Universidad Nacional

del Callao

Escuela Profesional de Ingeniería Química

Facultad de Ingeniería Química

LABORATORIO DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL

TEMA 1:

“COMPROBACIÓN PARA LEY DE BEER- LAMBERT”

ALUMNA:

REYES CALIXTO, YAKELIN LIZBETH 1416120312

GRUPO HORARIO:

90 G

FECHA DE PRÁCTICA:

09-04-2018
 I. OBJETIVOS

 Analizar la Ley de Beer – Lambert.

 Determinar la concentración de las muestras de Mn +2 por el método
gráfico.
 Preparar una curva de calibración a partir de una disolución patrón de
elevada concentración.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

II.1 Ley de Beer – Lambert

La Ley de Lambert-Beer introduce el concepto de absorbancia (A) de una

I
muestra como  A=log . Donde  I 0 representa la intensidad de la luz incidente e
I0
I la intensidad de la luz que atraviesa la celda. También podemos expresar la
absorbancia en función de la longitud de la cubeta y de la concentración de
soluto.

I
A=log =ϵ ⋅c ⋅ l(1)
I0

Donde:
l es la longitud de la cubeta en cm, 
c representa la concentración de soluto en mol/l  
ϵ es la absortividad molar (coeficiente de extinción molar) medido en
l/mol.cm.
Para una concentración y una longitud de cubeta determinadas, la absortividad
molar determina sí la intensidad de la banda (absorbancia) es alta o baja. Es
muy habitual representarlogϵ en ordenadas en lugar de la absorbancia, en
abscisas se representa la longitud de onda. Para ver la importancia del
coeficiente de absortividad molar, compararemos su valor en la
transición π→π∗ del 1,3-butadieno (λ=217nm), que presenta
una ϵ=21000l/mol.cm (logϵ=4,32), con la transición n→π∗ de la acetona
(λ=280nm) la cual presenta ϵ=12l/mol.cm (logϵ=1,08). En el caso del 1,3-
butadieno se observa una banda intensa mientras que en la acetona
corresponde a una banda de muy baja intensidad (transición prohibida). En
general se consideran transiciones prohibidas las que tienen una absortividad
molar inferior a 100 l/mol.cm.

II.2 Curva de Calibración

Uno de los métodos más utilizados para determinar la concentración de una

muestra problema, es el método de la curva de calibración. Esta curva de
calibración es una gráfica que relaciona la concentración de al menos cinco
soluciones de estándar de concentraciones conocidas, con la absorbancia de
cada uno de ellos a la longitud de onda máxima ( λ max).

Una vez obtenida la gráfica se determina la función matemática que presenta

dicha recta a través del tratamiento estadístico de regresión de los mínimos
cuadrados, la cual relaciona la absorbancia y la concentración de un analito. La
siguiente ecuación matemática corresponde a dicha función:
A=mc +n (2)

A: Absorbancia.
n: Intercepto de la recta
m: Pendiente de la recta y que corresponde al producto entre absortividad a de
la muestra y el espesor b de la cubeta.
Luego se mide la absorbancia de la solución problema y se interpola su valor
en la gráfica o se reemplaza en la ecuación (2), para obtener el valor de
concentración del analito. La concentración de la solución problema debe estar
comprendida en el rango de concentración que comprende la curva de
calibración. Si la concentración de la solución problema es menor que la
concentración del estándar más diluido debe usarse el método de adición
estándar, que consiste en adicionar un volumen determinado de un estándar
concentrado a la solución problema, antes de realizar la lectura y que permite
que esta lectura este dentro de las obtenidas para la curva de calibración. En
el caso contrario, si la concentración del analito es mayor que la concentración
del estándar más concentrado la solución problema deberá ser diluida.

Al hacer la curva de calibración, se debe emplear la longitud de onda de

máxima absorbancia ( λ max), para obtener una recta con la máxima pendiente
y así tener mayor sensibilidad y precisión al hacer las mediciones.

