Febrero 2012 Año 3 Edición Nº 13

1
Técnica de Multiovulación y
Transferencia de Embriones de
Ganado Bovino en Condiciones
de Trópico del Perú

INIA inicia la producción de

embriones In Vitro en Bovinos

INIA inicia aplicación de técnicas

reproductivas de avanzada nacional
2
Contenido
3 Editorial
4 El Algodón Tanguis
6 Las especies forrajeras nativas
12 INIA gana Proyecto del CORECITI
18 Multiovulación y Transferencia de Embrio-
nes de Ganado Bovino
24 Producción de Embriones a Nivel Nacio-
nal
26 El INIA inicia la producción de em-
briones In Vitro en Bovinos
27 Protocolo para la Producción de
Embriones In Vitro
Directorio
PhD. J. Arturo Flórez Martínez
Jefe del INIA
Abog. Guido Sotillo Osorio
Secretario General
Ing. Enrique La Hoz Brito
Director General de Investigación Agraria
Ing. Jorge Moreno Morales
Director General de Extensión Agraria
Ing. Rodolfo Morales Accame
Director General de Administración
Ing. Mary Rioja Núñez
Directora General de Planificación
Abog. Néstor Francisco Reyes Hurtado
Director General de Asesoría Jurídica
Ing. Félix López López
Director General de Información Tecnológica
Producción y edición: Oficina de Imagen Institucional
Instituto Nacional de Innovación Agraria - INIA
Av. La Molina Nº 1981, Lima – Perú
Teléfono: (511) 3492600 – Anexo 285
E-mail: imagen@inia.gob.pe
Derechos Reservados del INIA
Hecho el depósito legal en la
Biblioteca Nacional del Perú
N° 2010-17280
3
Editorial
P
ara todo el mundo es evidente que nuestros principales agregados
macroeconómicos se presentan alentadores y atractivos para las
inversiones. Pero, ¿acaso con tales indicadores estamos reflejan-
do todo el trasfondo de nuestra realidad y agenda pendiente? Si vemos
las condiciones reales del sector agrario, en su más amplia expresión,
es decir agrícola, pecuario y forestal y en todo el territorio nacional, sa-
bemos que tenemos muchas tareas muy urgentes por atender, tanto por
criterios económicos como también por todas las consideraciones que
se exigen para un verdadero desarrollo integral y sostenible.
La competitividad y la inclusión, son dos caras propositivas del desa-
rrollo integral y sostenible. Si nos articulamos en nuestros diferentes
esfuerzos (sea de investigación, experimentación, adaptación, difu-
sión, transferencia, aplicación y retroalimentación) si intercambiamos
nuestra información, si establecemos estándares para nuestros diver-
sos procesos y productos, si generamos conocimientos y facilitamos
su acceso, si compartimos y mejoramos permanentemente nuestros
“paquetes tecnológicos” para fortalecer nuestra producción de alimen-
tos como también darle mejor “posicionamiento” al producto peruano,
estamos generando ambiente competitivo y estamos dando las oportu-
nidades que por equidad se merecen todos los peruanos.
En INIA siempre hemos estado comprometidos con los esfuerzos del
desarrollo tecnológico agrario. Como ejemplo de ello, esta edición de
la Revista Agroinnova concentra los últimos logros de la Subdirección
de Investigación de Crianzas en favor de los productores pecuarios del
Perú con publicaciones de producción y transferencia de embriones In
Vivo e In Vitro, sanidad animal y pastos y forrajes, componentes vitales
para el desarrollo ganadero. Entre los principales y revolucionarios re-
sultados podemos mencionar tecnología de producción y transferencia
de embriones In Vivo y la producción de embriones In Vitro.
Los lineamientos de política ganadera del Ministerio de Agricultura in-
dican la formación de Núcleos Genéticos Élites para mejorar la oferta
de ganado de alto valor genético, al respecto el INIA, Ente Rector de
Innovación Agraria en el Perú, a través de la Dirección de Investigación
Agraria viene desarrollando tecnologías innovadoras para el desarro-
llo ganadero y valida tecnologías adecuadas en los principales com-
ponentes del proceso de producción ganadera: manejo, alimentación,
reproducción, mejoramiento genético y sanidad de las especies de ma-
yor importancia económica y social, así como mejorar la producción y
calidad de los pastos y forrajes, a través de sus Programas Nacionales
de Investigación de Camélidos, Animales Menores, Bovinos y ovinos,
y Pastos y forrajes a nivel nacional a través de sus Estaciones Experi-
mentales Agrarias, con la finalidad de lograr una innovación tecnológi-
ca que contribuya a que los productores sean competitivos y desarro-
llen una ganadería rentable.
PhD. J. Arturo Flórez Martínez
Jefe del INIA
 El Algodón Tanguis:
Deficiencias Tecnológicas, Escasa
Innovación y Falta de Adopción para
4 la Competitividad
L
a Dirección de Investigación Agra-
ria y la Dirección de Extensión
Agraria del Instituto Nacional de
Innovación Agraria (INIA), elaboraron el
siguiente documento sobre la Situación
Actual de la Producción, Investigación
y Transferencia de Tecnologías, Renta-
bilidad, Calidad de Fibra y Competitivi-
dad del cultivo del algodonero, cuyas
conclusiones y recomendaciones com-
partimos con los lectores de Agroinno-
va.

- Bajos niveles de productividad.

Debido a la utilización de pepa en lu-
gar de semilla de calidad, a deficien-
tes prácticas de manejo agronómico,
deficiente uso de la mano de obra e
insumos, y baja mecanización. Asi-
mismo, no acceden a servicios tec-
nológicos agrarios (análisis de sue-
los, subsolado, poscosecha, análisis
fitosanitarios, controladores biológicos, maquinaria
agrícola, entre otros); lo que ha llevado a obtener ren-
dimientos promedio de 50 qq/ha.
Se debe recalcar que algunos comerciantes u obten-
tores de semillas vienen promoviendo la idea que el
problema algodonero solamente se resuelve con la
siembra de semilla de calidad por parte del agricultor,
pero lo que hay detrás de esto es un interés por incre-
mentar la ventas de sus semillas. Es cierto que la se-
milla de calidad es un factor muy importante en la fase
productiva de campo; sin embargo, hay otros factores
(análisis de suelos, subsolado, nivelación, época de
siembra, manejo integrado de plagas, otros) que de no
realizarse, por muy buena calidad que sea la semilla,
no va poder expresar todo su potencial productivo.
- Menor rentabilidad, debido al incremento del costo
de la mano de obra y de los insumos sin ninguna
mejora en los rendimientos, lo que conlleva a la dis-
minución del área sembrada y sustitución por cul-
tivos alternativos como el maíz y arroz. La recon-
versión productiva no solo debe pensarse en otros
cultivos como frutales, sino en pasar de fibras largas
a extra largas y de menor periodo vegetativo, con
mayores rendimientos y mejores precios por calidad
de fibra, incluso para exportación de la fibra.
En los últimos 10 años el costo la mano de obra en
el cultivo de algodón se ha incrementado en 150%;
asimismo el costo de los fertilizantes, pesticidas y
de alquiler de maquinaria agrícola aumentaron con-
siderablemente en los últimos años. Sin embargo,
los rendimientos de algodón rama promedios a nivel
nacional no se han incrementado significativamente
y se mantienen en 50 qq/ha, especialmente en la
Costa central donde se siembra Tangüis. Los mayo-
res incrementos de los rendimientos se ha dado en la
Costa norte donde los productores algodoneros vie-
nen adoptando desde los últimos 4 años nuevos cul-
tivares mejorados de ciclo precoz y fibra extralarga.
- Atomización de productores algodoneros. El 85%
del área algodonera es manejada por pequeños pro-
pietarios (0.5 a 10 ha por agricultor), mayormente
desorganizados, sin asociatividad empresarial para
tener precios por economía de escala para la compra
de sus insumos, así como para la venta de sus cose-
chas. La organización es gremial en ANPAL PERU y
sus Comités y Asociaciones de los valles productores
de Tangüis con escasa capacitación y asistencia téc-
nica por parte del INIA y el MINAG.
- No se ha mejorado la precocidad de los cultiva-
res Tangüis tras la desactivación del Programa de
 Investigación de Algodón del INIA, hace más de 10
años. La institución cuenta ahora con un Programa
Nacional de Innovación Agraria en Cultivos Agroin-
dustriales, con escasos recursos económicos para
atender a varios cultivos juntos. El IPA viene tra-
bajando para dar precocidad y mejorar la fibra del
Tangüis. FUNDEAL ha desaparecido en el área del
Tangüis en toda la Costa central, luego de haber
tenido hasta 30 mil ha cubiertas con sus semillas
certificadas hace 12 años.
Actualmente, el Perú es uno de los pocos países
en el mundo que su mayor área es sembrada con
algodones de largo periodo vegetativo (8 – 9 me-
ses) y crecimiento indeterminado (1,8 – 2,20 m de
altura de planta). La mayoría de países algodoneros
siembra variedades precoces (5 – 6 meses) y creci-
miento determinado (1 – 1,30 m de altura de planta).
- La mayor área algodonera (80%) es sembrada con
cultivares de ciclo tardío (8 -10 meses), de creci-
miento indetermino obteniendo como resultado una
baja productividad, mayores costos de producción, y
limitan al productor a una sola cosecha por año.
Este es uno de los motivos por los que el productor al-
godonero esta reemplazando sus siembras por arroz
(ciclo vegetativo de 5 meses) o maíz (5 meses); culti-
vos que además de permitirle dos siembras por año, le
significan menor uso de mano de obra, de insumos, y
menos expuestos a factores climáticos adversos.
- Actualmente la promoción de las nuevas varieda-
des de ciclo precoz no están acompañadas de la
respectiva transferencia de tecnología sobre las
nuevas prácticas de manejo del cultivo.
La mayor adopción de cultivares se ha visto limitada
porque ésta no ha sido acompañada de un plan de
capacitación y transferencia de tecnología. Muchos
productores que sembraron estos cultivares les die-
ron el mismo manejo tradicional y fracasaron por
que no lograron los rendimientos esperados.
- Deficiente manejo integrado de plagas: lo cual
incremente considerablemente los costos de pro-
ducción e inciden en el desequilibrio del sistema
agroecológico de los valles.
Actualmente la asistencia técnica fitosanitaria está a
cargo de los vendedores de agroquímicos, los mis-
mos que le recomiendan al productor el uso indis-
criminado de estos productos muchas veces perju-
dicando y poniendo el riesgo el cultivo, con el único
afán de vender sus productos.
- Escasa presencia de profesionales y técnicos
agrarios capacitados en el manejo integrado de las
nuevas variedades, así como para los registros rea-
les de gastos, es decir, no existe información fidedig-
na de los gastos reales del cultivo, y por el contrario
se utilizan cartillas prestablecidas que distorsionan
los verdaderos costos de producción, así como en la
diferenciación de tecnologías alta, media y baja.
Propuesta para la Mejora Tecnológica, Innovación
y Competitividad
- Promover a nivel de pequeños y medianos productores
la siembra de los nuevos cultivares mejorados de ciclo
Precoz (5,5 - 6,5 meses), de alto potencial productivo
(85 – 130 qq/ha), crecimiento determinado (1,20 a 1,50
m) y de fibra extra larga. Ello implica paralelamente que
el INIA y la actividad privada trabaje en el Tangüis me-
jorado de corto periodo y obtención de fibra extra larga. 5
Promover la siembra de fibras extra largas y ciclo
precoz.
- Implementar un Plan de Capacitación, Asistencia
Técnica y Transferencia de Tecnología para trans-
ferir a los pequeños y medianos productores los
paquetes tecnológicos disponibles para un manejo
agronómico, fisiológico y fitosanitario eficiente de
los nuevos cultivares mejorados. La adopción de
estas tecnologías permitirá optimizar el uso de in-
sumos y mano de obra e incrementar los rendimien-
tos, lo que contribuirá a la mejora de la rentabilidad
del productor y posicionar al país como productor de
fibras extra largas. Este plan debe implementarse
en los principales valles algodoneros de costa. Du-
ración 3 años. Responsable INIA.
- Promover y fomentar el acceso de los pequeños y
medianos productores al mercado de los servicios
tecnológicos agrarios de calidad: análisis de suelos,
manejo de suelos, maquinaria agrícola, servicios
de postcosecha, productos entomopatógenos, eva-
luaciones de plagas y enfermedades, información
meteorológica para determinar la época de siembra
oportuna. Se requiere participación activa de los Es-
pecialistas de Gobiernos Regionales y DRAs.
- Coordinar con los obtentores y/o importadores para
asegurar el abastecimiento apropiado de semilla de
calidad para la siguiente campaña algodonera. El
Minag debe convocar a los obtentores o comercia-
lizadores a una licitación para comprar semilla de
cultivares precoces, fibra extralarga y alta produc-
tividad.
- Implementar un Programa de Mejoramiento Genéti-
co de la precocidad de los algodones Tangüis a fin
de que los productores puedan contar con semilla de
menor costo en relación a la semilla importada. Se
busca lograr cultivares de ciclo precoz, crecimiento
determinado, fibra extralarga y alta productividad.
Por ultimo el Minag, la DGCA y el INIA deben hacer el
estudio de costos de producción de Tangüis en todos
los valles y con tecnología baja, media y alta. Para la
campaña 2012 / 2013 se debe tener un equipo técnico
que registre las muestras de los costos de producción,
es decir, los gastos reales, con seguimiento en todo el
proceso productivo, desde Ica a Santa, pasando por
Pisco, Chincha, Cañete y Huaral.
 Las especies forrajeras nativas de
importancia ganadera para la zona
altoandina
6 Mg.Sc.Ing. Godofredo Mamani Mamani
Investigador del Programa Nacional de Innovación en Pastos y Forrajes - SDI de Crianzas
Estación Experimental Agraria Canaán - Ayacucho
gmamani@inia.gob.pe

