BIOLIXIVIACIÓN DE CALCOPIRITA POR SULFOBACILLUS ACIDOPHILUS Y

ACIDITHIOBACILLUS FERROXIDANS

INTRODUCCIÓN
Generalmente se tienen una gran cantidad de herramientas, tecnologías y utensilios
de uso cotidiano, que están hechos con cierto porcentaje de metales, los cuales le
brindan cierta utilidad a su funcionamiento, y es por esto por lo que con el paso del
tiempo se ha vuelto tan importante la extracción de metales como el cobre para la
elaboración de estos utensilios. La obtención de estos metales que se encuentran
en rocas o diferentes menas, se logra a través de diferentes procesos.
La Biolixiviación es un proceso biohidrometalúrgico en el que ocurre una lixiviación,
la cual se define como la extracción de la materia soluble de una mezcla mediante
la acción de un disolvente líquido, catalizada por microorganismos que en este caso
disuelven compuestos solubles como el cobre y otros metales de gran interés.
Estos microorganismos pueden ser arqueas o bacterias, que se caracterizan por
desarrollarse en condiciones extremas debido a que se mantienen a temperaturas
elevadas, en medios con pH ácidos y concentración de ciertos metales, teniendo
como ventaja que los compuestos utilizados en este proceso pertenecen al ciclo
biogeoquímico (producción y descomposición), dando lugar a productos y
subproductos que resultan compatibles con el medio ambiente.
En este documento se hablará sobre la Biolixiviación, con el fin de mostrar los
resultados obtenidos en un análisis sobre la minería de Calcopirita (CuFeS2) para
obtener cobre utilizando el método de contacto con microorganismos mesófilos
como la Acidithiobacillus Ferroxidans y termófilos con la Sulfobacillus Acidophilus,
en una disolución a 30 y 45 ºC, desarrollado por la Facultad de Ciencias de la
Universidad de Chile.
PROBLEMA
¿Es la Biolixiviación un proceso que permite recuperar un alto porcentaje de Cobre
desde menas de Calcopirita, al brindar las condiciones adecuadas para el desarrollo
de los microorganismos, condiciones como medios ácidos y generación de calor por
las reacciones de oxidación?
HIPÓTESIS
1. La disolución de Calcopirita genera un calor de reacción que permite elevar la
temperatura del medio donde se lleva a cabo la biolixiviación, por lo que se
considera que los microorganismos termófilos moderados (Sulfobacillus
Acidophilus) se desarrollan mejor y permiten un porcentaje mayor de
recuperación de cobre en comparación con los microorganismos mesófilos
(Acidithiobacillus Ferroxidans) utilizados en el proceso.
2. El ácido sulfúrico disminuye las precipitaciones del hidróxido de hierro al
aumentar el pH del medio de cultivo.
OBJETIVO GENERAL
Estudiar la biolixiviación como método de extracción del Cu en la minería
de Calcopirita a través de la adherencia de dos microorganismos llamados S.
Acidophilus y A. Ferroxidans y el cambio en las precipitaciones de hidróxido de
hierro al agregar ácido sulfúrico al medio de cultivo.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Analizar el porcentaje de adherencia con el mineral de los dos microorganismos
utilizados para verificar que el método de contacto es el adecuado.
• Determinar cuál de los dos microorganismos utilizados permite mayor porcentaje
de recuperación de cobre
• Investigar cómo afecta la adición de ácido sulfúrico el pH y las precipitaciones
de hidróxido de hierro en el cultivo
METODOLOGÍA
• MICROORGANISMOS
Para el desarrollo del experimento se utilizaron dos cultivos de microrganismos: uno
de bacterias mesófilas moderadas Acidithiobacillus Ferroxidans cepa ATCC 19859
y otro de bacterias termófilas moderadas Sulfobacillus Acidophilus cepa DSMZ
10332
• DISEÑO DEL EXPERIMENTO
El experimento con la Acidithiobacillus Ferroxidans se desarrolló por duplicado en
14 matraces estériles de 250 ml, cada uno con 0.5 g de calcopirita con un porcentaje
de cobre de 29.94% (extraído por CODELCO, Chile) y 100 ml de medio de cultivo,
además se agregaron 2 g/L de Fe (II) como sustrato de hierro II. Los frascos fueron
incubados y mantenidos en un shaker a 30 ºC con agitación de 100 rpm.
El experimento con Sulfobacillus Acidophilus se desarrolló también por duplicado y
en 14 matraces con la misma cantidad de calcopirita, Fe (II) y medio de cultivo que
en el experimento con Acidithiobacillus Ferroxidans , pero se mantuvo en el shaker
a 45 ºC con la agitación de 100 rpm.
Los frascos fueron monitoreados dos veces por semana durante cuatro semanas
obteniéndose 8 muestreos, en estos monitoreos se realizaba la medición de pH, Fe
(II) y cobre en la solución, además se retira un matraz y su duplicado para cuantificar
los precipitados de hierro y hacer el análisis de la población bacteriana en solución
y en el mineral por medio de la técnica de tinción con DAPI.
1. Determinación de la adherencia de los microorganismos al mineral
Para este proceso se utilizan los siguientes materiales y equipos:

