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Examen parcial de Tecnología de Aceites, Grasas y Derivados

FLORES, Jesús

EXAMEN PARCIAL 2021 – I

TECNOLOGÍA DE ACEITES, GRASAS Y DERIVADOS
1.1 Dados generales
Código del estudiante: …………………… Fecha: …………………… Hora:
……………………
Tiempo del examen: 2 horas
NOTA: El examen deberá subir a la plataforma virtual.
1. Del link adjunto podrá descargar el aticulo: “Extracción de aceite de Spirulina
platensis enriquecida
microalgas que utilizan dióxido de carbono supercrítico ”Realice una lectura minuciosa y
luego responda
las siguientes interrorantes relacionados a fuantes de aceites y grasas de origen biológico
una. ¿Identifiqué cuál fue la materia prima para la extracción del aceite? ¿De donde ha
provenido?
B. ¿Cuál fue el objetivo del trabajo?
C. Describa el proceso de extracción del aceite. A través de un diagrama de bloques,
identifica
los procedimientos seguido para la extracción del aceite, indicando las condiciones de
operación en cada uno de las etapas.
D. ¿Cuáles fueron los componentes químicos identificados en el aceite extraído? ¿Cuál fue
la
relación entre los ácidos grados sayurados: ácidos grasos insaturados?
mi. Describa la importancia de los componentes identificados en el aceite
2. Del link adjunto podrá descargar el aticulo: “Estudio detallado de la castaña (Bertholletia
excelsa)
Microcompuestos de aceite: fosfolípidos, tocoferoles y esteroles ”Realice una lectura
minuciosa
y luego respondió las siguientes preguntas relacionadas con fuantes de aceites y grasas de
origen
biológico
una. ¿Identifiqué cuál fue la materia prima para la extracción del aceite? ¿De donde ha
provenido?
B. ¿Cuál fue el objetivo del trabajo?
C. Describa el proceso de extracción del aceite. A través de un diagrama de bloques,
identifica
los procedimientos seguido para la extracción del aceite, indicando las condiciones de
operación en cada uno de las etapas.
D. ¿Cuáles fueron los componentes químicos identificados en el aceite extraído? ¿Cuál fue
la
relación entre los ácidos grados sayurados: ácidos grasos insaturados?
mi. Describa la importancia de los componentes identificados en el aceite

1
Momentos atípicos catalizan penzamientos disruptivos que marcarán los destinos del
mañana
El Moonshot de hoy, llevará a la humanidad a velocidad hiperestelar cambiar el mundo
actual
El profesor del curso

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Artículo
J. Braz. Chem. Soc. , Vol. 19, núm. 7, 1374-1380, 2008.
Impreso en Brasil - © 2008 Sociedade Brasileira de Química
0103 - 5053 $ 6,00 + 0,00
* correo electrónico: didier.montet@cirad.fr
Estudio detallado de microcompuestos de aceite de nuez de Brasil ( Bertholletia excelsa ):
Fosfolípidos, tocoferoles y esteroles
Thavarith Chunhieng, Abdel Hafidi, Daniel Pioch, José Brochier y Didier Montet *
CIRAD-Persyst, UMR Qualisud 95, TA B-95/16, 73 rue JF Breton, 34398 Montpellier Cedex 5, Francia
Se estudió el aceite de nuez de Brasil ( Bertholletia excelsa ) por su composición en ácidos grasos,
tocoferoles, esteroles y fosfolípidos. La composición de ácidos grasos de los fosfolípidos también fue
estudió. Estos resultados se compararon con los de los aceites de girasol, nuez, almendra, soja y oliva.
Su alto contenido de ácidos grasos insaturados, de β-tocoferol y de β-sitosterol le dio al Brasil
nuez interesante propiedades antioxidantes y anti-colesterol. La composición de ácidos grasos en
El fosfolípido es muy diferente de la composición del aceite. Ácido linolénico, que no está presente.
en el aceite, está presente en un alto nivel en fosfatidiletanolamina.
Palabras clave: aceite de nuez de Brasil, ácidos grasos, fosfolípidos, esteroles, tocoferoles.
Introducción
Nueces de Brasil, semillas de Bertholletia excelsa HBK
se producen y exportan desde la cuenca del Amazonas
región y se utilizan más ampliamente en dulces.
en Europa y América del Norte. 1 Aunque conocido
por su contenido en proteínas, 15-17% en peso fresco
y alrededor del 50% en peso de su harina desgrasada,
las nueces también son una buena fuente de aceite (63-70%).
Se informa que las nueces de Brasil contienen una mayor cantidad de
aceite en comparación con el de almendras (53%) y nueces
(55%). 2 El aceite de nuez de Brasil es un aceite amarillento claro con
olor agradable. Tiene un uso limitado en todo el mundo debido a
el desconocimiento sobre su composición. De echo,
Se han realizado pocos estudios completos sobre la nuez de Brasil.
petróleo. Queríamos complementar el conocimiento sobre este aceite con
dosificación de esteroles, tocoferoles y fosfolípidos.
La determinación de la composición precisa de estos
compuestos pueden ser de una ayuda inestimable para su
discriminación durante la falsificación y por motivos cosméticos y
aplicaciones dietéticas.
Los esteroles son componentes naturales presentes en muchas plantas.
y especies animales. También son esenciales para humanos y
salud animal. La fracción de esteroles es específica de cada aceite.
y se puede utilizar para caracterizar un aceite. Ellos han estado
reportados recientemente como agentes anti-colesterol. 3
El β-sitosterol participa en la conversión del ácido linoleico
en ácidos grasos poliinsaturados. Esta reacción es esencial
para la conversión de ácidos grasos ω-6 en prostaglandinas y
leucotrienos. Están involucrados prostaglandinas y leucotrienos
en el sistema inmunológico; reducen la tromboembolia
problemas al reducir la agregación plaquetaria y también ayudar
en la reducción de los metabolitos de los fármacos antiinflamatorios. 4
Se ha informado que el β-sitosterol participa en la producción de colesterol.
reducción 5 y para mejorar los problemas urinarios. 6
La vitamina E es un grupo de ocho moléculas llamadas

2
tocoferoles o tocotrienoles. La vitamina E funciona como
poderoso antioxidante y protege las células humanas y grasas
moléculas contra los radicales libres que podrían dañarlos. 7
Los radicales libres se propagan en el cuerpo, rompen las células

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Vol. 19, No. 7, 2008
membranas, y están involucradas en la piel y el ADN celular.
daño que causa varios cánceres 8 y degenerativos
enfermedades. La vitamina E juega un papel contra la inmunización.
trastornos y envejecimiento prematuro, también se emplea en la
tratamiento de fibrocistes 9 y previene la formación de
cataratas oculares.
La deficiencia de vitamina E se ha relacionado con enfermedades neurológicas.
anomalías en abetalipoproteinemia y malabsorción de grasas
trastornos. La distrofia inducida experimentalmente indica que
La vitamina E de la dieta puede desempeñar un papel importante en la
sistema nervioso con respecto a la estabilidad de la membrana y
función fisiológica .
En los últimos años, la peroxidación lipídica ha atraído mucho
interés en relación con el proceso de envejecimiento, el desarrollo del cáncer y
otras condiciones patológicas. Epidemiológico internacional
Los estudios han sugerido que las diferencias en la ingesta de grasas en la dieta
puede proporcionar una clave significativa para la prevención del cáncer. 10
Fosfolípidos de membrana, incluida la fosfatidilcolina (PC)
y fosfatidiletanolamina (PE) se supone que son los
principales especies responsables de la formación de hidroperóxido durante
peroxidación lipídica in vivo. 11
El objetivo de esta investigación fue incrementar
conocimiento sobre la composición bioquímica de los ácidos grasos,
esteroles, tocoferoles y fosfolípidos de la nuez de Brasil que
forman los grupos más grandes de antioxidantes naturales para su uso en
formulaciones dietéticas especiales, farmacología y medicina. Nosotros
comparó la composición del aceite con algunas nueces conocidas
como nueces de Grenoble o almendras y aceite de oliva que
es el aceite de referencia en la dieta mediterránea.
Experimental
Material
Las nueces de Brasil se recolectaron en el noreste de la
Cuenca del Amazonas. Fueron proporcionados por la empresa JBA
Agroconcept (Castries, Francia). El origen exacto de este
variedad, que es muy rica en selenio, 12 se mantiene voluntariamente
secreto debido a las futuras aplicaciones industriales que
surgió de este estudio. Desde el inicio del análisis,
En abril de 2000, las muestras de frutos secos se almacenaron en un armario.
a temperatura ambiente con una temperatura media de
25 ° C. Todos los análisis se realizaron en dos meses.
Extracción de lípidos
El aceite se extrajo de 20 g de harina de nueces de Brasil para
6 h por el método Soxhlet con hexano (250 mL). La
El disolvente se eliminó por evaporación y luego enjuagando.
con gas nitrógeno.
La harina se preparó moliendo nueces directamente.
Preparación de ésteres metílicos de ácidos grasos (FAME)
Se añadió solución de metilato de sodio (3 ml) a tres
gotas de aceite extraído y calentado a 60 ° C durante 10 min. 13
Después de 10 min de ebullición, 3 mL de cloruro de acetilo en metanol
(50 ml / 625 ml) se añadió. La mezcla se calentó
de nuevo durante 10 min y se enfría a temperatura ambiente y
posteriormente 10 mL de agua destilada y 15 mL de

