Nombre de la

Condiciones de
prueba Fundamento Indicador de pH Reactivos de Lectura Interpretación
incubación
bioquímica
Permite diferenciar y separar
a las bacterias en dos
grandes grupos basándose
en la composición de la
pared celular. Las Gram +
Cultivo puro y joven
tienen una pared celular
(aplica para todas Azul: Gram (+)
gruesa compuesto por
las pruebas) 1 min Cristal violeta Mordiente Rosa: Gram (-)
peptidoglicanos permitiendo
Gram Cristal violeta 1 min --- (Lugol) Alcohol/acetona Reportar morfología
que el complejo cristal
Mordiente 5 s Safranina. microscópica y
violetalugol no sea eliminado
alcohol/acetona 1 agrupación.
por la solución alcohol-
min safranina.
acetona. Las Gram – no
tienen esta capa de
peptidoglicano, por lo tanto,
son teñidas por el colorante
de contraste.
Basada en la identificación
de citocromo C como última
molécula aceptadora de e-
Oxidasa (+)
en la cadena respiratoria. En
Oxidasa Tiempo de reacción: N,N-dimetil-1,4- Oxidación del
presencia de O2 la enzima ---
30s. fenilendiamonio. Reactivo
citocromo C oxida al reactivo
Oxidasa (-).
Fenilendiamina y forma un
compuesto purpura
(indofenol).
Determina la presencia de
Catalasa (+):
catalasa, enzima para Reacción
Catalasa efervescencia (O2)
degradar el peróxido de instantánea, No --- 𝐻2𝑂2 al 30%.
Catalasa (-): No se
hidrogeno utilizar asa de metal.
observa cambio.
𝐻2𝑂2 → 𝐻2𝑂 + 𝑂2.
 Identifica el tipo de
metabolismo energético del
37ª por 24 hrs Agar
O/F Oxidación y mo mediante un indicador
semilíquido Azul de bromotimol Vire a
fermentación acido base en condiciones Glucosa al 10%.
Sembrado por pH 6 a 7 (amarillo-verde).
anaerobias y aerobias Las
picadura.
bacterias producirán ácidos
al metabolizar la glucosa.
Motilidad (+)
Identificación de mo que Agar semisólido:
Crecimiento fuera de
tienen movilidad gracias a la Sembrado por
Motilidad la línea de siembra
presencia de un flagelo Por punción. Incubar a ---- ----
Motilidad (-)
agar semisólido o técnica de 24 hrs-35ºC Método
Crecimiento solo en
la gota suspendida. gota suspendida.
la línea de siembra.
Pruebas bioquímicas Secundarias
Nombre de la
Condiciones de
prueba Fundamento Indicador de pH Reactivos de Lectura Interpretación
incubación
bioquímica
Debido a que el
reactivo de Griess
solo detecta la
presencia de nitrito,
las muestras con un
resultado (-) se
evaluan con Zn
Determina la capacidad que Medio de cultivo Reactivo de Griess: Sol.
(reductor) para
Nitratos tienen los mo de reducir el líquido, sembrado A: Acido sulfanilico 0.8%
--- detectar si hay
nitrato a nitritos o en N2 por por inoculo pesado Sol. B: Alfanaftilamina
precencia de nitritos.
la enzima nitrato reductasa. por 35ºC por 24 hrs. 0.5% Zn.
Reactivo de Griess
Zn (-) (+).

Si se observa color,
significa que el Zn
redujo los nitratos
presentes y se torno a
 rosa por el reactivo de
Griess Si no hay
cambio de color
significa que la
bacteria.
Incubar a 37ºC por
Muestra la capacidad de los
48 hrs Refrigerar a
mo para hidrolizar la gelatina
4ºC por 10 min
a péptidos y aa, mediante la
Gelatinasa Medio semisólido ---- ---- ----
acción de enzimas
Sembrado por
específicas denominadas
punción ¾ partes del
gelatinasas.
tubo.
