LA REACCION DE LA ANTRO N A
en démontrant son effet sur les symptómes
ｾｩｱｵ･ｳ＠ et les ｭｯｾｬｩｦ｡ｴｮｳ＠ ｢ｩｯ｣ｾｮＺｱｵＮ･ｳ＠
Iasme, fonction hevatique, etc. V1s a v1s des
pésultats ex1.érimentaux, qui s2ront commu-
ｾｩｱｵ￩ｳＬ＠ on ｣ｯｮｳｩＨｾﾷ･＠ ｾｵ･＠ cet ｾｦ･ｴ＠
a travers la mocl!ficatwn causee dans la fiare
intestinale; cclle-ci, ｳｯｾｴ＠ a ｴｲ｡ｾ･ｳ＠
tion soit á tra vct'S l'elaboratwn de tox1ques,
joue certainemcnt _un róle ｦ＿ｮ､ｾｭ･ｴ｡ｬ＠
production de la cnTlwse hepabque.
LA REACCION DE LA ANTRONA EN LA
DETERMINACJON DE LOS HIDRATOS DE
CARBONO
F. GRA:\DE, A. UTRERA
lnstiiuto dt• ｉｮ ｶ｣ｳｾｬｧｮ･ｩｯ＠
l'mfpsor C. J
La casi totalidad de los métodos empleados
habitualmente para la determinación de la glu-
cosa en los líquidos biológicos se basan en el
poder reductor de este glícido. Por ello, dichos
métodos pueden dar valores anormalmente ele·
vados al computar como glucosa otras sustan-
cias reductoras que suelen acompañar a ésta.
Aunque muchos de los métodos empleados en
la actualidad evitan este inconveniente ｭ･ｲｾ､＠
al uso de desproteinizantes adecuados, es inte-
resante en ciertos casos disponer de un méto-
do exacto que permita la determinación de los
hidrocarbonados sin depender del poder reduc-
tor de los mismos.
La reacción de los hidratos de carbono con
la antrona, descrita recientemente por DHEY-
wooo, ofrece en este sentido un gran ｩｮｴ･ｲ
ya que se trata de una reacción extremada-
mente sensible y específica que puede ser apli ·
cada a todos los hidratos de carbono, sean o no
reductores, y permite la valoración de los po-
ｬｩｾ￭｣､ ｯｳ＠ sin necesidad de recurrir a la previa
h1drolisis de los mismos. Estos y otl os motivos
ｾ｡＠ dado lugar a que en la literatura de los
ｵｬｴｾｭｯ ｳ＠ años se hayan publicado algunos tra-
baJos relacionados con la aplicación de esta
reacción a la determinación de los hidratos de
carbono en distinto::; productos biológicos. En·
tre estos trabajo::; debemos mencionar los de
MORRIS (194.8), SEIFTER y cols. (1950) y ZIPF y
WALDO (1952) .
Nuestro interés por el método de la antrona
ｳｾ＠
ｾ･ｳ｡ｲｯｬ￳＠ inicialmente al buscar un proce-
dimiento para la determinación del alucógeno
en pequeñas muestras de tejidos y eno condicio-
nes en las que los métodos habitualmente em-
17
pleados no daban resultados bastante satisfac-
du torios.
Al estudiar la aplicación del método de la an-
trona a nuestro problema tuvimos ocasión de
se produit realizar algunas observaciones acerca de la
reacción de esta sustancia con los hidratos de
ｬＧ｡ｵｴｯＭｾｮｦ ･｣ ﾭ carbono, que creemos puedan ser de interés
para quienes se preocupen ror estas cuestio-
dans la nes, y que damos a conocer en el presente tra-
bajo.
D8SCRIPCI(¡:-.; DE T.OS EXPERI\11::\TO>; .
•liélodos. - La antrona utilizada <'n uuPst! os expen-
mentos fué preparada a partir de antraquinona, si-
guiendo el método descrito en Orgrulic Synt111 sis (vol. 1,
página 60 l. Las primer as m u es tras fu eron preparadas
t•n el Instituto Ibys por los señores ｂｕｅｒｴＺｾ＠ y ｇＮｾｌｅｏＬ＠
cu:ya colaboración agradecemos; las demás, fueron pre·
par·adas <'n nuestro laboratorio.
La solución de antrona se preparó, según ｚｉｐｾ＠ y \\"AL-
t)(), di!<olviendo O 2 gr. del producto puro <'n la mezcla
fría de 5 c. c. de agua y 95 c. c. de sulfúrico concen-
tl ado. El sulfúrico debe ser purísimo, habiendo obteni-
do resultados sati.sfactorios con <'1 de la marca Probus,
