Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

Tema 9. Ciclo de los ácidos tricatboxólicos y respiración celular

Destino del piruvato

Durante la glucólisis aeróbica, la glucosa u otros monosacáridos se convierten en

piruvato por lo que en presencia de oxígeno el piruvato es el producto final per se de esta
vía citosólica. También la degradación de aminoácidos como la alanina, serina y cisteína
da lugar a la producción de piruvato.
El piruvato tiene una serie de destinos metabólicos según el tejido y el estado
metabólico de dicho tejido. Los principales tipos de reacciones en los que participa el
piruvato se indican en la figura:

Glucosa

Glucólisis

Piruvato
Transaminación Reducción

Alanin Lactato
a Carboxilación Descarboxilación
oxidativa

Oxalacetat Acetil-CoA
o

El piruvato se convierte en acetil-CoA mediante el complejo multienzimático de la

piruvato deshidrogenasa.

Piruvato + NAD+ + CoASH  Acetil-CoA + CO2 + NADH + H+

Este enzima está localizado exclusivamente en el compartimento mitocondrial y se

encuentra a altas concentraciones en tejidos como el músculo cardíaco y el riñón. La
reacción de la piruvato deshidrogenasa es esencialmente irreversible siendo este hecho la
razón principal por la que no existe una conversión neta de carbono de ácido graso a
carbono glucídico.

Acetil-CoA X piruvato

94
 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

Se han encontrado dos tipos de regulación del complejo de la piruvato

deshidrogenasa:
 Los dos productos de la reacción, el acetil-CoA y el NADH, inhiben el complejo
de forma competitiva.
 El complejo existe en dos formas: a) un complejo enzimático activo y b) un
complejo fosforilado inactivo. La inactivación del complejo se consigue por una
proteína quinasa dependiente de Mg2+-ATP unida estrechamente al complejo
multienzimático. La reactivación del complejo se logra mediante una
fosfoproteína fosfatasa que desfosforila el complejo en una reacción que es
dependiente de Mg2+ y Ca2+.

Destinos metabólicos del Acetil-CoA

Los diferentes destinos del acetil-CoA generado en el compartimento mitocondrial

incluyen:
1. Oxidación completa del grupo acetilo en el ciclo de los ácidos tricarboxílicos
para la generación de energía
2. En el hígado la conversión de un exceso de acetil-CoA en los cuerpos cetónicos
acatoacetato y -hidroxibutirato y
3. Transferencia de las unidades acetilo al citosol y posterior biosíntesis de
moléculas complejas tales como los esteroles y ácidos grasos de cadena larga.

Piruvato Aminoácidos Ácidos grasos

Acetil-CoA

Ciclo de los Esteroles

Cuerpos ácidos
cetónicos Ácidos grasos
tricarboxílicos

Ciclo de los acidos tricarboxilicos (ciclo del ácido cítrico o ciclo de Krebs).

El destino principal del acetil CoA producido en las diversas vías catabólicas
generadoras de energía es su oxidación completa en un serie de reacciones oxidativas
denominadas ciclo de los ácidos tricarboxílicos.

Aunque algunos enzimas del ciclo se encuentran en el citosol, la localización

primaria de los enzimas del ciclo de los ácidos tricarboxílicos es la mitocondria. Este tipo
de distribución es apropiada ya que el complejo multienzimático de la piruvato
deshidrogenasa y la secuencia de la -oxidación de los ácidos grasos, las dos fuentes

95
 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

principales para la generación de acetil CoA, están localizadas en el compartimento

mitocondrial.

Es la etapa final del catabolismo aeróbico de los hidratos de carbono, los

aminoácidos y los ácidos grasos.

