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Verificacion Del Proceso de Limpieza y Desinfeccion de Los Laboratorios
Verificacion Del Proceso de Limpieza y Desinfeccion de Los Laboratorios
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar al titulo de microbiología industrial
APROBADO
____________________
Ana Karina Carrascal
Bacterióloga M. Sc
Directora
____________________ ______________________
Luisa Gutiérrez Luz Amparo Maldonado
Bacterióloga Bacteriología
VERIFICACION DEL PROCESO DE LIMPIEZA Y DESINFECCION DE LOS
LABORATORIOS: AGUAS Y LODOS, INMUNOLOGIA ESPECIALIZADA Y
CITOMETRIA DE FLUJO, MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Y
MICROBIOLOGIA AMBIENTAL Y DE SUELOS
_____________________ _____________________
Ingrid Schuler Garcia Janeth Arias
Decana Académica Directora de Carrera
Facultad de Ciencias Microbiología Industrial y Agrícola
DEDICATORIA
Le dedico este trabajo de grado, ante todo, a Dios, por otorgarme la sabiduría y la
salud para lograrlo. A mis padres por estar ahí cuando más los necesité, por su
ayuda y constante cooperación. Por ser la fuente de mi inspiración y motivación
para superarme cada día más y así poder luchar para que la vida depare un futuro
mejor. A Alejandro Díaz por que sabes lo que esto significa para mí. Y para todas
las personas que me acompañaron en todos y cada uno de los momentos de mi
vida.
Lena Marcela Callejas
Agradezco a Dios ante todo quien me ha dado la vida, haberme permitido culminar
esta meta. A mis padres por su apoyo incondicional, a mis hermanas por su
inmensa ayuda, a mi hija Sarita, quien ha sido el motivo para luchar y el motor de
mi vida. A Germán mi esposo, por su gran amor, su sacrificio, su infinita paciencia
y comprensión. A todos, dedico este trabajo de grado y los llevo en mi corazón.
Pág.
1. INTRODUCCION................................................................................................. 1
2. MARCO TEORICO.............................................................................................. 2
4. JUSTIFICACIÓN ............................................................................................... 26
5. OBJETIVOS ...................................................................................................... 28
6. MATERIALES Y MÉTODOS............................................................................. 29
7. RESULTADOS .................................................................................................. 35
11. BIBLIOGRAFIA............................................................................................... 58
LISTA DE FIGURAS
Por esto, la finalidad de este estudio fue demostrar la efectividad de los procesos
de limpieza y desinfección llevados a cabo en los laboratorios de que prestan
servicios al Departamento de Microbiología. Este proceso fue evaluado realizando
un análisis microbiológico de las superficies de mesones, pisos antes y después
del proceso de limpieza y desinfección mediante la técnica del hisopo.
2. MARCO TEORICO
Siempre que se presta un servicio las “características” de este deben cumplir con
determinadas condiciones o “requisitos” que conformen al cliente que lo recibe, o a
la sociedad. El sistema de gestión de la calidad es el conjunto de actividades que
se desarrollan para que las características del servicio cumplan con los requisitos
establecidos.
El planteo inicial antes de elaborar o diseñar el sistema de calidad es establecer o
averiguar cuáles son los requisitos que deben cumplir el producto o servicio.
Luego se debe decidir de qué forma se van a cumplir los requisitos usando los
recursos disponibles de la manera más eficiente. Existen normas o estándar es de
calidad que contienen requisitos de carácter general y que se pueden aplicar a un
caso particular siempre que se determina que los requisitos de dicha norma o
estándar sean equivalentes a los requisitos del propio producto o servicio que se
debe brindar. También es posible utilizar solamente aquellos requisitos de una
Norma que son aplicables al producto o servicio (BERNILLON, 1999).
El sistema de control destinado a eliminar y/o prevenir las fallas del producto o el
servicio que se brinda y cumplir con los requisitos establecidos se denomina
“Sistema de Gestión de la Calidad” o simplemente “Sistema de Calidad”. Sistema
de calidad es el conjunto de actividades que se planifican y realizan en una
empresa, durante la fabricación de un producto o la prestación de un servicio, para
lograr efectivamente la calidad de ese producto o servicio, tomando todas las
precauciones necesarias a fin de prevenir la aparición de fallas y desviaciones
durante el proceso productivo.
Las actividades de un sistema de calidad se pueden dividir en cuatro grupos: la
planificación, el control, el aseguramiento y la mejora de la calidad (BERNILLON,
1999)
Así para las instalaciones, solo exige que las condiciones sean tales que faciliten
la realización correcta de los ensayos, y que las condiciones ambientales no
invaliden los resultados ni comprometan la calidad requerida.
En general, resulta importante asegurar el orden y la limpieza del laboratorio, y en
el caso de los laboratorios de microbiologías es necesario preparar procedimientos
para estas operaciones.