La medición de la absorbancia de la solución problema debe hacerse a la

misma longitud de onda que fue hecha la curva de calibración.

II.2.1 Elaboración de una Curva de calibración:

La elaboración de una curva de calibrado se puede dividir en dos pasos:

preparación de las disoluciones patrón y obtención de la función señal –
concentración (construcción de la curva propiamente dicha). Una vez obtenida
la curva de calibración se podrá utilizar para conocer la concentración de
analito en una muestra desconocida.

A. Preparación de Patrones: Para elaborar una curva de calibrado se

parte de varias disoluciones con una concentración conocida de analito (la
sustancia a medir). Estas disoluciones se conocen como disoluciones patrón.
Se han de elaborar una batería de patrones suficiente para cubrir un rango que
incluya la concentración esperada en las muestras desconocidas.
Las concentraciones utilizadas en los patrones también han de estar dentro del
rango válido para la técnica analítica que se va a utilizar. Es decir, han de estar
por encima del mínimo de concentración de analito cuantificable por la técnica
utilizada. Este mínimo es conocido como límite mínimo cuantificable.
También ha de estar por debajo del límite de linealidad. La relación lineal entre
concentración y señal no se suele mantener a altas concentraciones y el límite
de linealidad marca la concentración máxima para la cual la curva de
calibración sería fiable.

B. Construcción de la curva: Relación concentración de analito y señal

analítica: La curva de calibrado se construye midiendo la señal analítica en
cada uno de los patrones previamente elaborados. En el eje de ordenadas se
asigna el valor de la señal medida y en el eje de abscisas la concentración del
patrón. De esta forma podemos señalar puntos en la gráfica según las
coordenadas (concentración (x), señal (y)).

C. Uso de la curva de calibración con muestras desconocidas:

Teniendo una muestra de concentración desconocida, se puede medir la señal
analítica y estimar la concentración por extrapolación sobre la gráfica obtenida
anteriormente. Pero se puede obtener de forma más exacta a través de
la ecuación explícita de la recta que, aplicada a nuestra curva, sería:
y=b+m .C A
Dónde:

b es la ordenada en el origen (intersección de la recta en el eje de ordenadas)

m es la pendiente de la recta

CA es la concentración del analito, representada en el eje de abscisas

y es la señal medida

Tomando dos puntos de la recta, se calcula la pendiente y ya se podría obtener

la concentración de analito midiendo la señal:

y−b
C A=
m

Además de para medir concentraciones de analitos en muestras, las curvas de

calibrado también se utilizan para comprobar el correcto funcionamiento de
instrumentos analíticos.

III. DATOS EXPERIMENTALES

III.1 Materiales utilizados

 Cubeta de 1cm
 Vaso precipitado
 Matraz aforado de 250mL, 25 mL
 Pipetas (bureta de 50 ml)

III.2 Equipos utilizados

 Espectrofotómetro doble haz Lambda 3B- doble Haz

 Balanza analítica
 III.3 Reactivos utilizados
 Solución de KMnO4 de 66 mg/L

IV. PROCESAMIENTO DE DATOS

 La solución patrón de KMnO4 que se encuentra a 66 ppm, lo llevamos a

diferentes diluciones de 1/5, 2/5, 3/5 y 4/5, a 25 ml de enrase.
 Analizamos las muestras obtenidas en el espectrofotómetro a la longitud
de onda optimo obtenido para el Mn +2 anteriormente, y construimos la
curva patrón. ( λ optimo=525 nm )
 Determinamos la concentración de las muestras P(7ml), Q(12ml) y
R(17ml) que contienen Mn+2.