3
Se añadieron sucesivamente hexano. La mezcla se agitó
vigorosamente y dejar reposar para permitir que las capas se separen.
Se transfirió la capa superior de hexano que contenía FAME
a un tubo pequeño y se almacena a -20 ° C para su posterior análisis por
cromatografía gas-líquido (GLC).
El análisis FAME fue realizado por GLC (Ceinstruments,
Modelo GC 8000 Top) equipado con una ionización de llama
detector. Una columna Supelcowax 10 (0,32 mm di × 30 m
de película de 0,25 µm de largo) con gas portador de helio a una
Se utilizó una velocidad de flujo lineal de 2 mL min -1 . Una temperatura
programa de 100 ° C durante 5 min, aumentando a 230 ° C a una velocidad de
Se usó 10ºC min ^ {- 1} . El FAME, disuelto en hexano, fue
inyectado (1 µL) en modo dividido. El inyector y el detector
las temperaturas fueron 250 y 260 ° C respectivamente. Áreas de picos
se registraron utilizando un integrador Merck D-200. Ácidos grasos
se identificaron mediante la comparación de los tiempos de retención del aceite de palma
ácidos grasos y en comparación con los valores de la literatura.
Análisis de tocoferoles por líquido a alta presión
cromatografía (HPLC)
Se disolvieron 1,0 g de muestras de aceite en 13 ml de hexano.
y se inyectaron muestras de 10 µL en un tubo de 150 × 4,6 mm
columna rellena con 5 micras Hypersil ® sílice. El líquido
se equipó el cromatógrafo (Spectra System P1000 XR)
con un detector Spectra System FL 3000 ajustado a 294/336 nm.
La fase móvil fue 97% n-hexano y 3% 1,4 dioxano
a un caudal de 1 mL min -1 . Las composiciones de tocoferol fueron
obtenido por comparación de los tiempos máximos de retención de la colza
tocoferoles de semillas.
Saponificación para análisis de esteroles  14
A 50 ml de aprox. 2 mol L -1 de solución etanólica de KOH s
se agregaron a 5 g de lípidos en un matraz de globo equipado con
un condensador. La solución se hirvió suavemente durante una hora.
Después de enfriar, se agregaron 50 mL de agua destilada a través
se agitó la parte superior del condensador y el matraz. Contenido
del matraz se transfirió a un embudo de decantación. Matraz
y el condensador se enjuagaron con 100 mL de éter dietílico
y se vierte en un embudo de decantación y se agita vigorosamente.
La capa etanólica acuosa se extrajo al matraz.
utilizado para la saponificación. Se vertió el extracto etéreo

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a través del cuello del embudo hacia otro separador
embudo que contiene 40 mL de agua. Etanólico acuoso
La solución de jabón se extrajo dos veces, cada vez con 100 mL
de éter dietílico. Las fracciones etéreas se combinaron en el
segundo embudo de decantación y se lavaron dos veces con
40 mL de agua agitando vigorosamente y luego sucesivamente
con 40 mL de solución acuosa de KOH 0.5 mol L -1 , 40 mL de
agua, y nuevamente con 40 mL de la solución de KOH, luego
dos veces más con 40 mL de agua. La solución etérea fue
vertido cuantitativamente en un matraz alquitranado de 200 ml y
evaporado. Se añadió acetona (6 ml) y el volátil
El disolvente se eliminó por completo bajo una suave corriente.
de nitrógeno. Se pesó la fracción insaponificable y se
mantenido en 10 mL de hexano a -20 ° C para análisis adicional.
Cromatografía preparativa en capa fina
Se aplicaron extractos de lípidos brutos sobre 20 × 20 cm
Placas de TLC recubiertas con una capa de gel de sílice de 0,5 mm 60F254
(Merck, Alemania) como bandas de 14 cm ( ca. 20 mg placa -1 )

4
con un aplicador automático Linomat-3 (Camag, Suiza).
Se aplicó la mezcla de estándares de TLC (colesterol)
como referencia en un lado de cada plato y los platos
se desarrollaron en cloroformo / éter (90/10, v / v). Después
revelado y secado, las placas se rociaron con
solución de diclorofluoresceína en etanol y se observó
bajo luz ultravioleta (Chromato-Vue modelo CC20, ultravioleta
Products Inc). Las bandas de esteroles se rasparon y extrajeron.
dos veces con cloroformo.
Preparación de derivados de éter de TMS de esteroles
La fracción insaponificable total se derivó a trimetilsililo
éteres agregando 100 mL de reactivo Tri-Sil e incubando el
tubos a 60 ° C durante 45 min. El disolvente se evaporó bajo
se disolvieron una corriente de nitrógeno y derivados de éter TMS
en 1 mL de hexano. Los tubos se sonicaron en un ultrasonido
baño durante 1 min y centrifugado durante 3 min. La capa de hexano
se transfirió a otro tubo, se evaporó a sequedad y
disuelto en 0,5 ml de hexano para análisis adicional por GLC.
Análisis de esteroles por GLC
Una columna capilar (30 m × 0,32 mm di) con 0,15 µm
espesor de película (DB-1701, Alemania) de un 50% fenil- / 50%
Fase estacionaria de metil-polisiloxano (Chrompack, EE. UU.)
se utilizó. Se utilizó hidrógeno como gas portador en una entrada.
presión de 9,6 psi y como gas auxiliar a un caudal de
2 ml min -1 . Las temperaturas del inyector y del detector fueron de 280 ° C;
la temperatura del horno fue de 254 ° C. Los picos se calcularon
por un integrador HP 6890.
Extracción de fosfolípidos por ósmosis
Se añadieron 6 g de lípidos en solución de hexano en
un dedo de goma. La ósmosis se realizó contra hexano con
un caudal de 0,5 ml min -1 durante 24 h. Fosfolípidos
fueron transferidos del dedo de goma a un tubo pequeño,
evaporado a sequedad con gas nitrógeno y luego mantenido en
1 mL de cloroformo a -20 ° C para análisis adicionales.
El análisis de fósforo por espectrometría de llama se realizó en
10 g de aceite en un vaso de precipitados de 100 mL y luego se transfiere a un
horno. 15 Se aumentó la temperatura del horno a 300 ° C
y mantenido durante 24 h, seguido de aumentos de tres pasos
a 350, 400 y 450 ° C a intervalos regulares de 4 h cada uno.
La mineralización se logró a 475 ° C durante 4 h. La ceniza fue
disuelto en 4 ml de HCl / agua (50/50 v / v) y luego calentado a 80 ° C
para disolverlos completamente. La solución se filtró en 50 mL
matraces y se completa con agua pura. Los elementos minerales fueron
cuantificado por espectroscopia de emisión de plasma.
Cromatografía en capa fina preparativa de fosfolípidos
Los extractos de fosfolípidos se aplicaron en TLC de 5 x 20 cm.
placas recubiertas con gel de sílice 60 F254 de 0,5 mm (Merck,
Alemania) como bandas de 2 cm ( aproximadamente 0,8 mg placa -1 ) con un Linomat-3
aplicador automático (Camag, Suiza). Un estándar de fosfolípidos
La mezcla se aplicó como referencia en otra placa y placas.
se desarrollaron en cloroformo / acetona / metanol / ácido acético /
agua en una proporción 50/20/10/10/5 (v / v). Después de revelar, la placa
fue rociado con azul de molibdeno - ácido fosfomolíbdico
reactivo, solución al 20% en peso en alcohol etílico (Aldrich).
Análisis de fosfolípidos por método de espectrofotometría  16
Se rasparon las bandas de fosfolípidos de la placa y se
de agua destilada y 120 µL de nitrato de magnesio se agregaron
a las muestras. Las muestras se transformaron en depósitos blancos por
mineralización con un mechero Bunsen. HCl 0,5 mol L -1 (300 µL)
se añadió y las muestras se incubaron en un baño de agua a
45 ° C durante 20 min y luego se enfría a temperatura ambiente. A
mezcla de 700 µL de 10% de ácido ascórbico y amonio

5
Se añadió molibdato (1/6 p / p). Concentraciones de fósforo
se determinaron comparando sus valores de absorbancia con
los de las soluciones estándar (30 a 160 µg mL -1 ) que fueron
preparado utilizando el mismo procedimiento.
Resultados
Composición general
A una a w (actividad del agua) de 0,5, a 23 ° C, el agua
contenido de nuez de Brasil es 2,75 ± 0,2%, que es un

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valor para una nuez aceitosa. 12 Determinación de cenizas de la torta.
que contiene 10% de lípidos muestra un alto contenido de minerales de 10,7
± 0,1%. El contenido de calcio es bajo, alrededor de 600 mg / 100 g, pero
El magnesio y el fósforo son muy altos con respectivamente
1.400 y 2.400 mg / 100 g de torta.
El contenido de selenio varía mucho entre regiones y
también entre la nuez de un árbol. La nuez analizada
en este estudio muestran contenidos que varían entre 0,4 y
12,7 mg / 100 g. 17 Contenido total de azúcar (glucosa + fructosa
+ sacarosa) de torta desgrasada de nueces de Brasil fue del 8,2%. Total
El contenido de fibra de la torta es del 15,2%, lo que representa
para la nuez entera 4.5%. El bizcocho desgrasado contenía
de 67,9% de proteína. Eso representa para toda la nuez un
contenido de proteínas del 17,3%. El contenido de aceite del Brasil fresco
nuez es 72,5%.
Composición de ácidos grasos (%) del aceite de nuez de Brasil
La composición de ácidos grasos obtenida por GLC muestra una
alto nivel de insaturación (75,6%) en el aceite, debido esencialmente
a C18: 1 (39,3%) y C18: 2 (36,1%) (Tabla 1). Estas
los valores son muy cercanos al obtenido por Assuncao. 18 Es
es menor que la aceituna (83,3%), la almendra (87,0%) y la nuez
(83,0%) aceites. El porcentaje de ácido linoleico (18: 2) es mayor que
en aceite de almendras o de oliva. La alta insaturación de las grasas
ácidos y la gran cantidad de ácido linoleico dan a este aceite
algunas propiedades interesantes para una dieta saludable.
Fracciones de tocoferol
Se encontró que el tocoferol total era 0.06 mg g -1 del
nuez completa. Tres tocoferoles principales se encuentran en la nuez de Brasil
aceite (Tabla 2). El aceite de nuez de Brasil se caracteriza por su alto
contenido en β-tocoferol (88,3%). Esta composición es
muy parecido al obtenido recientemente por Kornsteiner 19
sobre nueces de Brasil compradas en un mercado local en Austria. Es
más rico que el aceite de nuez y el aceite de oliva, que sólo contenía
1,8% y 5,3%, respectivamente. 20 El aceite de oliva tiene un alto contenido
en α-tocoferol (84,2%) frente al 11,3% del aceite de nuez de Brasil.
El aceite de nuez de Brasil es pobre en γ-tocoferoles (0,4%) en comparación
con contenido de aceite de oliva (10,5%) y aceite de nuez (88,0%). 21
δ-tocoferol no se encuentra en el aceite de nuez de Brasil, mientras que la nuez
contiene 8.5%. El β-tocoferol es un componente característico
de aceite de nuez de Brasil y podría utilizarse para discriminar este
aceite de otros como el aceite de soja, que podría utilizarse como
mezcla.
Fracciones de esteroles
El contenido total de esteroles de nueces de Brasil en el aceite fue de 0,19%
(± 0.01) que se acerca a los resultados obtenidos por Phillips 22
con un 0,09% sobre las nueces de Brasil consumidas en EE. UU. Aceite de nuez de Brasil
tiene una composición de esteroles similar al aceite de oliva. Su β-sitosterol
contenido (76%) es alto y comparable al del aceite de oliva
(81%) y aceite de nuez de Brasil consumido en EE. UU. (68%). Los dos

