UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ

GALLO
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

VIROLOGIA

DOCENTE:

DRA. ALBINO CORNEJO GRACIELA

ALUMNA:

CHOZO MESTANZA SELENE VANESSA

CICLO:

2019 – I

Lambayeque, 4 de julio del 2019

 PRACTICA

PRUEBA DE HEMAGLUTINACIÓN

I. INTRODUCCIÓN:

La hemoaglutinación es un método donde no se mide la capacidad infecciosa de las

partículas virales.
Es una técnica directa para medir partículas virales, pues en realidad mediante esta
técnica se mide la cantidad de partículas hemo aglutinantes (proteínas virales)
independientemente si estas están incluidas en la partícula viral o libres como antígeno.
La hemoaglutinación es uno de los métodos indirectos más comunes para cuantificar
partículas virales y/o antígenos virales hemo aglutinantes en suspensión. En esta los
eritrocitos se pueden sensibilizar con diversos antígenos y se pueden usar como un
sistema indicador. Así, si se descubren los anticuerpos, la reacción se revelará como una
hemoaglutinación que se puede advertir a simple vista.
Existe una gran cantidad de antígenos que se pueden unir a los glóbulos rojos, entre
ellos los carbohidratos que se adhieren con rapidez. En el caso de las proteínas se
requiere un proceso de pretratamiento con ácido tánico o con cloruro de cromo. Este
sistema se usa para demostrar anticuerpos contra toxinas como la de la difteria o del
tétanos.
También para descubrir anticuerpos contra el virus de la fiebre amarilla, VZV, influenza,
para influenza y dengue. Un virus hemaglutinante es aquel capaz de aglutinar glóbulos
rojos de determinada especie animal, por ejemplo, los virus ya mencionados
anteriormente.
El título de una hemoaglutinación está determinado por la última dilución de una serie,
en donde se observa, macroscópicamente, una malla formada por la unión del virus y/o
antígeno libre a receptores en la membrana de los glóbulos rojos y en la siguiente
dilución un sedimento o “botón” de glóbulos rojos.

II. OBJETIVOS:

➢ Reconocer el virus de New Castle mediante la HA directa en observaciones de la

acción del virus sobre el eritrocito.
➢ Determinar el título de la H.A. para la valoración de eficiencia de la vacuna.
III. MATERIALES:
Material Biológico:
➢ Virus New Castle cepa “La Sota” (vacuna).
➢ Glóbulos rojos lavados de pollo al 0.5 o 0.7%

Material de Laboratorio:

➢ Solución Salina Fisiológica o PBS (solución buffer fosfato)

➢ Gradillas
➢ 10 tubos de ensayo
➢ Pipetas
➢ Espejo
➢ Centrífuga
➢ Jeringas

IV. PROCEDIMIENTO:

A. Preparación de Glóbulos Rojos Lavados:

➢ Extraer la sangre de pollo y conservarla en un tubo con anticoagulante citrato

de sodio.
➢ Centrifugar a 1500 rpm por 5 min.
➢ Eliminamos el sobrenadante (plasma).
➢ Agregar al tubo (Paquete Celular) solución salina fisiológica y mezclar
suavemente.
➢ Volver a centrifugar a 1500 rpm por 5min.
➢ Eliminamos el sobrenadante y volvemos a repetir el proceso de lavado 2 – 3
veces más.
➢ Luego, tomamos de 0.7 ml. de glóbulos rojos del paquete celular y lo
suspendemos en 100 ml. de SSF, para obtener el 0.7 % de glóbulos rojos
lavados.
B. Reacción de Hemoaglutinación:
➢ Colocamos 10 tubos en una gradilla, colocándole al primero 0.8 ml. de SSF y del
tubo 2 al 10 añadir 0.5 ml. de Suero Fisiológico.
➢ Luego, con una pipeta coger 0.2 ml. de cepa de New Castle y depositarla en el
tubo N° 01 (dilución 1/5).
➢ Luego tomamos 0.5 ml. del tubo 01 y lo depositamos en el tubo Nº 02, (dilución
1/10). Repetir hasta obtener las diluciones 1/20, 1/40,1/80, 1/160, 1/320, 1/640,
1/1280 (el tubo N° 10 es el control el cual tiene SSF).
➢ Luego, a los 10 tubos le colocamos 0.5 ml. de los glóbulos rojos lavados al 0.7 %
(incluyendo el tubo control).
➢ Luego dejamos reposar al medio ambiente por 15 a 20 minutos.
➢ Pasado el tiempo, colocamos debajo de la gradilla un espejo, para observar si
hay “hemoaglutinación positiva” (formación de una malla delgada, gris) o
hemoaglutinación negativa (se observa un punto rojo).
➢ La última dilución en la cual aparece HA es el título del virus (este es el inverso
de dicha dilución).
V. RESULTADOS:

➢ Cuando dio (+) se observó una distribución uniforme de los eritrocitos en el

fondo del tubo.
➢ Cuando dio (-) se observó un punto o botón.
➢ El control siempre es (-) porque no tiene el virus.
➢ En la práctica se utilizó una batería de 10 tubos con diluciones desde 1/5hasta
1/1280, siendo el décimo tubo el control.
➢ Como la última dilución para la HA (+) es la de 1/80, su inversa es el título de la
HA.
➢ Entonces el título de la HA es 80.
VI. CONCLUSIONES:

➢ Se logró obtener su título fue 1/80.

➢ Las propiedades de los virus, al aglutinar los glóbulos rojos es debido a que los
virus poseen glucoproteínas (hemaglutinina y neuroaminidasa), la
neuroaminidasa corta el enlace que hay con el glóbulo rojo por eso éste cae,
precipita.
➢ Mientras más virulento es un virus la prueba da (+).

VII. REFERENCIAS:
• ARBIZA, J. y colb. (2005). Curso de Microbiología: Módulo de Virología Práctico
2005. Universidad Politécnica Andrés Bello. Santa Fe de Bogotá.
• CRESPO, María del Pilar (2004) El diagnóstico viral por laboratorio. Clínica
Fundación Valle del Lili. Cali.