CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES COMO FUENTE PERPETUA PARA LA PRODUCCIÓN DE

COMPUESTOS BIOACTIVOS DE IMPORTANCIA INDUSTRIAL.

Resumen
Las plantas se han utilizado en todo el mundo por sus poderes medicinales desde la antigüedad. Las
propiedades farmacológicas de las plantas se basan en sus componentes fitoquímicos, especialmente los
metabolitos secundarios, que son fuentes sobresalientes de compuestos bioactivos de valor agregado. Los
metabolitos secundarios tienen una composición química compleja y se producen en respuesta a diversas
formas de estrés para realizar diferentes tareas fisiológicas en las plantas. Se utilizan en industrias
farmacéuticas, cosméticos, suplementos dietéticos, fragancias, sabores, colorantes, etc. El uso extendido de
estos metabolitos en diversos sectores industriales ha iniciado la necesidad de centrar la investigación en
aumentar la producción mediante el empleo de técnicas de cultivo de tejidos vegetales (PTC) y optimizando
su producción a gran escala utilizando biorreactores. Las técnicas de PTC que son independientes de las
condiciones climáticas y geográficas proporcionarán una producción incesante, sostenible, económica y viable
de metabolitos secundarios. Este artículo de revisión pretende evaluar las ventajas del uso del cultivo de
tejidos vegetales, la distribución de metabolitos secundarios importantes en familias de plantas, las estrategias
involucradas para la producción óptima de metabolitos y la importancia industrial de los metabolitos
secundarios seleccionados.
Introducción
Las plantas siempre han jugado un papel destacado en las medicinas tradicionales y modernas. Casi el 80%
de la población mundial depende de componentes derivados de plantas para su salud y bienestar cruciales
[1,2]. Son ricos en fitoquímicos que tienen la capacidad milagrosa de curar enfermedades y se pueden utilizar
en numerosos sectores como el farmacéutico, cosmético, nutracéutico, etc. [3]. Están ganando más atención
entre la creciente población debido a su asequibilidad, accesibilidad, eficacia ecológica y prometedora
comparable a los agentes de drogas sintéticas de alto costo. Por lo tanto, la atención preliminar de la
investigación hasta la fecha sobre plantas medicinales se ha centrado en las áreas de farmacognosia,
fitoquímica y horticultura. La creciente demanda de tales productos ha provocado la necesidad de encontrar
estrategias para mejorar su producción sin perturbar a su población natural [4].
Las plantas se consideran seguras para los humanos. Se usan para tratar y prevenir dolencias y
enfermedades específicas en humanos desde tiempos inmemoriales. Por lo tanto, las plantas que poseen
metabolitos terapéuticos con efectos farmacológicos beneficiosos se denominan plantas medicinales [5]. Las
propiedades medicinales de estas plantas se deben a la existencia del grupo heterogéneo de productos
metabólicos naturales llamados metabolitos secundarios que son divergentes en su estructura y vías
metabólicas. Estos metabolitos no son esenciales para el crecimiento y desarrollo de las plantas [6], pero
juegan muchos papeles importantes como moléculas de señalización y como agentes de defensa [7]. Se
consideran productos económicamente importantes, ya que se usan en medicamentos, sabores, fragancias,
insecticidas, colorantes, etc. [8]. India es un reservorio de numerosas plantas medicinales de alto valor y es
una de las principales plantas medicinales productoras de este país asiático.
Se producen al desviar las rutas generadoras de energía en las rutas metabólicas como la fotosíntesis, la
glucólisis, el ciclo de Krebs a intermedios biosintéticos. Se clasifican en diferentes categorías en función de su
biosíntesis, estructuras y funciones. Se biosintetizan a partir de acetil coenzima A, ácido mevalónico, ácido
shikimico, desoxililulosa 5-fosfato o vías combinadas [9]. Se clasifican en terpenoides, esteroides, alcaloides,
saponinas, terpenos, lípidos y cofactores enzimáticos [10,11]. Las diferentes clases de metabolitos
secundarios producidos por callos in vitro y cultivos en suspensión celular se han tabulado en la Tabla 1.
El cultivo de tejidos vegetales (PTC) debido a sus diversos beneficios se ha utilizado como una plataforma
importante para la producción de metabolitos secundarios [12,13]. Por lo tanto, el artículo de revisión tiene
como objetivo enfocar los méritos del uso de técnicas de PTC para la producción de metabolitos secundarios,
así como la distribución de diferentes clases de metabolitos secundarios de plantas en familias de plantas,
usos medicinales importantes y estrategias para mejorar su producción para aumentar el rendimiento. En la
Tabla 2 se resumen pocas plantas medicinales importantes junto con sus metabolitos secundarios de
importancia comercial.
Tabla 1. Clases de metabolitos secundarios producidos por el cultivo de tejidos vegetales.