Medio de
Christensen: Medio
de cultivo sólido.
inoculación por
estría Caldo de
Stuart: Medio de
cultivo líquido, Agar urea de
Se basa en la capacidad de sembrado Rojo fenol Agar urea de Christensen
Ureasa un mo para hidrolizar la urea Agar urea de Christensen (más trasnparente (-)
Rojo fenol.
por acción de la enzima Christensen (más sensible) o Caldo de Rosa (+)
ureasa 𝑈𝑟𝑒𝑎 → 2𝑁𝐻3 + 𝐶𝑂2. sensible) o Caldo de Stuart. Lento(+) lenta Caldo
Stuart Agar urea de de Stuart.
Christensen (-) (+)
(+) lenta Caldo de
Stuart por inoculo
pesado A 37ª C-24
hrs Se lee a las 24
hrs.
Se basa en la capacidad que Medio de cultivo: Citrato
35º 24-48 hrs Medio
Citrato tiene el mo de utilizar al Azul de bromotimol pH de de Simmons Fuente de 1) Citrato (-) verde.
solido Inocular por
citrato como fuente de C vire 6.4-7. C: Citrato Fuente de N: 2) Citrato (+)azul.
estría.
(producción de ácidos) o las sales de amonio.
 sales de amonio como única
fuente de nitrógeno
(alcalinizando el medio).
Permite detectar si la
bacteria es fermentadora de
glucosa por vía acido mixta,
MR Rojo de metilo produciendo ácidos fuertes
(ácido láctico, Ac. acético y
Ac. fórmico) provocando un
descenso en el pH del
medio.
Permite identificar mo que
fermenten la glucosa por la
VP Voges
vía butilenglicolica,
Proskauer
identificando el metabolito
acetoìna como intermediario.
Permite evidenciar los mo
que son capaces de utilizar
Malonato el malonato de sodio como
única fuente de C y el sulfato
de amonio como única
fuente de N.
Detecta si el mo puede
desaminar la fenilalanina por
enzimas desaminasas. El
Fenilalanina Ac. Pirúvico producido se
detectará con el reactivo
FeCl3 𝐹𝑒𝑛𝑖𝑙𝑙𝑎𝑛𝑖𝑛𝑎 → 𝐴𝑐.
𝑝𝑖𝑟𝑢𝑣𝑖𝑐𝑜 + 𝑁𝐻3.
MIO Determinar la capacidad
Motilidadindol- enzimática de un organismo
ornitina para descarboxilar L-Ornitina
para formar una amina y
Medio líquido,
sembrado por
(+)Rosa.
inoculo pesado. Rojo de metilo. Medio de Clark y Lubs.
(-) transparente.
Incubar a 35ºC
de18-24 hrs.
Condiciones Reactivo de Barrit
aerobias Tiempo de Alfa-naftol 5%/
Transparente nulo,
lectura y de EtOH KOH 40%
---- rojo positivo, amarillo
reacción: 10- 15 min Reactivo de Coblentz
negativo.
Tiempo límite de Alfa-naftol 5%/
detección: 48 hrs. EtOH 95% KOH 40%
Medio de cultivo
A) Control
líquido, sembrado
B) Malonato (-) Utiliza
por inoculo pesado. Azul de bromotimo. Caldo malonato.
CHO generando ácido
Incubar a 35ºC 24
C) Malonato (+).
hrs.
Medio de cultivo
líquido. Sembrado 1) Detección de Ac.
por la técnica de Pirúvico por el cloruro
--- Cloruro férrico.
slam o lengüeta férrico para formar un
Incubar a 37ºC de color verde.
24-48 hrs.
35-37ªC por 24- 48
L-ornitina 5 g Glucosa 1g 1) Motilidad (+) si hay
hrs Medio de cultivo
Purpura de bromocresol. Reactivo de Ehrlich o el crecimiento fuera de
semisólido en
de Kovács. la línea de siembra
ambiente anaerobio
 alcalinizar el medio 𝐿 −
𝑜𝑟𝑡𝑖𝑑𝑖𝑛𝑎 → 𝑝𝑢𝑡𝑟𝑒𝑐𝑖𝑛𝑎.
Identifica la capacidad que
KIA Agar hierro de
tiene el M.O de fermentar la
Kigler
lactosa y producir H2S.