6
Cuadro 1. Composición de ácidos grasos (%) del aceite de nuez de Brasil determinada por GLC en comparación con otra composición de aceite . 18, 20, 21 Valor
medio de los mismos
muestra inyectada por triplicado
Ácidos grasos
Almendra / (%)
Nuez / (%)
Aceituna / (%)
Nuez de Brasil / (%)
Nuez de Brasil / (%) 18
C 12: 0
0 0,2 ± 0,05
C 14: 0
0 0,2 ± 0,05
C 16: 0
9
9
13,9
13,0 ± 0,12
12,0
C 16: 1
1,5
0 0,2 ± 0,05
C 18: 0
3
2.8
11,0 ± 0,15
10,4
C 18: 1
73
19
71,8
39,3 ± 1,1 0
41,2
C 18: 2
14
64
9.0
36,1 ± 1,1 0
36,1
C 18: 3
1.0
AGL insaturados
87,0
83,0
83,3
75,6
77,3
Cuadro 2. Composición (%) de las fracciones de tocoferol del aceite de nuez de Brasil determinada por HPLC en comparación con los tocoferoles de aceite
de oliva, soja y nuez. 20, 21
Valor medio de la misma muestra inyectada por triplicado
Tocoferoles
Aceite de nuez de Brasil / (%)
Aceite de nuez de Brasil 19 / (%)
Aceite de oliva / (%)
Aceite de soja / (%)
Aceite de nuez / (%)
α-tocoferol
11,3 ± 1,2 0
7
84,2
10
1,7
β-tocoferol
88,3 ± 1,9 0
93
5.3
3
1.8
γ-tocoferol
0 0,4 ± 0,05
10,5
58
88,0
-
δ-tocoferol
-
-
-
29
8.5

7
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Estudio detallado de microcompuestos de aceite de nuez de Brasil ( Bertholletia excelsa )
J. Braz. Chem. Soc.
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Los aceites contienen bajas cantidades de estigmasterol pero aceite de nuez de Brasil.
es más rico que el aceite de oliva al 8% frente al 1,3%. 23 β-sitosterol
el contenido en aceite de nuez de Brasil (76%) también es similar al aceite de almendras
(77%). 24 Debido a la similitud en las fracciones de esteroles entre
estos tres aceites, este factor no se puede utilizar para diferenciar
Aceite de nuez de Brasil de otros aceites (Cuadro 3).
Fracciones de fosfolípidos
La concentración de fósforo en el aceite de nuez de Brasil.
se encontró por duplicado que era 377.3 mg L -1 (± 0.2) por llama
espectrometría. Las diferentes clases de fosfolípidos,
obtenidos por extracción, fueron analizados por HPLC y por
espectrofotometría. El porcentaje se recalculó en base
sobre el contenido de fósforo medido de 377,3 mg L -1 y
en comparación con la lecitina de girasol 25, que es la más utilizada
fosfolípidos industrialmente (Tabla 4).
El aceite de nuez de Brasil contiene 31; 24; 21 y 24% de
fosfatidilinositol (PI); fosfatidilcolina (PC);
fosfatidiletanolamina (PE) y ácido fosfatídico (PA)
respectivamente, mientras que el aceite de girasol contiene 20; 47; 21 y
12% de los mismos componentes. El contenido de PI es mayor (31%)
luego en aceite de girasol (20%). El contenido de PC (24%) es la mitad del
el contenido de aceite de girasol (47%) mientras que la fosfatidilserina
(PS) es el doble de la cantidad. 25
Se analizaron los ácidos grasos extraídos de los fosfolípidos.
por FAME / GLC (Tabla 5). Los resultados se comparan con los
resultados obtenidos por Smiles et al.  26 durante el estudio de la
efecto de los reactivos desgomadores sobre la recuperación y la naturaleza
de lecitinas de aceite de girasol crudo (Cuadro 6).
Composición de ácidos grasos de los fospolípidos de la nuez de Brasil
aceite (Tabla 5) es diferente de la composición de ácidos grasos
de aceite de nuez de Brasil (Cuadro 1). La principal diferencia es que el
el aceite contiene más ácido linoleico (36,1%) que los fosfolípidos,
que están presentes, en promedio, al 10%. PA y PI contienen
alto nivel de ácido láurico (10-12%) mientras que el aceite tiene un
cantidad muy baja (0,2%). PE contiene 34% de linolénico
ácido mientras que el aceite no lo contiene.
Los fosfolípidos del aceite de nuez de Brasil contienen menos grasas insaturadas
ácidos que los del aceite de girasol
No se observa ácido linolénico (18: 3) en girasol.
fosfolípidos y aceite de nuez de Brasil, mientras que 34 y 11%,
respectivamente de ácido linolénico se encuentran en PE y PA.
Había un contenido muy alto de ácido linoleico (18: 2).
en PC, PE y PI (71,5; 68,6 y 56,6% respectivamente) de
aceite de girasol, mientras que el aceite de nuez de Brasil contenía solo 6; 8 y
Cuadro 3. Composición (%) de las fracciones de esteroles del aceite de nuez de Brasil determinada
por GLC en comparación con el aceite de oliva y almendras 23, 24
Nuez de Brasil - Castanha do Pará
Composición
Aceite de oliva/
(%)
Nuez de Brasil/
(%)
Nuez de Brasil 22 /
(%)
Nuez de almendra
petróleo/(%)
Colesterol
0,23
0 1 ± 0,05
-
-

8
Campesterol
3,19
0 2 ± 0,7 0
2 .
0 4
Estigmasterol
1,3 0
0 8 ± 0,3 0
0 6,5
0 3
Colestenol
-
0 2 ± 0,2 0
-
-
β-sitosterol
81 .0
76 ± 1,5 0
68 0
77
Sitostanol
2,3 0
0 8 ± 1,2 0
0 4,3
-
∆5-Avenasterol
2,7 0
0 2 ± 0,7 0
14,1
12
∆7-estigmastenol
0,55
0 1 ± 0,2 0
0 6,4
0 2
∆7- Avenasterol
-
-
-
0 2
Cuadro 4. Composición (%) de las fracciones de fosfolípidos del aceite de nuez de Brasil
determinada por espectrofotometría en comparación con la lecitina de girasol 26
Fosfolípidos
PI/(%)
PC / (%) PE / (%) PA / (%) Total / (%)
Girasol
Lecitina
20
47
21
12
100
Aceite de nuez de Brasil
31
24
21
24
100
Cuadro 5. Composición (%) de los ácidos grasos fosfolípidos del aceite de nuez de Brasil
Ácidos grasos
Spot 0
Pi
ordenador personal
EDUCACIÓN FÍSICA
Pensilvania
Desconocido
Desconocido
12: 0
-
12,0
0 1.0
-
10.0
0 4.0
-
14: 0
0 0,3
0 5,0
0 2,0
0 5,0

9
0 4.0
0 2,0
0 5,0
16: 0
25,2
26,0
34,0
18.0
38,0
20,0
27,0
16: 1
0 1.0
0 6,0
0 2,0
0 3,0
0 5,0
0 2,0
0 2,0
18: 0
0 9,0
18.0
23,0
0 9,0
18.0
12,0
16,0
18: 1
50,2
18.0
31.0
23,0
14.0
19,0
28,0
18: 2
14.0
11,0
0 6,0
0 8.0
-
0 8.0
19,0
18: 3
0 0,3
0 4.0
0 1.0
34,0
11,0
33,0
0 3,0
PI: fosfatidilinositol, PC: fosfatidilcolina, PE: fosfatidiletanolamina; PA: Ácidos fosfatídicos.