2. Cultivo de tejidos vegetales y producción de metabolitos secundarios.

Los consumidores son cada vez más conscientes sobre las opciones de estilo de vida que han aumentado la
demanda de productos naturales y orgánicos. El interés en las plantas medicinales aumentó en las últimas
dos décadas debido a sus beneficios para la salud en términos de seguridad y costo en comparación con las
drogas sintéticas [14-16]. Recientemente, la industria de la medicina herbal es una de las industrias
emergentes más rápidas en todo el mundo. El comercio mundial de plantas medicinales y sus metabolitos en
el año 2000 fue de US $ 60 mil millones, con una tasa de crecimiento anual promedio del 7% y se prevé que
alcance los US $ 5 billones para 2050 [17]. En el año 2002, se informó que 4 mil millones de personas de la
población mundial utilizaron hierbas medicinales para su atención de salud crucial [18]. Los metabolitos de las
plantas pueden aislarse de las plantas cultivadas naturalmente, pero su producción comercial es limitada
debido a limitaciones ambientales y regionales [13]. Los métodos convencionales requieren mucho tiempo, ya
que la planta tarda varios años en crecer y alcanzar el punto para la producción deseada de metabolito. Un
método alternativo para superar esta situación es utilizar técnicas de PTC para la producción de metabolitos
secundarios de manera eficiente dentro de una corta duración para la aplicación comercial [12,19]. Aprueba la
propagación masiva de plantas en condiciones ambientales controladas sin restricciones estacionales [20,21].
2.1. Tipos de sistemas in vitro para la producción de metabolitos.
La producción in vitro de metabolitos secundarios es un procedimiento de dos etapas: (i) Agregación de
biomasa, y (ii) Síntesis de metabolitos secundarios [13,20]. Se informó que las estructuras organizadas como
brotes y raíces, callos, suspensión celular, etc. se emplearon para la producción de metabolitos secundarios
[8,22].
En condiciones in vitro, las células vegetales inducidas forman una masa no organizada de células conocida
como callo. Para la inducción de callos, se usa comúnmente una gran cantidad de concentraciones de auxina
o amalgamación de auxina y citoquinina. Los cultivos de callos han ganado potencial comercial para la
fabricación de metabolitos secundarios de importancia terapéutica [23,24]. Se ha informado que el cultivo de
callos es más confiable que la recolección de materiales vegetales de la naturaleza para extraer los
metabolitos terapéuticos [25]. Se pueden usar para la generación de múltiples clones de plantas usando
micropropagación, y también se pueden usar para desarrollar cultivos en suspensión de células individuales
empleando fermentación discontinua o continua para producir los metabolitos secundarios preferidos [26,27].
Posteriormente, los cultivos de callos y suspensiones tienen la capacidad de sintetizar metabolitos
secundarios y permite la manipulación de las vías de biosíntesis de metabolitos secundarios. Se ha informado
que los cultivos de callos se utilizan para la producción de alcaloides de tropano, α-tocoferol, ajmalina,
serpentina, reserpina, flavonoides, escopolamina, paclitax-el, estilbeno, resveratrol y antocianinas [25].
Se han informado cultivos de órganos diferenciados como brotes o raíces para la producción de metabolitos y
pueden representar un perfil de metabolitos similar a las plantas nativas [28]. Los cultivos de raíces peludas
de plantas son el método alternativo más auspicioso para el desarrollo de compuestos sintetizados en raíces
de plantas [29]. La transformación arbitrada de Agrobacterium rhizogenes se ha utilizado para desencadenar
raíces vellosas en las plantas, lo que ha permitido la construcción in vitro de metabolitos secundarios
sintetizados en las raíces de las plantas [30,31]. Han establecido un esquema biológico beneficioso para
estudiar la biosíntesis de varios compuestos bioactivos como la nicotina y los alcaloides de tropano y [32,33],
ginsenósidos [34], antraquinonas [35] y artemisinina [36]. La ventaja de utilizar raíces peludas para el
desarrollo de compuestos radica en su alta productividad, constancia y competencia [37-39].
3. Estrategias de producción de metabolitos secundarios.
La producción secundaria de metabolitos es una técnica imprescindible que tiene una inmensa aplicación
comercial. La producción constante y los altos rendimientos son los factores importantes en el desarrollo
comercial de los metabolitos secundarios [40,41]. Los enfoques de ingeniería metabólicos y tradicionales se
han utilizado para mejorar la construcción y los rendimientos de metabolitos secundarios [42].