 Serie de reacciones -que tienen lugar en las mitocondrias- que llevan a cabo el
catabolismo de los residuos acetilos, liberando equivalentes reductores, cuya
oxidación, libera la mayor parte de la energía libre de los combustibles
tisulares.
 Principal función: ruta final común de la oxidación de hidratos de carbono,
lípidos y proteínas, puesto que la glucosa, los ácidos grasos y muchos
aminoácidos son metabolizados a acetil-CoA o a intermediarios del ciclo.
 Ruta anfibólica, es decir, que actúa no sólo en el catabolismo sino también en la
generación de precursores para las rutas biosintéticas (anabólicas). De los
intermediarios del ciclo del ácido cítrico se derivan muchos compuestos,
incluyendo aminoácidos, porfirinas y nucleótidos de pirimidina.
 También juega un papel destacado en la gluconeogénesis, la transaminación, la
desaminación y en la lipogénesis.

Papel catabólico del ciclo:

El ciclo comprende la combinación de una molécula de acetil-CoA con el ácido

dicarboxílico de 4 átomos de carbono oxalacetato, originando el ácido tricarboxílico de 6
átomos, citrato. Continúa una serie de reacciones que liberan 2 moléculas de CO 2 y se
regenera el oxalacetato.

El ciclo del ácido cítrico es el mecanismo por el cual libera la mayor parte de la
energía libre durante la oxidación de los carbohidratos, los lípidos y los aminoácidos.
Durante la oxidación del acetil-CoA se generan equivalentes reductores que entran en la
cadena respiratoria, originando grandes cantidades de ATP en el proceso de fosforilación
oxidativa.

Reacciones del ciclo:

La citrato sintasa cataliza la condensación del acetil-CoA con el oxalacetato. [La

reacción se desplaza hacia la derecha por la hidrólisis del enlace tioéster del CoA.]

Oxalacetato + Acetil CoA  Citrato

El citrato se convierte en isocitrato por medio del enzima aconitasa.

Citrato  Isocitrato

96
 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

La isocitrato deshidrogenasa cataliza la primera reacción tipo deshidrogenasa. El

isocitrato se convierte en -cetoglutarato en una reacción de descarboxilación oxidativa,
que transcurre probablemente vía un intermediario ligado al enzima, el oxalsuccinato. En
esta etapa del ciclo se produce el primer (de dos) CO2 y el primero (de tres) NADH + H+.

Isocitrato + NAD+  [oxalsuccinato] + NADH + H+  -cetoglutarato + CO2

La conversión del -cetoglutarato en succinil CoA está catalizada por el complejo

-cetoglutarato deshidrogenasa. En esta reacción se producen la segunda molécula de
NADH y el desprendimiento de CO2 .

-cetoglutarato + CoASH + NAD+  Succinil CoA + NADH + H+ + CO2

La reacción de la succinil CoA sintetasa o succinato tioquinasa convierte el

succinil CoA en succinato y conlleva en los tejidos de mamíferos la fosforilación de GDP
que pasa a GTP.

Succinil CoA + GDP + Pi  Succinato + GTP

El succinato de oxida a fumarato en la reacción de la succinato deshidrogenasa

que posee el FAD como grupo prostético.

Succinato + FAD  Fumarato + FADH2

97
 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

En la siguiente etapa del ciclo el fumarato se hidrata formando L-malato mediante

el enzima fumarasa.

Fumarato + H2O  L-malato

La reacción final del ciclo de Krebs es la reacción de la malato deshidrogenasa en

la que se extrae el equivalente de reducción final en forma de NADH + H+.

L-Malato + NAD+  Oxalacetato

98
 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

Rendimiento energético.

Como resultado de la oxidación en el ciclo del ácido cítrico, por cada molécula de
acetil-CoA catabolizada en una revolución del ciclo se generan 3 moléculas de NADH y 1
de FADH2. La transferencia de los equivalentes reductores del NADH a la cadena
respiratoria generan 2.5 ATP en el proceso de la fosforilación oxidativa. El FADH2
produce 1.5 ATP al transferir sus electrones a través de la cadena respiratoria hasta el
oxígeno molecular. Se genera un enlace fosfato de alta energía durante la conversión de
succinil-CoA a succinato (a saber GTP). En definitiva, se generan 10 nuevos enlaces
fosfato de alta energía durante cada vuelta del ciclo.