y J. C. DE ÜYA. calidad para análisis. La solución de antrona se pre-
paró nueva cada dia aunque puede conservarse cuatro
:\féd1cas. :\fadri!l . Directo•·. o cinco días sin que se modifiquen los resultados. Las
l llt'> r.z.
Di.lz. ｭｵ･ｾｴｲ｡ｳ＠ de hidrato de ca1bono utilizadas fueron en to-
dos los casos de marcas conoci<las y de calidad "purí-
sima" o para análisis. En t odos los casos las muestras
fueron desecadas cuidadosamente, en vacío, sobre sulfú-
rico, antes de preparar las soluciones correspondientes.
Estas se hicieron en gene1-al a partir de una solución
madn• conserva da en la nevera, de la que por dilución
S<' pr<'paraba ca<la dia la solución a utilizar.
Dl'b<' tenerse gran cuidado en el Sl cado d<'l material
d<' viril io, quP no debe hac erse nunca con papel de Iil·
lro o paños. T odo el material utilizado por nosotros fué
S<'cado a la estufa después del lavado habitual.
Como aparatos de mPdida utilizamos el colodmetro
fotoeléctrico de Evelyn y el espectrofotómetro de Co-
leman.
R ESULTADOS.
A continuación exponemos los resultados de
nuestras observaciones, que agrupamos en una
serie de capítulos de acuerdo con los distintos
problemas examinados.
￩ｾＮ＠
a) Influencia del calentamiento.
La reacción de la antrona requiere para su
producción la elevación de la temperatura de
la mezcla durante algún tiempo . Generalmente
se admite que el calor producido al mezclar la
solución sulfúrica de antrona con la solución
acuosa que se analiza, basta para hacer mar-
char la reacción. Sin embargo, algunos autores
opinan que el desarrollo de calor puede no ser
bastante uniforme, lo que puede influir sob1 e la
intensidad del color de la reacción.
E studiamos el desarrollo de calor en las con-
diciones de nuestras determinaciones introdu-
ciendo directamente un termómetro en el tubo
del colorímetro en donde se mezclaban :3 c. c. de
la solución a analizar con 6 c. c. de solución sul-
fúrica de antrona. El desarrollo de calor en el
18
tubo mantenido al aire puede verse en la figu-
ra 1, que reproduce una de las observaciones
realizadas.
Siguiendo esta misma técnica se realizaron
una serie de 118 determinaciones con cantida-
des de glucosa que ｯｳｾｩｬ｡ｲｮ＠ entre 2 y 50 mi-
crogramos para el volumen total de 9 c. c. (3 de
1
¡ minutos, al cabo de los cuales se le lleva de nue-
110 f - · 1 J
10o't
i
1
! 1
90
\ , 1 entrada en el baño a 80 grados y cuidar de sa-
\ 1
1
1
70 \ 1
1
6 \ 1
''
1
1 puesto el reactivo de antrona en todos ellos lle-
l 1
1 nos satisfactorios.
JO
S ｾ＠
: 1
"
1
;o
l
/S
t días.
Fíg. l.-Desarrollo de calo< al mezclar 3 <'. <" de ｾｯｬｵ｣ｩ￳ｮ＠
:u•uosR con 6 c. c. de solución de antrona en sulfúrico en
un tubo de Evelyn.
Ordenadas: ｔ･ｾｮｰ ･ｲ｡ｴｵ＠ en gra dos.
ａ｢ｒｃｩｾ｡ｳＺ＠ )Iinutos tran>:curridos ､･ｾ＠
clar la" soluciones.
Temperatura exterim·: 25 ｾｲ｡｣ｴｯｳＮ＠
solución acuosa de glucosa y 6 de solución
sulfúrica de antrona ) . El color fué medido en
el fotoc:olorímetro, pasados treinta minutos
usando el filtro 620.
Los resultados fueron en general excelentes
para cada serie de determinaciones, pero los
valores variaban de un día para otro más de
lo que parecía conveniente. Se pensó en que es-
tas diferencias podían estar ocasionadas por
modificaciones en el calentamiento de la mez-
cla y se ensayó entonces otro método capaz de
permitir mantener más constantes las condicio-
nes en cuanto a la temperatura de la mezcla.