• Concentrado de calcopirita
• Inóculo de bacterias
• Cámara de recuento de células Petroff-Hausser
• Microscopio de contraste de fases, marca Nikon modelo Labaphot
Se realiza el experimento utilizando un matraz de 50 ml con 0.25 g de calcopirita,
un volumen de 25 ml de medio de cultivo y un inóculo de bacterias.
Se determinó la concentración inicial de bacterias en la solución con el mineral
concentrado y luego se llevo el matraz a un agitador de 30 y 45 ºC para los
microorganismos mesófilos y termófilos moderados, respectivamente, y ahí se
mantuvieron hasta el final de la experiencia.
Para realizar el conteo de las bacterias se extrajeron 8 ml de la solución y se
cargaron en una cámara de petroff-Hausser donde posteriormente se contaron los
microorganismos con un microscopio de contraste de fases, este proceso se realizo
en el momento inicial del contacto con el mineral, cada 15 minutos hasta completar
60 minutos y finalmente cada 30 minutos hasta completar 120 minutos
2. Determinación del cobre extraído
El cobre en la solución se determina con la técnica de absorción atómica, lo cual se
realiza con el espectrofotómetro de absorción atómica 1100B Perkin-Elmer.
3. Determinación del Fe (II)
Los materiales y equipos necesarios son:
• Espectrofotómetro UV marca Agilen
• Fluoruro de sodio
• Hidroxilamina
• O-Fenantrolina

✓ Cuantificación del Fe (II) en la solución

1. Tomar 0.1 ml de solución

2. Agregar 0.4 ml de solución de Fenantrolina y agitar
3. Agregar 2 ml de agua destilada y agitar
4. Leer la absorbancia a 510 nm.

4. Determinación del Fe (III) precipitado

Los materiales y equipos necesarios son:
• Ácido clorhídrico (HCl) 5N
• Espectrofotómetro UV Marca Agilen
• Fluoruro de sodio
• Hidroxilamina
• O-Fenantrolina

✓ Cuantificación del Fe (III) en la solución

1. Tomar 2 ml de la solución
2. Aforar a 20 ml de HCl 5N
3. Incubar a 60 ºC por 30 minutos con agitación
4. Agregar 0.1 ml de hidroxilamina y agitar
5. Agregan 0.4 ml de solución de Fenantrolina y agitar
6. Agregar 1.9 ml de agua destilada, agitar
7. Leer la absorbancia a 510 nm.

5. Cuantificación de las bacterias por medio de la técnica de tinción DAPI

Los materiales y equipos utilizados en el proceso son:
• DAPI
• Filtro policarbonato, con tamaño de poro de 0.2 𝜇m
• Formaldehido al 37%
• Microscopio de epifluorescencia equipado con filtros de 365 nm y 546 nm
• Cámara fotográfica marca Nikon

✓ Traspaso de células desde una suspensión hacia un soporte

Las células suspendidas en la solución se traspasan a un soporte, que será el filtro
de policarbonato.
El proceso es el siguiente:
1. Realizar la fijación celular de 5 ml de suspensión con al menos 4 ∗ 106 células
con formaldehido al 4% por 1 hora en hielo
2. Filtrar en membrana de policarbonato
3. Teñir con 1 𝜇g/ml de DAPI
4. Colocar un cubreobjetos sobre el filtro y agregar una gota de aceite de cedro
5. Evaluar las secciones de filtro con un microscopio de epifluorescencia y filtro de
luz UV con una longitud de onda de 365 nm