L
a pradera nativa altoandina del
Perú está compuesta por nu-
merosas plantas nativas, que a
través de diversos estudios han sido
identificados y clasificados de acuerdo
a su uso e importancia, así podemos
encontrar plantas de valor forrajero,
valor medicinal, hábitat, ambiental,
combustible, entre otras. Esta condi-
ción nos plantea la necesidad de co-
nocer previamente las especies de un
pastizal antes de realizar prácticas de
uso y manejo. Así para el desarrollo de
la ganadería, se requiere determinar
el potencial forrajero de los pastizales,
a través de un conocimiento previo
de las especies de mayor producción Figura 1. Familias más importantes que conforman un pastizal (Mamani, 2009).
forrajera, de buena calidad nutritiva y
aceptación por el ganado doméstico que se quiere ali- a.1. Poáceas
mentar y de su manejo. En los estudios realizados por
el Programa Nacional de Innovación Agraria (PNIA) en Las gramíneas son el principal componente de muchas
Pastos y Forrajes de la Estación Experimental Agraria Ca- praderas. Estas se encuentran agrupadas en unos 600 gé-
naán, en Ayacucho y Huancavelica, se han identificado neros y aproximadamente 5 000 especies, constituyendo
especies de uso ganadero y realizado evaluaciones sobre de este modo el 75% de las plantas forrajeras. Las gramí-
su ecología, calidad nutritiva y deseabilidad por el ganado neas, mayormente herbáceas, se distinguen por sus tallos
doméstico; sin embargo, aún se requiere de mayores es- cilíndricos a veces aplanados, generalmente huecos y con
tudios sobre su fisiología y fenología. nudos macizos. Tienen una doble hilera de hojas alternas,
con nervaduras paralelas. La hoja está constituida por una
A continuación se hace una clasificación y descripción vaina de forma tubular, en general abierta por un lado para
de las principales especies forrajeras nativas de impor- rodear el tallo, y por la hoja propiamente dicha de forma
tancia ganadera encontradas en nuestros estudios. lanceolada que se extiende hacia arriba y fuera de la lígula.
La inflorescencia está formada por espiguillas que es un
Clasificación de los Pastos Naturales conjunto de flores escalonadas en las ramificaciones del
raquis; está compuesta por dos glumas y de uno o varios
Los pastizales se han clasificado de diversas formas y flósculos, que son los que contienen las flores, las cuales
desde diferentes puntos de vista; sin embargo, existen dos están compuestas por una lemna y una palea y los órganos
formas que deben ser consideradas para fines de manejo reproductivos. En la pradera nativa altoandina las especies
ganadero que son la clasificación taxonómica y funcional. están agrupadas en los géneros Festuca, Calamagrostis,
Stipa, Poa, Muhlembergia, Paspalum, Dissanthelium, Hor-
a. Clasificación Taxonómica deum, Agrostis, Bouteloua, Aciachne, entre otras.

Las especies de la pradera nativa altoandina, se agru- a.2. Asteráceas

pan en más de 20 familias, de los cuales destacan
como dominantes las Poaceas y las Asteraceas (Figura La Familia Asteraceae es la más diversa y numerosa.
1), y en menor proporción las familias Fabaceae, Jun- El número exacto de su taxa no se ha precisado, se ha
caceae, Rosaceae, Cyperaceae entre otras. reportado que la diversidad total a nivel mundial sería
de 21 000 – 23 000 y de 1 314 a 1 530 géneros. La
única familia que puede competir con la Asteraceae en
cuanto a diversidad es Orchidaceae. El Endemismo en
las Asteraceae Peruanas es alto con más de 370 spp
y 15 géneros considerados como tales. En la pradera
nativa altoandina predominan especies del género Hi-
pochoeris, Bidens, Lucilia, Werneria, Senecio, Paras-
trephia, Baccharis, Liabum, Nototriche, principalmente.
a.3. Rosáceas
Es una de las familias más importantes en número de
especies (casi 3000), por su importancia económica y
amplia distribución. Esta familia incluye la mayor parte
de las especies de frutas de consumo masivo. especies
ornamentales, principalmente rosas, flores por excelen-
cia, con importancia para la jardinería y la industria de
perfumería. La familia de las rosáceas es grande, con
unos 100 géneros, en los que se reparten alrededor de
3000 especies, cuya distribución es casi mundial, origi-
narias sobre todo de las regiones templadas y subtropi-
cales del hemisferio boreal. En la pradera nativa predo-
minan especies del género Lachemilla y Margiricarpus.
especies presentan un desarrollo importante de rela-
ción simbiótica con bacterias del genero Rhizobium, las
cuales se localizan en el sistema radicular formando
típicas nudosidades, posee además una extraordinaria
capacidad de utilizar el nitrógeno del aire, el cual a su
vez es cedido a la planta para su desarrollo normal.
Los tallos de las leguminosas son herbáceos leñosos
dependiendo el género. En general, las flores pueden
autofecundarse con su propio polen (autogamia) o con
el polen de otra flor (alogamia). Sin embargo, la mayor
parte de tréboles y medicagos son autoestériles y re-
quieren de los insectos para la polinización cruzada. En 7
la pradera nativa altoandina predominan especies del
género Astragalus, Lupinus, Trifolium, Vicia.

a.4. Ciperáceas

Las ciperáceas forman una familia de plantas monoco-

tiledóneas parecidas a los pastos, muchas de ellas po-
linizadas por viento. Los tallos suelen ser más o menos
triangulares en el corte transversal, sin hojas por enci-
ma de la base. La flor no posee perianto o lo posee muy
reducido a escamas, cerdas o pelos. La inflorescencia
básica es una espiguilla, igual que las gramíneas, por
eso en una época se las creía la familia más emparen-
tada con ellas, aunque ahora se sabe que están más
cercanamente emparentadas a los juncos. Las ciperá-
ceas pueden ser confundidas con las gramíneas, pero
no tienen lígula, sus hojas son trísticas, y sus vainas
son cerradas, además, las flores están encerradas por
una sola bráctea. Está integrado por aproximadamente
4.500 especies, agrupadas en unos 104 géneros, sien-
do la tercera familia de monocotiledóneas en número
de especies. En la pradera nativa altoandina predomi-
nan especies del género Scirpus, Carex, Eleochoaris.

a.5. Juncáceas Figura 2. Grupos y Familias de Plantas más importantes de un

Las juncáceas forman una familia de plantas monocoti-
ledóneas parecidas a los pastos, con hojas lineales que
poseen vaina y lámina pero no tienen lígula, inflorescen-
cias normalmente condensadas en glomérulos termina-
les y se diferencian de los pastos porque las flores po-
seen tépalos obvios, las hojas son trísticas, y los frutos
son cápsulas. Han colonizado todos los ambientes en
especial los de las zonas templadas, y se polinizan por
viento. En la pradera nativa altoandina predominan es-
pecies del género Distichia, Juncus, Luzula, entre otras.
Pastizal (Flores, 1993).
b. Clasificación Funcional.
La clasificación funcional tiene por objeto, determinar el
grado de deseabilidad relativa que tienen las diferentes
plantas por los animales domésticos (ver Cuadro N° 1).
Flores (1993) clasifica a los pastizales en plantas de-
seables, poco deseables o indeseables.
b.1. Especies deseables (D)

a.6. Fabáceas
Entre las leguminosas o fabáceas existen aproxima-
damente 500 géneros y unas 11000 especies de legu-
minosas y en América se tienen 4000 especies. Estas
Las especies deseables son aquellas plantas que son
palatables durante todo el año y forman parte de la
dieta de los animales. Se les encuentra en campos
de buena condición, son perennes y tienen sistemas
radiculares profundos. También están incluidas plan-
 tas deliciosas que son las más palatables, pero raras.
En este grupo podemos encontrar gramíneas, hierbas
y arbustos forrajeros que carecen de defensas como
espinas o compuestos secundarios. Tienden a dismi-
nuir su población a medida que la presión de pastoreo
aumenta o si el sobrepastoreo es prolongado.
b.2. Especies poco deseables (PD)
Las especies poco deseables son especies de importan-
cia secundaria en campos de buena condición. A esta
8 categoría pertenecen especies que son consumidas por
los animales, durante determinadas épocas del año.
Ellas reemplazan a las especies deseables cuando dis-
minuye la condición del campo y reemplazan a las espe-
cies indeseables cuando mejora la condición del campo.
Estas plantas son menos palatables que las anteriores.
b.3. Especies indeseables (I)
Las especies indeseables son las más pobres, suelen
abundar en campos sobrepastoreados y mal manejados.
Están constituidas casi en su totalidad por plantas invaso-
ras, tóxicas, duras y espinosas y no son consumidas por
el ganado en ninguna época del año. Estas especies son
abundantes en campos degradados por el sobrepastoreo
y reemplazan a las especies deseables y poco deseables
cuando la condición del campo es muy pobre.
Principales Especies forrajeras nativas de la zona
altoandina
En los diversos estudios realizados por el Programa
Nacional de Innovación Agraria en Pastos y Forrajes
de la Estación Experimental Agraria Canaán en los
pastizales de las regiones de Ayacucho y Huanca-
velica, se han identificado y clasificado numerosas
especies de buen valor forrajero, las más importan-
tes son las siguientes:
1. Chilligua (Festuca dolichophylla)
Es una especie de la familia Poáceas. Planta perenne
crece en matojos de 30 a 100 cm de altura, hojas que
sobresalen las cañas floríferas, inflorescencia en paní-
cula angosta, espiguilla multiflora, con glumas agudas
más cortas que la lemna, lemna ligeramente aristada o
acuminada (Tovar, 1993). Se desarrolla desde los 3800
hasta los 4300 msnm. Crece en suelos profundos, algo
húmedos. Es deseables para llamas, vacunos y poco
deseable para ovinos y alpacas. Su valor nutritivo es
7.6 % proteína cruda, y 40 % de fibra cruda.

Cuadro N° 1. Deseabilidad de las especies forrajeras nativas

por las especies animales al pastoreo (Mamani, 2009).