Página 7
Chunhieng y col.
1379
Vol. 19, No. 7, 2008
11% de PC, PE y PI. No hubo rastros de 18: 2 en PA
de aceite de nuez de Brasil.
Contenido de ácido oleico (18: 1) de fosfolípidos de aceite de nuez de Brasil
es alto: 31; 23 y 18% respectivamente de PC, PE y PI
en comparación con 15,1; 11,4 y 6,3% en aceite de girasol.
Se observa que el ácido esteárico (18: 0) contiene 23; 9 y
18% de PC, PE y PI respectivamente en aceite de nuez de Brasil, mientras que
el aceite de girasol tenía un contenido más bajo con solo 3.4; 4.8
y 7,8% de PC, PE y PI, respectivamente.
El contenido de ácido palmítico (16: 0) en el aceite de nuez de Brasil es el
más alto con 34 y 18% respectivamente de PC y PE
frente a los del aceite de girasol 10,1 y 15,7%. Pi
de nuez de Brasil y aceite de girasol contiene casi la misma
contenido en ácido palmítico, 26 y 29,3%.
Discusión
El aceite de nuez de Brasil tiene una buena proporción de grasas insaturadas.

10
ácidos 75,6% que podría compararse con el de la nuez o
aceites de oliva (83%). 20 El alto contenido en ácido linoleico (39,3%)
y ácido linolénico (36,1%) aporta a este aceite algunos
interesantes características dietéticas.
La fracción de tocoferol del aceite de nuez de Brasil es bastante
diferente al del aceite de oliva. El contenido de β-tocoferoles.
(88,3%) es mucho mayor que en otros aceites y podría
ser discriminador en caso de falsificación. Estudios previos
indican que normalmente el α-tocoferol es más activo contra
oxidación luego β-tocoferol. Mortensen y Skibsted 27
estableció una jerarquía de las propiedades antioxidantes
de tocoferoles y concluyó que el α-tocoferol,
β-tocoferol, γ-tocoferol y δ-tocoferol tienen
propiedades antioxidantes descendentes. Sin embargo, Kaiser
et al.  28 demostraron que el β-tocoferol es tan eficaz como
α-tocoferol en la extinción física de O 2 pero tiene un
baja reactividad química. Este homólogo de tocoferol podría
ser particularmente adecuado para condiciones biológicas en las que
una acumulación de productos de oxidación podría debilitar el
defensa antioxidante.
La composición de fitoesteroles del aceite de nuez de Brasil es similar
a los aceites de oliva y nueces de almendras. Su alto contenido en sitosterol
podría ser útil como medicamento contra el colesterol. 23, 24
Cuadro 6. Composición (%) de los ácidos grasos fosfolípidos del aceite de girasol
y aceite de soja 27
Ácidos grasos
Fosfolípidos
16: 0
18: 0
18: 1
18: 2
ordenador personal
10.1
0 3.4
15,1
71,5
EDUCACIÓN FÍSICA
15,7
0 4,8
11,4
68,6
Pi
29,3
0 7,8
0 6,3
56,6
PI: fosfatidilinositol; PC: fosfatidilcolina; PE: Fosfatidil-
etanolamina.
Nuestro experimento muestra que el aceite de nuez de Brasil contiene
una interesante composición de ácidos grasos fosfolípidos
comparable a la lecitina de girasol. 25, 26
Según estos resultados, el aceite de nuez de Brasil tiene el potencial
tener un alto valor comercial en la industria de alimentos saludables
con aplicación en algunas áreas de la ciencia médica.
Reconocimientos
El Proyecto proporcionó apoyo financiero para
Investigación e Industria (PRI) con el apoyo de los franceses
Ministerio de Relaciones Exteriores. Las nueces fueron suministradas por JBA
Agroconcept.
Referencias
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División de Química Sección de Aceites y Grasas. Métodos estándar de
la Sección de Aceites y Grasas de la IUPAC. Londres, 1965, 3-4.
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Minerales de productos grasos y dosificación por emisión de plasma
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Página 8
Estudio detallado de microcompuestos de aceite de nuez de Brasil ( Bertholletia excelsa )
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Biochem. Biophys . 1990 , 277 , 101.
Recibido: 8 de agosto de 2007
Fecha de lanzamiento web: 27 de agosto de 2008

Página 9
manuscrito aceptado
Título: Extracción de aceite de Spirulina platensis enriquecida
microalgas que utilizan dióxido de carbono supercrítico
Autor: Christelle Crampon Clémence Nikitine Mohamed
Zaier Olivier Lépine Céline Dejoye Tanzi Maryline Abert
Vian Farid Chemat Elisabeth Badens
PII:
S0896-8446 (16) 30365-5
DOI:
http://dx.doi.org/doi:10.1016/j.supflu.2016.10.006
Referencia:

12
SUPFLU 3775
Aparecer en:
J. de fluidos supercríticos
Fecha recibida:
20-7-2016
Fecha revisada:
11-10-2016
Fecha de aceptación:
12-10-2016
Por favor, cite este artículo como: Christelle Crampon, Clémence Nikitine, Mohamed
Zaier, Olivier Lépine, Céline Dejoye Tanzi, Maryline Abert Vian, Farid
Chemat, Elisabeth Badens, extracción de aceite de Spirulina platensis enriquecida
microalgas que utilizan dióxido de carbono supercrítico, The Journal of Supercritical Fluids
http://dx.doi.org/10.1016/j.supflu.2016.10.006
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aplicar a la revista pertinente.

Página 10
1
Extracción de aceite de Spirulina platensis enriquecida
microalgas que utilizan dióxido de carbono
supercrítico
Christelle Crampon 1, *, Clémence Nikitine 1 , Mohamed Zaier 1 , Olivier
Lépine 2 ,
Céline Dejoye Tanzi 3 , Maryline Abert Vian 3 , Farid Chemat 3 , Elisabeth
Badens 1
1 Aix Marseille Université, CNRS, Centrale Marseille, M2P2 UMR 7340
13451 Marsella, Francia
*christelle.crampon@univ-amu.fr
2 AlgoSource, 37, bd de l'Université, BP 406, 44602 Saint-Nazaire, Francia
3 Université d'Avignon et des Pays de Vaucluse, INRA, UMR 408, GREEN Extraction Team,
33, rue Louis Pasteur, F-84000, Aviñón, Francia

Página 11
2
Gráficamente abstracto
CO 2 supercrítico
CO 2 supercrítico
Lípidos neutros
Antioxidantes

13
Reflejos
Se realizó extracción de CO 2 supercrítico en microalgas Spirulina platensis
Se trazaron curvas de extracción bajo diferentes condiciones de operación.
Se realizó un diseño factorial para estimar la influencia de las condiciones de operación
Se llevaron a cabo experimentos a gran escala.
Resumen
Este artículo trata sobre la extracción de lípidos neutros y antioxidantes de la espirulina enriquecida.
platensis utilizando dióxido de carbono supercrítico (CO 2 ), y más particularmente con el

Pagina 12
3
influencia de las condiciones experimentales en los rendimientos de extracción y la cinética a escala de
laboratorio y piloto.
Los estudios preliminares se llevaron a cabo a escala de laboratorio antes del establecimiento de un
diseño: se trazaron curvas de extracción para diferentes tasas de llenado de autoclave y en diferentes
condiciones
de presión y temperatura. Usando una metodología de superficie de respuesta, la influencia significativa
de
Se destacó la presión sobre la eficiencia de extracción. Las respuestas superficiales mostraron que, en el
estudio
campo experimental, la pérdida de masa aumentó cuando la presión, la temperatura y la relación de masa
de CO 2 / microalgas
aumentado. Los análisis de extractos mostraron que los extractos de aceite contenían clorofilas ayb, así
como  -
caroteno. Finalmente, se llevaron a cabo experimentos a mayor escala con lotes de 1 y 50 kg (factores de
escala
de 100 y 5000, respectivamente) y los resultados fueron consistentes con los obtenidos a escala de
laboratorio.
Palabras llave : CO 2 supercrítico ; extracción; microalga; lípido neutro; antioxidante RSM; aumentar
proporcionalmente
1. Introducción
Desde hace varios años, las microalgas han sido objeto de un creciente interés en la
investigación y
industria para aplicaciones relacionadas con la salud y la energía. De hecho, las microalgas
son fotosintéticas.
organismos que tienen la capacidad de adaptarse a muchos entornos (incluso los más
extremos).
Además, las microalgas pueden sintetizar compuestos de alto valor añadido en cantidades
significativas.
cuando se somete a condiciones de cultivo particulares. Por ejemplo, algunas especies
pueden
acumulan un alto contenido de aceite [1] y particularmente cuando se someten a defectos de
nitrógeno. La
calidad del aceite, debido a la presencia de ácidos grasos poliinsaturados como el ácido
eicosapentaenoico
(EPA), ácido docosahexaenoico (DHA) o ácido  linolénico (GLA) [2-7] y antioxidantes
(es decir,  -
caroteno) [8], permite su uso en las industrias alimentaria y farmacéutica. Muchas
microalgas son

14
incluso capaz de sintetizar moléculas antimicrobianas y antivirales, lo que aumenta el
interés de
industrias farmacéuticas [9-11]. Gracias a su contenido en ficocianina, un activo soluble en
agua
compuesto, y gracias a su alto contenido en proteínas, Spirulina platensis es una de las
microalgas

