ADN: molécula de doble cadena, cada cadena está conformada por una serie de nucleótidos, cada nucleótido está

formado por una pentosa

(desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada.

Las bases nitrogenadas están clasificadas en dos grupos; las purinas (Guanina y Adenina) y las pirimidinas (Citosina y Timina).

ESTRUCTURA DEL ADN

G-C unido por 3 puentes de hidrogeno.

A-T unido por 2 puentes de hidrogeno.
3’ carbono 3 donde hay un grupo OH
5’ Carbono 5 donde hay un grupo fosfato

Entre nucleótido y nucleótido existen uniones de tipo fosfodiéster.

NH2: grupo amino

C=O: grupo ceto

O
C
N
H

El genoma humano o el ADN está organizado dentro del núcleo de la célula. Esta información hereditaria equivaldría por ejemplo a una biblioteca
con 1.000 tomos o páginas y 3.000 letras cada una de las páginas.

Los 3mil millones de pares de bases (entre adenina con timina y guanina con citosina) están dentro del núcleo en una forma compactada, en
forma de cromatina que van a constituir los cromosomas humanos.

Cariotipo humano: es la representación gráfica de los cromosomas organizados según la nomenclatura con colores diferentes cada
cromosoma posee una secuencia de ADN compactada de forma diferente cuando se comparan entre ellos mismos.

CRITERIOS PARA CLASIFICARLOS (GENOMA HUMANO)

1. Localización

Nuclear: es aquel que está contenido en el núcleo de la célula.

Mitocondrial: está en el citoplasma dentro de las mitocondrias.

CARACTERISTICAS GENOMA NUCLEAR GENOMA MITOCONDRIAL

Tamaño 3.000 Mb 16.569 pb
Forma Lineal Circular
Nº de moléculas diferentes 23 (XX) y 24 (XY) Única molécula en su secuencia
Nº de genes 25.000 – 29.000 37
ADN repetitivo Abundante Escaso
Transcripción de genes Individual Policistrónica
ADN codificante 1,5% 95%
Recombinación >1 cromosoma - meiosis No existe
Herencia Mendeliana Materna
Proteínas asociadas Tiene histonas No tiene histonas asociadas
Nº total de moléculas 23 en haploides y 46 en diploides Miles
Tasa de Mutación Baja Alta
Intrones Presentes Ausentes

2. Función

Genoma codificador de proteínas: 1, 5% del total del genoma se considera que es codificador de proteínas principalmente conformadas por
los genes, no toda la estructura de los genes sino parte de estos genes que se denominan exones (son porciones codificadas de proteínas de
los genes).
Genoma no codificador de proteínas: 98, 5% secuencias que están fuera de los genes llamadas secuencias extragénicas y las secuencias
que están dentro de los genes llamadas intrones.

3. Disposición y organización

• ADN de copia única (genes): está una sola vez presente.

• ADN de copia repetitiva: aparece varias veces a lo largo de todo el genoma (aparece en cualquier cromosoma a lo largo del telómero del
brazo corto hasta el telómero el brazo largo).

- ADN alfa satélite (secuencias alfoides): siempre va a estar presente en todos los centrómeros de todos los cromosomas.

- ADN mini satélite (VNTRs: variable número de repeticiones en tándem): está presente en todos los telómeros o cerca de los
telómeros de los cromosomas, tanto del brazo corto como del brazo largo.

- ADN micro satélite (STRs: secuencias cortas en tándem): son secuencias más cortas que los mini satélites y los Alfa satélites.

POLIMORFISMOS DE ADN

En el análisis del ADN con fines de identificación humana, se emplean técnicas sofisticadas para caracterizar un conjunto de marcadores los que
podrían definirse conceptualmente cómo marcas o etiquetas que identifican diversos tipos de secuencias de ADN (en diversos loci) en los cuales
existen polimorfismos (marcadores polimórficos).

Los polimorfismos son secuencias diferentes tanto en letras (A,G,T,C) como en longitud de secuencias repetitivas que va a constituir un marcador
de ADN.

Marcadores genéticos: secuencias de ADN marcan o etiquetan a un locus.

C2: TPOX C3: D3S1358 C4: FGA C5: D5S818 C7: D7S820 C8: D8S1179 C11: TH01 C12: VWA
C13: D13S317 C16: D16S539 C18: D18S51 C21: D21S11 CX: AMEL CY: AMEL AMEL: amelogenina.

PERFIL DE IDENTIDAD GENETICA

Es un conjunto de genotipos de diversos marcadores polimórficos (15-30) que caracterizan o individualizan cualquier vestigio biológico o muestra
de referencia, convirtiéndonos en seres únicos y exclusivos, a excepción de los gemelos idénticos.

La base en los estudios de genética se fundamenta en la comparación del material genético entre los distintos individuos (diversidad genética).

Gen: secuencia de ADN qué es capaz de codificar para un producto funcional para la producción o para la síntesis de una proteína que va a
cumplir una función específica.