Especie Animal
N° Especie
Vacuno Ovino Alpaca Llama

1 Opuntia flocosa I I I I
2 Pycnophylium glomeratum I I I I
3 Baccharis tricuneata I I I I
4 Gnaphalium sp. I PD PD I
5 Hipochoeris taraxacoides I PD D I
6 Liabum sp. I I I I
7 Perezia coerulescens PD I I PD
8 Perezia multiflora PD I I PD
Planta de Festuca dolichohylla
9 Senecio spinosus I I I I
10 Taraxacum officinalis D PD D D
11 Werneria caespitosa I I I I 2. Festuca (Festuca rigescens)
12 Werneria nubigena PD D D PD
13 Carex ecuadorica D D D D Es una especie perteneciente a la familia de las Poá-
14 Scirpus rigidus D D D D ceas. Planta perenne, cespitosa, de 15 a 25 cm de
15 Ephedra americana D PD PD D altura, lígula pestañeada, laminas semirigidas, de ápi-
16 Gentiana sedifolia PD D D PD ce obtuso, involuta, finamente pubescente en el haz.
17 Geranium sessiliflorum PD D PD PD Panícula angosta, espiciforme, ramas angulosas, co-
18 Distichia muscoides I D D I múnmente glabras. Espiguillas de 2 a 3 flores, Glumas
19 Luzula peruviana PD PD PD PD desiguales, obtusas. Lemma escabroso, pubescente
20 Astragalus dielsii I I I I hacia el ápice, brevemente aristada, raquilla escabro-
21 Astragalus garbancillo I I I I so-pubescente (Tovar, 1993). Se desarrolla desde los
22 Lupinus sp, I I I I 3800 hasta los 4600 msnm. Crece en suelos algo hú-
23 Trifolium amabile D PD D D medos y húmedos, y en vegetación tipo pajonal y cés-
24 Nototriche sp. PD D PD PD ped de puna. Es una especie deseable para bovinos,
25 Plantago lamprophylla I I I I los ovinos y las alpacas solo consumen los brotes de
26 Plantago rigida I I I I esta especie. Tiene un contenido de proteína de 7.0 %
27 Aciachne acicularis PD PD PD PD en etapa de elongación.
3. Muhlembergia (Muhlembergia ligularis)

Es una especie perteneciente a la familia Poáceas. Plan-

ta perenne, cespitosa con cañas de 4-8 cm de largo.
Laminas foliares planas o subinvolutas, hojas planas,
suaves, panículas pequeñas con espiguillas uniflorales,
glumas obtusas, lemna aguda. (Tovar, 1993). Se desa-
rrolla desde los 3400 hasta los 4600 msnm. Crece en
suelos húmedos y de textura media, es frecuente encon-
trarlos asociado con Trébol nativo y en vegetación tipo
césped de puna. Es deseable para ovinos y alpacas y
poco deseable para vacunos y llamas. Tiene un conteni- 9
do de proteína de 7.1 % en etapa de elongación.

4. Crespillo (Calamagrostis vicunarum)

Es una especie perteneciente a la familia de las Poá-

ceas. Planta perenne de 5-1 cm de altura, hojas fi-
Planta de Festuca rigescens
liformes, flexuosas o arqueadas, inflorescencia en
forma de panícula densa espiciforme, espiguilla uni-
flora, lemna con arista dorsal geniculada en el dorso,
raquilla con pelos cortos y escasos (Tovar, 1993). Se
desarrolla desde los 3900 hasta los 4600 msnm. En
suelos secos o algo húmedos, en vegetación tipo cés-
ped de puna. Es poco deseable para ovinos y alpacas
así como vicuñas. Tiene bajo valor nutritivo, entre 9 %
de proteína y más de 60 % de fibra cruda en etapa de
elongación.

5. Poa (Poa perligulata)

Es una especie perteneciente a la familia de las Poá-

ceas. Planta perenne cespitosa, con cañas de 3.5 a
7 cm de altura. Ligula membranácea. Laminas folia-
res plegadas o a veces planas, algo suaves, aguas o
subagudas, de apice arqueado, glabras. Panoja color Planta de Muhlembergia ligularis
bronceado, densa, espiciforme, aovada, ramas adpre-
sas. Espiguillas 2 floras, glumas ligeramente desigua-
les, glabras, obtusas. Lema subaguda u obtusa, mem-
branácea pardusca hacia el ápice (Tovar, 1993). Se
desarrolla hasta los 4700 msnm. Crece en suelos hú-
medos y en vegetación tipo pajonal y césped de puna.
Es deseable por ovinos y alpacas, que utilizan las hojas
en la base de la planta.

6. Calamagrostis (Calamagrostis rigescens)

Es una especie perteneciente a la familia de las Poá-

ceas. Planta perenne cespitosa con cañas de 10 a 25 m
de altura, cañas muy duras y engrosadas, hojas ligera-
mente involutas o planas, suaves, panícula algo densa,
espiciforme, espiguilla, lemna con arista dorsal recta,
raquilla sin pelos (Tovar, 1993). Se desarrolla desde los
3800 hasta los 4600 msnm. Crece en suelos muy hú-
medos, es frecuente encontrarlo en bofedales, y zonas
con agua permanente. Es deseable para ovinos y poco
deseable para llama y alpacas. Su valor nutritivo es de
5.2 % de proteína cruda en elongación.

7. Stipa (Stipa brachyphylla)

Es una especie perteneciente a la familia de las Poá-

ceas. Planta perenne, cespitosa de 10 a 25 cm de al- Planta de Calamagrostis vicunarum

10
Planta de Stipa brachyphylla
Planta de Paspalum pygmaeum
Planta de Dissanthelium macusaniensis
tura, hojas involutas, casi filiformes, subrigidas, inflo-
rescencia en panícula angosta, espiguilla uniflora, algo
purpurea con glumas más largas que la lemna, lemna
cilindracea-fusiforme con arista apical geniculada (To-
var, 1993). Se desarrolla desde los 3700 hasta los 4300
msnm, en suelos secos, en césped de puna y pajona-
les. Es deseables para ovinos, alpacas y llamas y poco
deseable para vacunos. Su valor nutritivo es de 10 %
de proteína y 65 % en fibra cruda en la etapa de elon-
gación.
8. Paspalum (Paspalum pygmaeum)
Es una especie perteneciente a la familia de las Poá-
ceas. Planta enana anual, de hasta 8 cm de altura, algo
postrada, hojas algo planas, inflorescencia en panícula
pequeña, generalmente igualado o excedido por las ho-
jas superiores, espiguilla plano convexa (Tovar, 1993).
Se desarrolla hasta los 4300 msnm, en suelos sueltos,
descubiertos, en pajonales de ichu. Es deseable para
ovinos y alpacas y poco deseable para vacunos y lla-
mas.
9. Dissanthelium (Dissanthelium macusaniensis)
Es una especie perteneciente a la familia de las Poá-
ceas. Es una planta perenne, cespitosa, con cañas
erguidas de 5 a 8 cm de altura. Laminas foliares sub-
coriaceas, plegadas o planas. Panoja densa. Glumas
iguales y más largas que los antecios. Lemma inferior
escabrosa hacia el ápice y márgenes (Tovar, 1993).
Crece hasta los 4800 msnm. Crece en suelos secos,
y pedregosos, de textura ligera y media. Generalmen-
te en las cimas de las montañas con escasa cobertu-
ra vegetal. Es deseable para alpacas. Tiene bajo valor
nutritivo, entre 4 % de proteína y más de 30 % de fibra
cruda.
10. Hipochoeris (Hipochaeris taraxacoides)
Es una especie perteneciente a la familia de las Aste-
ráceas. Hierba de porte arrosetado, acaule, hojas ba-
sales numerosas, oblongadas, lanceoladas de borde
sinuoso dentado, inflorescencia en cabezuelas termi-
nales cortamente pedunculadas al centro de cada ro-
seta, acampanadas, flores numerosas, liguladas las
marginales más desarrolladas, blancas, fruto aque-
nio oblongo, papus con pelos blancos, plumosos. Se
desarrolla hasta los 4300 msnm. Es deseable para
ovinos y alpacas y poco deseable para vacunos y
llamas.
11. Scirpus (Scirpus rigidus)
Es una especie perteneciente a la familia de las Cy-
peráceas. Planta perenne de 20 a 30 cm de alto, con
una espiguilla solitaria, con flores de estilo trífido, con
estambres y ausencia de aristas. Se desarrolla desde
los 3500 hasta los 4300 msnm. Se desarrolla en lu-
gares húmedos, permaneciendo verde hasta junio. Es
deseable para ovinos y alpacas y poco deseable para
vacunos y llamas. Su valor nutritivo en elongación es
de 84.1 % de fibra cruda y 7.0 % de proteína.
12. Carex (Carex equadorica)

Es una especie perteneciente a la familia de las Cy-

peráceas. Planta perenne semejante a una gramínea,
rizomatosa de 5 a 15 cm de alto, de tallo triangular,
hojas lineales algo rígidas, inflorescencia con espigui-
llas aglomeradas en cabezuelas compactas (espigas)
aovadas apicales o casi apicales en el tallo, flores (es-
piguillas) pequeñas, en las axilas de las brácteas, fruto
aquenio encerrado en la espiguilla. Se desarrolla desde
los 3500 hasta los 4300 msnm, suelos algo húmedos
y en pajonales de puna y césped de puna. Es deseable 11
para ovinos y alpacas y poco deseable para vacunos y
llamas. Su valor nutritivo es 4 % de proteína y 11.8 %
de fibra cruda en elongación.
Planta de Carex equadorica
13. Sillu sillu (Lachemilla pinnata)

Es una especie perteneciente a la familia de las Rosá-

ceas. Su crecimiento es rastrero, pero puede alcanzar
una altura de 10 cm. Raíz pivotante, engrosada y muy
desarrollada hasta 25 cm. Hojas algo plateadas, villo-
sas, pinnadas, flores solitarias, pequeñas, amarillentas,
pediceladas, villosa o glabras, variable en pubescen-
cia. Se desarrolla comúnmente desde los 3800 hasta
los 4300 msnm. Crece en suelos húmedos y de vege-
tación tipo Césped de Puna. Es altamente deseable
por el ganado alpacuno y ovino y poco deseables para
llamas. Tiene un contenido de proteína de 6 % y 25 %
de fibra cruda.

14. Kunkuna (Distichia muscoides)

Es una especie perteneciente a la familia Juncaceae. Planta de Distichia muscoides

