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NTC-5698-1 para Mohos y Levaduras
NTC-5698-1 para Mohos y Levaduras
2009-08-19
~~.
I ONTEC
E: MICROBIOLOGY OF FOOD ANO ANIMAL FEEDING
STUFFS - WITH HORIZONTAL METHOD FOR THE
ENUMERATION OF YEASTS ANO MOULDS. PART 1:
COLONY COUNT TECHNIQUE IN PRODUCTS WATER
ACTIVITY GREATER THAN 0,95.
I.C.S.: 07.100.30
.
El Instituto Co Iom birano de Normas Técnicas
2269yd Certificación,
1993
ICONTEC, es el organismo
nacional de normalización, según el Decreto e .
de que responda en
de esta norma a
3MC
ALlM
TORIO LTDA
ALPINA
ANNAR D
ARCHIVO
TORIO DE
MAYOR DE BO
ASBIOQUIM LTDA
BIANÁLlSIS
BIOCONTROL LTOA
BIOQUILAB LTOA
BIOTRENDS LABORATOR
CALIDAD INDUSTRIAL LTDA
CARULLA VIVERO SA OBIÓLOGOS ASOCIADOS
CONGELAGRO SA ULAB LTDA
CASA LUKER S.A PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
REPES & WAFFLES SA PURIFICACiÓN Y ANÁLISIS DE FLUIDOS
ONGELAGRO LTDA
ORPOLAC - CORPOICA QUALA SA
COKAPKA SECRETARIA DISTRITAL DE SALUD DE
NZIPÁN LABORATORIO SA BOGOTÁ
SUIZO SA
I DUSTRIAS ALIMENTICIAS ZENÚ SA
I DUSTRIA PRODUCTORA DE ACEITES UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
ENOVABLES UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
VECOL SA
I STITUTO DE GENÉTICA UNIVERSIDAD
CIONAL DE COLOMBIA VlLASECA LTDA
VITROFARMA SA
Además
. . de las ant enores
. e C
sIgUientes empresas'. ,n onsulta Pública el Proyect o se puso a consideración de las
ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales Y nacionales y otros documentos relacionados.
DIRECCiÓN DE NORMALIZACiÓN
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
CONTENIDO
Página
NTRODUCCIÓN 1
ALCANCE . . 2
REFERENCIAS N •....., 2
.................................... 2
5 ...................
3
51
52 ............................... 4
6. . 6
7. MUESTREO . . 6
8. PREPARACiÓN DE LA MU YO 7
9. PROCEDIMIENTO 7
9. INOCULACiÓN E INCUBACiÓN 7
Página
BIBLIOGRAFíA 10
DOCUMENTO DE REFERENCIA 11
NTC 5698-1
acuosa (Aw)
as aplicaciones del
C 5698-2 pueden no
En este cas ueden utilizar métodos
es abso necesario por razones
todo el para aplicar el método
en la NTC 5698-2 , en la medida de lo
1 de 11
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
1. ALCANCE
2. REFRENCIAS NORMATIVAS
NTC 4491 (todas las partes), Microbiología de alimentos y alimentos para animales.
preparación de muestras para ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para análisis
microbiológico. Parte 1: Reglas generales para la preparación de la suspensión inicial y de
diluciones decimales.
NTC 4092 Microbiología de alimentos y de alimentos para animales. reglas generales para el
análisis microbiológico.
GTC 171, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Guía para la preparación y
producción de medios de cultivo. Guía general para los ensayos de desempeño de medios de
cultivo.
ISO 8261, Milk and Milk Products. General Guidance for the Preparation of Test Samples, tnltie!
Suspensions and Decimal Dilutions for Microbiological Examinations.
3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES
Para los propósitos de este documento, se aplican los siguientes términos y definiciones.
NOTA Existen algunas formas intermedias y la distinción entre una levadura (véase el numeral 3.1) y un moho
(véase el numeral 3.2) puede ser arbitraria.
3.1 Levadura. Microorganismo aeróbico mesofílico que, a 25 "C usando un medio de agar
micológico bajo las condiciones descritas en esta NTC, desarrolla colonias (véase el numeral 3.4)
redondas brillantes o mate sobre la superficie del medio, que usualmente tienen un contorno regular y
una superficie más o menos convexa.