✓ Traspaso de las células desde el mineral hacia el soporte

El proceso es el siguiente:
1. Lavar el mineral cinco veces con el medio de cultivo
2. Incubar el mineral en 5 ml de PBS con formaldehido al 4% por 1 hora en hielo
3. Teñir una porción del mineral con 1 𝜇g/ml de DAPI
4. Colocar un papel blanco bajo el portaobjetos para facilitar la observación de las
bacterias sobre el mineral
5. Traspasar el mineral a él portaobjetos
6. Colocar un cubreobjetos sobre el mineral y agregar una gota de aceite de cedro
7. Evaluar el mineral con un microscopio de epifluorescencia y filtro de luz UV con
una longitud de onda de 365 nm
ANALISIS MATEMATICOS DE LOS DATOS EXPERIMENTALES
1. Porcentaje de adherencia bacteriana sobre calcopirita
Para determinar este porcentaje después de cuantificadas las bacterias con la
cámara de petroff-Hausser en el momento inicial y el final (120 minutos) se aplica la
siguiente ecuación:
𝐵𝑎𝑐𝑡𝑒𝑟𝑖𝑎𝑠 𝑒𝑛 𝑒𝑙 𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 0 − 𝑏𝑎𝑐𝑡𝑒𝑟𝑖𝑎𝑠 𝑎 𝑙𝑜𝑠 120 𝑚𝑖𝑛
%𝐴𝑑ℎ𝑒𝑟𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 =
𝐵𝑎𝑐𝑡𝑒𝑟𝑖𝑎𝑠 𝑒𝑠 𝑒𝑙 𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 0
2. Porcentaje de cobre recuperado
Con los resultados obtenidos con la técnica de absorción atómica en la
determinación del cobre extraído en el experimento se aplica la siguiente ecuación:

𝐶𝑜𝑏𝑟𝑒 𝑎𝑙 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑥𝑝𝑒𝑟𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑜 ∗ 𝑉𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙

%𝐶𝑜𝑏𝑟𝑒 𝑟𝑒𝑐𝑢𝑝𝑒𝑟𝑎𝑑𝑜 = ∗ 100
𝑀𝑎𝑠𝑎 𝑑𝑒 𝐶𝑢 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙

Donde
Vtotal= 0.1 L (medio de cultivo)
Masa de Cu total= 0.1497 g

RESULTADOS ESPERADOS

En este trabajo mediante el empleo de bacterias S. Acidophilus a 45 ºC y A.

Ferroxidans a 30 ºC se busca mejorar el proceso de extracción de Cobre de la mena
de Calcopirita, por medio del método de biolixiviación conocido como método de
contacto, por lo tanto, se espera que mediante está técnica se obtenga alrededor
del 70% de adherencia de los microorganismos a la mena. Consiguiendo así un
mayor porcentaje de recuperación de Cobre, el cual se espera que sea mayor con
el microorganismo S. Acidophilus.

Además, se espera que haya precipitaciones de Hidróxidos de Hierro en la

biolixiviación y que estas afecten la adherencia de los microorganismos
disminuyendo así la efectividad del proceso, pero además se considera que con la
adición de ácido sulfúrico al medio de cultivo se disminuyen estas precipitaciones y
se recupere un mayor porcentaje de cobre.
 RESULTADOS OBTENIDOS

Primero se determina el porcentaje de adherencia de las dos cepas con una cámara
de conteo de Petroff-Hausser y un microscopio de contraste de fases, ese proceso
se realiza en el tiempo cero y cada 15 minutos hasta completar 60 minutos y luego
cada 30 minutos hasta completar 120 minutos.

Grafica 1: Porcentaje de adherencia de bacterias

A. Ferroxidans a 30 ºC. (Tomado de biolixiviación
de Calcopirita por SULFOBACILLUS
ACIDOPHILUS, Bravo Salinas Daniela Andrea,
pag.23)

Grafica 2: Porcentaje de adherencia de bacterias

S. Acidophilus a 45 º C. (Tomado de biolixiviación
de Calcopirita por SULFOBACILLUS
ACIDOPHILUS, Bravo Salinas Daniela Andrea,
pág. 24)

Posteriormente se realiza una comparación de la adherencia de las dos cepas

Grafica 3: Comparación de porcentaje de

adherencia de A. Ferroxidans y Acidophilus sobre
un concentrado de calcopirita (tomado de
biolixiviación de Calcopirita por SULFOBACILLUS
ACIDOPHILUS, Bravo Salinas Daniela Andrea,
pag.25)

El porcentaje de adherencia de las dos cepas es aproximadamente 86%, por lo cual,

el método de contacto es adecuado para realizar el proceso.

Se procede a realizar el estudio del Cobre extraído por cada una de estas bacterias.