Especie de perenne. Es de crecimiento erecto, alcanza
una altura de 10 cm. Planta que forma grandes cojine-
tes o almohadillas, tallos ramificados, con hojas en for-
ma dística e imbricas con el ápice obtuso calloso, flores
solitarias, fruto algo globoso, alargado que sobresale
de la masa compacta que forma la planta. Crece desde
los 3800 hasta los 4800 msnm. Crece en zonas de ane-
gamiento de agua, es una especie típica de bofedales.
Es deseable para alpacas y ovinos, poco deseables
para llamas y vacunos. Tiene un valor nutritivo de 8 %
de proteína y 16 % de fibra.
15. Trébol nativo, Layo (Trifolium amabile)
Es una especie perteneciente a la familia de las Fabá-
ceas. Es una planta perenne que tiene una vida pro-
ductiva de 4 a 7 años. Planta cespitosa de raíz pivótate,
engrosada y muy desarrollada de hasta 25 cm de largo,
tallo poco elevado de la superficie del suelo, hojas trifo-
liadas, los foliolos son anchos y aovados, inflorescencia
en cabezuelas cortamente pedunculadas, corola blan-
quecina o rosada, fruto o legumbre con 1 o 2 semillas.
Se desarrolla desde los 3800 hasta los 4300 msnm,
en suelos de textura media, con buena humedad y en
vegetación tipo césped y pajonal. Se asocia muy bien
con Stipa obtusa. Especie muy palatable para alpacas
y ovinos y poco deseables para llamas. Tiene un valor
nutritivo de 15 % de proteína y 20 % de fibra cruda en
estado de botones florales.
Literatura consultada
1. Beltrán, H. Granda, A; León, B.; Sagástegui, A.
Sánchez, I. y M. Zapata. 2006. El libro rojo de las
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raz - Perú
7. Tovar, O. 1993. Gramíneas del Perú. Ruizia Tomo I.
Madrid, España.
 INIA gana Proyecto del Consejo Regional
de Ciencia y Tecnología - CORECITI
E
l Dr. Marco Cabrera Gonzáles, investigador de
la Subdirección de Investigación de Crianzas del
Instituto Nacional de Innovación Agraria - INIA
12 presentó el proyecto denominado “Evaluación y colec-
ción mediante marcadores fenotípicos de morfotipos de
Lymnaea viatrix resistentes a formas infectivas de Fas-
ciola hepática”, ante el III CONCURSO DE PROYEC-
TOS DE INVESTIGACIÓN E INNOVACIÓN resultando
ganador para ejecutarse en el año 2012 en la Estación
Experimental Agraria Baños del Inca de Cajamarca.
El INIA, mediante el Centro Nacional de Biotecnología
Agraria y Forestal – CNBAF, la Sub Dirección de Inves-
tigación en Crianzas y la Estación Experimental Agra-
ria Baños del inca, en coordinación con la Universidad
Nacional de Cajamarca, viene realizando un trabajo de
investigación que permitirá el desarrollo de una vacuna
frente a Fasciola hepatica mediante la utilización de an-
tígenos de secreción/excreción (Cistein proteasas) que
permitirá disminuir la incidencia y prevalencia de fascio-
losis en ganado bovino.
La fasciolosis causada por Fasciola hepatica es una de las
enfermedades parasitarias de mayor repercusión sanitaria y
económica en la ganadería de rumiantes de todas las regio-
nes templadas del planeta. Estimándose pérdidas anuales
causadas por este proceso en más de 3000 millones de dóla-
res USA. a nivel mundial (Boray, 1985; Hillyer and Apt, 1997).
En regiones templadas como es el caso de Cajamarca,
se considera endémica a Fasciola hepatica, por las ca-
racterísticas biológicas propias del hospedador, como
el nivel nutricional, la intensidad de la respuesta inmu-
ne, la fase productiva en la que se encuentra; y, final-
mente, las características propias del parásito; donde
se considera esta infección más importante que afecta
a los animales domésticos de los productores (Fabiyi,
1987), con prevalencias entre el 25 y el 100% (Sharma
y cols., 1989; 1991; Roy y Tandon, 1992).
Igualmente, se ha de destacar que la infección en hu-
manos por Fasciola hepatica es una zoonosis creciente
en América del Sur, Asia y África, en las que se han es-
timado entre 2,7 y 17 millones de personas afectadas
(Mas Coma y cols., 2005); en el caso de Cajamarca
la incidencia se presenta en la ciudad de Cajamarca
(52,5%) y distritos aledaños como Namora (8,9%), Je-
sús (6,9%) y Baños del Inca (6,9%) principalmente en
niños de edad escolar, (DIRESA 2007), adquiriéndose
la infección por la ingesta de agua o vegetales contami-
nados con metacercarias de Fasciola.
En la actualidad la lucha contra la fasciolosis en Cajamarca
esta basada casi exclusivamente en el empleo profiláctico
y terapéutico de antihelmínticos. Sin embargo, dichos trata-
mientos tienen como inconveniente el corto periodo de ac-
ción de los fármacos, lo que obliga a un uso continuado en
zonas endémicas y posibilita las reinfecciones si el animal
sigue pastando en zonas contaminadas (Fairweather y Bo-
ray, 1999); cada vez se señala resistencia de este método
de lucha. Así en la década de los 90 se empezaron a noti-
ficar los primeros casos de resistencia, casos que se han
extendido por Australia, America y varios países europeos
(Moll y cols., 2000; Fairwather, 2005).
Además de la aparición del fenómeno de resistencia
al uso de antihelmínticos se presenta otros problemas
asociados como, por ejemplo, el alto costo económico
de los tratamientos continuados, especialmente para
los ganaderos de zonas endémicas (Overend y Bowen,
1995); elevados periodos de supresión de la carne y le-
che por los metabolitos presentes, estando algunos de
dichos fármacos no permitidos en animales de aptitud
para la producción de leche, así como el desarrollo de
una mayor conciencia de los consumidores sobre los
residuos de medicamentos en alimentos y en el medio
ambiente (Knox y cols., 2001). Por ello, en los últimos
años se están contemplando nuevos métodos de lucha
contra la fasciolosis, como son la selección genética de
animales resistentes (Roberts y cols., 1997) y sobre todo
métodos de control inmunológico como el desarrollo de
vacunas, que se ha mostrado como una alternativa via-
ble y prometedora Dalton y cols., 2003, Hillyer, 2005.
Fases del Trabajo de Investigación
Se llevará a cabo en cinco fases de investigación:
Fase 1. Técnica Fecal Egg Count Reduction Test para
seleccionar cepas resistentes de Fasciola hepatica en
campo a Triclabendazol.
Se implementó el laboratorio con equipos, reactivos
y material biológico con fondos concursables por el
Centro Nacional de Biotecnología Agraria y Forestal –
CNBAF, perteneciente a la Sub Dirección de Recursos
Genéticos y Biotecnología – SUDIRGEB y los resulta-
dos de esta fase ya fueron publicados en la edición N°
12 de la Revista AGROINNOVA.
Fase 2. Producción In Vitro de metacercarias prove-
nientes de cepas resistentes locales.
Para esta fase se presentó el proyecto “Evaluación y
colección mediante marcadores fenotípicos de morfo-
tipos de Lymnaea viatrix resistentes a formas infecti-
vas de Fasciola hepática”, ante el III CONCURSO DE
PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN E INNOVACIÓN
resultando ganador el cual se ejecutará en el año 2012.
Asimismo, el INIA seguirá gestionando la búsqueda de
financiamiento para continuar la ejecución de las fases
siguientes.
Fase 3. Inoculación de metacercarias a ovinos para
producción de formas juvenil y adulto de Fasciola he-
patica resistente.
Fase 4. Caracterización de antígenos de secreción/
excreción por electroforesis, western blot y aislamiento
de cistein proteasas de formas juveniles y adultas de
Fasciola hepatica.
Fase 5. Prueba de efectividad y protección inmunológica
de cistein proteasas con adyuvante completo e incom-
pleto de fround, a vacunos en condiciones de campo.
PROYECTO
EVALUACIÓN Y COLECCIÓN MEDIANTE MAR-
CADORES FENOTÍPICOS DE MORFOTIPOS DE
Lymnaea viatrix RESISTENTES A FORMAS INFEC-
TIVAS DE Fasciola hepática - CORECITI
1. Diseño del Proyecto de Investigación
1.1. Planteamiento del problema
En la Región Cajamarca la fasciolosis es una enferme-
dad parasitaria de mucha importancia; tanto desde el 13
punto de vista veterinario por sus altos niveles de pre-
valencia en el ganado, como desde el punto de vista
de la zoonosis por su alta incidencia en la población
humana, como ocurre en los distritos de Namora (con
8,9% de su población infectada), Jesús (con 6,9% de
su población infectada) y Baños del Inca (con 6,9% de
su población infectada).
Las condiciones climáticas, las características biológi-
cas propias del hospedero definitivo, como su nivel nu-
tricional, la intensidad de la respuesta inmune, la fase
productiva en la que se encuentra y, finalmente, las ca-
racterísticas propias del parásito hacen que esta región
sea endémica de Fasciola hepatica. Sin embargo, a pe-
sar de los conocimientos epidemiológicos de la enfer-
medad y del desarrollo de diferentes herramientas para
su control, su incidencia y daño va en aumento. Desde
hace décadas se emplea productos químicos para su
control, habiendo evidencias de un uso inadecuado y
que ha generado resistencia del agente causal. Actual-
mente, hay otros problemas asociados a esta enferme-
dad, como el alto costo económico para los ganade-
ros por los tratamientos más frecuentes con productos
químicos, mayor frecuencia de periodos de supresión
del uso de la carne y leche; y, el riesgo de presencia
de residuos de medicamentos en los alimentos y en el
medio ambiente.
Por ello, en los últimos años se están considerando
nuevos métodos de lucha contra la fasciolosis, como
la selección genética de animales resistentes, los mé-
todos de control inmunológico, y la selección de los
caracoles intermediarios del género Lymneae con ca-
racterísticas de resistencia a las formas infectivas de
Fasciola hepatica; los que se han mostrado como alter-
nativas viables y prometedoras.
Este proyecto se orienta a trabajar la última alternativa
de las antes mencionadas para la región Cajamarca.
Planeándose dos fases de investigación. Se desea con-
tribuir con información y materiales relevantes para ge-
nerar un control inocuo de la Fasciola hepatica. En este
estudio (año 2012), como una primera fase, se pretende
identificar y estudiar mediante marcadores fenotípicos
los mecanismos de resistencia innata que presentan
morfotipos de caracoles hospederos intermediarios a
este parásito. Luego, en otro estudio, como una segun-
da fase y definitiva (año 2013), se pretende llegar a de-
terminar una tecnología para el control de la fasciolosis
consistente en la multiplicación y distribución de los mor-
fotipos de caracoles resistentes en los campos de pasto-
14
reo, con la finalidad de interrumpir el ciclo biológico de la
enfermedad impidiendo su infección al ganado.
2. Justificación
La ejecución de este proyecto se justifica por lo siguiente:
a) Porque, actualmente en Cajamarca no existe una
tecnología o programa de control de la Fasciola hepati-
ca que se base en interrumpir o limitar el ciclo biológico
de este parásito; pudiendo hacerlo a nivel de sus hos-
pederos intermediarios mediante selección genética.
b) Porque, se orienta a usar la resistencia genética que
históricamente es una de las herramientas más saluda-
bles y sostenibles para los métodos de control de pla-
gas; y que aún no se usa para el control de la fasciolosis.
Este tipo de control no conlleva riesgos de salud al ser
humano, ni al ambiente; asimismo, su uso es muchas
veces de menor costo que otros métodos de control.
c) Porque, en la zona hay alta variabilidad del hospede-
ro intermediario de la Fasciola hepatica (caracoles del
género Lymneae), cuyos niveles de resistencia al pa-
rásito son aún desconocidos; habiendo probablemente
algunos biotipos hospederos que interrumpen o limitan
el ciclo biológico; y por ende constituyen un potencial
genético por usar en el control de dicha enfermedad.
Este hecho es probable, ya que se conoce que la com-
patibilidad de las especies que forman el complejo ca-
racol - trematodo, ocurre de manera físico bioquímica
en la naturaleza. El miracidio es capaz de modular la
respuesta inmunológica de su huésped, siendo los ca-
racoles capaces de secretar sustancias que afectan la
movilidad de las etapas invasivas del parásito.
Asimismo, es justificable el apoyo a este proyecto por-
que ya se cuenta con avances de investigación en este
tema en otras regiones del mundo. En Cuba, Alfredo
Gutiérrez, et al. (2003), demostraron que existen mar-
cadores fenotípicos relacionados con la resistencia y
susceptibilidad de Limneidos a Fasciola hepatica. Asi-
mismo, Hernani Larrea, et al. (2007), hallaron en cara-
coles peruanos, Lymnaea viatrix, un índice de 70% de
infección experimental con estadios larvales de Fascio-
la hepatica; es decir, había un 30% de individuos con
algún mecanismo de resistencia.
De otro lado, el Instituto Nacional de Innovación Agraria
(INIA), cuenta con personal capacitado para desarrollar
la investigación; así como con un laboratorio de biotec-
nología parasitaria y con algunos equipos para realizar
los diferentes trabajos.
3. Objetivos
3.1. Objetivo general
Contribuir a la generación de un método de control de la
fasciolosis en vacunos ¿ovinos y otras especies?, me-
diante el uso de caracoles hospederos intermediarios re-
sistentes, que interrumpen el ciclo biológico del parásito.
3.2. Objetivos Específicos
• Colectar diferentes morfotipos de caracoles Lymnaea
viatrix, de las áreas de pastoreo de hatos de ganado
vacuno con resistencia a fármacos antihelmínticos.
• Caracterizar morfotipos de caracoles Lymnaea viatrix,
mediante marcadores fenotípicos en base a su reac-
ción frente al miracidium de Fasciola hepatica.
• Obtener en laboratorio poblaciones de los morfotipos
de caracoles Lymnaea viatrix con resistencia al miraci-
dium de Fasciola hepatica.
4. Resultados Esperados
• Obtener un protocolo de caracterización fenotípica de
caracoles Lymnaea viatrix, que permita seleccionar y
obtener poblaciones resistentes a la forma infectiva de
Fasciola hepatica.
• Morfotipos de caracoles Lymnaea viatrix resistentes al
miracidium de Fasciola hepatica con resistencia a fár-
macos antihelmínticos.
• Poblaciones de morfotipos de caracoles Lymnaea via-
trix resistentes al miracidium de Fasciola hepatica con
resistencia a fármacos antihelmínticos.
5. Metodología
5.1. Diseño de la investigación
(FERCT) que se basa en el recuento de huevos de
Fasciola hepatica existentes en las heces del vacuno,
antes y después de un tratamiento usando para el con-
teo de huevos la técnica de sedimentación modificada
de Deniss.
Los criterios usados para calificar una explotación como
resistente, sospechosa o susceptible a los antihelmín-
ticos, son dos: la reducción de huevos en las heces a
efecto del tratamiento, y el límite inferior del intervalo
de confianza al 95% de seguridad. Pudiendo haber tres
casos: 15
(a) Población resistente: cuando la reducción de los
huevos en las heces a efecto del tratamiento es menor
que 95%; y, cuando el límite inferior del intervalo de
confianza al 95% de seguridad es menor que 90%.
(b) Población sospechosa: cuando solo uno de los cri-
terios para la población resistente se cumple.
(c) Población susceptible: cuando ninguno de los crite-
rios para la población resistente se cumple.
5.1.2. Colección y caracterización de morfotipos de ca-
racoles Lymnaea viatrix:

5.1.1. Área de estudio y selección de rebaños resistentes La colección de los especímenes de hospederos inter-
mediarios, o caracoles de la especie Lymnaea viatrix,
El área de estudio comprenderá zonas de crianza de se realizará en 10 hatos de vacunos con resistencia pa-
ganado vacuno con incidencia de fasciolosis y con pre- rasitaria comprobada a la aplicación de antihelmínticos.
sencia de resistencia antihelmíntica, ubicándose en Esto con la finalidad de buscar caracoles con resisten-
los distritos de Baños del Inca y La Encañada, de la cia genética al miracidium de Fasciola hepatica, prove-
provincia y región de Cajamarca. En cada distrito, se niente de cepas resistentes a los fármacos usados en
identificarán cinco rebaños y en cada uno de ellos 20 su control.
animales para iniciar el estudio.
Los especímenes serán identificados por las caracte-
La incidencia de fasciolosis en el rebaños, que servi- rísticas morfológicas de la conchilla, sistema reproduc-
rá para su elección, se determinará mediante la ob- tor y rábula. Del total de especímenes colectados, un
servación y cuantificación de los huevos de Fasciola grupo se colocará en cajas petri con la finalidad de ob-
hepatica existentes en las heces
de los animales. Para el efecto,
las muestras se analizarán me-
diante sedimentación, siguiendo
la técnica parasitológica de de-
positar una cantidad conocida de
heces en un bote con perlas para
homogeneizar, y cuyo conteni-
do se pasa a través de una ma-
lla de 150 mm de diámetro para
concentrar huevos del parásito,
antes de depositar el filtrado en
copas de sedimentación.