Siguiendo lo señalado por otros autores prac-
ticamos la adición de la solución de antrona en
sulfúrico a la solución que contiene el hidrato
de carbono, mientras los tubos de Evelyn que
contienen esta solución se hallan sumergidos en
un baño de agua a temperatura ambiente. Los
tubos son sacados luego del baño de agua y lle-
vados a otro en el -cual el agua se mantiene a
una temperatura más elevada. Se hicieron una
serie de ensayos para establecer las condiciones
óptimas de la reacción, de los que se dedujo
que la temperatura del baño más conveniente
era la de 80 grados, mantenida durante quince
minutos. El procedimiento finalmente adapta-
do fué el siguiente:
REVISTA CLINICA ESPAÑOLA 15 O<'tub 1·e 1953
Los tubos de Evelyn conteniendo la solución
del hidrato de carbono en un volumen total de
3 c. c. se colocan en una gradilla adecuada. Con
una bureta se añaden a cada tubo los 6 c. c. de
la solución de antrona en sulfúrico, agitando el
tuvo vivamente para que la mezcla se efectúe.
Tan pronto se ha verificado dicha mezcla se
lleva el tubo al baño a 80 grados, anotando exac.
tamente el tiempo y manteniéndolo allí quince
vo a ot ro baño con agua corriente. El método
requiere d os personas: una, para ir poniendo el
sulfúrico en los tubos, y otra, para anotar la
1
carlos cuando han pasado exactamente los quin-
ce minutos de calentamiento. Este procedimien-
1 to es un poco más complicado que otros proce-
dimientos que han sido descritos, pero es el
1
que nos ha dado resultados más constantes. St
se dejan los tubos en un baño hasta que se ha
¡
vándolos todos a la vez al baño caliente, se ob-
tienen resultados que hemos considerado me-
1
1
En la tabla I presentamo!-> los valores obtem-
Jo ｍ ｴ ｾｗｩｯｳ＠
dos con este procedimiento para una serie de
muestras de glucosa determinadas en distintos
b) D esarrollo de color y su relación co11 la
C'Oncentración df'l hülrofo de carbono.
el momento de m<'z·
El producto de la reacción entre la antrona y
los hidratos de carbono tiene color azul, pero
como la solución de antrona tiene un tono ama-
rillento, el color del líquido que se observa cuan-
do la reacción se hace con pequeñas cantidades
de glícido adquiere un tinte verdoso.
Se realizó el estudio del color en el espectro
visible utilizando el espectrofotómetro modelo
Coleman, midiendo la absorción entre 400 y 750
milimicras, con intervalos de 25 milimicras. El
resultado de estas medidas se presenta en la fi-
gura 2, en la que se reproducen la curva de ab·
sorción luminosa de la solución de antrona al
0,2 por 100 en sulfúrico más un 50 por 100 de
su volumen de agua bidestilada y la de un pro·
blema que contiene 50 microgramos de glucosa
en un volumen total de 9 c. c. (3 de solución de
glucosa y 6 de reactivo de antrona).
El estudio de la curva muestra que el pro·
dueto de la reacción tiene su máximo de absor·
ción en 625 milimicras. P or esta razón emplea·
mos sistemáticamente para nuestras determina·
ciones en el colorímetro de Evelyn el filtro 620.
De acuerdo con lo observado por MORRIS, he·
mos encontrado que el desarrollo de color pue·
de medirse también con el filtro 540 de Evelyn,
pero se obtiene entonces una menor sensibili·
dad, como puede verse en la figura 3.
De acuerdo con las observaciones de este
autor hemos encontrado que el desarrollo de
TOll(\ L1 LA REAOOJON DE LA ANTRON A 19
N t MERO 1

