Departamento de Microbiología, Parasitología e Inmunología, Facultad de Medicina, UBA

GUIA DE TRABAJOS PRÁCTICOS

MICOLOGÍA

Departamento de Microbiología
Facultad de Medicina
UBA
2009

Guía de Trabajos Prácticos 2009 1

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Observación de escamas con micelios y levaduras. Digestión con KOH

40%.

Procedimiento:

Colocar una gota de KOH 40% en el centro de un portaobjetos.

Agregar la muestra y cubrir con un cubreobjetos.
Digerir calentando la preparación suavemente a la llama hasta el
desprendimiento de burbujas.

Micelio filamentoso hialino

tabicado con artroconidios Candida spp. Malassezia spp.

Observación de exámenes directos de levaduras con la Tinción de

Giemsa.

Procedimiento:

Fijar la muestra con metanol 100% 1 minuto.

Inundar el extendido con Giemsa 20 minutos.
Lavar el preparado con agua y dejar secar al aire. No secar al calor.

Fase levaduriforme de Histoplasma capsulatum

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Preparación de LCR con tinta china (TCH) y observación de levaduras

capsuladas.

Procedimiento:

Centrifugar previamente la muestra (10 min a 3000 rpm).

Colocar una gota del sedimento en un portaobjetos.
Agregar una gota de TCH sobre la muestra, mezclar y cubrir con un
cubreobjetos.
Examinar con objetivo de 10, 20X y confirmar con 40X.

Cryptococcus neoformans

Cultivo de escamas observadas en la clase 1 en tubos conteniendo los medios

Saboureaud/Cloranfenicol y Lactrimel/Cloranfenicol en pico de flauta.

Procedimiento:

Destapar el tubo cerca del mechero y flamear la boca del mismo.

Utilizar un gancho previamente flameado al rojo y enfriado.
Humedecerlo en medio estéril y tomar las escamas.
Realizar tres puntos de siembra desde el fondo hacia el pico sobre la
superficie del medio.
Volver a tapar el tubo previamente flameado.
Incubar en estufa a 28ºC.
Tener la precaución de trabajar siempre cerca del mechero.

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Descripción de las características de las colonias de:

Histoplasma capsulatum fase levaduriforme en BHI (Agar infusión cerebro

corazón).
Alternaria spp. en medio Sabouraud.
Aspergillus fumigatus en medio Sabouraud.
Rhizopus spp. en medio Sabouraud.
Candida spp. en medio Sabouraud y ChromAgar Candida.
Microsporum canis y Trichophytum rubrum en medio de Lactrimel.

Realizar preparaciones con azul de lactofenol para la observación

microscópica. Describir las estructuras observadas.

Observación de microcultivos.

Procedimiento:

Tomar un portaobjeto, colocar en el centro una gota de azul de lactofenol.

Con un gancho estéril tomar parte del micelio y disociarlo con ayuda de una
aguja sobre la gota de azul de lactofenol
Colocar un cubreobjeto y observar al microscopio óptico.

Trichophyton rubrum

Hongo antropófílo. Características macroscópicas: colonias de lento crecimiento,

blanca aterciopelada, algodonosa con un pigmento rojo vinoso por el reverso.
Características microscópicas: microconidios en forma de lágrima o pera (2-3 x 3-
5 ), unidos en forma alterna a la hifa. En general los macroconidios son raros. En cepas
muy esporuladas se pueden encontrar en forma de lápiz.

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Microsporum canis

Hongo zoófílo. Características macroscópicas: colonias de crecimiento rápido,

mostrando hacia los 10-15 días de incubación colonias con anverso lanoso o
algodonoso blanco o de color gamuza.; puede existir algún surco radiado. Reverso con
pigmento amarillo limón. Características microscópicas: macroconidios fusiformes
de pared externa gruesa y rugosa, con extremos afilados ligeramente curvados, con 6-
12 septos internos. Escasos microconidios claviformes o piriformes, sésiles.

Alternaria alternata

Características macroscópicas: colonias afelpadas o pulverulentas de color gris-

oliva. Características microscópicas: hifas septadas y pigmentadas. Conidióforos
septados de longitud variable del que emerge un conidio elipsoidal grande, septado en
forma transversal y longitudinal (moriforme) formando cadenas.

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Aspergillus fumigatus

Características macroscópicas: las colonias sobre agar Czapeck son blancas al

principio y luego se tornan verde azulado a gris oscuro. Consiste en una densa felpa
de conidióforos. Características microscópicas: conidióforo corto de pared lisa, a
menudo verde en la parte superior. Cabeza conidial columnar, uniseriada,
usualmente fértil sobre los dos tercios de la superficie de la vesícula. Conidios
verrugosos, subesféricos de 2.5 a 3 µm de diámetro.

Rhizopus spp.

Características macroscópicas: colonia de crecimiento rápido y vellosa.

Características microscópicas: micelio cenocítico con estolones y rizoides.
Esporangióforos partiendo de los rizoides. Esporangio terminal con multiesporos, con
columella, la misma es de esférica a ligeramente elipsoide. Esporangiosporos
subesféricos, ornamentados.

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Histoplasma capsulatum var. capsulatum

Examen directo en materiales biológicos con tinción de Giemsa: levaduras

pequeñas redondas u ovales con un brote, rodeado de una pared que no toma los
colorantes, con una masa cromática en un polo en forma de media luna de color azul
oscuro y el resto del citoplasma presenta color celeste. Se lo puede observar en el
interior y/o afuera de macrófagos o células gigantes.
Cultivos a 28°C en Saboureaud. Características macroscópicas: colonias de lento
crecimiento (3 a 4 semanas), de aspecto granuloso a algodonoso, blancas y luego
parduzcas (color canela). Reverso inicialmente de color crema y luego parduzco.
Características microscópicas: microconidios hialinos, sésiles de pared lisa y
delgada que salen de conidióforos cortos o a los lados de las hifas hialinas y tabicadas.
Macroconidios esféricos de pared rugosa, con expansiones digitiformes, que salen de
conidióforos cortos. Ambos conidios muy abundantes.
Cultivos a 37°C en BHI. Características macroscópicas: colonias cerebriformes de
aspecto cremoso (7días).
Características microscópicas: levaduras monogemantes de 2-3 x 4-5 m.

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