De otro lado, para determinar la

presencia de resistencia de Fas-
ciola hepatica frente a los prin-
cipales antihelmínticos (como
Nitroxinil al 34%, Closantel al
12.5%, Triclabendazol al 10%, en
dosis terapéuticas); se empleará
la Técnica In Vivo llamada Fae-
cal Egg Count Reduction Test
 servar la emergencia espontánea de cercarias de Fas-
ciola hepatica, para determinar su índice de infección;
pudiendo haber casos sin infección que vendrían a ser
los individuos con algún mecanismo de resistencia y los
más interesantes para este estudio los cuales servirán
para sacar la generación F1; y de los caracoles muer-
tos se disecaran para determinar los índices cercári-
cos de infección (global, simple y múltiple), así como
la intensidad de infección (número de redias/caracol y
número de cercarias/redia).
16 Cabe señalar que los especímenes que no muestren
infección, o que no han tenido infección natural de
Fasciola, serán seleccionados y obtener una primera
generación (F1), en la que se realizará la infección ex-
perimental con miracidium de Fasciola hepatica prove-
nientes de cepas resistentes.
5.1.3. Obtención de la primera generación de morfoti-
pos de caracoles sin infección de Fasciola.
Los ejemplares de caracoles nativos de la especie
Lymnaea viatrix procedentes de los rebaños y que no
hayan mostrado infección de Fasciola hepatica, se uti-
lizaran para obtener una primera generación llamada
‘Colonia F1’. Asimismo, servirán para observar su com-
portamiento en el laboratorio en un periodo entre 9 a 18
días, empleando temperatura entre 14 y 22ªC. En este
caso se observará su capacidad de postura, incubación
y eclosión de huevos, crecimiento, potencial reproducti-
vo e intervalo entre generaciones.
5.1.4. Obtención de miracidio
Por otro lado, los huevos de Fasciola hepatica con re-
sistencia a los principales fármacos usados en su con-
trol, serán colectados en bolsas de plástico directamen-
te del recto junto con las heces de los animales. Luego,
se trasladarán al laboratorio y serán lavados con agua
destilada e incubados en placas de petri a 25° C de
temperatura durante siete días en oscuridad. Los hue-
vos embrionados serán inducidos a la eclosión por ac-
ción de la luz para obtener la forma infectiva.
5.1.5. Infección experimental
Este trabajo se realizará a nivel de laboratorio, usando
los individuos de la ‘Colonia F1’. Para provocar la in-
fección, los caracoles serán colocados en placas petri
multipocillo con agua destilada y serán inoculados con
diferentes cantidades de miracidios de Fasciola hepati-
ca (1, 2, 3, 4 y 5 unidades) por individuo. Luego, serán
expuestos durante 24 horas a 22° C, con la finalidad de
favorecer la infección.
Para determinar la reacción de los caracoles respecto
a la infección realizada, se realizarán dos evaluacio-
nes. La primera, será para determinar el ingreso de los
miracidios al caracol, y se realizará a 24 horas de la
inoculación con la ayuda de un microscopio estereos-
cópico. La segunda evaluación será a partir de la sexta
semana de la inoculación, en la que se examinarán los
especímenes a fin de observar la emergencia espontá-
nea de las cercarias. Los morfotipos de caracoles que
no presenten emergencia espontánea serán analiza-
dos para determinar su reacción a Fasciola hepatica de
acuerdo a marcadores fenotípicos, como morfometría
de la concha, conducta de ovoposición, reacción tisular
a la infección y patrón de pigmentación del manto.
5.2. Variables de evaluación
• Morfometría de la concha: se determinará mediante la
medición de la concha y el registro de su forma.
• Conducta de ovoposición: se tomará para tanto para
caracoles que presenten emergencia de metacercaria,
así como para los que no presenten, luego de la infec-
ción experimental con miracidium.
• Reacción celular a la infección: se hará mediante cor-
tes histológicos a los caracoles que presenten emer-
gencia de cercaría y también los que no presenten
emergencia luego de la infección experimental, con el
fin de observar hematocitos (células de defensa del ca-
racol) englobando al miracidium que conlleva a su des-
trucción. De esta manera se determinará la resistencia
activa del caracol intermediario.
• Patrón de pigmentación del manto: se evaluará esta
característica para diferenciar macroscópicamente los
morfotipos de caracol, de acuerdo al el tipo de pigmen-
tación y su concentración en la concha.
• Resistencia de los morfotipos a Fasciola hepatica: la
resistencia de los morfotipos de caracoles al miracidium
de Fasciola hepatica, se evaluará en base a la media
aritmética empleando la siguiente fórmula:
5.3. Método de investigación
Esta investigación seguirá el método hipotético de-
ductivo, que considera la deducción de la hipótesis de
teorías ya existentes, la que debe ser contrastada de
acuerdo a las “consecuencias observacionales” que se
obtienen a través del estudio.
Este proyecto se basa en la hipótesis que “existe va-
riabilidad de caracoles hospederos intermediarios de
Fasciola hepatica, de la que se puede realizar una se-
lección y multiplicación de aquellos morfotipos resis-
tentes con la finalidad de interrumpir o limitar su ciclo
biológico”. Para contrastar dicha hipótesis se recurrirá a
la caracterización de morfotipos de Lymnaea viatrix en
base a su resistencia o susceptibilidad; asimismo, se
estudiará la reproducción y descendencia de los mor-
fotipos resistentes, con el propósito de multiplicarlos y
usarlos, más adelante, en el control de la fasciolosis.
5.4. Tipo de investigación
De acuerdo con Hurtado, J. y M. Barrera (2008), esta
investigación es de tipo proyectivo, porque parte de un
problema y se orienta a generar una innovación tecno-
lógica para su solución.
De otro lado, en relación a la orientación de la investiga-
ción científica, este trabajo corresponde a la Investigación
Tecnológica, porque usa el conocimiento básico existente
acerca de la biología de la Fasciola hepatica, y en base a
ella se orienta a identificar caracoles intermediarios resis-
tentes a dicho parasito que pueden impedir su reproduc-
ción, contribuyendo de esa manera a su control.
5.5. Recolección y tratamiento de la información
5.5.1. Recolección de la información
Para el recojo de información se establecerán los proto-
colos para cada una de las variables a evaluar, indican-
do el momento y forma de realizar los procedimientos
de muestreos y evaluaciones. Asimismo, se tendrá lo
que se llama “Libro de Campo del Estudio”, en forma
física y digital; que es una herramienta que permite re-
gistrar todas las actividades desarrolladas, así como
los datos e información que a lo largo de la investiga-
ción se van recogiendo.
La información será de dos tipos: cuantitativa y cualita-
tiva. La información cuantitativa se refiere a datos que
se obtienen por conteos (de naturaleza discontinua) o 17
mediante el uso de instrumentos de medición (natura-
leza continua). La información cualitativa se refiere a
opiniones respecto a tal o cual hecho o fenómeno (co-
lor, presencia o ausencia de algo, etc.), y para tener
un mayor acercamiento a la verdad serán contrastadas
entre las personas evaluadoras, tratando de llegar a un
consenso.
5.5.2. Tratamiento de la información
Los datos de las variables cuantitativas serán analiza-
dos mediante el uso de la estadística, utilizando pro-
gramas de cómputo; para obtener medias aritméticas
o promedios, rangos, variancia, desviación estándar,
coeficiente de variabilidad, etc., que permitirán caracte-
rizar cada morfotipo de caracol. Asimismo, mediante el
análisis de variancia se podrá determinar la diferencia
entre los morfotipos. Para el procesamiento de estos
datos se usará, básicamente, el programa de cómputo
excel y el paquete estadístico SAS (Statistical Analysis
System).
La información cualitativa será sujeta de análisis de sus
contenidos definiendo temas y categorías para elaborar
la descripción e interpretación correspondiente a cada
variable, y caracterizar a los morfotipos.
6. Propuesta de difusión de resultados de la Investigación
Este estudio se orienta a la identificación de morfotipos
de caracoles del género Lymnaea viatrix con resisten-
cia a Fasciola hepatica; así como, el estudio de su sis-
tema de reproducción y multiplicación; con la finalidad,
de emplearlos, más adelante y en otro estudio, en el
control de dicha plaga al incrementar su frecuencia en
los campos de pastoreo del ganado.
Además los resultados a obtenerse en esta investiga-
ción, serán difundidos hacia la comunidad científica de
la región y el país, por ello, se elaborará al menos, un
artículo científico publicable en revistas de innovación
agraria. Asimismo, los ejecutores del estudio desarro-
llarán conferencias dirigidas a estudiantes y profesio-
nales del sector agrario, en diferentes eventos de difu-
sión de resultados de investigación.
Cabe señalar, que el resultado de esta investigación
servirá para desarrollar, más adelante, una innovación
tecnológica integral para el control de la Fasciola hepa-
tica; la misma que sería usada por los ganaderos de la
región Cajamarca.
18

Técnica de Multiovulación y
Transferencia de Embriones de
Ganado Bovino en Condiciones
de Trópico del Perú
M.V. Roberto Díaz Navarro (*), Ing. Oscar Rengifo Garrido (**) e Ing. José Almeyda Matías (***)

L
a Transferencia de Embriones Bovinos es una
herramienta para el mejoramiento genético que
tiene como principal ventaja incrementar la ca-
pacidad reproductiva del ganado, siendo actualmente
la técnica más utilizada a nivel comercial en el ámbito
mundial para reproducir animales de alto valor gené-
tico.
Durante mucho tiempo el ganado bovino ha venido
siendo mejorado genéticamente desde el lado pater-
no mediante el uso de la Inseminación Artificial (IA);
sin embargo, con la Transferencia de Embriones (TE)
se puede acelerar el mejoramiento tanto desde el lado
paterno como materno, disminuye el intervalo entre
generaciones, acelera el proceso de selección y au-
menta el número de la progenie de donantes valiosas.
La transferencia de embriones, inseminación artificial y
monta natural son técnicas complementarias que se uti-
lizan en forma estratégica para acelerar el mejoramiento
genético en diferentes zonas en condiciones específicas.
Además, en la actualidad muchas técnicas relacionadas
como el sexado de semen, la micromanipulación, la fertili-
zación in vitro y la clonación han sido factibles para lograr
un mejor aprovechamiento y complementar estas técni-
cas.
Hasta hace algunos años la colección y transferencia