Durante la oxidación completa de la glucosa a CO 2 y H2O hay una formación neta

de:
1. 2 ATP por glucosa en la conversión de glucosa a piruvato
2. 5 ATP por glucosa como resultado de la translocación y posterior oxidación en
el compartimento mitocondrial de 2 NADH + H+ formados en las reacción de
la gliceraldehído 3-P deshidrogenasa de la ruta glucolítica.
3. 25 ATP por glucosa a partir de la oxidación de las dos moléculas de piruvato en
la reacción de la piruvato deshidrogenasa y posterior conversión de 2 acetil
CoA a CO2 y H2O.

De aquí que el rendimiento neto de ATP durante la oxidación completa de glucosa

a 6 CO2 más 6 H2O es de 32 o 30 ATP.

99
 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

Regulación del ciclo

En la regulación de la actividad del ciclo están implicados diversos factores.

 El suministro de unidades de acetilo, tanto si provienen del piruvato (de

glúcidos) como de ácidos grasos es un factor crucial para determinar la
velocidad del ciclo de Krebs. Las influencias reguladoras sobre el complejo de
la piruvato deshidrogenasa tienen un efecto importante sobre la actividad del
ciclo. Cualquier control ejercido sobre los procesos de transporte sobre la -
oxidación de los ácidos grasos constituye un determinante efectivo sobre la
actividad del ciclo de Krebs.

 Dado que las reacciones de deshidrogenación primarias del ciclo dependen de

un suministro continuo de NAD+ y FAD, sus actividades están muy
estrictamente controladas por la cadena respiratoria mitocondrial, la cual es
responsable de la oxidación del NADH y del FADH2 producidos como
resultado de la oxiadción de sustratos del ciclo.

100
 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

Estequiometría del ciclo:

Acetil-CoA + 3 NAD+ + FAD + GDP + Pi + 2 H2O 

2 CO2 + 3 NADH + FADH2 + GTP + 2 H+ + CoA

Papel anabólico del ciclo:

El ciclo de los ácidos tricarbocílicos también genera precursores para las vías
biosintéticas. Por ejemplo, la mayoría de los átomos de carbono en las porfirinas vienen
del succinil-CoA. Muchos de los aminoácidos derivan del -cetoglutarato y del
oxalacetato.

101
 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

Respiracion celular.

El NADH y el FADH2 formados en la glucólisis, en la oxidación de los ácidos

grasos y en el ciclo del ácido cítrico son moléculas ricas en energía porque contienen un
par de electrones con elevado potencial de transferencia.

Cuando estos electrones se transfieren al oxígeno molecular, se libera una gran

cantidad de energía, que puede ser utilizada para generar ATP. La fosforilación oxidativa
es el proceso por el que se forma ATP como resultado de la transferencia de electrones
desde el NADH o el FADH 2 al O2 a través de una serie de transportadores de electrones.
En los organismos aerobios esta es la principal fuente de ATP.

En resumen podríamos decir que: el flujo de electrones desde el NADH o FADH 2

al O2 a través de complejos proteicos localizados en la membrana interna mitocondrial
provoca el bombeo de protones hacia el exterior de la matriz mitocondrial. Se genera una
fuerza protomotriz que está formada por un gradiente de pH y por un potencial eléctrico
transmembranal. Cuando los protones regresan a la matriz mitocondrial a través de un
complejo enzimático se sintetiza ATP. De esta forma, la oxidación y la fosforilación
están acopladas por un gradiente de protones a través de la membrana interna
mitocondrial.

102
 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

Las mitocondrias son orgánulos de forma ovalada en las que se encuentran la

cadena respiratoria, los enzimas del ciclo de Krebs y los enzimas de la oxidación de los
ácidos grasos. Mientras que la membrana externa es muy permeable a la mayor parte de
las moléculas pequeñas e iones, la membrana interna es intrínsecamente impermeable a
casi todos los iones y moléculas polares.