olor sigue la ley de Beer, existiendo buena pro- losa da una intensidad de color mucho mayor.
ｾｯｲ｣ｩｮ ｡ ｬｩ､ ｡ ､＠ por lo menos hasta la cantidad La glucosa ocupa una posición intermedia. Los
de 150 microgramos de glucosa en el volumen poliglícidos muestran un desarrollo de color
total de 9 c. c., como puede ver se en la figura 4. que es comparable al de los monoglícidos que

41
r
1,2

D,l Ｏｾ＠
1,0
45 /
!/
V
ｯ ｾ＠

0,8

oJ /

Lv / ｲ ｾ＠

0,5
4J /
0.1 V I/ .
ｾ＠
ｾ＠
0,1
1 1
/0 20 JQ

F ig. 3.-Desarrollo de color en la reacción entr e la ant rona

y la glucosa.
F otocolorimetro de Evelyn. Filtro, 620 y 540. V olu men t o-
tal, 9 c. c. (3 c. c. de solución de glucosa y 6 c. c. de reac-
tivo de a n trona) . Baño a 80 grados, 15 minutos.
Ordenadas: Coeficiente de extinción.
500 600 Abscisas: Microgramos de glucosa p or tu bo.
Fig. 2.-Curva de absorción de la r eacción de la antrona a Lecturas con el filtro 620.
(bnflo a 80 grados, 15 minutos). + Lecturas con el filtro 540.
X 6 c. c. de solución sulfúrica de antrona. -r 3 c. c. de
agua bidestilada.
1 6 c. c. de solución sulfúrica de antrona. + 3 c. c. de so-
lución acuosa C'Onteniendo 50 microgramos de g lucosa.
S
1 1 :
1 ! 1 1 ;,
Ordenadas: Coeficien te de extinción .
t•
ｾＱ＠ 1 1 1 7
Abscisas: Longitud de onda en m !lim icras. IJ
- 1 1
1
i 1 /
Espectrofotó:netro Coleman.
/
11
1 1
/
11
1 1
' 1
1
I.D r
e) I nfluencia de la clase de hidrato de carbono 1 1 1 ｾ＠ 1
1
sobre el desar rollo de color. 1 / 1

La reacción de la antrona, según se ha indi- 1

1 / . 1

1 / 1
cado ya, es común a todos los hidratos de car- 1
1
1 / 1
bono, pero la cantidad de producto coloreado ' 1
ｾ＠ 1
resultante puede variar de un glícido a otro. '
Ya en 1946 observó MORRIS que la misma can- T _/ 1
tidad en peso de glucógeno y de glucosa dan D.J
:/ 1
'
una ligera diferencia de intensidad de color. El ., l./;' 1 1

glucógeno da por término medio un 11 por 100 / 1 1

más de color que la glucosa. La galactosa, en

cambio, sólo da un 54 por 100 del color des-
arrollado por una cantidad igual de glucosa.
Estas observaciones nos movieron a estudiar
sistemáticamente el desarrollo de color de los
distintos hidratos de carbono a nuestro alcan-
ce, siguiendo la técnica antes descrita.
En la figura 5 reproducimos los valares ob-
tenidos con una serie de hidratos de carbono.
. Como puede verse, los monosacáridos reac-
cionan con la antrona con tres grados diferen-
tes de intensidad. La galactosa y la mannosa
desarrollan menos color, mientras que la levu-
Fig. 4.-Relación entre d e sarrollo de color y cantidad de
g lucosa .
Volu:nen total, 9 c. c. (3 c. c. de solución gl ucosa y 6 de
r eactivo de antrona). Lectur as, fotocolorimetro de Evelyn.
Filtro 620, 15 minutos de b a ñ o a 80 grados.
Ordenadas: Coeficiente de extinción.
Abscisas : Micr ogramos de g lucosa p or t ubo.
los componen. Así, la inulina da aproximada-
mente la misma intensidad de color que la le-
vulosa, mientras que el almidón y el glucógeno
dan una intensidad de color comparable a la de
la glucosa.
 20. REVISTA OLIN IOA ESPAÑOLA 115 octubre 1953

que 100 microgramos de glucosa dan un color

equivalente a 106 microgramos de glucógeno.
La purificación del glucógeno por disolución en
agua caliente seguida de precipitación por al-
cohol y secado cuidadoso del producto, no mo-
dificó sensiblemente el resultado.

d) Sobre el mecanismo de la reacción.