Página 13
4
con mayor potencial [12,13]. Spirulina platensis ocupa el primer lugar en el mercado
mundial actual
con unas 3.000 toneladas de materia seca producidas por año y se cultiva principalmente en
China,
Francia, India, Japón, Myanmar y Estados Unidos. Esta microalga se utiliza como
complemento alimenticio para
nutrición humana y animal, o como materia prima para productos cosméticos. Además,
algunos
los trabajos se han centrado en sus efectos beneficiosos en la prevención del cáncer [14].
La extracción de compuestos de interés de algas marinas secas o microalgas suele ser
realizado utilizando disolventes orgánicos como n- hexano, pero tales disolventes
ampliamente utilizados tienen importantes
inconvenientes: toxicidad, inflamabilidad y baja selectividad.
Una alternativa para evitar el uso de solventes tóxicos y no seguros para extraer bioaceites
o
otros compuestos de interés es realizar la extracción mediante dióxido de carbono
supercrítico (CO 2 )
como disolvente. Este solvente es generalmente reconocido como seguro (GRAS) - no
tóxico, no inflamable
- y puede ser bastante selectivo. Esta selectividad se obtiene variando la presión y
temperatura. El paso de separación para recuperar el producto de destino se realiza
utilizando simples
despresurización ya que el CO 2 es gaseoso a presión ambiente. La despresurización puede
ser múltiple
por etapas permitiendo un fraccionamiento de los compuestos extraídos en función de su
variación de solubilidad
con densidad. El rendimiento del extracto, que depende de las condiciones experimentales,
puede ser similar a
los obtenidos mediante procesos de extracción con disolventes orgánicos y pueden ser
elevados durante bastante tiempo.
tiempo de extracción corto [15]. Además, la baja temperatura crítica del CO 2 (304,21 K /
31,06 ° C)
permite su uso para extracciones de compuestos termolábiles. Por último, su presión crítica
(7.38MPa)
es bastante bajo.
El CO 2 supercrítico solubiliza compuestos no polares como lípidos neutros (triglicéridos,
grasas libres

15
ácidos ...); cuando los compuestos de interés no son solubles, se puede aumentar el poder
disolvente
utilizando modificadores polares y seguros como el etanol o el agua.
Esta tecnología es muy conocida hoy en día y se considera un proceso ecológico. En una
industrial
escala, la mayor parte del CO 2 se recicla por lo tanto disminuyendo el consumo por

Página 14
5
masa extraída. En resumen, el uso de CO 2 supercrítico en lugar de disolventes orgánicos
proporcionan un proceso de extracción más limpio y compacto. Durante las últimas cuatro
décadas, una significativa
Se han construido varias plantas de extracción industrial que utilizan fluidos supercríticos,
lo que acredita que
esta tecnología es económicamente viable para un gran número de aplicaciones.
Algunos trabajos en la literatura desde 1995 hasta la actualidad se han ocupado de la
extracción de compuestos.
de interés de las microalgas que utilizan CO 2 supercrítico . En 2011 Crampon et al. [15]
publicó un
revisión de informes de 80 artículos sobre este tema: la extracción supercrítica de CO 2 de
neutrales
Se describieron lípidos y otros compuestos de alto valor agregado de algas y microalgas,
así como las condiciones operativas y pretratamientos asociados. Como también se
menciona en
literatura, el CO 2 supercrítico extrae específicamente los lípidos neutros contenidos en
microalgas;
el aceite extraído está libre de fosfolípidos. Este punto es de gran interés ya que la presencia
de
fosfolípidos en extractos de lípidos implica un paso adicional de desgomado para
eliminarlos
para aplicaciones alimentarias y sanitarias o energéticas. Otro punto importante a destacar
es el
posibilidad de aplicar esta técnica en biomasa húmeda que contenga un contenido de agua
de hasta el 23% en peso [16].
Muchos artículos se han centrado particularmente en la extracción de compuestos de interés
de
Spirulina ( Arthrospira ) platensis o maxima . La extracción de CO 2 supercrítico permite
extracción de lípidos neutros [17-18] y particularmente ácido  linolénico (GLA) que
tiene un
papel importante en el metabolismo humano y se utiliza como suplemento dietético
[19,3,4,20]. En efecto,
gracias al GLA, el cuerpo humano es capaz de producir ácido dihomo-γ-linolénico que es
un constituyente muy importante de los fosfolípidos de la membrana celular. Algunos
artículos también
mencionó la extracción de CO 2 supercrítica de carotenoides [18] y
principalmente  caroteno [21,22]
así como tocoferoles [22,23].
16
Con respecto a la extracción de GLA, los rendimientos de la extracción
de CO 2 supercrítico puro son del mismo orden de
magnitud que los obtenidos con n- hexano. Sin embargo, la extracción de GLA es
mejorado por la adición de un codisolvente (etanol) [4].

Página 15
6
El objetivo de este trabajo fue extraer un bioaceite que contenga predominantemente lípidos
neutros y
antioxidantes de Spirulina platensis enriquecida con CO 2 supercrítico puro . En una
primera parte, un
estudio a escala de laboratorio (10 g por lote) de la influencia de los parámetros operativos:
presión,
temperatura, caudal de CO 2 y velocidad de llenado del autoclave sobre los rendimientos de
extracción y la cinética y
sobre la composición del aceite. Un diseño experimental centrado en la influencia de
A continuación, se presentan y discuten la presión, la temperatura y la relación de masa
de CO 2 / microalgas. Finalmente,
Se llevaron a cabo experimentos a mayor escala con 1 kg y 50 kg de materia seca por lote.
correspondientes a factores de escala de 100 y 5000, respectivamente. Hasta donde
sabemos, tal
El cambio de escala nunca se ha discutido en la literatura sobre la extracción
de CO 2 supercrítico de
microalgas.
2. Materiales y métodos
2.1. Productos químicos y microalgas
El dióxido de carbono fue suministrado por Air Liquide Méditerranée (Francia) con una
pureza del 99,7%.
Todos los reactivos fueron de grado AR (Carlo Erba, Francia).
Las microalgas Spirulina platensis fueron cultivadas, recolectadas y suministradas por
AlgoSource SAS
(Saint-Nazaire, Francia). Las microalgas se enriquecieron en lípidos neutros mediante una
producción bajo
limitación de nitrógeno. El contenido total de lípidos estaba comprendido entre el 10 y el
16% en peso de seco.
materia (datos del proveedor) según la temporada y el método de cultivo. Después de la
cosecha,
se centrifugó la suspensión de microalgas (separador de Westfalia, Francia). El material
crudo
así recuperada parecía una pasta que necesitaba secarse ya que el contenido de humedad
permanecía
alrededor del 40%. Esta pasta se sometió luego a una extrusión en un cilindro de 5 mm bajo
un
flujo de aire horizontal a 308K. De hecho, la cinética de extracción de CO 2 supercrítica de
compuestos de
Se sabe que el interés de las microalgas aumenta cuando la biomasa inicial se seca al aire.

17
 Página 16
7
flujo en comparación con otros métodos de secado como la liofilización o el secado por
aspersión [16]. La
El contenido de agua resultante de la biomasa seca fue de aproximadamente el 5% en
peso. Las microalgas se suministraron en forma
de copos y luego congelado para limitar la degradación de lípidos
A escala de laboratorio, la biomasa de microalgas recibidas se almacenó en un congelador a
255K bajo un
atmósfera inerte. Antes de las extracciones a escala de laboratorio, para aumentar la
cinética de extracción,
Las microalgas se trituraron con un molino de corte y luego se tamizaron. Una fracción de
la
se aislaron partículas con un tamaño medio de menos de 0,160 mm. Después de la
extracción, el
extractos (compuestos principalmente de triglicéridos) se recuperaron en n -hexano bajo un
inerte
atmósfera para evitar su degradación en ácidos grasos libres.
Sin embargo, las condiciones de almacenamiento utilizadas a escala de laboratorio no se
pudieron aplicar a escala piloto.
debido a dificultades prácticas. Las microalgas se mantuvieron en cambio a temperatura
ambiente y
los extractos se almacenaron en recipientes cerrados en un congelador.
2.2. Supercrítico CO  2  de extracción
Los experimentos se realizaron en laboratorio y a escala piloto con diferentes
configuraciones.
Se evaluó la reproducibilidad de los resultados, se graficaron las curvas de extracción y se
Se estudiaron las condiciones operativas.
2.2.1. Configuraciones experimentales
El montaje utilizado para las extracciones a escala de laboratorio (Separex-4219) fue
suministrado por
Separex (Champigneulles, Francia). Este aparato permitió trabajar con tres
autoclaves (5, 10 y 20 cm 3 ) correspondientes a lotes comprendidos entre 2 y 13 g de seco
biomasa. La presión máxima de trabajo y el caudal de fluido fueron de 45 MPa y 1 kg h -1 .
Se realizó una extracción clásica de la siguiente manera (Fig.1): el autoclave se llenó con el
polvo de microalgas y se calienta hasta alcanzar la temperatura deseada. El CO 2 fue
enfriado por

Página 17
8
un baño criogénico a 277K, filtrado y bombeado al extractor hasta la presión de trabajo
fue alcanzado. La presión fue controlada por un manómetro. Entonces la vlvula de expansin
fue
abrió. Un flujo de CO 2 supercrítico atravesó el polvo de microalga a presión constante,
temperatura y caudal durante una duración predefinida correspondiente a la extracción
duración. Después de pasar por el extractor, el CO 2 se expandió a través de la expansión
válvula. El CO 2 se volvió gaseoso y los compuestos extraídos se recogieron en un colector

18
envase. El caudal de CO 2 se midió con un medidor de flujo de gas colocado al final de la
línea de extracción. En general, se trazó la curva de extracción completa y se usó para
identificar si había
fue una limitación de transferencia de masa por difusión.
A escala de laboratorio, la baja masa de biomasa introducida en el autoclave genera
pequeñas
cantidades de extracto difíciles de recuperar. Como consecuencia, los extractos se
recolectaron en n-
hexano y almacenado en atmósfera de CO 2 a 255 K para evitar la hidrólisis de triglicéridos.
Algunas otras extracciones se realizaron en autoclaves de 2L y 150L (HITEX, Vannes,
Francia) correspondientes a lotes de 1 y 50 kg, respectivamente. La presión máxima de este
la configuración fue de 29 MPa. A escalas piloto, la cantidad de extracto recuperado era
importante y no
requieren la dilución en n- hexano. Cabe señalar que a escalas mayores (lotes de 1 kg y
más), se recicló CO 2 .
2.2.2. Precisión de medidas y reproducibilidad
El rendimiento de extracción se estimó en relación con las pérdidas de masa de la
extracción.
autoclave (Ec. 1) o en relación con los rendimientos de extracción (Ec. 2).