Las Normas de Calidad tienen por objetivo ayudar y orientar al responsable de una
actividad en el diseño del sistema de calidad y en brindar herramientas de trabajo
de utilidad para detectar, evaluar y prevenir las fallas que puedan ocurrir
(HARRINGTON, 1992).
Una norma de calidad establece pautas o criterios para que durante todas estas
actividades que se realizan en el proceso productivo no se produzcan fallas o
desviaciones que afecten la calidad final del servicio en forma significativa. Los
Criterios de Calidad son la forma especial en que se realizan todas estas
actividades para evitar que constituyan una fuente de error.
Para verificar que se cumple con los requisitos de la norma, existen unas
entidades de certificación que dan sus propios certificados y permiten el sello.
Estas entidades están vigiladas por organismos nacionales que les dan su
acreditación. Para la implantación, es necesario que apoye a la organización una
empresa de consultoría, que tenga buenas referencias, y el firme compromiso de
la Dirección de que quiere implantar el Sistema, ya que es necesario dedicar
tiempo del personal de la empresa para implantar el Sistema de gestión de la
calidad (HARRINGTON, 1992).
2.6.3. Solubilidad
2.6.5. No Corrosivo
El desinfectante no deberá poseer propiedades corrosivas, ni irritantes, así como
tampoco producir manchas u otras alteraciones en los metales (RODRIGUEZ,
2002).
2.6.7. Disponibilidad
Una molécula activa, como puede ser por ejemplo un nutriente, puede penetrar a
través de la membrana citoplasmática bien mediante difusión pasiva (que es una
forma inespecífica y lenta) o mediante transporte activo (que es un procedimiento
específico, capaz de permitir la acumulación de productos en la bacteria o el
traslado se produce con el producto transformado o unido a una proteína de
membrana). Muchos de los desinfectantes más utilizados, incluyendo fenoles,
derivados de amonio cuaternario, biguanidas, entre otras producen fisuras a nivel
de compuestos de bajo peso molecular, siendo causa de desnaturalización
proteica y lisis celular. Los derivados de amonio cuaternario interaccionan con los
fosfolípidos de la membrana y producen daño celular generalizado (MCDONNELL,
1999).
Los mecanismos de acción son más difíciles de estudiar y por tanto, conocer,
aunque a este respecto uno de los elementos más importantes lo constituye la
presencia o ausencia de envoltura lipídica (por ejemplo herpesvirus,
paramyxovirus y orthomyxovirus son virus con envoltura procedente, en parte, de
la membrana de la célula hospedadora). Los desinfectantes con propiedades
lipofílicas (derivados de amonio cuaternario, homólogos del fenol, anfóteros,
biguanidas poliméricas) son activos frente a los virus envueltos. El cloro y los
derivados de yodo, los agentes oxidantes, algunos aldehídos (el glutaraldehído) y
los ácidos o los álcalis fuertes, son activos frente a la mayoría de los virus (PEÑA,
2003).
Son sustancias que tienen efectos nocivos sobre los microorganismos bien sea
destruyéndolos como: Bactericidas, Fungicidas y Viricidas, Inhibiéndolos o
dificultando su crecimiento: Bacteriostáticos, fungistáticos y virustáticos.
2.8. CONDICIONES QUE INFLUYEN EN LA ACTIVIDAD MICROBIANA
Temperatura de la solución.
En general, cuanta más alta sea la temperatura más eficaz será la desinfección.
Es preferible usar, por lo tanto, una solución desinfectante tibia o caliente, que una
fría. Por lo que habrá que seguir las instrucciones del fabricante, ya que por
ejemplo a temperaturas superiores de 43o C, los yodóforos liberan yodo que
puede manchar los materiales, y la acción corrosiva del cloro aumenta cuando se
usan soluciones calientes de hipoclorito.
Tiempo.
Todos los desinfectantes químicos necesitan un tiempo mínimo de contacto para
que sean eficaces. Este tipo de contacto mínimo puede variar de acuerdo con la
actividad del desinfectante.
Concentración.
La concentración de la solución de desinfectante necesaria, variará de acuerdo
con las condiciones de uso, además deberá ser adecuada para la finalidad a la
que se destina y el medio ambiente en que haya de emplearse. Las soluciones
deberán prepararse, por lo tanto, siguiendo estrictamente las instrucciones del
fabricante (MARTINEZ, 2007).
Estabilidad.
Todas las soluciones desinfectantes deberán ser de preparación reciente, en las
que se hayan utilizado utensilios limpios. El mantenimiento prolongado de
soluciones diluidas listas para ser usadas, puede reducir su eficacia, o convertiste,
tal vez, en un depósito de organismos resistentes. Los desinfectantes pueden
desactivarse si se mezclan con detergentes y otros desinfectantes no adecuados.