3.1. Estrategias tradicionales
Los metabolitos secundarios se producen como resultado del metabolismo primario. Depende de las
velocidades a las que los sustratos de las rutas metabólicas primarias se redirigen a las rutas biosintéticas
secundarias. Su síntesis depende de factores bióticos y abióticos como el crecimiento y la fisiología, la
temperatura, la humedad, la intensidad de la luz, etc. La productividad del metabolito de los cultivos in vitro
depende de la composición del medio de cultivo, el pH, la densidad del inóculo, el entorno del cultivo como la
temperatura, la densidad de la luz, etc. agitación, aireación, etc. [21,42]. Por lo tanto, para mejorar el
crecimiento y la productividad del metabolito, estos factores deben optimizarse. La elección de medios de
cultivo adecuados juega un papel vital en la fabricación de metabolitos secundarios. Los componentes del
medio de cultivo como macro y micronutrientes, vitaminas, carbohidratos (azúcares) y aminoácidos, y
reguladores del desarrollo de las plantas, por ejemplo, citoquininas, auxinas, giberelinas, jasmonatos y
salicilatos, influyen en la producción de metabolitos [39].
Los enfoques eficaces para mejorar la producción biotecnológica de metabolitos secundarios están utilizando
inductores que desencadenan la ruta metabólica secundaria para estimular la defensa de la planta para
proteger la célula vegetal [43]. Los inductores pueden dividirse en función de su fuente, es decir, bióticos y
abióticos. Los inductores abióticos son componentes de fuentes no biológicas como la mayoría de los
compuestos inorgánicos, por ejemplo, sales de metales pesados, iones metálicos, óxidos metálicos, etc.
[44,45]. Se ha informado que las tensiones físicas como el choque frío, la radiación UV, la osmótica, el estrés
hídrico, etc. inducen actividad enzimática y metabolismo secundario [46].
Los inductores bióticos se originan a partir de una fuente biológica y pueden ser exógenos o endógenos. Los
inductores bióticos exógenos son componentes de las paredes celulares microbianas como el quitosano, la
quitina o los componentes de la pared celular de las plantas como los polisacáridos u oligosacáridos. Se
informa que los polisacáridos u oligosacáridos son las moléculas de señalización premeditadas más lejanas
para las rutas de activación porque induce respuestas de defensa de la planta similares a la invasión de
patógenos [47]. Los inductores bióticos endógenos son polisacáridos (liberados por el deterioro de la pared
celular de la planta debido a patógenos), moléculas intracelulares o proteínas como el ácido salicílico o el
jasmonato de metilo producidos por la planta en reacción a diversos tipos de estrés o invasión patogénica
[45]. Los inductores bióticos son percibidos por receptores particulares de la membrana celular, y luego
transfieren el estímulo a la célula mediante la transducción de señales que conduce al desarrollo de
fitoalexinas [43].
Se ha informado que las fitohormonas como el ácido salicílico y el jasmonato de metilo producidas en plantas
en respuesta al estrés o la invasión de patógenos son los compuestos de señalización en la provocación que
conducen a una producción mejorada de metabolitos secundarios como flavonoides, alcaloides, terpenoides y
fenilpropanoides [48-52]. Ellos inician rutas de transducción de señales dirigidas a señales secundarias en el
núcleo celular que a su vez conducen a la estimulación transcripcional de varios genes, lo que induce la
síntesis de una serie de proteínas involucradas en la defensa o resistencia y metabolitos secundarios [53,54].
Se informó que muchas vías metabólicas secundarias fueron desencadenadas por microbios (hongos,
bacterias, virus, levaduras, etc.). El uso de extractos bacterianos, fúngicos y de levadura para inducir
metabolitos secundarios ha estado llamando la atención debido a la mejora del rendimiento y la calidad de los
metabolitos. El método más efectivo para aumentar la productividad de los metabolitos secundarios en PTC
es el uso de inductores de hongos [55]. Induce la expresión de genes vegetales específicos, activando rutas
metabólicas secundarias, aumentando así los metabolitos secundarios [56]. Induce fitoalexinas de plantas en
el curso de progresiones fisiológicas de resistencia a enfermedades de plantas [57]. Fusarium, Pythium,
levadura, Aspergillus, PenicilIium, especies de Trichoderma, etc. se extraen con frecuencia como inductores
de hongos y se usan para inducir metabolitos secundarios en plantas medicinales [58,59].
Aspergillus niger y Saccharomyces cerevisiae se utilizaron extractos sin células como inductores de hongos
para mejorar la producción de ácido gimnémico a partir de cultivos en suspensión celular de Gymnema
sylvestre [60]. Se informó que Aspergills flavus aumenta la producción de alcaloides indol terpenoides en
Catharanthus roseus [59]. Los inductores bacterianos también se utilizan para mejorar la producción de
metabolitos secundarios. Las cepas de bacterias Gram-positivas y Gram-negativas se utilizaron como
inductores de la biosíntesis de alcaloides de tropano en cultivos adventicios de raíces pilosas de Scopolia
parviflora [61]. Kang y col. [62] registraron la producción mejorada de biosíntesis de ginkgolida y bilobalida en
cultivos de suspensión de células de Gingko biloba utilizando extracto de Staphylococcus aureus. El
tratamiento con Rhizobacterium elicitor conduce a una expansión lenta de hipericina y pseudohipericina en
plántulas de Hypericum perforatum [63]. La fitotoxina coronatina producida por Pseudomonas syringae ha
recibido una atención considerable como inductor para mejorar la producción de metabolitos secundarios. Se
informó que la producción de taxano aumentaba por la acumulación de coronatina en cultivos de células de
Taxus [64]. Del mismo modo, la coronatina desencadenó la síntesis de viniferinas en el cultivo de suspensión
celular de Vitis vinifera [65]. Los descriptores bacterianos de Rhizobium leguminosarum y Agrobacterium
tumefaciens se describieron para aumentar la producción de ácido glicirricico a partir del cultivo de raíces de
Taverniera cuneifolia [66].
