrollarse

en él?
El agar nutritivo es un medio de cultivo nutritivo no selectivo utilizado para propósitos
generales, para el aislamiento y recuento de microorganismos con escasos requerimientos
nutricionales. Su uso esta descrito para el análisis de alimentación, aguas y otros
materiales de importancia sanitaria.
En general para este tipo de agar se recomienda:
Bacterias de fácil crecimiento: en aerobiosis de 35-37℃ durante 18 a 24 horas
 Bacterias exigentes en sus requerimientos nutricional: en atmosfera con 5-10% 𝐶𝑂2 a 35-
37℃ durante 24 a 48 horas.

Algunos de los microorganismos que crecen satisfactoriamente en este tipo de agar:

Escherichia Coli, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Pseudomonas
aeruginosa

5. ¿Averigüe la composición y determine, cuál es la fuente de carbono del medio Citrato

de Simmons y del agar nutritivo?

Citrato de Simmons: es un medio utilizado para la diferenciación de bacterias en base a la

capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía.
La composición contiene: citrato de sodio, cloruro de sodio, fosfato di potásico, fosfato
mono amónico, sulfato de magnesio, azul de bromotinol, agar.
Agar nutritivo: Medio de cultivo nutritivo no selectivo, en el cual la pluripeptona y el
extracto de carne constituyen la fuente de carbono, nitrógeno y aportan nutrientes para el
desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el
agar es el agente solidificante.
La composición contiene: pluripeptona, extracto de carne, cloruro de sodio y agar.

6. ¿Por qué se considera al medio citrato de Simmons, un medio diferencial y con

respecto a qué?

El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar

citrato como única fuente de carbono usan sales de amonio como única fuente de
nitrógeno, con la siguiente producción de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa,
a través del ciclo del ácido tricarboxilo. El desdoblamiento del citrato genera
progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último en presencia de un medio alcalino,
da origen a ácidos orgánicos al ser utilizados como fuente de carbono, producen
 carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira a azul y esto es indicativo de
la producción de citrato permeasa.

7. ¿Cuál es el medio de cultivo elegido para el aislamiento de Staphylococcus aureus?

Diga la composición y clasifíquelo de acuerdo a su origen, composición y consistencia.

Agar Salado Manitol. Es un medio de cultivo sólido, selectivo y diferencial

Se emplea para el aislamiento selectivo de Staphylococcus aureus. El agar sal manitol
contiene una concentración de cloruro sódico de 7.5%, el cual es el agente activo del
medio e inhibe parcial o completamente a los organismos bacterianos diferentes de los
estafilococos. Los estafilococos coagulasa (+) (Staphylococcus aureus) producen colonias
de color amarillo y un medio circundante de color amarillo, mientras que los estafilococos
negativos a la coagulasa producen colonias de color rojo y no provocan cambios en el
color del indicador rojo fenol

8. ¿Cuál es el medio de cultivo que se emplea para el aislamiento de hongos y

levaduras? ¿Por qué tiene esa capacidad?

Hongos y levadura medio: es el medio utilizado para el aislamiento y recuento de hongos

y levaduras en alimentos. Es un medio selectivo, es nutritivo debido a la presencia de
extracto de levadura y glucosa y selectivo por la presencia de cloranfenicol que inhibe el
crecimiento bacteriano.

9. Qué características tienen los medios de cultivo para células animales.

El cultivo de células animales ha avanzado notablemente durante las últimas décadas y en
la actualidad está considerado como una tecnología fiable, robusta y relativamente
desarrollada. Hoy en día se emplean métodos de cultivo celular para sintetizar una serie
de sistemas bioterapéuticos en instalaciones de fabricación a gran escala de productos de
uso comercial y para estudios clínicos.
Utilizando cultivos de células mamíferas pueden producirse proteínas en su forma efectiva
(estructura cuaternaria). Si se compara con la producción microbiana de bacterias y
 levaduras, el tratamiento posterior se reduce significativamente. Además puede eliminarse
el riesgo de infección en la producción de proteínas humanas.
Para implementar con eficiencia la tecnología de cultivo de células mamíferas es preciso
optimizar una serie de variables esenciales: condiciones de los medios de cultivo y del
biorreactor, líneas celulares idóneas (células CHO, BHK, híbridas y de insectos), costes
de explotación reducidos, altas tasas de productividad, control de procesos eficiente y,
sobre todo, calidad.
Así mismo, es necesario aplicar estrategias adecuadas para el desarrollo, ampliación y
caracterización de los procesos y validar procedimientos sólidos que cumplan con las
normas vigentes.

10. Qué características tienen los medios de cultivo para células vegetales

Los primeros medios utilizados en cultivo de células y tejidos vegetales fueron

semisintéticos. Frecuentemente contenían extractos o complejos orgánicos como agua de
coco, hidrolizado de caseína y extracto de levadura. Actualmente, la mayoría de los
medios son de composición conocida, estando constituidos básicamente por cinco grupos
de ingredientes: nutrientes inorgánicos, fuente de carbono, fuente de nitrógeno, vitaminas
y reguladores del crecimiento que in vivo son sintetizados por una parte u órgano de la
planta para luego ser transportados a otros órganos donde se metabolizan y/o acumulan
(Seabrook 1980, Yasuda et al 1972).
Las fuentes de nitrógeno más comunes son el nitrato y amonio, pero también se han
utilizado urea, hidrolizado de caseína, extracto de levadura y aminoácidos, entre otros. La
fuente de carbono más empleada es la sacarosa o glucosa y en menor grado la maltosa,
galactosa, almidón y melaza. Los micronutrientes, generalmente adicionados al medio de
cultivo en forma de sales, son utilizados por las células como cofactores enzimáticos,
como el molibdeno para la nitrato reductasa y el magnesio para algunas cinasas
(Murashige y Skoog 1962, Shenk y Hildebrandt 1972)
BIBLIOGRAFÍA

 Dr. Graciano Calva Calva. (10 de Noviembre de 2005). Cultivo de celulas y tejidos
vegetales: Fuente de alimentos para el Futuro. Revista Digital Universitaria, 6(11).
 Laura Santacruz Reyes, Ángel Melo Jimenez, Carlos Rodríguez Herrera y Johanna
Moscoso Gama (2017), Historia de los cultivos de células animales in vitro y su
importancia en la actualidad
 Guadalupe Socorro Zendejas-Manzo, Héctor Avalos-Flores, Marisela Yadira Soto-
Padilla (2014) Microbiología general de Staphylococcus aureus: Generalidades,
patogenicidad y métodos de identificación
 Ficha técnica Britania: Agar Nutritivo, Cimnons citrato Agar,