Determinacién Recuento Coliformes totales y E.Coli Técnica Petrifilm PROCEDIMIENTOSI Area : Laboratorio-Contral de Calidad 21 Fecha: 26/07/2011 Revsen 0 [1ded Cambios del Documento be Bana iy rl in (hans Tela Laberoloiay Contel =|Pi PROGEDIMENTO Determinacién Recuento Coliformes | _FOCEMENO i IDAL totales y E.Coli Técnica Petrifilm ae coicee al Fecha: 26/07/2011 Revioni0 [det 1. Propésito y alcance: 1.1 Propésito Las placas Petifim para el recuento de Coliformes Totales y €. Col es un sistema con medio de cultivo listo que contiene nvitientes del agar y agentes gelificante soluble en frio yun indicador que colores las colonias facilitando la enumeracién de ellas, 1.2 Aleance Elmétodo es oplicable en la industria de alimentos y bebidas. 2. Responsables + Asistente de Laboratorio + Supervisor laboratorio Control de Calidad 3. Referencia: - Método Oficial AOAC 998.08 Método de pelicula seca rehidratada para Recuento y confirmacién de E. cali en aves , cémicos y mariscos + Método Oficial AOAC 991.14 Mélodo de pelicula seca rehidratada en alimentos para Recuento de Coliformes y E.Coli en Alimentos, 4, Definiciones y Terminologi No aplica 5. Materiales, equipos y reat + Balanza Granataria, sensibilidad 0.1 gr = Pipetas estériies 5 ml = Espatulal = _ Eslufa de incubaci6n regulada a 35°4/-19C = Contador de Colonia - Bolsas Estériles = Elanol al 70% = Agua de Peptona 0.1% = Petrifim = Tubos 9 mide Agua PeptonaDeterminacién Recuento Coliformes FROSEOMENTIO ae : Loberatoro-Contol Hl IDAL fotales y E.Coli Técnica Petrifilm came Fecha: 26/07/2011 Rawson 10 [Soa 6, Procedimiento determinacién Recuento Aerobios Mesofilos 6.1 Procedimiento + Pesar 25 g de muestra representativa dentro de una bolsa estéri - Agregar 225 mi de Agua de peptona. - _Homogenizar la muestra por un minuto (Dilucién 107!) + Apariir de la diiucién anterior tomar 1 mly depositarlo en un tubo de 9 ml con agua de peptona, homogenizar con la misma pipeta 4 a 5 veces (Dilucién 10) + Colocar la placa Petriflm en una superficie plana, levaniar el fim superior y con una. Pipeta estérily en forma perpendicular a la placa colocar 1 mi dela dilucién en el centro de fim interior + Bajar el fim sobre el inoculo ¥ ejercer una leve presién con un difusor durante 8 a 10 segundos, de forma tal, que se reparta el sembrado en el érea circular del cultivo. + Leventar el aplicador y esperar por un minuto a que molfique el gel. + Incubar @ 35%/-1°C 24-48 hrs las placas cara arriba en forma horizontal en pilas hasta 20 placas 6.2 Recuento y expresién de resultados + Para recuento de Colformes contar todas las colonias asociadas con burbujas de gas. + Para recuento de E.Col contar todas las colonia azvies asociadas con burbujas de gas. + _Anotar el nmero de colonias contadas en cada Petrifim = Como se realizan diiuciones en duplicado, se deben promediar el N° de colonias ‘encontradas en ambos placas de la misma dilucion y muitiplicar por el inverso de la diiucién. En caso de obtener recuento dentro del rango en diluciones consecutivas, registrar el nmero de colonias de cada dilucién, mullipicar por elinverso de la dilucién y luego determinar el promedio del recuento bactetiano entre ambas, diluciones. + Se informara como UFC/g ~ Enel caso de valores oblenidos sobre © bajo el rango debe ser informados como recuento estimado en placa (RESP) + Encaso de recuento incontables se registrara como muy numerosas para contar (MNPC) e informara como mayor al érea por la ditucién vilizada. = En caso de no obtener desarrollo en las placas se debe informar de acuerdo al limite de deteccion de la técnica Ejemplo: <10 UFC/gPROCEDIMIENTO | Determinacién Recuento Coliformes rea: Laboratorio-Control f IDAL totales y E.Coli Técnica Petrifilm de Calidad 21 Fecha: 26/07/2011 Roviion 0 [400% 7. Registros Identiicaciin | Area | Almacena | Proteceién | Recuperacién | Retencién | pisposicién miento Cuademe de | Taberatorio | Taboratorio | Jefe de | Soleiiéndalo al| —S ahos | Se eliminan protocolo de Controlde | Laboratorio | jefe de del archive. Microbiologia calidad, laboraterio = Cuaderno de Protocolo Microbiologia. 8. Indicador de gestion No aplica. 9. Anexos No Aplica.