M#
Fig. 5.-Color producido por la antrona con diferentes hi-
dratos de carbono.
Volumen total; 9 c. c. (3 c. c. de solución de hidrato de car-
bono y 6 c. c. de reactivo de antrona).
Baño 80 grados, 15 minutos. Lectura, fotocolorlmetr·o tle
Los datos publicados hasta el presente con
respecto al mecanismo de la reacción de la an-
trona hacen depender ésta de la formación de
furfural o un derivado del mismo (SATTLER v
fZERBAN; ZIPF y W ALDO) . .
Es interesante señalar a este respecto que la
reacción de la antrona con el furfural no es
exactamente comparable a la que da con los
hidratos de carbono. En su primera publicación
señaló DREYwooo, en efecto, que el color verde
de la reacción suele virar a ocre con rapidez.
Hemos ensayado la reacción del furfural con
la antrona empleando una muestra de furfural
recién destilado y hemos observado también
este fenómeno, que no se da con los hidratos
de carbono.

ﾡ Ｎ Ｌｾｬﾷ＠
Evelyn. Filtro 620.
-- -+
.1 .e/r .- j T-
Ordenadas: Coeficiente de extinción. f-
Abscisas: Cantidad total de hidrato de <'arbono en mi{'ro-
gramos por tubo !5 - f- - - ｾ＠ Ｍｾ＠
-- - - -- f- Rpmncuo
Los disacáridos se comportan de manera un

,7V
poco más compleja. La maltosa, por ejemplo, da 1,3
el mismo color que la glucosa, lo que hace pen-
sar que tanto los di como los poliglícidos com-
puestos de glucosa tienen el mismo desarrollo jv¡ ¡__
de color. Sin embargo, la trehalosa, que es como
la maltosa, un diglícido compuesto de dos mo- / 1
léculas de glucosa, da mucho menos color que lj
aquélla. La diferencia entre la maltosa y la tre- 0.9 )1
halosa consiste únicamente en el modo de unión 0,8 /¡
de las dos moléculas de glucosa, que forman
un enlace 1-4 en el caso de la maltosa, y un 0.1 // ... .Ｑ ｾ＠ Ｍｾ＠
[._/
v
enlace 1-1 en el caso de la trehalosa. Así, pues, //:
[/6
es posible que no sólo sea importante la natu- -/- 1 - - ｾ＠

raleza de los monosacáridos que componen el di- 0.5 j ｾ＠ / ,__

glícido, sino también la forma de estar unidos.
La lactosa da un color intermedio que viene ¡// /
¡.../
./
¡.,

a corresponde aproximadamente a la mezcla de V V V

O.J ｾ＠ .// ｾ＠ IAra.b Ｂ ｾﾷ Ｍ
glucosa y galactosa que la constituye. La sa-
carosa, en cambio, parece dar más color del que
corresponde a la levulosa y la glucosa que la
ｾｦ＠ v/
.......
...v V
-
constituyen. (),/ ¡) _.,/ ｶｾ＠ /
Nuestros resultados no coinciden exactamen- ｾ＠ V
te con los de MORRIS en lo que respecta a la re-
lación entre el desarrollo de color del glucó-
Fig. S.-Comparación del color producido con la antrona
geno y la glucosa. Los valores que hemos ob- por· dos pentosas (xllosa y arabinosa), una metllpentosa
tenido indican que el glucógeno desarrolla, en (ra:rmosa) y una hE'xosa (glucosa).
efecto, un poco menos de color que la glucosa. Volumen total, 9 c. c. (3 c. c. de solución de hidrato de car·
bono y 6 c. c. de reactivo de antrona). Baf'ro a 80 grados,
Mientras MORRIS encuentra que 100 microgra- 15 minutos.
LE'duras colorlmetro, foto eléctrico de Evelyn. Filtro 20-
mos de glucógeno dan el mismo color que 111 0rdenadas: Coeficiente de extinción.
microgramos de glucosa, encontramos nosotros Abscisas: Micromoles de hidrato de carbono por tubo.