3.2. Ingeniería metabólica
La ingeniería metabólica es la modificación de las rutas metabólicas en un organismo utilizando herramientas
biológicas modernas como la genómica, la proteómica, la metabolómica, etc. para producir metabolitos de
importancia comercial [67]. Por lo tanto, permite la manipulación de vías bioquímicas endógenas. Implica la
sobreexpresión o la baja regulación de las vías metabólicas al desviar los precursores, enzimas y proteínas
reguladoras comunes con la ayuda de la tecnología del ADN recombinante. Las plantas contienen numerosas
vías metabólicas responsables de la biosíntesis de metabolitos complejos. Estas vías pueden reconstituirse en
huéspedes heterólogos para la sobreproducción y el aislamiento de metabolitos de bragas económicamente
importantes.

Las rutas biosintéticas para la producción de metabolas secundarias en las plantas surgen de las rutas
shikimato, policétido y terpenoide. La vía shikimate está altamente conservada y se informa que es la principal
fuente de fenilpropanoides y compuestos aromáticos [68]. Se considera como una ruta metabólica esencial en
las plantas en relación con el flujo de carbono, ya que se espera que más del 30% del carbono fijo se fije a
través de. esta vía [69]. Los metabolitos fenólicos secundarios en las plantas se derivan de la fenilalanina a
través de. biosíntesis shikimate. El p-coumaroyl-CoA intermedio forma el origen de metabolitos como
cumarinas, flavonoides, lignanos, estilbenoides, catequinas, vainillina, ácido gálico, betalaínas, etc.

La vía terpenoide también se conoce como vía isoprenoide. La biosíntesis de terpenoides en plantas usa dos
vías autónomas, es decir, la vía del ácido mevalónico (MVA) y la vía del metil-D-eritritol (MEP). La vía MVA
sirve a los precursores para la síntesis de brasinoesteroides, sesquiterpenoides, fitoesteroles, triterpenoides y
polifrenols. La vía MEP se utiliza para la biosíntesis de monoterpenoides, diterpenoides, hemiterpenoides,
tocoferoles, plastoquinonas, reguladores del crecimiento de las plantas como las citoquininas, giberelinas, etc.
Los terpenoides representan más de un tercio de los metabolitos secundarios de la planta y ejecutan varias
funciones en la planta. Por ejemplo, los terpenoides volátiles (monoterpenoides) y los carotenoides se usan
como atrayentes polinizadores, las fitoalexinas (sesquiterpeniodos, diterpenoides y triterpenos) se usan como
agentes antimicrobianos, antiempañantes y protección contra el estrés abiótico, los monoterpenos y
sesquiterpenos se usan como resistencia contra varios depredadores (kilos). Además, actúa como fuente de
formación de naftoquinonas, cannabinoides, furanocumarinas, antraqui-nonas y alcaloides indol terpenoides
[70].
La ruta del policétido desempeña un papel vital en la biosíntesis de ácidos grasos. Se derivan de acetil CoA o
malonil CoA. Los metabolitos secundarios establecidos a partir de la ruta del policétido incluyen acetogeninas,
jasmonatos, ácido 6-metilsalicílico, plumbagin, coniina y antraquinonas [70].
3.2.1. Vías de regulación ascendente
Las proteínas que se unen a sitios específicos, es decir, la región promotora o potenciadora del ADN para
controlar la transcripción o expresión de genes diana se denominan factores de transcripción. Decodifican
información en el genoma y modulan la tasa de transcripción [71,72]. Tienen dos regiones funcionales, a
saber, un dominio activador y un dominio de unión al ADN. El dominio de unión al ADN posee aminoácidos
que identifican una base de ADN específica en el elemento regulador, mientras que el dominio activador
posee sitios de unión llamados funciones de activación y dominio de trans-activación para otras proteínas
(correguladores de la transcripción).