La cadena respiratoria

La cadena respiratoria está formada por tres bombas de protones conectadas

mediante dos transportadores móviles de electrones.

Los electrones se transfieren del NADH al O2 a través de una cadena de tres

grandes complejos proteicos llamados NADH-Q reductasa, citocromo reductasa y
citocromo oxidasa.

Los electrones son transportados desde la NADH-Q reductasa a la citocromo

reductasa mediante la forma reducida de la ubiquinona (Q), una quinona hidrofóbica que
difunde con gran rapidez en el interior de la membrana interna mitocondrial. La
ubiquinona también transporta electrones desde el FADH2 a la citocromo reductasa.

Una pequeña molécula, el citocromo c, transporta electrones desde la citocromo

reductasa a la citocromo oxidasa, el componente final de la cadena

NADH NADH-Q Q Citocromo Cit c Citocromo O2

Reductasa reductasa oxidasa

FADH2

103
 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

Complejo NADH-Q reductasa

Los electrones del NADH entran en la cadena a nivel de la NADH-Q reductasa. La
etapa inicial consiste en la unión al NADH y la transferencia de sus dos electrones con
potencial elevado al flavina mononucleótido (FMN), que es el grupo prostético de este
complejo, para dar lugar a la forma reducida, el FMNH2

NADH + H+ + FMN  FMNH2 + NAD+

Los electrones se transfieren a continuación del FMNH2 a una serie de comp`lejos

hierro-azufre (Fe-S), el segundo grupo prostético de la NADH-Q reductasa.

FMNH2 + Fe-Soxidado  FMN + Fe-Sreducido

Los electrones se transfieren después desde los centros hierro-azufre de NADH-Q

reductasa al coenzima Q, al que también se le llama ubiquinona (Q). La reducción de este
intermediario origina el ubiquinol (QH2).

Fe-Sreducido + Q  Fe-Soxidado + QH2

NADH FMN Fe-Sreducido Q

NAD+ FMNH2 Fe-Soxidado QH2

NADH-Q reductasa

104
 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

El flujo de electrones desde el NADH al QH 2 a través de la NADH-Q reductasa

provoca el bombeo de cuatro H+ desde el lado de la matriz al lado citosólico de la
membrana interna mitocondrial. El mecanismo que convierte un potencial eclectrónico en
una fuerza protomotriz aún no se conoce.

Recordamos que el FADH2 se forma en el ciclo de Kebs por la oxidación del

succinato a fumarato por medio de la succinato deshidrogenasa. Este enzima es uno de
los componentes del complejo succinato-Q reductasa, una proteína intrínseca de
membrana localizada en la membrana interna mitocondrial. El FADH 2 no abandona el
complejo, en vez de ello, sus electrones se transfieren a centros Fe-S y de allí al coenzima
Q para incorporarse a la cadena transportadora de electrones.

El complejo suscinato-Q reductasa y otros enzimas que transfieren electrones desde

el FADH2 a Q no son bombas de protones, en contraste con la NADH-Q reductasa.
Consecuentemente, se forma menos ATP en la oxidación del FADH2 que en la del NADH.

Citocromo reductasa

Un citocromo es una proteína transportadora de electrones que contiene un

grupo protético hemo. Durante el transporte de elctrones, los átomos de hierro de los
citocromos alternan entre el estado ferroso reducido (+2) y el estado férrico oxidado
(+3).

La función de la citocromo reductasa es catalizar la transferencia de electrones

desde QH2 al citocromo c, que es una proteína hidrosoluble, y al mismo tiempo,
bombear protones a través de la membrana interna mitocondrial.

El flujo de un par de electrones a través de este complejo provoca el transporte

neto de 2H+ hacia el lado citosólico, un rendimiento que es la mitad del que se obtiene
con la NADH-Q reductasa.