Es necesario verificar periódicamente la eficacia de los desinfectantes,
especialmente cuando se han disuelto para usarlos. Existen para tal fin equipos de
ensayo baratos y de fácil uso.
Precauciones.
Los desinfectantes químicos que pueden envenenar los alimentos, tales como los
fenólicos, no deben usarse en las fábricas de elaboración de alimentos, ni en
vehículos para su transporte. Se debe tener cuidado que los desinfectantes
químicos no dañen al personal, y de que cuando se usan en lugares donde se
guardan o transportan animales, tales como establos y vehículos, no les
produzcan daños y molestias (MARTINEZ, 2007).
Los hipocloritos son los desinfectantes más utilizados de este grupo y están
disponibles comercialmente en forma líquida (hipoclorito sódico) o sólida
(hipoclorito cálcico, dicloroisocianurato sódico). El mecanismo de acción sobre los
microorganismos no es bien conocido, pero se postula que actúan inhibiendo las
reacciones enzimáticas y desnaturalizando proteínas. Tienen un extenso espectro
de actividad (bactericida, virucida y esporicida, pero variable frente a las
micobacterias) según la concentración de uso. La concentración habitual del
hipoclorito sódico o lejía comercializada es de 50 g de cloro activo por litro
(5,25%). Para la desinfección ambiental las diluciones de uso son al 0,1 y 1% (20
y 200 ml de lejía en 1 L de agua, respectivamente). Las concentraciones al 1% de
cloro activo se utilizan cuando hay sangre o productos orgánicos en la superficie
que se quiere desinfectar. Diluciones al 1:50, con una concentración de 1.000 ppm
de cloro, son necesarias para destruir las micobacterias. Las diluciones se deben
realizar con agua del grifo a temperatura ambiente y en 11 recipientes cerrados de
plástico opaco. Se recomienda utilizar soluciones preparadas en el día (MENES,
2000).
Los hipocloritos son de bajo costo y de acción rápida. Sin embargo, se ha de tener
en cuenta que son desinfectantes que deterioran los metales, que se inactivan
fácilmente en presencia de materia orgánica, relativamente inestables y su eficacia
se ve afectada por el pH. Interaccionan con otras sustancias químicas: soluciones
ácidas y de amonio, con producción de vapores de cloro que son muy irritantes.
No se deben utilizar tampoco en combinación con formaldehído, ya que esta
combinación es altamente carcinógena. Se utiliza ampliamente como
desinfectante de rutina de pavimentos, lavabos, aseos y zonas de preparación de
alimentos, así como en la desinfección de los aparatos de diálisis y tratamiento de
aguas. En brotes y epidemias de Legionella spp. La hipercloración del sistema de
distribución de agua ha demostrado ser un método muy eficaz (RODRIGUEZ,
2002).
El hipoclorito de sodio es una solución acuosa que posee una concentración entre
el 4.4% y el 5.4% (m/m), clara, ligeramente amarilla, olor característico
dependiendo de la presentación. Por su naturaleza oxidante, es un blanqueador,
desodorizante y desinfectante. De la concentración de "cloro libre activo" depende
su reactividad en las reacciones de oxidación, cloración y acción bioquímica tales
como el control bacteriológico y microbiológico. El cloro, los hipocloritos son los
desinfectantes más frecuentes en los programas de desinfección estos actúan
sobre proteínas y ácidos nucleicos de los microorganismos, oxidando los grupos
SH entre otros de la tirosina. Este compuesto es activo sobre todas las bacterias,
incluyendo esporas y además es efectivo en un amplio rango de temperaturas.
6.1. HIPOTESIS
Ho: No existe una reducción del 90% de la carga microbiana después de realizar
el procedimiento de limpieza y desinfección en cada una de las áreas de trabajo
de los laboratorios
Hi: Existe una reducción del 90% de la carga microbiana después de realizar el
procedimiento de limpieza y desinfección en cada una de las áreas de trabajo de
laboratorios
Hongos y Levaduras
Los datos obtenidos de los recuentos de mesófilos aerobios y de hongos y
levaduras correspondientes al antes y al después del proceso de limpieza y
desinfección en cada una de las superficies así como también el porcentaje de
reducción de cada uno de los laboratorios muestreados fueron graficados y se
presentan a continuación.
AREAS DE MUESTREO
AREAS DE MUESTREO
A N T ES 39 28 33 54 49 11
D E S P UE S 3 3 4 3 3 0
%R E D UC C IO N 90 92 90 94 92 92
A R E A S D E M UE S T R E O
Porcentaje mínimo (90%) de la carga microbiana después de realizar el
procedimiento de limpieza y desinfección.