100


(gramo)
masa
inicial
(gramo)
extracción
después
masa
- (g)
masa
inicial
% pérdida
Masa
(1)

100


(gramo)
contenido
lípido
neutral
(gramo)
extraído
19
lípido
neutral
%
producir lípidos
Neutral
(2)

Página 18
9
La precisión de las mediciones gravimétricas para la estimación de la pérdida de masa fue
en el
orden de 10-3 g. Las incertidumbres sobre las pérdidas de masa fueron de 1,7 10 -
3 %. Presión, temperatura y
El caudal de CO 2 se leyó con una precisión de 0,5 MPa, 1 K y 7 10-3 kg h -1 .
La reproducibilidad de los experimentos de extracción se probó en tres operaciones
diferentes.
condiciones. Cada experimento se reprodujo 2 o 3 veces durante un tiempo de extracción
de
180min. La reproducibilidad se estimó a partir de la desviación promedio.
La Tabla 1 da los resultados de los experimentos de reproducibilidad. Demuestra que
cualquiera que sea el
condiciones operativas, las extracciones fueron reproducibles. La reproducibilidad en la
pérdida de peso de
el recipiente era menos del 0,3%.
2.3. métodos analíticos
2.3.1. Análisis de materias primas
Contenido de agua de microalgas secas.
El contenido de agua de la materia prima se determinó de la siguiente manera: 5 g de
microalgas fueron
colocado en un horno Memmert (Schwabach, Alemania) a 378K hasta que la masa de la
muestra permaneció
constante. El contenido de agua se determinó por la diferencia entre la masa de microalgas
antes y después del secado dividido por la masa inicial de microalgas.
Análisis de lípidos.
La composición cualitativa de los petróleos crudos de microalgas fue determinada primero
por un Bligh
y extracción con tintorería [24] y luego mediante cromatografía de gases junto con
espectrometría de masas
(GC / MS).

Página 19
10
Perfiles de éster metílico de ácidos grasos (FAME).
Para identificar y cuantificar los ácidos grasos presentes en el aceite, los lípidos se
metilaron utilizando
el método de Morrison y Smith [25]. Los ácidos grasos metilados se purificaron mediante
Thin Layer

20
Cromatografía (Adsorbil plus 1-250mm - Hard Layer-20 × 20cm - Alltech) y fueron
analizados mediante cromatografía de gases (Autosystem XL, Perkin Elmer, Francia) con
un
Columna Famewax (Restek, Francia).
2.3.2. Extraer análisis
Determinación de fósforo.
Las muestras se mineralizaron primero. A continuación, se determinó la cantidad de fósforo
mediante ICP
(Plasma acoplado inductivamente) acoplado con espectrometría de masas. Los resultados se
dieron en ppm
en peso, partes por millón (mg de fósforo por kg de aceite).
Fracción seca.
El principio de este análisis es el mismo que se utiliza para determinar el contenido de
humedad.
de microalgas. En ese caso, el resultado se expresó en relación con el sólido y no con el
agua.
Determinación de clases de lípidos.
La separación y cuantificación de las clases de lípidos se realizó mediante gas
detector de ionización de llama / cromatografía con un Iatroscan New MK5 (Iatron
Laboratories
Inc., Japón) con varillas de cuarzo Chromarod S III.
Análisis de antioxidantes.
La identificación y determinación del contenido de antioxidantes (clorofilas ayb y
caroteno) contenido en el aceite extraído se determinó mediante espectrofotometría
UV-visible

Página 20
11
utilizando el valor de absorbancia medido en un espectrofotómetro Biochrom Libra S4
(Biochrom,
Cambridge, Reino Unido). La longitud de onda utilizada fue 653 y 666nm para clorofila y
450nm para
caroteno. Se trazó una curva de calibración utilizando estándares para determinar el
pigmento.
concentración en extractos. La curva de calibración recta de absorbancia frente a pigmento
concentración (mg ml
−1
) dependía de la ley de Beer-Lambert.
2.4. Diseño experimental
Un diseño experimental combinado con la metodología de superficie de respuesta (RSM)
utilizando
El software Nemrodw (LPRAI, Marsella, Francia) se estableció para estudiar la influencia
de tres parámetros operativos sobre el rendimiento de extracción: presión, temperatura y
Relación de masa CO 2 / microalgas. El dominio operativo se eligió de la siguiente manera:
la presión varió
de 28 a 46MPa, temperatura de 318 a 338K y relación de masa de CO 2 / microalgas de 80
a

21
200.
Los tres factores fueron elegidos para los valores de entrada del diseño experimental y para
cada uno, dos
se consideraron los niveles en el extremo. Un diseño factorial compuesto por
2 3 experimentos fue
realizado. X 1 , X 2 y X 3 fueron la temperatura, la presión y la relación de masa de CO 2 /
microalgas,
respectivamente. La Tabla 2 muestra los factores y niveles elegidos para el diseño
experimental. La
respuesta o el resultado del diseño experimental, anotado como Y, fue la pérdida de masa
en el
autoclave. Las diferentes condiciones de funcionamiento de los experimentos llevados a
cabo en este estudio son
presentado en la Tabla 3. El diseño factorial se compuso de 8 posibles combinaciones entre
los dos niveles de los factores. Se dedujo de una matriz de Hadamard a la que un
Se añadió el experimento a nivel medio. Se repitieron 2 experimentos (experimentos 5 y
6 y experimentos 8, 9 y 10) para cuantificar el error.

Página 21
12
Se utilizaron modelos de superficie de respuesta de segundo orden para expresar la
variación de la recuperación de petróleo (Y)
en función de las variables independientes X 1 , X 2 y X 3 (Ec. 3):
Y (%) = b  0  + b  1 X  1 + b  2  X  2  + b  3 X  3 + b  12  X  1  X  2  + b  13 X  1 X  3 + b  23  X  2  X  3  + b  123 X  1 X  2 X  3
(3)
donde Y representaba la variable de respuesta, b 0 era una constante. b i , b ij y b ijk eran los
lineales
y factores interactivos. Es un modelo sinérgico de grado 3 clásico para este tipo de
matriz. La
se impuso que los coeficientes cuadráticos fueran nulos. Los otros coeficientes del modelo
fueron
determinado utilizando el software Nemrodw (LPRAI, Marsella, Francia). El acuerdo de
modelo
El ajuste se evaluó mediante el coeficiente de determinación R 2 .
3. Resultados y debates
Se realizaron experimentos preliminares antes del diseño experimental con el fin de
delimitar
el dominio de estudio de la temperatura y la presión.
3.1. Análisis cualitativo de lípidos contenidos en biomasa de microalgas secas antes de
supercríticos
Extracción de  CO  2
Después del secado con flujo de aire se caracterizó la biomasa de microalgas. El contenido
de agua fue
estimado en alrededor del 5% en peso.
Los lípidos contenidos en la biomasa de microalgas antes de la extracción de CO2
supercrítico también fueron

22
analizado. Los lípidos fueron extraídos por el método de Bligh y Dyer [24] y separados por
gas
Cromatografía.
La Tabla 4 muestra el perfil de lípidos del aceite contenido en una muestra de biomasa de
microalgas antes
extracción supercrítica. Para todas las muestras analizadas, el contenido lipídico medio,
incluidos los polares y
los lípidos no polares variaron entre el 10 y el 16%, lo que corresponde a los datos del
proveedor.
El aceite de microalgas original era rico en ácidos grasos saturados desde C16 hasta
C18. Pudimos
obsérvese una cantidad no despreciable de ácido  linolénico (GLA) (C18: 3).

Página 22
13
3.2. Curvas de extracción en diferentes condiciones operativas
Se trazaron curvas de extracción en varias condiciones de operación con el fin de i) estimar
la
influencia de los parámetros operativos en los rendimientos de extracción y la cinética, ii)
acumular datos para alimentar
un modelo matemático [26]. En lugar de trazar curvas de extracción en función del tiempo,
la mayoría
Se eligió el parámetro comúnmente utilizado: el caudal másico de CO 2 sobre la masa de
biomasa.
3.2.1 Influencia de la tasa de llenado
La tasa de llenado debe influir en la transferencia de masa entre la biomasa y el
CO 2 supercrítico ,
y luego sobre la cinética de extracción. Para evaluar dicha influencia, las extracciones
fueron
realizado con 9,00, 10,70 y 13,25 g en un autoclave de 20 ml correspondientes a tasas de
llenado de
68, 81 y 100%, respectivamente. Las condiciones de funcionamiento se fijaron a una
presión de 40 MPa,
temperatura de 333K, caudal de CO 2 de 0,37 kg h -1 .
La figura 2 muestra las curvas de extracción obtenidas para cada llenado del
recipiente. Llenado del autoclave
con 68 y 81% de biomasa condujeron a resultados similares. Sin embargo, las curvas de
extracción mostraron
que cuando se empaqueta el polvo, la transferencia de masa se ve perjudicada
probablemente debido a
caminos preferenciales. Para obtener una gran cantidad de extracto, se aconseja trabajar con
un recipiente.
llenado hasta el 80%.
3.2.2 Influencia de la presión
Para evaluar la influencia de la presión sobre la cinética de extracción y los rendimientos, la
extracción
se trazaron las curvas (Fig. 3) bajo varias presiones: 10, 20 y 30 MPa. Cada curva fue
23
obtenido a una tasa de llenado del 68%, 333K, con una tasa de flujo de CO 2 de 0,45 kg h -1 .
La figura 3 muestra que la presión tuvo una influencia positiva en los rendimientos ya que
la solubilidad de los compuestos en
El CO 2 supercrítico generalmente aumenta cuando aumenta la presión. Trabajando
demasiado bajo