Se han identificado varios factores de transcripción para la producción secundaria de metabolitos. Se ha
descrito que los factores de transcripción MYB son los controladores de varias rutas biosintéticas en varias
especies de plantas. Factores de transcripción como R2R3-MYB, repetición WD (repetición beta-transducina),
genes elementales helix-loop-helix (genes bHLH), translocador de nucleótidos de adenina (o translocase de
nucleótidos de adenina o Ant) tipo 1, factor de respuesta de APETALA2 / etileno (AP2 / ERF), WRKY, NAC,
SQUAMOSA Promotor Binding Protein-Like (SPL) se ha informado que controlan la acumulación de
antocianinas y flavonoides en especies de plantas como Arabidopsis, Petunia hybrida, Zea mays, Solanum
lycopersicum, Ipomoea batatas, etc. [73 –75].
Las proteínas de la familia MYB están involucradas en la activación de la vía del fenilpropanoide que regula la
producción de antocianinas. La expresión del factor de transcripción MYB12 en el desarrollo de plántulas de
Arabidopsis thaliana resultó en un aumento en el contenido total de flavanoides [73]. En Arabidopsis, los
genes biosintéticos de antocianina se activan mediante la formación del complejo de regulación transcripcional
cuando las proteínas MYB se comunican con las proteínas bHLH en la existencia de una repetición WD40
[76]. En C. roseus, se ha reconocido que tres elementos de transcripción ORCA1, ORCA2 y ORCA3 están
implicados en la expresión de la biosíntesis de alcaloide indol terpenoide. La sobreexpresión de ORCA2 u
ORCA3 en la suspensión de células de C. roseus / raíces peludas impulsó la síntesis de metabolitos como la
ajmalicina, la serpentina, la triptamina y la catharantina [77]. La adición de catharanthine, vindoline,
strictosidine y ajmalicine aumentó significativamente cuando ORCA3 se sobreexpresó [78].
En Artemisia annua, dos proteínas del factor de transcripción sensible al ácido jasmónico AP2 / ERF (AaERF1
y AaERF2) se unen a los genes del promotor que cataliza la síntesis de artemisinina. Se notificó una
acumulación mejorada de artemisinina y ácidos artemisínicos cuando se sobreexpresaron las proteínas
AaERF1 o AaERF2 [79]. El factor de transcripción AaWRKY1 se une para activar el promotor del gen
sesquiter-pene sintasa para la biosíntesis de artemisinina en Artemisia annua [80]. El factor de transcripción
GaWRKY1 se contrae con el promotor de los genes (+) - d-cadineno sintasa y regula la biosíntesis de gosipol
[81]. Una de las mayores familias de factores de transcripción en plantas es el dominio NAC que contiene
proteínas. Estas proteínas controlan numerosas vías de desarrollo y se producen en respuesta a diversos
estreses bióticos y abióticos. En Arabidopsis, se informó que el regulador de camalexina era una proteína
NAC ANAC042. El factor desafiante en la regulación de las vías es encontrar un factor de transcripción que
coincida con genes precisos [82]. Una alternativa a dicho desafío es producir factores de transcripción
sintéticos, que se dirigen a más de un solo gen de importancia [83].
3.2.2. Redirigir precursores comunes
Las enzimas compiten por precursores en una vía biosintética. La producción de metabolitos puede
incrementarse alterando el precursor hacia la biosíntesis de los metabolitos diana obstaculizando la vía
competitiva o induciendo la sobreexpresión de genes en la vía precursora [70]. En el tomate, la producción de
taxadieno mutante puede potenciarse aumentando la expresión del gen que descifra la taxadieno sintasa, que
es un precursor en la ruta de los carotenoides. Jadaun y col. [84] informaron que la sobreexpresión de 1-
desoxi-d-xilulosa 5-fosfato sintasa (GrDXS) condujo a una mayor acumulación de metabolitos secundarios
terpenoidales en Pelargonium spp. (aceite esencial) y Withania somnifera (withanolides). En menta y lavanda,
la sobreexpresión de genes en las vías precursoras condujo a un aumento en el contenido de monoterpeno en
los aceites esenciales [85,86]. La sobreexpresión directa de genes relacionados con la vía alcaloide fue
efectiva para aumentar la acumulación de alcaloides en C. roseus [87].
3.2.3. Dirigir metabolitos a compartimentos celulares específicos
Las enzimas y metabolitos de las rutas metabólicas secundarias están confinadas en el citoplasma y los
orgánulos como los peroxisomas, vesículas, vacuolas, etc. Las enzimas para las rutas metabólicas
secundarias se coordinan en complejos enzimáticos multifuncionales asociados con los efectos de
canalización del sustrato donde el gasto metabólico de una enzima actúa como sustrato. para la enzima
posterior [88,89].