(no es recomendado 2) Catalasa (-) Medio
para prueba de acido: Fermentación
indol) Siembra por de glucosa
picadura. 3) Catalasa (+)
4) Indol (+).
1) No fermentador.
2) Alcalino-ácido;
Lactosa (-); Glucosa
(+): al estar en poca
cantidad utiliza las
peptonas como fuente
de energía; H2S (-);
Gas (-).
3) Alcalino-ácido:
Lactosa (+); Glucosa
(+); H2S (+); Gas (-).
Medio de cultivo 4) Ácido-ácido:
sólido, sembrado Citrato de amonio férrico Lactosa y glucosa (+);
por pico y estriada Rojo de fenol. Glucosa 0.1% Lactosa H2S (-); Gas (+) 4A)
Incubación 37ºC 24- 1% Peptonas. Alcalino-ácido:
48 hrs. Lactosa y glucosa (+);
H2S (-); Gas (+) Se
dejo más tiempo en
incubación, el mo
consumio todos los
CHO y empezó a
utilizar las peptonas
como fuente de N
(Punta básica).
5) Ácido- ácido:
Lactosa y glucosa (+);
H2S (+); Gas (+

Basada en la capacidad que
tiene el mo de descarboxilar
LIA Lisina hierro
o desaminar la L-lisina por la
agar
enzima lisina descarboxilasa
𝐿𝑖𝑠𝑖𝑛𝑎 → 𝑐𝑎𝑑𝑎𝑣𝑒𝑟𝑖𝑛𝑎 + 𝐶𝑂2.
Determina la presencia de
H2S que el mo puede liberar
partir de aminoácidos
azufrados, utilizando la
enzima tiosulfato reductasa
o cisteína desulfhidrasa
SIM Sulfuro-indol
- movilidad 𝐶𝑖𝑠𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 → 𝑎𝑐. 𝑝𝑖𝑟𝑢𝑣𝑖𝑐𝑜 +
𝐻2𝑆 + 𝑁𝐻3 𝑇𝑖𝑜𝑠𝑢𝑙𝑓𝑎𝑡𝑜 →
𝑠𝑢𝑙𝑓𝑖𝑡𝑜 + 𝐻2𝑆 Determina la
capacidad del mo para
oxidar al triptófano formando
indol con ayuda de las
enzimas triptofanasas.
1) Utiliza los CHO
como fuente de C
(generación de
ácidos).
2) Lisina (+)
descarboxilación
(tubo4). Debido a que
la pérdida del grupo
35º C de18-24 hrs carboxilo, da
Lisina hierro agar: L-
cultivo sólido, productos alcalinos.
Purpura de bromocresol. lisina, citrato de amonio
sembrado por pico y En la desaminación
férrico.
estría. se produce ácido alfa-
cetocarbónico, el cual,
con la sal de hierro y
bajo la influencia del
oxígeno forma un
color rojizo en la
superficie del medio.
3) Lisina (+) sulfuro
(+)
Medio SIM Sulfato de
Medio de cultivo amonio férrico Tiosulfato
semisólido Sembrar de sodio Reactivo de
--- ---
por punción 35ºC Ehrlich o de Kovács (p-
24-48 hrs. dimetilamino
aminobenzaldehído)
 Detecta si el M.O es móvil o
inmóvil.
Método diferencial basada
en la capacidad en detectar
TSI Agar triple
si el mo fermenta dextrosa,
azúcar hierro
lactosa y sacarosa para
producir sulfuro y ácidos que
cambiaran pH del medio.
No fermenta CHO:
Medio Rosa
Fermentación de
glucosa: Medio rosa y
amarillo, al tener
Cultivo semisólido
Glucosa 1g, Sacarosa 10 menos cantidad de
siembra por pico y
Rojo de fenol. g, Lactosa 10 g, Sal de glucosa utiliza las
estría Incubar a
hierro peptonas como fuente
37ºC 18-24 hrs.
de N (básico)
Fermentación de
glucosa, lactosa y/o
sacarosa: Medio
amarillo.
Elaboro: Hernandez Leyva Ana Julia