ANTES 24 26 25 29 28 9
DESPUES 2 3 3 3 3 1
%REDUCCION 92 90 83 93 89 95
AREAS DE MUESTREO
A N T ES 30 29 62
D ESP UES 2 2 5
%R ED UC C ION 84 92 94
AREAS DE MUESTREO
AREAS DE MUESTREO
A N T ES 33 37 34 36
D E S P UE S 2 3 2 2
%R E D UC C IO N 94 90 93 91
AREAS DE MUESTREO
AREAS DE MUESTREO
A N T ES 31 50 47 34
D E S P UE S 2 3 5 3
%R E D UC C IO N 94 87 88 91
AREAS DE MUESTREO
AREAS DE MUESTREO
ANTES 25 33 64 69
DESPUES 2 3 4 5
%REDUCCION 94 90 93 91
AREAS DE MUESTREO
A N T ES 33 33 28 38
D E S P UE S 4 4 4 5
%R E D UC C IO N 90 86 86 87
AREAS DE MUESTREOS
MESOFILOS HONGOS Y
AREAS DE MUESTREO
AEROBIOS LEVADURAS
LAB 235 AREA 1 MESON 1,80713E-08 6,1912E-10
LAB 235 AREA 1 PISO 1,633E-07 2,48545E-09
LAB 235 AREA 2 MESON 5,02061E-08 3,88357E-10
LAB 235 AREA 2 PISO 6,12062E-07 4,21536E-12
LAB 124 MESON 1 1,20384E-14 1,70946E-06
LAB 124 MESON 2 1,76012E-10 4,99624E-07
LAB 124 MESON 3 0,086491998 2,13919E-08
LAB 124 PISO 0,224068366 8,93049E-05
LAB PARASITOLOGIA MESON 1 2,00326E-06 1,65222E-10
LAB PARASITOLOGIA MESON 2 0,029836754 8,17545E-08
LAB PARASITOLOGIA MESON 3 0,000446626 2,72204E-07
LAB PARASITOLOGIA PISO 2,05321E-09 2,87474E-06
LAB ALIMENTOS MESON 1 3,29462E-08 1,65785E-10
LAB ALIMENTOS MESON 2 1,7957E-07 9,2411E-09
LAB ALIMENTOS MESON 3 4,4528E-08 5,59963E-09
LAB ALIMENTOS MESON 4 2,09917E-08 4,2752E-08
LAB ALIMENTOS PISO 1 1,68037E-06 1,81837E-09
LAB ALIMENTOS PISO 2 1,10566E-08 2,92082E-10
LAB AMBIENTAL MESON 1 4,9229E-08 1,02143E-07
LAB AMBIENTAL MESON 2 6,14124E-10 6,57188E-10
LAB AMBIENTAL MESON 3 1,57957E-08 1,07874E-09
LAB AMBIENTAL PISO 1 0,003081058 3,22205E-07
LAB AMBIENTAL PISO 2 0,00662456 2,52883E-08
LAB AMBIENTAL CAMARA 4,37927E-12 1,72032E-18
LAB CITOMETRIA MESON 1 3,6851E-08 2,76418E-10
LAB CITOMETRIA MESON 2 7,7866E-10 1,20341E-09
LAB CITOMETRIA PISO 0,17974527 4,3608E-08
Según los datos estadísticos obtenidos con la prueba de T student, se puede decir
que existen diferencias estadísticamente significativas para decir que el proceso
es aceptable, teniendo en cuenta que la mayoría de resultados de las diferentes
áreas muestreadas redujeron sus concentraciones, sin embargo al compararlo con
la hipótesis planteada (inhibición del 90%) algunas áreas no superan la prueba.
8. DISCUSION DE RESULTADOS
Utilizar los datos actuales para observar la relación que existe entre otras
variables de interés que pudieron no tenerse en cuenta en el presente estudio,
como por ejemplo: la variedad de detergentes y desinfectantes utilizados, las
áreas de muestreo húmedas o secas, la calidad de las muestras de
investigación procesadas.
CARRASCAL Ana Karina, Burbano Rosero Mariela, Paez Morales Adriana. 2003,
Manual de laboratorio, microbiología de alimentos, 1° edición, Pontificia
Universidad Javeriana, facultad de ciencias, departamento de microbiología,
Bogotá D.C.
DELGADO Erika, 2006, Elaboración y Documentación del programa de limpieza y
desinfección de los laboratorios del departamento de microbiología de la Pontificia
Universidad Javeriana, Facultad de ciencias, Bogota, 81pp.
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[Consulta: 2 Abril 2008].
7. REPÁRAZ, F.; Arina, P.; Artajo, P.; Sánchez, M.T.; Escobar, E. Octubre 2001.
Higiene y Desinfección en el Hospital. Anales. Suplemento 2.URL:
http://www.cfnavarra.es/salud/anales/textos/suple11/suple8.html (Consulta 2 de
Agosto 2008)