-- ·----
ToMO Ll LA REACCION DE LA ANTRON A :n
;-<()MERO 1

A fin de obtener algún dato más acerca de
esta cuestión, realizamos una serie de experi-
mentos en los que estudiamos comparativamen-
te el color ､･ｳ｡ｲｯｾｬ＠ por dos pentosas: la
l-arabinosa y la d-xilosa; una hexosa, la el-glu-
cosa, y una metilpentosa, la ramnosa.
Los resultados de estos experimentos se re-
cogen en la figura 6, cuyos valores son cifras
medias de dos experimentos coincidentes rea-
lizados en diferentes días.
Es fácil otservar que el color desarrollado
por las pentosas, referido a igual concentración
molecular, es mucho menor que el desarrollado
por la ramnosa o la glucosa.
Por la acción de los ácidos, las pentosas for-
man furfural , mientras que la metilpentosa
debe formar metil-furfural, y la hexosa, hidro-
ximetil furfural , según se expresa en las fórmu-
las siguientes (ver BERNHAUER, HURD e ISEN-
HOUR, WOLFRON y cols.).
las pentosas y las hexosas pudiera ser, por tan-
to, detido a este hecho.
Es digno de tenerse en cuenta que dentro de
las pentosas el color desarrollado es mucho me-
nor para la arabnosa que para la xilosa a igual
concentración molar. En 1932 observaron HURD
e ISENHOUR que en ¡:resencia de ácido sulfúrico
al 32 por 100 la arabinosa se transforma ｾｮ＠
furfural en un 45 por 1CO, mientras que la xi-
losa en iguales condiciones da un 70 por 100
de dicho producto. Es interesante que los co-
lores desarrollados ror estas dos pentosas en
nuestros experimentos se encuentran entre sí
en proporción análoga a la que acabamos de
señalar.
Los resultados indican, por tanto, que en el
mecanismo de la reacción de los hidratos de car-
bono con la antrona debe intervenir, en primer
lugar, la clase de derivado furfurólico formado,
y en segundo lugar, la proporción del mismo
que se rroduce en las condiciones de la reacción.