(*) Especialista en Biotecnología Reproductiva Animal, ex investigador del INIA

(**) Especialista en Biotecnología Reproductiva Animal, investigador del PNIA en Bovinos y Ovinos del INIA
(***) Docente de la UNALM, ex director de la Subdirección de Investigación de Crianzas del INIA
de embriones en bovinos se realizaba en forma qui-
rúrgica por lo que se hacía muy difícil su aplicación en
terreno (Rowson y col, 1969). El desarrollo de nuevos
instrumentos, métodos de colección y colocación de
los embriones en hembras receptoras, abrió la posibi-
lidad de usarla como una técnica más en los progra-
mas reproductivos en animales de alto pedigree en los
criaderos (Rowe y col, 1976; Eldsen y col, 1976, Rowe
y col, 1980a).
Hoy, la técnica de transferencia de embriones se prac-
tica en forma rutinaria en muchos países en el mundo.
Es así como en U.S.A., solamente, en 1983 se trans-
firieron 71 637 embriones en forma comercial (Embryo
Transfer Newsletter, 1984).
El objetivo principal de los tratamientos de supero-
vulación en el ganado bovino es producir un gran
número de ovulaciones y obtener el máximo número
de embriones transferibles que resulten en una alta
probabilidad de preñez. Sin embargo, la respuesta a
estos tratamientos es muy variable y difícil de prede-
cir. En un trabajo que incluyó 2 048 colecciones de
embriones se obtuvo un promedio de 11,5 ovocitos/
embriones y de 6,2 embriones transferibles por cada
vaca donante (Looney, 1986). Pero lo más importan-
te de este trabajo fue la gran variabilidad en la res-
puesta a la superovulación y en la producción de em-
briones. El 24% de las recolecciones no produjeron
embriones viables, el 64% de las donantes produje-
ron menos embriones transferibles que el promedio y
el 30% de las colecciones produjeron el 70% de los
embriones.
les productivos (leche y carne) gracias a aprovecha-
miento máximo del vigor hibrido del cruce de 2 razas
puras para el trópico peruano.
Beneficios de la Técnica de Producción de Embriones
• Incremento del progreso genético de población a
través del aumento de la intensidad de selección de
las hembras y por la disminución del intervalo de
generaciones.
• El ritmo al cual se incrementa la frecuencia de ge-
nes deseables en la población “determina el ritmo al 19
cual se incrementa la productividad animal”.
• La intensidad de distribución de los genes desea-
bles en la población depende de la tecnología repro-
ductiva que usemos.
• Se puede llegar a obtener 15 crías por año (7 crías
hembra/año).
• Alta intensidad de selección en las madres es pro-
duciendo varias crías/madre/año.
• Mayor cantidad de progenie de alto valor genético.
• Bajos costos de transporte del material genético.
• Disminuye la transmisión de enfermedades.
• Adaptabilidad de razas a diferentes zonas.
• Prolonga la vida reproductiva de donadoras.
• Maximizar la utilización de semen de alto valor.
Limitaciones
• Financiera, con respecto a la inseminación artificial
sin considerar el valor genético.
• Baja respuesta donadora 30%.
• Disponibilidad de receptoras.

Antecedentes

Instituciones participantes:

• Instituto Nacional de Innova-

ción Agraria – EEA El Porvenir
• Proyecto Especial Alto Mayo
– GORE San Martín

En el Laboratorio de Inse-
minación Artificial y Trans-
ferencia de Embriones ubi-
cado en la Granja Ganadera
de Calzada, profesionales
de la Estación Experimen-
tal Agraria El Porvenir del
INIA vienen investigando en
la producción de embriones
bovinos desde el año 1999
con la finalidad de mejorar
genéticamente la ganadería
lechera de la Región, multi-
plicando el material genético
superior a través de la trans-
ferencia de embriones, sien-
do la producción de ganado
F1 (Gir Lechero x Holstein) y
(Gir Lechero x Brown Swiss)
que logra mejorar los nive-
 • Protocolos relativamente largos (15 a 25 días). 4. Protocolo de estimulación hormonal
• Con mayor costo respecto a la inseminación artifi-
cial Día Actividad Dosis

Objetivo
0 Celo
Validación de un protocolo de superovulación en ganado
Bos taurus en condiciones de Trópico en la Región San 5 Propionato de estradiol 1g (6:00 a.m.)
Martin, para mejorar la respuesta superovulatoria en ca-
lidad y cantidad de embriones viables transferibles. 6:00 a.m. (80mg)
9 FSH 6:00 p.m. (70mg)
20 Materiales y Métodos
6:00 a.m. (60mg)
1. Ubicación geográfica 10 FSH 6:00 p.m. (50mg)

Los trabajos de validación de tecnología se desarrolla- FSH + Prostaglandina F2a 6:00 a.m. (50mg)
ron en la EEA El Porvenir – Anexo Calzada, en el dis- 11 (10 mg) 6:00 p.m. (40mg)
trito de Calzada, provincia de Moyobamba, región San
Martín, ubicado a 77º 38’ 11” de longitud Oeste y 05º 6:00 a.m. (30mg)
23’ 46” Altitud sur, a 860 msnm. 12 FSH 6:00 p.m. (20mg)

2. Condiciones climáticas 13 Celo + IA 2 IA c/12h

La zona se caracteriza por tener lluvias todo el año, en 20 Colecta

promedio 1 448 mm, notándose una temporada de me-
nor precipitación que va de junio a octubre y una tem-
porada de mayor precipitación de noviembre a mayo, la Nota: La aplicación de las hormonas se realizó utilizan-
temperatura media es de 25,9 ºC con una temperatura do agujas 21G x 1.5” y con jeringa de 5 cc de capaci-
mínima de 18 ºC y una máxima de 30 ºC., la humedad dad.
relativa es de 85% – 90%

3. Adaptación de las donadoras 5. Método de búsqueda

Los semovientes fueron adquiridos en sus respectivos Clasificación de los embriones

lugares de origen, a la edad comprendida entre 6 a 9
meses. a. Por su categoría

El traslado lo hemos realizado en un camión acondicio- Categoría Descripción

nado; para este fin fueron necesarias 91 horas de viaje
ininterrumpidos.
El proceso de adaptación fue orientado enteramente
a desarrollar anticuerpos contra Piroplasmosis y Ana-
plasmosis, porque la zona de procedencia es libre de
estas enfermedades mientras que el lugar de destino
es endémico.
El proceso de adaptación fue el siguiente:
Aproximadamente 32 a 64 blastómeros están
unidos y forman una masa compacta, las cé-
Mórula compacta lulas ocupan alrededor del 70 % del espacio
perivitelino y aún conservan la capacidad
totipotente.
De 100 a 200 células, se caracteriza por el
Blastocisto temprano comienzo de una cavidad en el interior del
embrión (Blastocele).

De 100 a 200 células, se caracteriza por que

Día post ingreso Acontecimiento existe una marcada diferenciación entre las
Blastocisto células del trofoblasto y el disco embrionario,
Vitaminas ADE y B la cavidad del Blastocele es mucho más no-
1 torio.
Vitaminas ADE y B
2 Más de 200 células, el diámetro celular au-
Aplicación de 10 cc sangre de vaca menta considerablemente y el consecuente
5 criolla adelgazamiento de la zona pelúcida, el espa-
Blastocisto expandido cio perivitelino ha desaparecido y existe pre-
8 a 60 Control de temperatura y tratamiento a sión de la masa celular sobre la zona pelúcida
las terneras que presentan fiebre con produciendo la ruptura, a través de la cual
Tetraciclinas comienza la protrusión.
b. Por su calidad Resultados y Discusión

Calidad Descripción 1. Producción de Embriones por Razas

El análisis de variancia, del uso del Protocolo de Es-

Excelente, el desarrollo corresponde al día de
la recolección, no existen defectos visibles, los
Grado I blastómeros son claramente visibles, color y
estructura uniforme, simétricos, forma esferoi-
de, zona pelúcida intacta
Bueno, el embrión tiene pocos blastómeros
desprendidos de la masa celular, y posee una
Grado II pequeña cantidad de residuos celulares, su
forma puede ser ligeramente irregular.
timulación Hormonal sobre vacas de las razas Brown
Swiss y Holstein, mostró que no existen diferencias sig-
nificativas (P>0.05) con relación a la producción de em-
briones clasificados como Excelente, Bueno, Regular y
Malo; encontrándose lo mismo al análisis de variancia
del total de embriones producidos (Cuadro N° 1).
21
Cuadro N° 1. Análisis de Variancia del Efecto del Protocolo
sobre la Producción de Embriones en vacas Brown Swiss y
Holstein, bajo condiciones de Trópico.

Regular, el embrión posee varios defectos, Fuentes de GL Excelente Bueno Regular Malo Total
detritus celulares, forma irregular, color muy Variación
Grado III oscuro o muy claro o zona pelúcida ligeramen- Vacas 24 n.s. n.s. n.s. n.s. n.s.
te agrietada.
Razas 1 n.s. n.s. n.s. n.s. n.s.
Malo, El embrión posee defectos aun más
marcados, desarrollo retardado, ruptura de Error 8 - - - - -
zona pelúcida con masa embrionaria parcial-
Grado IV mente fuera de ella, forma muy asimétrica, Total 33 - - - - -
desintegración de la masa celular, esta cate-
goría está considerada como no transferible. n.s.: No se hallaron diferencias significativas (Prob>0.05).

Asimismo, al realizar la comparación de medias (Dun-

6. Análisis Estadístico
Los resultados de embriones producidos por raza y
por clasificación fueron analizados, previa transfor-
mación de datos (raíz cuadrada del valor hallado más
uno, √y+1), usando un Diseño de Bloques Comple-
tos al Azar (DBCA), con el siguiente modelo aditivo
lineal:
Yij = µ + Vacai + (Raza ó Clasificación)j + Errorij
can, α=0.05) de la producción promedio de embriones
por colecta clasificados por razas (Brown Swiss y Hols-
tein), mejores resultados de producción de embriones
Excelentes se hallaron en vacas Holstein con un pro-
medio de 4,72 embriones/vaca el cual no difirió signi-
ficativamente al promedio obtenido en vacas Brown
Swiss (3,667 embriones/vaca) como puede observarse
en el Cuadro N° 2. Mientras que en la clasificación de
embriones Buenos, mejores resultados se encontraron
en la Raza Brown Swiss con una producción promedio

Donde:

Yij: Embriones producidos por

la i-ésima vaca de la j-ésima
Raza ó clasificación.
µ: Media poblacional.
Vacai: Efecto de la i-ésima
vaca.
(Raza ó Clasificación)j: E f e c t o
de la j-ésima Raza ó Clasificación.
Errorij: Error Experimental.

Asimismo, se usó la Prueba de

Duncan (α=0.05) para la com-
paración de medias. Los resul-
tados fueron analizados usan-
do el Software S.A.S.

Los resultados de transferen-

cia de embriones a receptoras
fueron analizadas de forma
descriptiva.
 de 4,778 embriones/vaca comparado a 2,560 embrio- dad los embriones clasificados como Buenos (3,1471
nes/vaca obtenidos con la raza Holstein. Del mismo embriones/colecta) que también fue significativamente
modo, en la clasificación Regular, mejor promedio se diferente al resto de clasificaciones. Sin embargo, las
obtuvo en la raza Holstein con 1,360 embriones/vaca cantidades de embriones clasificados como Regular y
comparado a 0,788 embriones/vaca obtenidos en la Malo fueron estadísticamente semejantes con valores
raza Brown Swiss. Asimismo, mayor cantidad de em- de 1,7353 y 1,2059 embriones/colecta respectivamen-
briones Malos fueron encontrados en la raza Brown te.
Swiss (2,222 embriones/vaca) comparado a la raza
Holstein (1,560 embriones/vaca). Y en la producción Cuadro N° 4. Embriones Clasificados por Colecta
Total de embriones, mayores resultados se obtuvie-
ron con la raza Brown Swiss (11,444 embriones/vaca) Clasificación N° de Colectas Promedio
22 al compararse a la raza Holstein (10,200 embriones/
vaca), sin embargo, estas producciones no fueron dife- Excelente 34 4,4412 a
rentes significativamente.
Bueno 34 3,1471 b
Cuadro N° 2. Producción Promedio de Embriones por
Colecta, Clasificados por Razas Regular 34 1,7353 c

Raza Excelente Bueno Regular Malo Total Malo 34 1,2059 c

Brown Swiss 3,667 a 4,778 a 0,778 a 2,222 a 11,444 a Nota.- Las medias con letra semejante no difieren significativamente
(Duncan, α=0.05).
Holstein n.s. n.s. n.s. n.s. n.s.
Estos valores hallados nos indican que bajo condicio-
Nota.- Las medias con letra semejante no difieren significativamente nes de Trópico se obtuvieron mayor cantidad de em-
(Duncan, α=0.05). briones clasificados como Excelente y Bueno.