2
NTC 5698-1
Las levaduras dentro, en lugar de sobre un medio, desarrollan colonias redondas, lenticulares.
Los mohos dentro, en lugar de sobre un medio, pueden desarrollar colonias redondas, lenticulares.
PLO Células vegetativas, grupos de células, esporas, cúmulos de esporas o una porción de micelio de
o de cultivo selectivo
una cantidad
do diluciones
ocdurante 5 d. Si es
durante 1 d a 2 d.
on respecto a la práctica actual de laboratorio, véase la NTC 4491 (todas las partes).
DILUYENTE
Generalidades
la NTC 4491 (todas las partes), ISO 861 y las normas específicas que tratan de los
uctos en cuestión.
3
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
NOTA Es posible adicionar agentes tensoactivos como poli(oxietileno)sorbatitan rnonooleato" sódico [0,05 %
(concentración de masa)] a los diluyentes para reducir la formación de grumos de esporas de mohos y conidias
(referencia [2]). .
Excepto para la preparación específica de la muestra de ensayo, se recomienda utilizar como diluyente caldo de
agua de peptona al 0,1 % (concentración de masa).
5.2.1 Agar de Dicloran rosa de bengala y cloranfenicol (DRBC) (referencias [3] y [4])
5.2.1.1 Composición
NOTA Teniendo en cuenta la legislación nacional vigente se puede considerar la utilización de medios de cultivo
de la GTC 125; para reportar según las indicaciones de esta Norma Técnica Colombiana se debe utilizar el medio de
cultivo referenciado en el mismo.
5.2.1.2 Preparación
5.2.1.2.1 Generalidades
Elabore una suspensión en agua de todos los ingredientes, excepto el cloranfenicol, y lleva a
ebullición hasta disolverlos completamente. Si es necesario, ajuste el pH (véase el numeral 6.4)
de modo que después de la esterilización esté en 5,6 ± 0,2 a 25 "C.
1)
Tween 80 es un ejemplo de un producto adecuado disponible en el comercio. Esta información se brinda
para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobación de este producto por parte
de ISO.
4
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
nfríe inmediatamente el medio en un baño de agua (6.3) conservado a una temperatura entre
4 "C y 47 "C. Enfríe hasta alcanzar temperatura inferior a 50 "C y dispense en cantidades de
5 mi en cajas de Petri estériles (véase el numeral 6.6).
ermita que el medio se solidifique y, si es necesario, seque la superficie de las placas tal
omo se describe en NTC 4092 y GTC 171 (todas las partes).
tilice inmediatamente o almacene en un lugar oscuro, según la GTC 171 (todas las partes)
asta que se necesite.
RECAUCIÓN evite la exposición del medio a la luz ya que los productos de la ruptura citotóxica pueden dar
amo resultado una subestimación de la micoflora en las muestras.
pigmentos que
presentes en el
nte solución de
ZnS04 7H20 19;
.1.3.1 Generalidades
5. .1.3.2 Productividad
In ubación: 5 d a 25° C ± 1° C
C pas: Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus niger ATCC 16404
2) Ejemplo de un producto disponible en el comercio. Esta información se suministra para conveniencia de los
usuarios de esta norma y no constituye una aprobación del producto por parte de ICONTEC .
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
Incubación: 5 d a 25 -c ± 1 -c
Cepas: Escherichia coli ATCC 24922 o
Bacillus subtilis ATCC 6633
o cepas registradas como equivalentes en otras colecciones de
bacterias.
6.3 Baño de agua, o equipo similar, con capacidad de funcionar entre 44 "C y 47 "C.
6.5 Frascos, matraces y tubos, para ebullición y almacenamiento del medio de cultivo y
para hacer las diluciones.
6.6 Cajas de Petri, estériles, de vidrio o plástico, con un diámetro de 90 mm a 100 mm.
6.7 Microscopio, para diferenciar las levaduras de las células bacterianas (campo
luminoso, amplificación de 250 veces a 1 000 veces).
7. MUESTREO
El muestreo no es parte del método que se especifica en esta NTC. El muestreo debería
11 arse a cabo de acuerdo con la norma específica, adecuada al producto en cuestión. Si no
e iste norma específica, se recomienda que las partes involucradas lleguen a un acuerdo sobre
e e tema.
pare la muestra de ensayo según la NTC 4491 (todas las partes), NTC 4092 y la norma
e ecífica que trate del producto en cuestión. Si no existe norma específica, se recomienda
q e las partes involucradas lleguen a un acuerdo sobre este tema.