CHO
e) La aplicación clel método ele la antrona a la
H.C.OH CH-CH deternánación del glucógeno.
HOC.H HC C.CHO Uno de los aspectos más útiles de la reacción
de la antrona es su aplicación a la determina-
H .C.OH o ción del glucógeno, puesto que permite prescin-
CH,OH dir de la hidrolisis, que de otra manera es ne-
cesaria.
r('ntosll . Furfural.
En 1950, SEIFTER y cols. describieron un mé-
todo para la determinación del glucógeno em-
CHO pleando la reacción de la antrona, que encierra
H.C.OH notables ventajas de sencillez y exactitud.
CH-CH Hemos realizado una serie de ensayos para
HCOH aplicar la reacción de la antrona a la determi-
e C.COH nación del glucógeno en el hígado y el músculo
HOCH de rata. El método que hemos adoptado final-
H,C O
HOCH mente no se diferencia de modo fundamental
del que SEIFTER y cols. llaman método indirec-
CH, to. El trozo de hígado o músculo (hasta 100 mi-
l\1et llpen ｴｯｾｵＮ＠ ligramos del primero y 200 del segundo) se pe-
san rápidamente con balanza de torsión y se
CHO llevan a un tubo de centrifuga :::alocado en baño
hirviente en el que hay 1 c. c. de KHO al 30 por
HC.OH 1GO. Se deja en el taño unos veinte a treinta
CH CH minutos, agitando de vez en cuando hasta que
HOC"H el tejido esté completamente disgregado y la
C C.COH
IICOH / solución sea perfectamente homogénea. Se deja
HCOH O enfriar y se añade 1,25 c. c. de alcohol absolu-
HCOH to, mezclando bien y llevando a baño caliente
para coagular el glucógeno, hasta que se inicie
CH,OH
la etullición del alcohol. Se deja enfriar y se
Hexosn. H id I"OXimetll furfu ral. centrifuga el tuto quince minutos a 3.000 re-
voluciones por minuto.
Si se admite que los productos formados por Se decanta el tubo invirtiéndolo sobre parel
la acción del ácido sobre los azúcares son los de filtro. Se añade luego 1 c. c. de agua desti-
ｱｵｾ＠ acabamos de señalar, tendremos que con- lada caliente, lavando Cien las paredes del tubo
clUir que el color desarrollado por el furfural al y disolviendo el glucógeno, que se vuelve a pre-
rea:cionar con la antrona es menor que el pro- cipitar con alcohol, repitiendo la centrifugación
､ｾ｣ｬｯ＠ cuando ésta reacciona con el metil o el y la decantación. Esta maniobra es convenien-
hldroximetilfurfural. te, sobre todo cuando se trata de trozos de
La diferencia entre el color desarrollado por músculo (diafragma de rata. por ejemplo) que
22 REVISTA CLINICA ESPA!VOLA
han sido incubados en un medio que contiene
elevada concentración de glucosa. En estos ca-
sos hemos encontrado útil lavar también en
Ringer sin glucosa el músculo, y secarlo luego
con papel de filtro, antes de pesarlo.
El precipitado de glucógeno se disuelve final-
mente en un volumen de agua destilada calien-
te de unos 10 c. c., tomando dos fracciones, de
3 c. c. cada una, para hacer la determinación
con 6 c. c. de reactivo de antrona, según se dijo
anteriormente.
El método se comparó con el clásico de Gooo,
KRAMER y SoMOGYI, encontrando en general ex-
celente acuerdo, como -¡:uede verse en la tabla II
que reproducimos a continuación. Los valores
son medias de dos determinaciones paralelas.
En la determinación del glucógeno utilizamos
sistemáticamente para la lectura colorimétrica
dos soluciones patrón de glucógeno, purificado
y desecado como se ha dicho anteriormente. De
esta manera los valores vienen expresados en
cantidades de glucógeno y no en el equivalente
de glucosa, como se expresa frecuentemente.
DISCUSIÓN.
Los datos que hemos dado indican que el mé-
todo de la antrona constituye un procedimiento
sensible específico y exacto para la determina-
ción del material hidrocarbonado en los produc-
tos biológicos. Su aplicación a la determinación
de la glucemia da resultados satisfactorios se-
gún han demostrado ZIPF y WALDO, y puede
constituir un método de gran utilidad por su
sencillez. Creemos, sin embargo, que el mayor
valor del método está en su aplicación a la de-
terminación del glucógeno.
Los dos mayores inconvenientes P!'ácticos del
método de la antrona están sin duda en la ne-
cesidad de vigilar con gran exactitud la tempe-
ratura durante el desarrollo del color y en el
manejo de la solución sulfúrica. Esta última
dificultad ha sido obviada por LoEwus, que em-
plea una solución de antrona en acetato de eti-
TABLA I
DESARROLLO DE COLOR DE LA REACCTON DE LA ANTRONA ｃｏｾ＠ LA GLUCOSA MEDIDO EN EL FOTOCO-
LORIMETRO DE EVEYN. FILTRO 620
Volumen total, 9 c. c. (3 c. c. solución problema y 6 c. c. solución antrona en sulfúrico). Calentamiento en baño a 80
grados, quince minutos.
COEFICIENTES
Cantidad total de glucosa por tubo en microg't'amos
Experimento 10 20 30
----
l. 0,0901 0,1772 0,2716
2. 0,1871 0,2924
3. 0,1135 0,2041 0,3100
4. 0,1010 0,2007 0,3080
5. 0,0996 0,1990 o,3010
---- -
0,101
Medias.... ..... 0,193 0,296
16 octubre 1953
lo, añadiendo luego por separado el ácido sul.
fúrico.
El hecho de que la antrona reaccione con t 0 •
dos los hidratos de carbono hace que esta reac.
ción sea útil sobre todo en aquellos estudios en
que se desee conocer la cantidad total de hidro-
carbonados, pero no importa saber cuáles son
los glícidos individuales presentes. Si el proble.
ma que interesa es el último señalado, enton.
ces es preciso recurrir a otros procedimientos
capaces de permitir la individualización de los
diferentes hidratos de carbono.
Por lo que respecta al mecanismo de la reac-
ción, los datos de la literatura (ZIPF y W ALDo)
y nuestras observaciones indican que se trata
de la condensación del derivado furfurólico
con la forma enólica tautómera de la antrona
o antranol. Nuestras observaciones indican que
los derivados metílicos del furfural (metil-fur-
fural e hidroximetilfurfural) dan muy aproxi-
madamente el mismo color ror mol.
El menor desarrollo de color observado en
las pentosas podría explicarse por el hecho de
que formen furfural y no su derivado metílico.
La semejanza entre la cantidad de calor pro-
ducida y la cantidad de furfural formada por
estas pentosas puede ser una indicación más
en este sentido.
No es fácil comprender la diferencia entre
las distintas hexosas, en lo que re::l¡,ecta a la
cantidad de color producida, que no podemos
explicar con los datos que poseemos. La dife-
rencia en la intensidad de color desarrollado
por las distintas hexosas con la antrona hace
que su aplicación a mezclas de las mismas sólo
pueda realizarse de modo cuantitativo si se co-
noce la proporción en que éstas se encuentran.
La mayor utilidad del método en el análisis
bioquímico está, como hemos dicho, en que per·
mite determinar la glucemia sin ser afectado por
las sustancias reductoras no azúcares y en la
determinación del glucógeno. Su utilidad es
también evidente para demostrar la presencia
de otros hidrocarbonados no reductores y para
establecer la cifra total de hidratos de carbono
en un problema.
DE EXTINCION
•o 50 60 100 150
---
0,369 0,.35 0,561 1,000 1,488
0,382 0,495 0,585 0,939 1.426
0,385 0,502 0,()06 0,930 1,398
0,395 0,512 0,602 0,921 1,347
0,367 0,.91 0,598
--- ---
1,415
0,379 0,487 0,590 0,947
To:JO LI PERFORACIONES GASTRODUODENALES 23
NO'MPJRO 1