Calculo de las diluciones patrón:

C1 = 1/5 = 0,2 x 66 = 13, 2 mg/L V1 = 5ml

C2 = 2/5 = 0,4 x 66 = 26,4 mg/L V2 = 10ml

C3 = 3/5 = 0,6 x 66 = 39,6 mg/L V3 = 15ml

C4 = 4/5 = 0,8 x 66 = 52,8 mg/L V4 = 20ml

Concentraciones:

mg 1 mol
C 1=13 ,2 × =2.403∗10−4 M
L 54.93 g

1mol
C 2=26,4 mg/ L× =4.806∗10−4 M
54.93 g

1 mol
C 3=39,6 mg/ L× =7.209∗10−4 M
54.93 g

1 mol
C 4=52,8 mg/L × =9.612∗10−4 M
54.93 g
 V. RESULTADOS EXPERIMENTALES

TABLA N°1: A, %T de la solución Mn2+ a diferentes concentraciones.

Longitud de onda ejecutada: 525 nm.

C (mg/L) A A(prom)
0.507
C1 0.507 0.507
0.507
1.017
C2 1.014 1.015
1.015
1.519
C3 1.519 1.520
1.521
2.003
C4 1.998 1.999
1.998
 GRÁFICO N°1: Curva de Calibración, absorbancia vs Concentración.

Concentacion Vs Absorbancia
2.5

2
f(x) = 2072.83 x + 0.01
R² = 1
Absorvancia

1.5

0.5

0
0 0 0 0 0 0 0 0 0
Concentracion (M)

L
Del grafico tenemos que ε =2072.8
mol . cm

TABLA N°1: A, %T de la solución Mn2+ a diferentes concentraciones.

Longitud de onda ejecutada: 525 nm.

C (mg/L) A A(prom)
0.725
P 0.726 0.725
0.725
1.236
Q 1.236 1.236
1.236
1.742
R 1.742 1.742
1.742

Determinación de las concentraciones de las muestras A, B y C. empleando la

Ley de Beer – Lambert.

A=2072.8C A + 0.015

Muestra P:

0.725=2072.8C A + 0.015
 L
0.725+0.015=2072.8 .C
mol . cm

C=3.57 ×10−4 M

Muestra Q:

1.236=2072.8C A + 0.015

L
1.236+0.015=2072.8 .C
mol .cm

C=6.035 ×10−4 M

Muestra R:

1.742=2072.8 C A +0.015

L
1.742+0.015=2072.8 .C
mol . cm

C=8.486 ×10−4 M

VI. CONCLUSIONES

 De las concentraciones halladas podemos concluir que, a mayor

concentración del analito, mayor será la absorbancia lo que contrasta la
Ley de Beer Lambert.
 La absorbidad molar según la curva de calibración nos resultó:
 L
ε =2072.8
mol . cm
 Las concentraciones halladas para las muestras P, Q y R fueron:

C P =3.570× 10−4 M

C Q=6.035 ×10−4 M

C R =8.486 ×10−4 M

I. BIBLIOGRAFÍA

 ESPECTROSCOPÍA VISIBLE-ULTRAVIOLETA. Texto publicado.

Página Web: Química Orgánica (en línea). (Fecha de consulta:14 de
abril 2018). Disponible en:
http://www.quimicaorganica.org/espectroscopia-visible-ultraviolata/733-
ecuacion-de-lambert-beer.html

 INTRODUCCIÓN A LA ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN

MOLECULAR ULTRAVIOLETA, VISIBLE E INFRARROJO CERCANO.
Texto publicado. Página Web (en línea). (Fecha de consulta:7 de abril
2018). Disponible en:
http://materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf.

VII. CUESTIONARIO

1. ¿Cuál será los gramos necesarios para preparar la solución

parón de Manganeso?
Si necesitamos:
 g
158.04
mg mol 1g
66 × × 3 × 0.250 L=0.04747 g de KMn O4
L g 1 0 mg
54.93
mol

2. Determinar las concentraciones de las diluciones en 10 ml.

V 1 C 1=V 2 C2
mg
10 mL∗66 =25 mL∗C2
L
mg
C 2=26.4
L
1 mol
26,4 mg/ L × =4.806∗10−4 M
54.93 g