Se informa que las secuencias de aminoácidos específicas apuntan y retienen proteínas a orgánulos
particulares [90]. En C. roseus, las enzimas asociadas con la biosíntesis de alcaloides indol monoterpenoides
se encuentran en las raíces, hojas, flores, brotes, etc., mientras que el metabolito se acumula en células
especiales llamadas idioblastos y laticíferos. Las enzimas y los metabolitos producidos tienen que ser
transportados no a una célula sino entre células que pertenecen a diferentes tipos de tejido [91]. Para proteger
a las células de la auto-toxicidad, las células compartimentan las reacciones que sintetizan metabo-litos
nocivos. El alcaloide berberina sintetizada por Coptis japonica y la nicotina en el tabaco se secuestran en
vacuolas [92,93]. Diferentes enzimas como la chalcona sintasa, la chalcona isomerasa y la 4-reductasa de
dihidroflavonol colaboran juntas para la tesis de biosina flavonoide en Arabidopsis thaliana [94]. Zhang et al
[95] informaron el transporte de antocianinas desde los pétalos a la vacuola central por vesículas
intracelulares o compartimentos pre-vacuolares en Eustoma grandiflorum. La enzima dimérica multifuncional
glutatión S-transferasas y un flavonoide vacuolar / H + -portador se informa que median el transporte vacuolar
de antocianina y proantocianidina en Arabidopsis thaliana [96].
3.2.4. Vías reguladoras hacia abajo (silenciamiento)
La síntesis de algunos metabolitos puede disminuirse reduciendo el nivel de enzima, aumentando el
catabolismo y el flujo de carbono en vías competitivas [70]. Los metabolitos no deseados producidos pueden
verse impedidos al ocultar genes que regulan al alza la vía metabólica o aumentan su catabolismo [97]. Para
eliminar gradualmente los metabolitos indeseables, se pueden utilizar las tecnologías modernas de ADN r
como el ARN antisentido, la interferencia de ARN (ARNi). Según se informa, la interferencia de ARN se ha
utilizado para manipular metabolitos secundarios de plantas como fenilpropanoides, alcaloides y terpenoides.
La manipulación de la vía del fenilpropanoide usando ARNi ha llevado a una coloración abundante en flores,
pigmento bajo en la capa de semillas, etc. y carotenoides en tomate, regulan la fragancia en flores de petunia,
etc. [98].
4. Nanopartículas para metabolitos secundarios
Las partículas dentro del rango de tamaño de 1 a 100 nm se conocen como nanopartículas. Estos se han
utilizado en el cultivo de tejidos vegetales para promover la eficiencia de la germinación, impulsar el
crecimiento de las plantas, mejorar los metabolitos bioactivos, etc. [99,100]. Se ha informado que los efectos
de algunas nanopartículas importantes de óxido metálico como el óxido de titanio, óxido de zinc, óxido de
hierro y óxido de cobre mejoran la producción de metabolitos secundarios en las plantas [101,102] Las
naopartículas de óxido de titanio aumentaron claramente el ácido gálico, ácido clorogénico, ácido o-cumarico,
tánico ácido y ácido cinámico en callos embrionarios de Cicer arietinum [102]. El tratamiento con
nanopartículas de plata aumentó la concentración del contenido de artemisinina en los cultivos de raíces
peludas de Artemisia annua L. [57], la concentración de diosgenina en la alholva [103], la regulación
ascendente de los genes biosintéticos para la producción de antocianinas y flavonoides en Arabidopsis
thaliana, etc. [104]. Las nanopartículas de óxido de cadmio dieron como resultado una mayor concentración
de ácido ferúlico e isovitexina en plantas de cebada [105].
5. Plantas medicinales importantes y sus metabolitos secundarios.
La investigación del cultivo de tejidos vegetales ha dado como resultado la producción de diversas moléculas
bioactivas en grandes cantidades para la terapéutica. Los metabolitos secundarios como alcaloides,
terpenoides, esteroides, saponinas, fenólicos, flavonoides, aminoácidos, etc. se usan en muchas
preparaciones farmacéuticas [106]. Pocas plantas medicinales importantes y sus metabolitos importantes se
enumeran a continuación.
5.1. Catharanthus roseus
Catharanthus roseus (L.) G. Don (Apocynaceae) es una planta medicinal importante debido a la presencia de
metabolitos como los alcaloides indóleos monoternelo o los alcaloides indol terpenoides [107]. Se utiliza en la
medicina tradicional para controlar el cáncer, la diabetes, la hipertensión, los agentes antimicrobianos, etc. Se
informó que el contenido de alcaloides era más alto en la etapa de floración [108]. Los alcaloides principales
en la raíz son ajmalicina, serpentina y reserpina. Vincolidina, vincolina, vindolindina, catindina, vinblastina,
catharanthamina, vinblastina, catharicina, catharina, leurosinona, catindina, cavincidina, apparicina, β-
carbolina, iochrovicina, rosicina, serpentina, etc. son los alcaloides principales informados en las hojas. Los
alcaloides coronaridina, vindolidina, vindolina, catharantina, ajmalicina, perivina, tetrahidroalsto-nueve,
tabersonina, carosina, catharicina, etc. dominan las flores [109,110]. Catharanthus longifolius, Catharanthus
tricho-phyllus y Catharanthus lanceus poseen alcaloides de tipo vindolina [111].