TABLA li The values obtained indicate that the anth-

COMPARACION DE LOS VALORES OBTENIDOS EN rone reaction is produced by the condensation
LA DETERMINACION DE GLUCOGENO HEPATICO DE
R,ATA POR EL METODO DE LA ANTRONA Y EL DE
of anthranol with methyl furfural or hydro-
GOOD, KRAMER Y SOMOGYI xylmethyl furfural.
Cifras de glucógeno en por 100 de peso fresco de tejido.
m!SAM.MENFASSUNG
M étodo
Experimento Método de Good, Krame1
de antrona y Somogyl Man untersuchte die Antronreaktion mit
der Kohlehydrate, wobei besonders auf die
l. 1,70 1,77 Faktoren aufmerksam gemacht wird, die bei
2. 1,56 1,74 der Anwendung der besagten Reaktion zur
3. l,ISO 1,69 quantitativen Bestimmung von Gluciden be-
4. 1,49 1,46 rücksichtig werden müssen.
15. 1,94 1,69
2,64 2,03
Beschrieben wird weiterhin die Verwendung
6.
7. 2,66 2,62 dieser Methode zur Glykogenbestimmung in
8. 2,42 2,72 den Geweben.
9. 2,64 2,39 Die erzielten Resultate zeigen an, dass die
10. 1,92 1,82 Antronreaktion dadurch entsteht, dass das
11. 3,21 3,152
12. 3,25 3,52 Antranol durch das Methylfurfural oder Hy-
13. 3,54 3,41 droxymethylfurfural kondensiert wird.
14. 3,62 3,51

Medias.... ..... .. 2,43 2,42

On fait une étude de la réaction de l'antrone

RESUMEN.
Se hace un estudio de la reacción de la an-
trona con los hidratos de carbono, señalando
algunos de los factores que es preciso tener
en cuenta para la aplicación de dicha reacción
a la determinación cuantitativa de los glícidos.
Se describe también la aplicación del méto-
do a la determinación del glucógeno en los te-
jidos.
Los datos obtenidos indican que la reacción
de la antrona es producida por la condensación
del antranol con el metil furfural o el hidroxi-
metilfurfural.
BIBLIOGRAFIA
avec les hydrates de carbone, en signalant
les facteurs dont il faut tenir compte pour
l'application de cette réaction a la déterminai-
son quantitative des glycides.
On décrit également l'application de la mé-
thode a la déterminaison du glucogene dans les
tissus.
Les résultats obtenus indiquent que la réac-
tion de l'antrone est produite par la conden-
sation de l'antranol avec le méthyle-furfural ou
1'hyroximéthyle-furfural.

BllRNHAUER, K.-C'hemie und Blochemie der Zuckerarten.

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Casa de Salud Valdecllla (Santander).

SUMMARY
I
ｾ･＠ anthrone reaction to carbohydrates is
stud1ed. Sorne of the factors to be borne in La determinación de la amilasemia para el
ｭｩｾ､＠ when that reaction is applied to quanti- diagnóstico de las pancreatitis agudas es con-
tative determinations of glucides are pointed siderada, desde hace algunos años, como el mé-
out. todo complementario eficacísimo que, junto a
.The. application of the method to the deter- la valoración adecuada del cuadro clínico, pue-
mmabon of glycogen in the tissues is likewise de darnos las seguridades que precisamos en
described. las dudas que siempre trae consigo un proceso