ESTRUCTURA DE UN GEN

Un gen puede contener 2 exones, 3 exones, hasta 82 exones, es el gen mapeado más grande hasta la fecha, que es el gen que codifica para la
proteína distrofina cuya mutación produce la enfermedad de distrofia muscular Duchenne/Becker.

Intrón Intrón Intrón

Exón

TRANSCRIPCIÓN DE LA INFORMACIÓN HEREDITARIA

ADM  ARN  PROTEINA

Ej: paciente con hemorragia o sangrado el cual debe detenerse, se activan unas proteínas que intervienen en la coagulación sanguínea
suponiendo que la orden es producir factor VIII, qué sirve el tapón en una hemorragia. El ADN mediado por una serie de bacterias enzimáticas
empiezan a desnaturalizar el gen que codifica para el factor VIII los puentes de hidrógeno del ADN se van a destruir para que la doble cadena
se separe, una vez separadas las cadenas una de ellas va a ser copiada por otra bacteria enzimática es decir se va a originar el ARN mensajero
(donde hay una citosina se va a unir una guanina y dónde hay una guanina se va a pegar una citosina, donde hay adenina se va a pegar un
uracilo porque se va a comenzar a formar la estructura del ARNm) una vez que la RNA mensajero se ha formado tiene que madurar para
abandonar el núcleo y llegar al citoplasma para cumplir la función de la traducción de la información hereditaria. Empieza unirse protectores al
extremo 3' y al 5' de la estructura, en el 5' se va a añadir un residuo de metil-7-guanosina o lo que se conoce como CAP y en el extremo 3' se le
va a añadir una cola de poli A. Estos capuchones en los extremos son para proteger la estructura de la degradación por enzimas proteolíticas
una vez que la proteína abandonado núcleo y ha ido al citoplasma. Antes de abandonar el núcleo hay que eliminarlo cinturones con lo que
interfiere una nueva bacteria enzimática que va a leer el principio y el final de cada Intrón entonces va a cortar los intrones de manera que se
pueda ensamblar el conjunto de exones de este gen, se forma la estructura de ARNm madura preparada para atravesar la membrana nuclear e
ir al citoplasma y experimentar la traducción hereditaria. Luego se consigue con otros tipos de ácidos nucleicos (ARNt y ARNr) y empieza la
traducción de la traducción hereditaria.

ENZIMAS DE RESTRICCIÓN

Tienen la propiedad de reconocer secuencias específicas para el ADN, leen las secuencias, las identifican y son capaces de cortar las secuencias
de ADN específicas en el sitio de unión, se encuentran en la naturaleza, en bacterias, y desempeñan un papel defensivo que pueden equiparados
a un prototipo de sistema inmunitario. Se denominan también endonucleasas de restricción porque restringen el crecimiento de los virus,
parásitos, bacterias (por ejemplo los bacteriófagos) ya que cortan la molécula de ADN de los bacteriófagos y de esa manera eliminan el
bacteriófago.

CLONAJE MOLECULAR

Creación de copias idénticas de secuencias o fragmentos de ADN específicos a partir de un origen común (por ejemplo; si se quiere obtener un
inserto o fragmento específico que permita obtener multimillonarias copias de una proteína como por ejemplo la insulina para los diabéticos) se
puede obtener clonación molecular de un gen específicos con fines terapéuticos.

VECTORES DE CLONACIÓN

Aquella estructura que se va a utilizar para colocarle el inserto o la secuencia del ADN específica que se quiere clonar.

• Plásmidos: ADN extracromosomal, circular, doble cadena. Poseen origen de replicación. Favorece función en bacterias. Insertos máx. de 4kb
(genes pequeños o secuencias pequeñas).

• Bacteriófagos: virus que infectan bacterias. Al modificarlas son útiles como vectores. Ingresan más fácilmente a la bacteria. Insertos máx. de
20 kb. Fago λ.

• Cósmidos: estructuras híbridas de un plásmido y un segmento del fago λ. Insertos máx. de 40kb.

• YACs: plásmidos de Gran tamaño. Funcionan como cromosoma dentro de una célula de levadura. > 1MB.

GENOTECAS

Genoteca de ADN genómico: es la secuencia normal tanto de exones, como de intrones, secuencias reguladoras, secuencias extragénicas.

Se extrae la sangre, se aíslan las células blancas (linfocitos), se le extrae el ADN, después se usa enzima de restricción, se cortan los genes que
se quieran clonar para almacenar en la genoteca. Por otro lado se usa plásmido bacteriano, cortamos con enzimas de restricción, también se
hace la molécula de ADN recombinante, introducimos las bacterias lo que favorece el crecimiento bacteriano y se obtiene el libro de información
de todos los genes que se pretenden almacenar.