También produce una gama de compuestos fenólicos como el ácido 2,3-dihidroxibenzoico, ácido salicílico;
glucósido del ácido salicílico, ácido benzoico, ácido gálico, glucovanilina, ácido vanílico, ácido 2,5-
dihidroxibenzoico, ácido glucósido del ácido 2,5-dihidroxibenzoico, etc. [112,113]. Los fenilpropanoides como
flavonoides, antocianinas, derivados del ácido cinámico, también son reportado en Catharanthus [114].
Estos fitoquímicos están presentes en cantidades muy bajas en la planta, por lo tanto, para mejorar la
producción fitoquímica se emplean métodos in vitro [115]. Los métodos de cultivo in vitro como el cultivo de
callos, la suspensión celular, la raíz pilosa, etc., se han descrito como estrategias avanzadas sobre los
métodos de mejoramiento convencionales para la producción de alcaloides terapéuticamente importantes
[116,117].
Los cultivos de raíces vellosas de C. roseus transformadas por Agrobacterium rhizogenes se han empleado
eficazmente para la producción de alcaloides indol de catharantina, tabersonina, lochnericina, horhammericina
[118]. El alcaloide ajmalicina y serpentina se ha obtenido de callos, suspensiones celulares, brotes, raíces
pilosas; alstonina de calli; antirrina y catindina en suspensiones celulares; acuamicina y lochnericina en callos
y suspensiones; horhammericina y vindolina en suspensiones y brotes; tabersonine en callos y suspensiones;
catharanthine en suspensiones, brotes y raíces; 3,4 anhidrovinblastina y catarina en brotes; vinblas-tine en
callos, brotes y embriones somáticos; y vincristina en brotes y embriones [107,119,120]. Liu y col. [121]
informaron el uso de ácido artemisínico como un inductor para la producción mejorada de producción de
vindolina y vinblastina en la suspensión celular de C.roseus.
5.2. Hypericum perforatum
Hypericum perforatum L. (Hypericaceae) es ampliamente utilizado en medicina tradicional y convencional. Los
estudios clínicos in vitro e in vivo informan propiedades antivirales, antifúngicas, antibacterianas, cicatrizantes,
antidepresivas, antioxidantes, etc. [122,123]. Las propiedades medicinales de la planta se atribuyen a la
presencia de metabolitos secundarios como los floroglucinales (hiperforina, hiperfoliatina, adperperina),
naftodianthrones (hipericina, pseudohy-pericina), flavonoides (rutina, quercetina, quercitrina, isoquercitrina,
hiperósido y amentoflavona ), taninos (catequina y epicate-mentón), proantocianidinas (procianidina B2) y
bioflavonoides (biapigenina y amentoflavona) y pequeñas cantidades de aceite esencial [124-127]. El principio
fitoquímico activo en la planta varía según diversos factores ecológicos como el hábitat de la planta, el
desarrollo, etc. Uno de los principales metabolitos de esta planta es la hipericina que ha ganado interés debido
a su potencial como agente anticancerígeno [128,129].
Los sistemas de cultivo in vitro se han descrito como un sustituto de la producción a gran escala de
metabolitos de interés farmacéutico [28,130]. La sobreproducción de naftodianthrones a partir de cultivos en
suspensión celular de H. perforatum se ha personalizado utilizando fitohormonas y diferentes inductores
[47,127,131].
5.3. Coleus forskohlii
Coleus forskohlii (Lamiaceae / Labiatae) es una planta medicinal utilizada en la medicina ayurvédica india.
Contiene el metabolito secundario diterpenoide labdano forskoline, que según se informa tiene varias
actividades biológicas y farmacológicas [132]. La forskoline actúa como un activador del adenilato ciclasa
[133]. La fuente solitaria de forskoline son las raíces de las plantas de C. forskohlii, pero la concentración del
metabolito de las plantas silvestres en hábitats naturales es muy inferior [134]. Las técnicas de cultivo de
tejidos vegetales tienen un potencial para la producción industrial de metabolitos bioactivos forskoline. El callo
inducido por hojas jóvenes de plantas de C. forskohlii informó la presencia de forskoline [133]. Los inductores
como el ácido salicílico y el metil jasmonato tuvieron un efecto intenso en la producción de forskoline [135].
5.4. Taxus baccata
Taxus baccata (tejo inglés) es una conífera de hoja perenne que se ve abundantemente en el centro y sur de
Europa. El complejo alcaloide diterpeno taxol (plaxitaxol) aislado de la corteza del árbol Taxus es uno de los
agentes anticancerígenos más potentes debido a su modo de acción sobre los microtúbulos. El taxol se une a
la subunidad β-tubulina, lo que lleva a la interferencia con su descomposición normal durante la división
celular con la estabilización resultante del polímero a través de la protección contra el desmontaje [136-138].
