DIAPO 10

Hola soy Anasofia y voy a continuar con

La cuantificación de fluorescencia relativa (o PCR de fluorescencia cuantitativa (QF-PCR)
es una técnica que se utiliza en una variedad de aplicaciones de análisis de fragmentos que
requiere comparaciones precisas de la altura de los picos en varias muestras. Las
aplicaciones que utilizan esta técnica incluyen la detección de pérdida de heterocigosidad
(LOH) mediante microsatélites
ahora veremos una Guía paso a paso para la cuantificación fluorescente relativa
PASO 1
AISLAR ADN

La extracción de ADN es un primer paso fundamental en el flujo de trabajo experimental de

secuenciación de ADN y análisis de fragmentos. La calidad general, la precisión y la
longitud de la secuencia de ADN leída pueden verse significativamente afectadas por las
características de la propia muestra y el método elegido para la extracción de ácidos
nucleicos. Los métodos ideales variarán según la fuente o el tipo de tejido, cómo se obtuvo
de su fuente y cómo se manipuló o almacenó la muestra antes de la extracción.
PASO 2
DISEÑAR PRIMER Y REALIZAR LA PCR
Amplificar los locus de microsatélites de interés mediante PCR utilizando un cebador
marcado con fluorescencia
locus: es una posición fija en un cromosoma
PASO 3
PREPARAR LA MUESTRA PARA ANÁLISIS
Agregue una alícuota del producto de PCR al estándar de tamaño y la mezcla de
formamida; se desnaturalizan por calor y procedemos a la electroforesis.

PASO 4
REALIZAR ELECTROFORESIS CAPILAR
Durante la electroforesis capilar, los productos de la PCR se inyectan electro cinéticamente
en capilares llenos de polímero. Se aplica alto voltaje para que los fragmentos de ADN
fluorescentes se separen por tamaño y sean detectados por la camara

PASO 5
ANALIZAR DATOS
finalmente se analiza el tamaño y la altura de los loci de microsatélites para poder llegar a
un diagnóstico