Genoteca de ADN complementario (ADNc): se extrae el ADN por técnicas específicas también de sangre por ejemplo y a través de una enzima
conocida como transcriptasa reversa hacemos reacción en cadena de polimerasa (PCR) y convertimos la estructura de ARNm a una estructura
de ADN complementario de doble cadena.
PCR
ARNm  Transcriptasa reversa  (secuencias codificadoras)
ADNc

FUNDAMENTO DEL ANALISIS DE ADN

Los puentes de hidrogeno del ADN se pueden destruir por acción del calor, si se calienta una muestra de ADN que está contenida en un tubo,
los puentes se van a destruir y la doble cadena va a estar separada, se van a tener cadenas libros sobrenadando en el tubo, pero si ese mismo
tubo se puede enfriar, los ADN se van a restituir.

Las secuencias de una cadena van a buscar la complementariedad de la otra cadena, van a buscar aparearse.

Esta técnica permitió desarrollar la PCR.

PCR: obtención de millones de copias de un fragmento mediante la amplificación selectiva in vitro de ADN, basada en las propiedades de
desnaturalización, renaturalizacion e hibridación del ADN.

En un tubo se coloca el ADN de una muestra (como toda reacción enzimática necesita de un cofactor) se coloca el cloruro de magnesio, se
coloca una fuente de nucleótidos (adenina, timina, citosina y guanina) oligonucleótidos, ese tubo se lleva al termociclador que lo que hace es
calentar y enfriar.

PCR: desnaturalización 94-95°C

Al ADN de doble cadena se le van a destruir los puentes de hidrógeno y éste se va a separar en dos.

PCR: annealing 54°C

Bajar la temperatura va a permitir que los oligonucleótidos se anillen o se amolden a las cadenas separadas por la acción del calor. Luego
interviene la TAC ADN polimerasa qué es la enzima estrella, en un medio de nucleótidos (de bases de adenina, citosina, guanina...) va a alinear
las adeninas con las timinas y las guaninas con las citosinas.

PCR: extensión 72°C

Sube la temperatura de nuevo para que la polimerización sea efectiva hasta completar las cadenas que quedaron separadas por la acción del
calor.

DIAGNÓSTICO MOLECULAR (A TRAVÉS DE LA VIDA)

 Pre-concepción: estudiando el estado portador de parejas.

 Pre-implantación (fecundación): favorecer la concepción in vitro y estudiar el cigoto que se ha estudiado in vitro, determinar si porta
alguna mutación y después implantar en el útero de la madre.
 Pre-natal: a través de amniocentesis o cordocentesis qué consiste en extraer líquido amniótico para estudiar las células amnióticas.
 Neonatal: luego de que el bebé nazca.
 Pre-sintomática: antes que aparezcan algunos síntomas.
 Post-sintomática: después que aparezcan los síntomas.
 Post-mortem: para explicar causa de muerte.

DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE ENFERMEDADES HEREDITARIAS

- Análisis directo de la mutación específica que explica el cuadro clínico por ejemplo: una hemofilia, fibrosis quística, atrofia muscular
espinal.
- Análisis indirecto: a través de polimorfismos ligados al gen, es decir, siguiendo al gen mutado apoyándonos en el estudio de la
genealogía.

Mutaciones: alteraciones en la secuencia del ADN que van a modificar la proteína que se va a sintetizar.

• Puntuales: es una mutación de punto, es decir, es una alteración o un cambio de una base nucleotídica por otra base nucleotídica. Una base
nitrogenada por otra base nitrogenada.
βA: pro glu glu
CCT GAG GAG

CCT GTG GAG

βs: pro val glu

βc: CCT AAG GAG

pro lys glu

• Deleciones: es una pérdida de material de secuencia de ADN, se puede perder una base, dos bases, tres bases, medio exón, el exón completo,
un conjunto de exones, hasta la totalidad del gen se puede delecionar.

Ej.: fibrosis quística: ∆F508 en el codón 508 de la proteína de la conductancia transmembranal, hay una deleción de 3 bases. El alelo normal es
de 98pb y el mutado es de 95pb.

• Inserciones: adición de material, dos bases más, medio exón, un exón completo o un conjunto de exones.

• Inversión: consiste en que un fragmento o una porción de un exón de algún Gen se invierte en su secuencia (se describe en hemofilia A y B).

• Expansión: consiste en un fragmento de una secuencia repetitiva que normalmente debe estar presente en alguna parte de nuestro genoma.
Ej.: en el Gen que codifica para la proteína fraxa o fraxe. Lo normal es que se tenga un triplete CGG en fraxa y aparezca 56 veces pero puede
aparecer 200 veces por expansión.
FMR1 FMR2
Genes: FRAXA – FRAXE Se ha descrito también en enfermedad de Huntington.
Xq27.3 Xq27
CGG CCG
Nº: 6 – 56 CGG Nº: 4 – 39 CCG

TERAPIA GÉNICA: estrategia para tratar o prevenir una enfermedad cambiando genes o modificando su expresión.

Terapia somática: el genoma del paciente cambia y no pasa a la siguiente generación.

Terapia germinal: las células germinales de los progenitores se modifican genéticamente para transmitir el cambio a la descendencia y futuras
generaciones.