Estos resultados nos indican que la producción de em- En el Cuadro N° 5, se observa que mediante el Protoco-
briones, usando el Protocolo de Estimulación Hormo- lo de Estimulación Hormonal se obtuvo 358 embriones
nal, es semejante en las razas Brown Swiss y Holstein. de 34 colectas realizadas a vacas, correspondiendo en
promedio por vaca 10,53 embriones colectados, de los
2. Embriones Clasificados cuales 7,59 embriones (clasificados como Excelente y
Bueno) tienen mayor probabilidad de preñez a la trans-
El análisis de variancia de los embriones obtenidos, al ferencia y de 2,94 embriones se encuentran como no
usar el protocolo de Estimulación Hormonal, muestra transferibles.
que no existe diferencias significativas (P>0.05) entre
las vacas donadoras; pero en la Clasificación de em- Cuadro N° 5.Total de Embriones Producidos en 34 Colectas
briones (Excelente, Bueno, Regular y Malo) si se en-
contraron diferencias altamente significativas (P<0.01) Total de Porcentaje Embriones
como respuesta al uso del Protocolo de Estimulación Clasificación Embriones (%) Observaciones Promedio
Hormonal (Cuadro N° 3). por Vaca
Excelente 151 42,18 258 (72,07%)
Cuadro N° 3. Análisis de Variancia de la Clasificación de embriones 7,59
Embriones obtenidos por Colecta. transferibles
con mayor
Fuentes de GL SC CM Fcal Pr>F Bueno 107 29,89 probabilidad de
Variación preñez
Vacas 33 6,99207677 0,21188111 0,49 0,9897 Regular 41 11,45 100 (27,93%)
n.s. embriones no 2,94
Clasificación 3 13,64161955 4,54720652 10,45 <.0001 ** Malo 59 16,48 transferibles

Error 99 43,07340489 0,43508490 Total 358 100 10,53

Total 135 63,70710121

n.s.: No se encontraron diferencias significativas (P>0.05).
**: Se encontraron diferencias altamente significativas (P<0.01).
Al realizar la prueba de comparación de medias (Dun-
can, α=0.05) mayor cantidad de embriones se obtuvo
en la clasificación Excelente (4,4412 embriones/co-
lecta) la cual fue significativamente diferente al resto
de clasificaciones (Cuadro N° 4); siguiéndole en canti-
Los valores de embriones transferibles hallados
(72,07%) usando la metodología MOET difiere al 60,5%
encontrado por Gonzales et al (2000) al usar la misma
metodología en ganado Bovino Criollo Limonero, con
mejores resultados los valores encontrados en el trópi-
co de San Martín.
Mientras que Looney (1986) obtuvo en promedio 11,5
embriones por vaca de los cuales 6,2 fueron embriones
transferibles, estos valores difieren de los resultados Embriones Producidos en 2 años: 358
obtenidos en el experimento con 10,53 embriones por Costo por embrión: S/. 259,66
vaca y 7,59 embriones transferibles, con mejores resul-
tados en embriones transferibles. Concluciones

3. Transferencia de Embriones • El ganado bovino Bos taurus (Brown Swiss

y Holstein) responde a la multiovulación del
De 88 transferencias realizadas en vacas sincroniza- Protocolo de Estimulación Hormonal con FSH
das “receptoras”, en un periodo de dos años, se logra- bajo condiciones tropicales, obteniendo una
ron 36 preñeces (40,9%) y 52 “receptoras” no preñaron producción promedio de 10,53 embriones por
(59,1%), como puede apreciarse en el Cuadro N° 6. vaca.
23
Cuadro N° 6. Transferencia de Embriones a Vacas Receptoras • El promedio de embriones viables para transfe-
rencia por colecta es de 7,59 correspondiendo
Estado Reproductivo Transferencia de Porcentaje (%) a las clasificaciones de Embriones Excelentes y
de la Vaca Receptora Embriones Buenos. Mientras que los Embriones Clasificados
Preñada 36 40,9 como Regular y Malo son de 2,94 embriones por
vaca.
Vacía 52 59,1
• El costo de producción de un embrión por el
Total 88 100,0 método propuesto es de S/. 259,66 Nuevos So-
les.

Sin embargo, Gonzales et al (2000), usando embriones • Mediante la Transferencia de Embriones se obtuvo
congelados, logró una tasa de preñez de 48,6% bajo como resultado 40,9% de Preñez (36 vacas) de un
condiciones de trópico venezolano. total de 88 vacas receptoras.

Validación Económica

Producción de Embriones por el Sistema MOET (en dos años)

 Producción de Embriones a Nivel
Nacional a través de la Técnica de
Multiovulación y Transferencia de
24 Embriones en Ganado Bovino
Ing. Cesar Osorio Zavala (*), Ing. Oscar Rengifo Garrido (**) e Ing. Aldo Torres Romero (***)

Los trabajos de investigación en producción y transferen- co y privado para promover la actividad en forma constan-
cia de embriones se iniciaron en la Estación Experimen- te y dinámica en diferentes regiones y crear la oportunidad
tal Agraria El Porvenir del INIA en 1999, en convenio con de entrenar a más profesionales, asimismo, captar genes
el Gobierno Regional de San Martín. Hasta la fecha en de las mejores vacas de los establos del sector privado
la zona nor oriental del Perú: Tarapoto, Bellavista, Moyo- solicitando un porcentaje de la producción de embriones
bamba, Rioja y Nueva Cajamarca (San Martín), Tingo Ma- para el INIA, por el servicio prestado como soporte técni-
ría (Huánuco) y Pomacocha (Amazonas) ya se tienen más co, que lo utilizará en la formación de núcleos genéticos
de 300 crías nacidas con esta técnica y en el año 2005 se en las diferentes estaciones experimentales agrarias para
obtuvo la primera cría de raza Brown Swiss en el Perú en luego ponerlas a disposición de los productores.
un vientre de una vaca criolla, (primera vez en el mundo),
evidenciando que con esta técnica se puede reconvertir el Soporte Técnico y Alianzas Estratégicas Concretadas a
ganado bovino de baja calidad genética en una sola ge- Nivel Nacional
neración. Esta técnica fue estandarizada por especialistas
del INIA y puesta a disposición de la comunidad técnico- 1. En Junín, proyecto “Mejoramiento genético del ga-
profesional-científico del Perú en diciembre del 2011 nado vacuno mediante la transferencia de embriones
en la región Junín”.
La Subdirección de Investigación de Crianzas de la Di- Por los recursos limitados que tiene el INIA, una de las
rección de Investigación Agraria (DIA) del INIA, luego de primeras oportunidades para la producción de embriones
la liberación de la tecnología, inició la búsqueda de socios de bovinos se generó a través del proyecto “Mejoramiento
estratégicos en el sector público y privado para iniciar la genético del ganado vacuno mediante la transferencia de
producción de embriones en forma masiva utilizando la for- embriones en la región Junín” en la EEA Santa Ana del
taleza que se tiene en manejo de la técnica, laboratorios im- INIA en Huancayo. Se apoyó en la producción de embrio-
plementados y vacas de
alto valor genético. Esta
iniciativa obedece a que
es necesario contar con
especialistas en produc-
ción y transferencia de
embriones para la trans-
ferencia de la técnica en
mención; sin embargo,
para llegar al nivel re-
querido se necesita de
cierta especialización
y mucha práctica, re-
quisitos que en nuestro
medio no es frecuente y
todavía es muy costoso
como para entrenar a
varios profesionales.

Es por ello la necesi-

dad de formar alianzas
estratégicas con institu-
ciones del sector públi- Con esta técnica se puede reconvertir el ganado bovino de baja calidad genética en una sola generación.

(*) Responsable de la Subdirección de Investigación de Crianzas – INIA

(**) Especialista en Biotecnologías Reproductivas del PNIA en Bovinos y Ovinos, EEA El Porvenir - INIA
(***) Especialista de la Subdirección de Investigación de Crianzas - INIA
nes para el proyecto superovulando 10 vacas
cada 60 días aproximadamente y obteniendo a
la fecha 235 embriones, de los cuales 42 fueron
transferidos y ya se tienen 10 terneros nacidos.
Los 193 embriones restantes congelados serán
transferidos en asociaciones de productores de
la Región Junín en el mes de abril del 2012 y se
espera más de 50 crías nacidas en las zonas
altas de Junín.

2. En Cusco, convenio de Colaboración entre

el Instituto Nacional de Innovación Agraria y 25
la Municipalidad Provincial de Espinar – Cus-
co.
La acción conjunta con los gobiernos locales es
otra actividad que el INIA realiza para el desa-
rrollo ganadero por ello en noviembre del 2011,
suscribió un convenio con la Municipalidad de
Ing. Enrique La Hoz, Dir. Gnral. de Investigación Agraria del INIA, acompaña-
Espinar del Cusco para la producción de em-
do del equipo técnico de la SDI de Crianzas, A. Torres, O. Rengifo, C. Osorio.
briones bovinos en las EEA Illpa y Canaán para
la generación de núcleos genéticos en la zona de Espinar 6. Cursos de producción de embriones
del Cusco, Ayacucho y Puno, donde el Municipio finan- El Ing. Oscar Rengifo, especialista en biotecnologías repro-
ciará los gastos operativos y el aporte del INIA será con ductivas de la Subdirección de Investigación de Crianzas
el experto en biotecnología reproductiva, equipos y vacas dictó el curso de “Producción y Transferencia de Embrio-
de alto valor genético, con lo cual se iniciará la producción nes en Bovinos” en el Pre Congreso de la XXXIV Reunión
de embriones bovinos. A la fecha ya se inició con la selec- Científica de la Asociación Peruana de Producción Animal
ción de las vacas donadoras y la primera aplicación del (APPA 2011) en el establo “Agropecuaria Las Pampas” en
protocolo de superovulación se iniciará el 15 de febrero la ciudad de Trujillo, donde se superovularon 04 donadoras,
del 2012 utilizando 10 vacas de la EEA Illpa – Puno. De la obteniendo 22 embriones viables, se transfirieron 12 em-
producción de embriones congelables, el 50% le corres- briones y a la fecha se tiene 05 vacas preñadas.
ponderá al INIA para fortalecer los núcleos genéticos que
viene formando en las diferentes estaciones experimenta- 7. En Lima, en la Universidad Nacional Agraria La Mo-
les agrarias a nivel nacional. lina (UNALM)
En coordinación con el Ing. José Almeyda Matías Jefe del
3. En Trujillo, soporte técnico con la empresa Green Programa Nacional de Investigación en Leche de la facul-
Perú S.A. tad de Zootecnia, se superovularon 10 vacas en 03 opor-
Se gestionó la producción de embriones en el establo La Joya tunidades, obteniendo más de 100 embriones viables.
de la empresa Green Perú S.A. En coordinación con la EEA
Santa Ana, se superovularon 11 vacas, se obtuvo 58 embrio- Para la continuación de esta labor se requieren de recur-
nes viables, se transfirieron 18 embriones y preñaron 8 vacas. sos disponibles, es por esta razón que el INIA viene ges-
De la producción de embriones, el 50% le corresponde al INIA tionando la búsqueda de socios estratégicos para la mul-
para el fortalecimiento de sus núcleos genéticos formados. tiplicación del material genético valioso a nivel nacional y
acelerar el mejoramiento genético utilizando tecnologías
4. En Arequipa, soporte técnico con la empresa Gloria innovadoras y considerando que de una vaca de alto valor
S.A. genético se espera 5 crías en promedio en toda su vida,
Se gestionó la alianza estratégica con la empresa Gloria sin embargo, con la utilización de la transferencia de em-
S.A. para ofrecer el soporte técnico en transferencia de briones se puede obtener más de 10 crías en sólo un año.
embriones bovinos en la región Arequipa. Al respecto, ya
lo han solicitado oficialmente y se tiene un plan de traba- Es necesario resaltar que estos primeros resultados se
jo para superovular vacas en el establo lechero Vito en vienen obteniendo con financiamiento “cero”, es decir, la
La Joya de Arequipa programado para marzo del 2012. Subdirección de Investigación de Crianzas no tiene presu-
Asimismo, se espera un porcentaje de la producción de puesto adicional para estos trabajos, sin embargo, en los
embriones para el INIA. últimos años se fue implementando los laboratorios y te-
niendo más experiencia en el tema y en estos momentos
5. En Cusco, soporte técnico con la Fundación San es evidente que el INIA tiene laboratorios implementados
Román. con equipos móviles y el personal con capacidad demos-
Se gestionó la alianza estratégica con la Fundación San Ro- trada para poder apoyar con técnicas reproductivas en el
mán para ofrecer el soporte técnico en la producción y trans- mejoramiento genético de bovinos a nivel nacional, sólo
ferencia de embriones bovinos en la región del Cusco. Al res- se necesita la inversión en capital de trabajo para iniciar
pecto, la Fundación San Román solicitó oficialmente y se tiene la reconversión genética. Por eso, exhortamos a la co-
un plan de trabajo para superovular vacas programadas para munidad en general, a otras instituciones involucradas en
el mes de marzo. Asimismo, se espera un porcentaje de la el sector, tanto públicas y privadas, para que inviertan re-
producción de embriones para el INIA. cursos que permitan el desarrollo de la ganadería bovina.
 INIA inicia la producción de
embriones In Vitro en Bovinos
Ing. César Osorio Zavala
Responsable de la Subdirección de Investigación en Crianzas
Dirección de Investigación Agraria - INIA
26
La Subdirección de In-
vestigación de Crian-
zas de la Dirección de
Investigación Agraria
(DIA) del INIA convocó
la reunión de 03 cien-
tíficos para la estanda-
rización de protocolos
para la producción de
embriones mediante la
técnica de Fertilización
In Vitro en bovinos,
trabajo de investiga-
ción adaptativa que se
ejecutó en el labora-
torio de biotecnología
reproductiva de la EEA
Canaán en Ayacucho,
el cual fue desarrolla-
do por los siguientes
profesionales: Dr. Teo-
dosio Huanca Mamani
de la EEA Illpa, Ing.
Oscar Rengifo Garrido
de la EEA El Porvenir y
la Ph.D. Ilse Cayo Col-
ca, también se contó con el apoyo de la Ing. María en investigar tecnologías adaptativas para el desarro-
Luz Naveros de la EEA Canaán y la Bióloga Rosa- llo ganadero a nivel nacional y como buenos servido-
rio Cóndori Pacheco, responsable del Laboratorio de res públicos se está publicando el protocolo utilizado
Biotecnología del PEAM del Gobierno Regional San y el informe técnico elaborado por la Ph.D. Ilse Cayo
Martín. Colca donde se redacta paso a paso la metodología
empleada y los resultados obtenidos y esta acción
De acuerdo a los resultados, se obtuvo hasta un 40% debe servir de ejemplo a otras instituciones y/o inves-
de embriones viables (ver tabla 2 del informe “Desa- tigadores de los diferentes sectores en compartir el
rollo del Protocolo para la Producción de Embriones conocimiento adquirido ya que como servidores pú-
In Vitro”) utilizando ovarios de vacas procedentes del blicos estamos en la obligación moral de compartir
camal. La fase siguiente de estos trabajos es producir todo lo que el Estado nos permite generar desde cada
embriones, utilizando ovocitos de vacas vivas con la puesto laboral.
técnica de punción ovárica, y preñar vacas, asimismo,
la continuación de estos trabajos se tiene proyectado Finalmente, mis reconocimientos y felicitaciones a los
en el Plan Operativo Institucional 2012 del INIA. científicos mencionados que por sus conocimientos,
dedicación y predisposición para reunirse durante va-
Estos resultados son alentadores para los trabajos de rias semanas en la EEA Canaán dieron fruto a los re-
investigación que viene realizando el INIA en beneficio sultados mencionados y recordarles a la comunidad en
de la ganadería nacional y es el fruto del esfuerzo del general que la Subdirección de Investigación de Crian-
trabajo en equipo que se viene monitoreando desde la zas está a disposición de todos los interesados para
Subdirección de Investigación de Crianzas. compartir el conocimiento.