9. PROCEDIMIENTO
9. PORCiÓN DE ENSA
ipeta, Agite la
partículas que
9.
9..1 Sobre una ), utilizando una pipeta o
ropipeta estéril
ida, o 0,1 mi de la su
pita estas operaciones con diluciones posteriores utilizando una pipeta o micropipeta estéril
ra cada dilución decimal.
9..2 Disperse el líquido sobre la superficie de la placa de agar con un esparcidor estéril
(v ase el numeral 6.8) hasta que el líquido se absorba por completo en el medio.
mbién se puede utilizar la inoculación de las placas mediante el método de vertido en placa,
ro en este caso la equivalencia de los resultados se debe convalidar en comparación a la
7
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
9.2.3 Incube aeróbicamente en posición invertida las placas preparadas (véanse los numerales
9.2.2 y 6.1) a 25 "C ± 1 "C durante 5 d. Si es necesario, deje las placas de agar en reposo en
luz natural difusa durante los 2 primeros días.
Se recomienda incubar las cajas (véase el numeral 6.6) en una bolsa plástica abierta con el fin
de no contaminar la incubadora en el caso de diseminación de los mohos fuera de las cajas.
NOTA 1 Los métodos de enumeraciónpara levadurasy, en especial para los mohos, son imprecisosdado que
consisten en una mezcla de micelio y esporas sexuales y asexuales. Las cantidadesde unidades formadorasde
colonias dependendel grado de fragmentacióndel micelio y de la proporciónde esporas capaces de crecer en el
medioen la placa.
NOTA2 A menudose presentala no linealidadde los recuentosde las placasque contienenla dilución,es decir,
las diluciones de 10 veces de la muestra con frecuencia no dan como resultado reduccionesde 10 veces en los
númerosde colonias recuperadasdel medio en la placa. Esto se ha atribuido a la fragmentacióndel micelio y a la
ruptura de los cúmulos de esporas durante la dilución además de la inhibición competitiva cuando hay un gran
númerode coloniassobre las placas.
PRECAUCiÓN las esporas de los mohos se dispersanen el aire con gran facilidad. Manipulelas cajas de Pe tri
con cuidadopara evitar el desarrollode coloniassatélitesque ocasionaríanuna sobreestimaciónde la poblaciónen
la muestra.
Si es necesario, realice un examen (véase el numeral 6.9) con microscopio (véase el numeral 6.7)
con el fin de diferenciar entre células de levaduras o de mohos y bacterias provenientes de las
colonias.
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N RMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
d) todos los detalles operativos que no se especifican en esta norma o que se consideran
opcionales, junto con los detalles de todos los incidentes que hayan podido tener
influencia en los resultados de ensayo,
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
BIBLIOGRAFíA
[1] Bell, C., Neaves, P., Williams, AP. Food Microbiology and Laboratory Practice.
Blackwell, Oxford, 2005. 324 p.
[2J Beuchat, L.R. Media for Detecting and Enumerating Yeasts and Moulds. In: Corry,
J.E.L., Curtis, G.D. w., Baird, R.M, Editors. Handbook of Culture Media for Food
Microbiology, pp. 369-386. Elsevier, Amsterda m, 2003. (progress in Industrial
Microbiology, Vol 37).
[3J Beuchat, L.R., Frandberg, E., Deak, T., Alzamora, S.M, Chen, J., Guerrero, AS.,
López-Malo, A, Ohlsson, t., Olsen, M., Peinado, J.M, Schenurer, J., De Siloniz, MI.,
Tornai-Lehoczki, J. (2001) Performance of Mycological Media in Enumerating
Desiccated Food Spoilage Yeasts: An Interlaboratory study. Int. J. Food Microbiol. 2001,
70, pp 8-96.
[4J King Jr., AD., Hocking, Ad., Pitt, J.I. (1979) Dichloran-Rose Bengal Medium for
Enumeration and Isolation of Moulds from Foods. Appl. Environ. Microbiol. 1979, 37, pp.
959-964.
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
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