La demanda cada vez mayor del alcaloide no puede satisfacerse mediante la extracción convencional de los
árboles debido al crecimiento impedido de los árboles Taxus y al contenido reducido de taxol en la corteza
[41,139,140]. Por lo tanto, los métodos in vitro que emplean el cultivo de tejidos vegetales están ganando más
importancia para la producción comercial del metabolito taxol. Además de las especies de Taxus, se han
informado pocas gimnospermas, angiospermas y varios endófitos para la producción de taxol [141,142].
En vitrotaxol, la producción fue reportada por primera vez por Christen et al. [143] Se ha informado que el
cultivo de células vegetales es un medio potente y sostenible para producir paclitaxel a partir de especies
como Taxus baccata, Taxus yunnanensis, Taxus cuspidate, Taxus chinensis, Taxuscanadensis y Taxus
globosa [140]. Las formas efectivas reportadas para aumentar el rendimiento de paclitaxel implica el uso de
líneas celulares de alto rendimiento, sistemas de cultivo de dos etapas, optimización de carbohidratos,
estrategias de prealimentación e inductores fúngicos como extractos fúngicos junto con desencadenantes
como ácido salicílico, quitosano, escualeno, metilo jasmonato, etc. [144,145] informaron una alta producción
de taxanos en cultivos celulares que eran de color marrón oscuro y tenían un índice de crecimiento reducido.
5.5. Nothapodytes foetida
Nothapodytes foetida es una especie en peligro de extinción distribuida en los Ghats occidentales de la India
que tiene una importancia mundial debido a sus propiedades farmacológicas y terapéuticas. Produce
camptotecina, un alcaloide indol monoterpenoide utilizado en la formulación de fármacos contra el cáncer
[146]. También se obtiene de varias plantas como Camptotheca acuminata, especies de Ophiorrhiza,
Ervatamia heyneana, Meriilliodendron megacarpum y Nothapodytes nimmoniana [147,148]. La camptotecina
se forma en varias partes de Nothapodytes foetida en una cantidad adaptable [149] y el contenido de
alcaloides aumenta con la edad de la planta [150].
6. Conclusión y perspectivas.
Las plantas se han utilizado con fines médicos desde la antigüedad. La creciente demanda de fitoquímicos
naturales sostenibles y rentables de las plantas exige su clonación masiva a través de enfoques de cultivo de
tejidos vegetales. Una gran cantidad de plantas medicinales y sus metabolitos han sido producidos por
técnicas in vitro en un corto período de tiempo en comparación con los enfoques convencionales. Para
satisfacer la creciente demanda de estos metabolitos naturales, se han empleado diversas estrategias para
producir plantas con características atractivas para la producción de metabolitos.

Discusión
El articulo habla sobre el cultivo de tejido vegetal que para aprovechar así la generación de metabolitos
secundarios naturales. Entonces desvían sus rutas metabólicas como la glucolisis, el CAT o la fotosíntesis y
así hacer que se sinteticen algunos metabolitos en mayor proporción.
El objetivo es plantear la importancia de manipular esas rutas metabólicas de esas especies vegetales con el
fin de sacar un provecha a la producción de ese metabolito que se puede presentar con diferentes actividades
biológicas.
Ej: El resveratrol.
Para la producción de esto depende de factores abióticos y bióticos que son vivo y le otro es inerte, también
de la temperatura, intensidad de la luz para el medio del cultivo, pH.
En el cuadro muestran básicamente cuales eran esos compuestos que la especie producía pero que se
pueden obtener a nivel industrial bajo el cultivo de esas especies vegetales.
También habla sobre la producción que naturalmente es muy lenta y hacen cultivos in vitro.
En una planta se puede cultivar las raíces in vitro ya que pueden crecer más rápido. La reproducción celular a
nivel de las raíces es mucho más rápido y eso es lo que necesita una especie vegetal en su proceso de
reproducción. Lo primero que necesita son nutrientes entonces ese metabolito que se produce allí en las
raíces ya se está asegurando que se produzca en mayor cantidad.
El callo es una de las partes de la especie vegetal que mayor cantidad de metabolitos que produce con el fin
de facilitar la absorción de nutrientes. Es la base de la raíz. Se obtiene con micro propagación y
posteriormente son los brotes y las raíces. Ese pequeño tallo y esas hojas.
Estrategias para la producción de esos metabolitos secundarios:
Los metabolitos secundarios se producen cuando la planta produce una respuesta de estrés. También se
someten a condiciones que le produzcan estrés entonces hacen una osmosis o choque de frio o ciertos
hongos y ciertas bacterias. Que le representen algo de invasión.
- Agentes biológicos Inductores de un estrés
La especie debe estar en un medio de cultivo
Utilizan la genómica (cantidades del material genético) proteo mica hace referencia únicamente a proteínas.
La regulación de algunas regiones del ADN para que esos metabolitos tengan una aceleración en la
reproducción. Modificación propiamente