La citocromo reductasa está formada por dos tipos de citocromos llamados b y

c1. La reductasa también contiene una proteína Fe-S.

Q Cit b (+2) QH. Fe-S (+2) Cit c1 (+3) Cit c (+2)

QH. Cit b (+3) QH2 Fe-S (+3) Cit c1 (+2) Cit c (+3)

Citocromo reductasa

105
 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

Citocromo oxidasa

La citocromo oxidasa, el último de los complejos que bombean protones de la

cadena respiratoria, cataliza la transferencia de electrones desde el ferrocitocromo c (la
forma reducida) hasta el oxígeno molecular, que es el aceptor final.

Cuatro electrones son cedidos al O2 para reduccirlo completamente a H2O a la

vez que se bombean protones desde la matriz al lado citosólico de la membrana interna
mitocondrial.

4 Cit c (+2) + 4 H+ + O2  4 cit c (+3) + 2 H2O

Esta reacción se realiza mediante un complejo de 10 subunidades. La citocromo

oxidasa contiene dos grupos hemos (difrentes al del citocromo c) y dos iones cobre
difrentes. El primer grupo hemo (hemo a) está próximo a uno de los iones Cu en la
subunidad conocida como citocromo a; y el otro grupo hemo (hemo a3) está próximo al
inón Cu en la otra subunidad conocida como citocromo a3.

La transferencia de elctrones comienza con la entrega de un electrón por el

citocromo c que reduce al Cu+2 del citocromo a y el segundo electrón reduce al Fe+3 del
mismo citocromo.

Cit c (+3) Cit a (oxidado) Cit a3 (reducido) H2O

Cit c (+2) Cit a (reducido) Cit a3 (oxidado) O2

Citocromo oxidasa

106
 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

El flujo de un par de electrones a través de la oxidasa provoca la translocación

de cuatro protones hacia el lado citosólico de la membrana.

Fosforilación oxidativa

La fosforilación oxidativa es el proceso por el que se forma ATP como resultado

de la transferencia de electrones desde el NADH o el FADH2 al O2.

La síntesis de ATP se consigue por medio de un ensamblaje molecular situado

en la membrana interna mitocondrial. Este complejo enzimático se denomina ATPasa
mitocondrial o ATP sintasa.

107
 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos y respiración celular

La unidad F1 está formada por cinco clases de cadenas polipeptídicas diferentes,

en la proporción de: 3 cadenas ; 3 cadenas ; 1 cadena ; 1 cadena ; y 1 cadena . En
esta partícula es donde radica la actividad ATPasa. La unidad F0 es el conducto de
protones del complejo.

Uno de los problemas más arduos con que se han enfrentado los bioquímicos en
las tres últimas décadas es la delineación del mecanismo de la fosforilación oxidativa.

Peter Mitchell en 1961 postuló la hipótesis quiniosmótica. Sugirió que el

transporte de electrones y la síntesis de ATP estaban acopladas mediante un gradiente
de protones a través de la membrana interna mitocondrial. Según este modelo, la
transferencia de electrones a través de la cadena respiratoria produce un bombeo de
protones desde la matriz mitocondrial hacia el lado opuesto de la membrana interna de
la mitocondria. En el lado citosólico aumenta la concentración de H+. Mitchell postuló
que la síntesis de ATP por medio del complejo ATPasa estaba dirigida por esta fuerza
protomotriz. En esencia, la formación de una fuerza protomotriz a través de la
membrana interna mitocondrial inducida por el transporte de elctrones es el
acontecimiento primario en la conservación de energía.

El transporte de electrones a través de la cadena respiratoria provoca el bombeo

de protones desde la matriz hacia el lado citosólico de la membrana interna
mitocondrial. El gradiente de pH y el potencial de membrana constituyen una fuerza
protomotriz que se utiliza para dirigir la síntesis de ATP por la ATPasa mitocondrial.

108