Página 23
14
Las presiones pueden disminuir drásticamente la solubilidad de los compuestos en el
solvente y finalmente
Disminuir los rendimientos para una duración de extracción determinada. Las curvas de
extracción parecían estar limitadas por
el fenómeno de difusión, pero la presión tuvo un impacto positivo en la
cinética. Trabajando bajo alto
La presión condujo a extracciones más rápidas, y luego a un menor consumo de CO 2 para
un determinado
duración de la extracción.
3.2.3 Influencia de la temperatura
Se estudió el efecto de la temperatura de 313 a 333 K bajo presiones de 10 y 20
MPa. Higos.
4 y 5 muestran las curvas de extracción obtenidas.
El comportamiento retrógrado está bien ilustrado por las figs. 4 y 5. La solubilidad
retrógrada es
característica de los fluidos supercríticos y se explica por la compleja influencia de la
temperatura
sobre la solubilidad debido a los efectos competitivos de dos fenómenos: la presión de
vapor del
soluto que aumenta cuando aumenta la temperatura, y el poder solvente supercrítico que
disminuye cuando la temperatura aumenta mientras que su densidad
disminuye. Dependiendo de la presión
condiciones, un efecto es predominante sobre el otro. A alta presión, cuando el fluido está
bastante
incompresible, la solubilidad aumenta siguiendo el aumento de la presión de vapor del
sustancia disoluta. A baja presión, la solubilidad disminuye cuando la temperatura aumenta
debido a la
efecto predominante de la disminución de densidad.
Higos. 4 y 5 muestran así que por debajo de 10MPa, las pérdidas de masa obtenidas a 313K
fueron mayores que
los obtenidos a 333K mientras que por debajo de 20MPa, la influencia de la temperatura
fue la contraria.
La presión de inversión se entiende así entre 10 y 20 MPa. Se podría concluir que
por encima de 20 MPa, un aumento de temperatura tendría un efecto positivo en el
rendimiento de extracción.
3.3 Diseño experimental para la metodología de superficie de respuesta (RSM)

Página 24
15

24
En el presente trabajo, las extracciones se realizaron a temperaturas en el rango de 318-
338K,
presiones de 28 a 46MPa y caudales de CO 2 entre 0,32 y 0,81 kg h -1 correspondientes a
Relaciones de masa de CO 2 / microalgas de 80 a 200. Estos parámetros elegidos tienen un
gran impacto en
rendimiento de extracción: los dos primeros parámetros influyen en la solubilidad de los
compuestos en el CO 2 supercrítico , así como la transferencia de masa por difusión
mientras que el último
El parámetro es importante para deducir la cantidad óptima de disolvente que se utilizará
para un determinado
cantidad de biomasa. Por lo tanto, está relacionado con el costo de la operación. Este
experimental
El dominio se determinó en base a los experimentos preliminares y la literatura. La presión
se eligió por encima de 20MPa para evitar el área de solubilidad retrógrada y mejorar la
masa
pérdidas como se ilustra en las Figs. 3 a 5.
Para todos los experimentos, se fijó una duración de extracción de 90 min. La masa de
microalgas estaba en
6 g de media en un extractor de 10 ml, lo que corresponde a una tasa de llenado media del
80%.
La Tabla 5 da la pérdida de masa obtenida para cada experimento.
La pérdida de masa obtenida cubrió un amplio rango de valores de 4.29-16.11%. Como era
de esperar, el
se alcanzó la mayor pérdida de masa para el experimento 11 a la temperatura, presión,
y relación de masa de CO 2 / microalgas, es decir, 338K, 46MPa y 200, respectivamente.
Se utilizaron rendimientos experimentales de aceite para determinar los coeficientes de la
superficie de respuesta.
ecuación (ecuación 3). Los coeficientes estimados se dan en la Tabla 6. El factor más
significativo es
X 2 , es decir, la presión.
La siguiente ecuación polinomial (Ec. 4) representa correctamente los datos experimentales
(R 2 = 0,999). La pérdida de masa calculada y los datos experimentales se comparan en la
Tabla 7.
Y (%) = 9.247 + 1.307X  1 + 3.267X  2 + 1.232X  3 + 0.483X  1 X  2 + 0.332X  1 X  3 +
0.108X  2 X  3 + 0.102X  1 X  2  X  3
(4)

Página 25
dieciséis
Higos. 6 (a) y 6 (b) muestran las superficies de respuesta que ilustran la influencia de la
presión y
temperatura, temperatura y relación de masa de CO 2 / microalgas sobre las pérdidas de
masa, respectivamente. En
En el campo de estudio experimental, el parámetro más influyente en la pérdida de masa de
extracción fue el
presión mientras que el menos influyente fue el caudal de CO 2 . La evolución del
rendimiento extraído con

25
cada parámetro fue como se describe en la literatura [15]: la solubilidad de lípidos neutros
en
El CO 2 supercrítico aumenta cuando aumenta la presión. Desde 28 hasta 46MPa la
influencia
de la temperatura sobre las pérdidas de masa se confirmó a partir de las mediciones
anteriores: un aumento en
la temperatura aumenta la solubilidad de los lípidos neutros en CO 2 supercrítico .
El contenido lipídico de la biomasa de microalgas, incluidos los lípidos polares y apolares,
es en promedio
16% (datos del proveedor), y utilizando CO 2 supercrítico fue posible extraer hasta el 16%
del
biomasa inicial. Sin embargo, se sabe que los lípidos polares no se extraen por vía
supercrítica.
CO 2 [15,16], por lo que estas elevadas pérdidas de masa pueden explicarse principalmente
por la presencia de agua en
los extractos y, en mucha menor medida, por la presencia de antioxidantes.
3.4. Influencia de la presión y la temperatura sobre el contenido de antioxidantes en el
aceite extraído.
La pigmentación marrón de los extractos se debe principalmente a la presencia de clorofilas
y
carotenoides. De hecho, en determinadas condiciones de funcionamiento, el
CO 2 supercrítico también disolvió estos
antioxidantes con el aceite y su solubilidad aumentó cuando la presión aumentó, como para
lípidos neutros.
Los contenidos de  caroteno y clorofila ayb se determinaron usando UV-visible
espectrofotometría para muestras de aceite obtenidas en diferentes condiciones de
operación. Tabla 8
relaciona las condiciones de funcionamiento y proporciona los correspondientes contenidos
de antioxidantes. Todas
Las extracciones se realizaron con un caudal de CO 2 de 0,4 kg h -1 y un tamaño de partícula
inferior a
0,160 mm.

Página 26
17
Como era de esperar, los contenidos de antioxidantes fueron mayores cuando la extracción
se realizó bajo
presión y temperatura más altas. Sin embargo, la extracción de antioxidantes parece ser
fuertemente influenciado por la temperatura. De hecho, el contenido de antioxidantes fue
más de
se duplicó cuando se aumentó la temperatura de 313K a 333K. Una variación de presión
hizo
no tener un efecto significativo. De hecho, trabajar por debajo de 10 o 40 MPa condujo al
mismo
composición.
3.5. Extracciones a mayor escala

26
Se realizaron experimentos a mayor escala con microalgas que contenían un contenido de
lípidos neutros.
del 12% con un tamaño medio de partícula de 0,5 mm.
Se realizó una primera extracción en autoclave de 2L para un lote de 1kg de biomasa seca
correspondiente a una tasa de cumplimiento en un promedio del 75%. La extracción se
llevó a cabo a 29 MPa,
333K y un caudal de CO 2 de 8,5 kg h -1 . Se realizó un lote sin ningún adyuvante y
otro con celulosa con el fin de incrementar la transferencia de masa entre el
CO 2 supercrítico y
biomasa. La figura 7 muestra las curvas de extracción obtenidas y muestra que la
transferencia se realizó rápidamente.
limitado por la difusión. Además, la presencia o no de adyuvante no tuvo un efecto
significativo
Influencia en el rendimiento de extracción.
Otro experimento se realizó en un autoclave de 150 L para un lote de 50 kg (llenado
promedio
tasa del 50%). La extracción se realizó a 29 MPa, 333 K y un caudal de CO 2 de 550 kg h -
1 . La figura 8 muestra la curva de extracción obtenida.
Estos dos experimentos a mayor escala corresponden a factores de escala de 100 y 5000,
respectivamente.
La Tabla 9 compara los resultados obtenidos a escala de laboratorio y a escala piloto. Para
ambos experimentos
(lote de 1 kg y lote de 50 kg), con una relación de masa disolvente / biomasa de 50, la
pérdida de masa
obtenida fue cercana al 6% (Fig. 7 y Fig. 8, respectivamente). A escala de laboratorio, la
pérdida de masa
obtenido bajo 30MPa y 333K para la misma proporción de solvente sobre alimentación fue
de 8.8% pero para un

Página 27
18
tamaño de partícula inferior a 160  m (Fig. 3). Las pérdidas de masa obtenidas para las tres
escalas diferentes
(laboratorio, × 100 y × 5000) son, por tanto, del mismo orden de magnitud en el mismo
Relación de masa de disolvente / biomasa. Esta característica ya se observó por debajo de
50 y 85 MPa en
trabajos previos realizados sobre microalgas [16].
Finalmente, se analizaron los aceites extraídos a mayor escala: determinación de fósforo,
seco
Se determinaron el extracto y la composición de los aceites.
Determinación de fósforo.
El contenido de fósforo de los aceites extraídos por CO 2 supercrítico fue inferior a 10 mg
kg -1 (límite
de detección del aparato de análisis). Este resultado esperado se explica por el hecho de que
El CO 2 supercrítico no solubiliza los fosfolípidos.
Extracto seco.