Grafica 4. Recuperación de cobre por S. Acidophilus

y A. Ferroxidans (tomado de biolixiviación de
Calcopirita por SULFOBACILLUS ACIDOPHILUS,
Bravo Salinas Daniela Andrea, pag.26)
Con esta gráfica se determina el porcentaje de Cobre extraído para cada bacteria,
en la siguiente tabla se pueden observar los resultados obtenidos:
MICROORGANISMO % CU RECUPERADO
A. Ferroxidans 7.348
Control 30ºC 7.438
S. Acidophilus 11.30
Control 45 ºC 13.35
Tabla No.1 Porcentaje de recuperación de Cobre

Comprobando así que se presenta mayor recuperación de Cobre con la bacteria S.

Acidophilus, con un 3,95% de diferencia.
Considerando esto se procede a determinar las concentraciones de Hierro en las
dos cepas para determinar cómo afectan las precipitaciones de hidróxido de hierro
el proceso y analizar estas precipitaciones en el experimento de control a 45 °C, en
el cual se adiciono ácido sulfúrico al medio de cultivo.
Las concentraciones de Hierro en el cultivo de Sulfobacillus Acidophilus se observan
a continuación:

Grafica 5. Concentraciones de Hierro en las

bacterias S. Acidophilus (Tomado de biolixiviación de
Calcopirita por SULFOBACILLUS ACIDOPHILUS,
Bravo Salinas Daniela Andrea, pag42)

Las concentraciones de hierro de

Acidithiobacillus Ferroxidans se observan en la gráfica 6

Grafica 6. Concentraciones de Hierro en las

bacterias A. Ferroxidans (Tomado de biolixiviación de
Calcopirita por SULFOBACILLUS ACIDOPHILUS, Bravo
Salinas Daniela Andrea, pag.39).

Por su parte, las concentraciones de Hierro en el experimento de control se pueden

ver en la siguiente gráfica:

Grafica 7. Concentraciones de Hierro en el

experimento de control a 45 °C (Tomado de
biolixiviación de Calcopirita por SULFOBACILLUS
ACIDOPHILUS, Bravo Salinas Daniela Andrea, pag.43).
Analizando las gráficas 5 y 7 se observa que la cepa de S. Acidophilus presentan
mayores precipitaciones de Fe (III) que el experimento de cultivo, lo que será un
problema en el caso de la biolixiviación porque se creará una capa de Hidróxidos
de Hierro sobre el mineral que impedirá que se puede realizar adecuadamente el
proceso, en el caso del experimento de control, disminuyen las precipitaciones de
hidróxido de hierro lo que hace que aumente la recuperación de cobre hasta
13.35%, con lo que se concluye que efectivamente las precipitaciones de hidróxido
de hierro afectan el proceso.

Finalmente, se estudia el pH de estos dos cultivos.

Grafica 8. Variación del pH en Sulfobacillus

Acidophilus y el experimento de control. (Tomado de
biolixiviación de calcopirita por SULFOBACILLUS
ACIDOPHILUS, Bravo Salinas
Daniela Andrea, pag.41)

Recordando que el pH se relaciona con la concentración de iones H+, se puede

observar que en el experimento de control se tiene un pH menor porque la
concentración de estos iones en el medio de cultivo disminuye, esta disminución se
debe a que cuando se agrega ácido sulfúrico se presenta mayor consumo de iones
H+ por la disociación de estos cuando el ácido sulfúrico entra en contacto con el
medio de cultivo.
IDENTIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS

1. NOMBRE CIENTÍFICO: Sulfobacillus Acidophilus CEPA: DSMZ 10332

DESCRIPCIÓN MICROORGANISMO
Es un microrganismo perteneciente al reino de las bacterias, de clase bacilos y es
Grampositiva. En cuanto a las condiciones aptas para su crecimiento y desarrollo
se tiene:
a. Temperatura: es una bacteria termófila moderada, su temperatura óptima está
en el rango de 45 a 50 °C.
b. pH: es una bacteria acidófila, siendo su pH óptimo en 1.8 a 2.
c. Necesidad de gases: es una bacteria aeróbica.
d. Crecimiento:
• C. Autotrófico: puede utilizar glucosa y CO2.
• C. Quimiolitótrofo: utiliza como sustrato Hierro Ferroso y Azufre elemental.
• C. Mixotrófico.
¿POR QUÉ SU USO?
La bacteria Sulfobacillus Acidophilus DSMZ 10332 es usada en esta investigación
porque presenta un crecimiento Quimiolitótrofo, lo cual permite que pueda recuperar
el Cobre al consumir Hierro Ferroso y Azufre elemental de la Calcopirita. Además,
al ser una bacteria aeróbica, la convierte en una opción que permite llevar a cabo el
proceso de la biolixiviación ya que este es aeróbico.
2. NOMBRE CIENTÍFICO: Acidithiobacillus Ferroxidans CEPA: ATCC 19859
DESCRIPCIÓN MICROORGANISMO
Es un microorganismo que pertenece a las bacterias en el grupo de proteobacteria,
Gram negativa y con forma de bastón.
Condiciones para su crecimiento y desarrollo:
a. Temperatura: pertenece a la clase de mesófilas que manejan temperaturas
menores a 40°C.
b. pH: bacteria acidófila ya que su pH óptimo se encuentra entre 1.8 y 2.0.
c. Necesidad de gases: bacteria aeróbica.
d. Capaz de sobrevivir a altas concentraciones de metales pesado como el Hierro,
Cobre, Manganeso y Uranio.
e. Crecimiento:
Rutas metabólicas de Quimiolitótrofo.
Tiene habilidad para oxidar iones ferrosos en soluciones de Ácido Sulfúrico
obteniendo la energía necesaria para crecimiento y fijación de CO2.
¿POR QUÉ SU USO?
Esta bacteria es usada porque consume Hierro Ferroso y Azufre elemental,
permitiendo obtener Cobre de la Calcopirita, además es aeróbica por lo que se
puede usar en el proceso de biolixiviación.
PARAMETROS DEL BIOPROCESO
1. Velocidad de crecimiento
Para determinar la velocidad de crecimiento de los microorganismos se realiza el
estudio de las bacterias planctónicas en la solución lixiviante
• Acidithiobacillus Ferroxidans
✓ Bacterias planctónicas en la solución lixiviante

Grafica 9. Bacterias planctónicas en la solución

lixiviante de A. Ferroxidans (Tomado de biolixiviación
de calcopirita por SULFOBACILLUS ACIDOPHILUS, Bravo
Salinas Daniela Andrea, pag.45)
Se determina la velocidad de crecimiento máxima hasta las 432 horas, no se tiene
en cuenta los datos tomados a las 336 horas porque se desvía del comportamiento
mostrado durante el experimento

Velocidad de crecimiento
X
22
TIEMPO (Bacterias/ml) Ln X
y = 0,0026x + 20,569
100 1,00E+09 20,723 21,5 R² = 0,9311

Ln X
180 1,50E+09 21,128 21
260 1,80E+09 21,311
420 2,40E+09 21,598 20,5
0 100 200 300 400 500
Tiempo

Con lo cual se determina que la velocidad de crecimiento es de 0.0026 h-1

• Sulfobacillus Acidophilus

✓ Bacterias planctónicas en la solución lixiviante

Grafica 10. Bacterias planctónicas en la

solución lixiviante de S. Acidophilus
(Tomado de biolixiviación de calcopirita
por SULFOBACILLUS ACIDOPHILUS, Bravo
Salinas Daniela Andrea, pag.46)

Esta grafica muestra la evolución de las bacterias termófilas moderadas en la

solución lixiviante y se observa que no es posible hallar una velocidad de
crecimiento máxima porque no hubo crecimiento de estos microorganismos durante
el experimento.
2. Eficiencia
La eficiencia corresponde a la relación entre el producto que se pudo obtener con
respecto a la materia prima utilizada, considerando que el estudio se realiza con 0.5
g de calcopirita, lo cuales tienen un contenido de 29.94% de cobre, la eficiencia del
100% se obtendrá si se recuperan 0.1497 g de cobre., entonces la ecuación para
determinar la eficiencia es
𝑐𝑜𝑏𝑟𝑒 𝑟𝑒𝑐𝑢𝑝𝑒𝑟𝑎𝑑𝑜
𝐸𝑓𝑖𝑐𝑖𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 = ∗ 100
0.1497 𝑔 (𝐶𝑜𝑏𝑟𝑒 𝑎𝑙 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑥𝑝𝑒𝑟𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑜)
Realizando los cálculos para el cultivo de Acidithiobacillus Ferroxidans, Sulfobacillus
Acidophilus y para el experimento de control a 45 ºC, se obtiene los siguientes
resultados
MICROORGANISMO EFICIENCIA
A. Ferroxidans 7.348%
S. Acidophilus 11.30%
Control 45 ºC 13.35%

Se puede observar entonces que estos valores corresponden al porcentaje de cobre

recuperado que se calculó antes, además, se observa que la eficiencia del proceso
es 1.53 veces mayor con el microorganismo termófilo moderado (S. Acidophilus)
respecto al microorganismo mesófilo y 1.82 veces mayor en el experimento de
control con respecto a este microorganismo mesófilo.