27
El extracto seco de los aceites extraídos es aproximadamente del 96 al 99% en peso. Una
parte de agua residual (agua inicial
contenido en la biomasa fue en promedio del 5% en peso) se extrae luego.
Composición de aceites
La tabla 10 muestra las clases de lípidos del extracto obtenido con el lote de 50 kg por
debajo de 29 MPa.
ya 333K.
El aceite analizado mostró un alto contenido en ácidos grasos libres en detrimento de los
triglicéridos.
Esta característica ya se ha observado en trabajos anteriores [16]. De hecho, a escala de
laboratorio, el
Se almacena una pequeña cantidad de biomasa de microalgas en un congelador en
atmósfera inerte, pero de esta manera
de almacenamiento no se puede aplicar a mayor escala. El lote de 50 kg de biomasa de
microalgas se
almacenados a temperatura ambiente, lo que puede conducir a la degradación de los
triglicéridos en estado libre.
ácidos grasos. Otra explicación puede ser el contenido sustancial de agua en el extracto,
quizás

Página 28
19
también conduce a la hidrólisis de los triglicéridos extraídos en ácidos grasos libres. Sin
embargo, esto
El contenido de ácidos grasos libres no compromete el valor nutricional de los aceites
extraídos.
4. Conclusiones
El objetivo de este trabajo fue realizar la extracción de CO 2 supercrítico a partir de lípidos
neutros enriquecidos
Spirulina platensis . La influencia de las condiciones de funcionamiento: presión,
temperatura, flujo de CO 2
Se estudió la tasa, la tasa de llenado sobre la cinética de extracción y / o los rendimientos, y
sobre el contenido de antioxidantes. Como
esperado, la presión es el parámetro más influyente en los rendimientos de extracción y la
cinética. La
El comportamiento retrógrado también fue bien ilustrado. La presión de inversión se
entiende entre 10
y 20MPa. En cuanto a la influencia de los parámetros operativos sobre el contenido de
antioxidantes,
Parece que la temperatura es el parámetro más significativo. Cuanto mayor sea la
temperatura,
mayor el contenido de antioxidantes. Las extracciones a mayor escala (factores de escala de
100 y 5000) fueron
realizado y condujo a resultados alentadores ya que la pérdida masiva fue del mismo orden
de
magnitud como a escala de laboratorio para una relación equivalente de disolvente sobre
alimentación. Los datos recopilados

28
se utilizará para desarrollar un modelo matemático con el fin de predecir curvas de
extracción.

Página 29
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[22] L. Wang, B. Pan, J. Sheng, J. Xu, Q. Hu, Actividad antioxidante de Spirulina platensis
extractos por extracción de dióxido de carbono supercrítico, Food Chem. 105 (2007) 36-41.
[23] JA Mendiola, D. García-Martínez, F. Javier Rupérez, PJ Martín-Álvarez, G. Reglero,
A. Cifuentes, C. Barbas, E. Ibañez, FJ Señoráns, Enriquecimiento de vitamina E a partir
de espirulina
platensis microalga por SFE, J. Supercrit. Fluidos 43 (2008) 484-489.
[24] EG Bligh y WJ y Dyer, Un método rápido para la extracción y purificación total de
lípidos,
Lata. J. Biochem. Physiol. 37 (1959) 911-917.
[25] WR Morrison y LM Smith, Preparación de ésteres metílicos de ácidos grasos y
dimetilacetales de lípidos con fluoruro de boro-metanol, J. Lipid Res. 5 (1964) 600-608.
[26] A. Mouahid, C. Crampon, SA. A. Toudji, E. Badens, extracción
de CO 2 supercrítico de
lípidos neutros de microalgas: experimentos y modelado, J. Supercrit. Líquido. 77 (2013) 7-
dieciséis.

Página 32
23
Fig. 1: Aparato de extracción de CO 2 clásico a escala de laboratorio .
F

Tanque de CO 2
Enfriador
CO 2 alto
bomba de presión
Manómetro
Calentador
Extracción
célula
Recolección de aceite
Matraz Erlenmeyer
Flujo
metro
Expansión
válvula

Página 33
24
Fig. 2: Curvas de extracción obtenidas para varias tasas de llenado.

Página 34
25
Fig.3: Influencia de la presión en las curvas de extracción a 333K

Página 35
26
Fig. 4: Influencia de la temperatura por debajo de 10MPa.

Página 36
27
Fig. 5: Influencia de la temperatura por debajo de 20MPa.

Página 37

31
28
Fig.6: Superficies de respuesta que ilustran la influencia de la presión y la temperatura en la
pérdida de masa (a)
y temperatura y relación de masa de CO 2 / microalgas en la pérdida de masa (b).
a)
B)
318 K
338 K
338 K
318 K
46 MPa
28 MPa
200
80
Relación CO 2 / microalgas = 140
Presión = 37MPa

Página 38
29
Fig.7: Curvas de extracción obtenidas con un lote de 1 kg de biomasa seca sin ningún
adyuvante
y con celulosa a 29MPa, 333K y un caudal de CO 2 de 8,5 kg h -1

Página 39
30
Fig.8: curvas de extracción obtenidas con un lote de 50 kg bajo 29MPa, 333K y un flujo
de CO 2
tasa de 550 kg h -1 .

Página 40
31
Tabla 1: Reproducibilidad de los experimentos de extracción
Experimentar
Pérdida de masa
/%
Promedio
/%
T = 328 K; P = 37MPa; Q  CO2 = 0,562 kg h -1
1
8.8
8,9 ± 0,1
2
8.8
3
8,9
T = 318 K; P = 28MPa; Q  CO2 = 0,791 kg h -1
1
6.1
6,2 ± 0,1
2
6.3
T = 318 K; P = 46MPa; Q  CO2 = 0,867 kg h -1
32
1
11,7
11,6 ± 0,3
2
11,3
3
11,9

Página 41
32
Tabla 2: Factores y niveles estudiados para el diseño experimental
Parámetro
Temperatura
T/K
Presión
P / MPa
CO 2 / masa de microalgas
proporción
Factor
Valor máximo de parámetro
Nivel alto
Valor mínimo de parámetro
Nivel bajo
X 1
338
(+1)
318
(-1)
X 2
46
(+1)
28
(-1)
X 3
200
(+1)
80
(-1)
Tabla 3: Condiciones operativas de extracción realizadas
Experimentar
número
X 1
T/K
X 2
P / MPa
X 3
Relación de sobrealimentación de CO 2

33
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
318
338
318
338
318
318
338
318
318
318
338
328
28
28
46
46
28
28
28
46
46
46
46
37
80
80
80
80
200
200
200
200
200
200
200
34
140

Página 42
33
Tabla 4: Perfil lipídico de microalgas antes de la extracción de CO 2 supercrítico
Ácidos grasos
Concentración de ácidos grasos
/ µg g -1 de microalgas secas)
Proporciones relativas
/%
Saturado (SFA)
C8
78
0,07
C10
27
0,02
C12
27
0,02
C14
515
0,46
C16
70860
63,48
C18
1468
1,32
Monoinsaturados (MUFA)
C16: 1
8955
8.02
C18: 1n-9
3274
2,93
C18: 1 n-7
588
0,53
Poliinsaturados (PUFA)
C18: 2
15321
13,73
C18: 3
10505
9.42
Σ SFA

35
72975
65,38
Σ MUFA
12817
11.48
Σ PUFA
25826
23.14

Página 43
34
Tabla 5: Pérdidas de masa obtenidas en diferentes condiciones operativas
Número de experimento
T
/K
PAG
/ MPa
Relación de masa de CO 2 / microalgas
Pérdida de masa
/%
1
318
28
80
4.29
2
338
28
80
5.48
3
318
46
80
9,85
4
338
46
80
12.56
5
6
318
318
28
28
200

36
200
6,08
6.25
7
338
28
200
8.19
8
9
10
318
318
318
46
46
46
200
200
200
11,91
11.34
11,66
11
338
46
200
16.11
12
328
37
140
9.00

Página 44
35
Tabla 6: Coeficientes de la ecuación de superficie de respuesta
Coeficiente
Valor
Significado %
b 0
b 1
b 2
b3
b 12
b 13
b 23

37
b 123
9.247
1.307
3.267
1.232
0.483
0.332
0.108
0.102
0,600
4.5
1,80
4,77
12,1
17.3
45,2
46,7
Tabla 7: Pérdidas y desviaciones de masa de petróleo previstas en relación con los datos
experimentales
Experimento número Y calc /%
Y exp /%
Desviación
1
2
3
4
5
6
7
8
9
4.259
5.449
9.819
12.529
6.049
8.159
11.629
16.079
9.247
4.29
5.48
9,85
12.56
6,08
8.19
11,66
38
16.11
9.00
0,031
0,031
0,031
0,031
0,031
0,031
0,031
0,031
-0,247

Página 45
36
Tabla 8: Condiciones de operación de extracción y contenidos de antioxidantes
correspondientes (mg g -1 de
aceite extraído).
Temperatura
/K
Presión
/ MPa
caroteno
Clorofila a
Clorofila b
333
40
0,22
0,40
1,50
313
40
0,09
0,20
0,65
313
10
0,11
0,26
0,64
Tabla 9: Comparación entre los resultados de la planta piloto y la escala de laboratorio
Escala
Volumen de autoclave
/L
(masa de biomasa seca)
PAG
/ MPa
T
39
/K
Caudal de CO 2
/ kg h -1
Pérdida de masa en CO 2 -
relación de sobrealimentación = 50
Escala de laboratorio 20 mL (10 g)
30
333 0,5
8,8 *
× 100
2 litros (1 kg)
29
333 8.5
6.2 **
× 5000
150 litros (50 kg)
29
333 550
6 **
* d <160  m
** d = 500  m
Tabla 10: Clases de lípidos del extracto obtenido con el lote de 50 kg
Clases de lípidos Hidrocarburos AGL *
Triglicéridos Colesterol Antioxidantes
Composición
/% en peso
1,55
86.10
2,41
2,42
7.51
* Ácidos grasos libres

40