Es necesario e importante recalcar la función que tie- “El conocimiento es patrimonio de la humanidad,…..
nen los científicos del INIA como institución de Estado difúndela”.
Protocolo para la Producción
de Embriones In Vitro
Preparación de Medios
I. Medio de Transporte de Ovarios
Solución salina 9% (9 g. de NaCl en 1.000 mL
de agua destilada). La solución debe de estar a
38,5°C. Agregar 25 mg amphoterecin-B, 10.000U
PenG y 10.000mg Streptomycin.
Colectar los ovarios directamente de la carcasa,
remover los tejidos con ayuda de una tijera y co-
locarlos en el termo. Transportarlos al laboratorio
lavarlos con solución salina temperada y mante-
nerlos en solución salina temperada hasta su uso.
II. Medio de Lavado (ML)
SOF-Hepes Solución Stock 10 mL
L-Glutamina-stock 100 μl
Piruvato Stock 30 μl
Gentamicina (SIGMA) 10 μl
Aminoácidos esenciales (SIGMA) 200 μl
Aminoácidos no esenciales (SIGMA) 100 μl
BSA 30 mg
Filtrar (0,02 μm) y mantener congelado por un
máximo de 2 semanas en alícuotas de 1,5 mL
aproximadamente. Antes de su uso incubar a
38,5°C, 5% CO2 y 95% Hd por lo menos 2 horas.
III. Medio de Maduración (MM)
Medium 199 (SIGMA) 9 mL
FCS (SIGMA) 1 mL
FSH-LH stock 10 μl
Piruvato stock 20 μl
Gentamicina 10 μl
Filtrar (0,02 μm) y guardar congelado por un máxi-
mo de 1 mes en alícuotas de 1,5 mL aproximada-
mente. Antes de su uso agregar FSH-LH stock (5
μl) y piruvato (2,5 μl) por cada 500 μl de medio.
Antes de su uso preparar gotas de 40 μl cubrir con
aceite mineral e incubar a 38,5°C, 5% CO2 y 95%
Hd por lo menos 1 hora.
IV. Medio de Fertilización (MF)
TL-stock 10 mL
BSA 0.06 g
Piruvato stock 20 μl
Gentamicina 10 μl
27
Filtrar (0,02 μm) y guardar congelado por un máxi-
mo de 2 semanas en alícuotas de 1,5 mL aproxi-
madamente. Antes de su uso preparar gotas de
40 μl cubrir con aceite mineral e incubar a 38.5°C,
5% CO2 y 95% Hd por lo menos 1 hora.
V. Selección de Espermatozoides (Método Percoll)
Percoll 90%
Percoll (SIGMA) 9 mL
PBS 10X o PBS X 1 mL
Ácido lactico 30 μl
CO3NaH 25,5 mg
Percoll 45%
Percoll 90% 1 mL
TL-stock 1 mL
Percoll 22.5%
Percoll 45% 1 mL
TL-stock 1 mL
La gradiente de Percoll que se uso fue de 45/22,5.
En un tubo de 15 mL agregar 2 mL de Percoll 22,5
y con ayuda de una jeringa añadir desde la base
del tubo de 15 mL el Percoll 45. Dejar a 37°C por
lo menos 30 minutos. Agregar una pajilla de se-
men lentamente en la superficie de la gradiente.
Centrifugar por 30 minutos a 2.000 RPM. Luego
remover el líquido y dejar el pellet y agregarle 30
mL de TL-stock y diluir lentamente. Usar 3 a 5 μl
de la solución en el medio de fertilización.
VI. Medio de Cultivo (MC)
SOF-Hepes Solución stock 9 mL
L-Glutamina-stock 100 μl
Piruvato stock 30 μl
Gentamicina 10 μl
Aminoácidos esenciales 200 μl
Aminoácidos no esenciales 100 μl
FCS 500 μl
Glucosa 2,6 mg
Filtrar (0,02 μm) y mantener congelado por un
máximo de 2 semanas en alícuotas de 1 á 5 mL
aproximadamente. Antes de su uso preparar go-
tas de 40 mL cubrir con aceite mineral e incubar a
38,5°C , 5% CO2 y 95% Hd por lo menos 1 hora.
Preparación de Stocks
I. SOF-Stock
 NaCl 314,5 mg
KCl 26,5 mg
KH2PO4 8 mg
NaHCO3 105 mg
Rojo Fenol 1 mg
Ácido Láctico 20 μl
CaCl2-stock 1 mL
MgCl2-stock 1 mL
Enrasar a 50 mL con agua destilada autoclavada.
Ajustar el pH a 7,45. Filtrar (0,02 μm). Almacenar
28 a 4°C por un periodo máximo de 2 semanas.
II. SOF-HEPES Solución Stock
SOF-Stock 50 mL
HEPES (SIGMA) 119 mg
Ajustar el pH a 7.45. Filtrar (0,02 μm). Almacenar
a 4°C por un periodo máximo de 2 semanas.
III. TL-Stock
NaCl 333 mg
KCl 11,5 mg
NaHCO3 105 mg
NaH2PO4 2 mg
Rojo Fenol 1 mg
Ácido Láctico 33 μl
CaCl2-Stock 1.19 mL
MgCl2-stock 1 mL
Ajustar el pH a 7,45. Filtrar (0,02 μm). Almacenar
por un máximo de 2 semanas a 4°C.
IV. CaCl2-Stock
Cl2Ca.2H2O 125,7 mg
Agua destilada autoclavada 10 mL
Separar en alícuotas de 1 mL y congelar. Al des-
congelar la alícuota, esta puede permanecer a
4°C por 2 semanas.
V. MgCl2-Stock
Cl2Mg.6H2O 49.8 mg
Agua destilada autoclavada 10 mL
Separar en alícuotas de 1 mL y congelar. Al des-
congelar la alícuota, esta puede permanecer a
4°C por 2 semanas.
VI. Heparina-Stock
TL-stock 1 mL
Heparina 1 mg
Separar en alícuotas 100 μl y congelar. Al descon-
gelar la alícuota, esta puede permanecer a 4°C
por 1 semana.
VII. FSH-LH-Stock
FSH (Folltropin-V) 0,5 mg
LH (SIGMA) 0,5 mg
Medium 199 1 mL
Separar en alícuotas de 20 μl y congelar. Al des-
congelar la alícuota no volver a congelar y des-
cartar.
VIII. L-Glutamina Stock
L-Glutamina (SIGMA) 14 mg
Solución salina 1 mL
Separar en alícuotas de 100 μl y congelar. Al des-
congelar la alícuota no volver a congelar y des-
cartar.
IX. Aceite Mineral
Solución salina 150 mL
Aceite Mineral (Daniel HE) 350 mL
Agitar la mezcla y dejarlo en la incubadora inde-
finidamente. Al sacar el aceite mineral e introdu-
cirlo a la cámara de flujo laminar y/o incubadora
desinfectar la botella con alcohol.
X. PBS (10X)
Solución A
ClNa 8g
ClK 0,2 g
Cl2Mg.6H2O 0,1 g
Cl2Ca 0,1 g
Glucosa 1g
Na-Piruvato (SIGMA) 0,036 g
sFiltrar (0,02 μm). Enrasar a 100 mL y guardar a
4°C.
Solución B
Na2HPO4 1,15 g
KH2PO4 0,2 g
Filtrar (0,02 μm). Enrasar a 100 mL y guardar a
4°C.
XI. PBS (X)
Solución A 1 mL
Solución B 1 mL
Agua Destilada 8 mL
XII. Na-Piruvato Stock
Na-Piruvato 11 mg
Medium 199 1 mL
Conservar congelado en alícuotas de 250 μl. Des-
cartar después de usar, no volverlo a congelar.
Las sales fueron adquiridas de MATHESON, CO-
LEMAN & BELL DIV. La calibración del pH se rea-
lizó con NaOH 1N.
 Desarollo del Protocolo para la
Producción de Embriones In Vitro
Probado en el Laboratorio de Biotecnología Reproductiva de la EEA Canaán del INIA

Dr. Teodosio Huanca Mamani (*), Ing. Oscar Rengifo Garrido (**), Ph.D. Ilse Cayo Colca (***) 29

E
l trabajo de Fertilización In
Vitro (FIV) se realizὁ en co-
ordinación con los investiga-
dores: Dr. Teodosio Huanca, Ing.
Oscar Rengifo, Ph.D. Ilse Cayo,
M.V.Rosario Condori, y la Ing. Mary
Naveros de las Estaciones Experi-
metales Agrarias de Calzada, Illpa
y Canaán. Durante los mesesde no-
viembre y diciembre del 2011 se de-
finieron los siguientes pasos y se en-
contraron las siguientes dificultades:

1. Transporte de Ovarios

Materiales

- Botella Pyrex con tapa 1 L.

- Vaso Pyrex 200 mL
- Termo
- Solución Salina (0.9% NaCl) 1 L
- Stock antibacterial y antimicótico
- Guantes estériles de látex
- Tijeras

Otros materiales (según los reque-

rimientos del camal)
- Botas de jebe Elaborado por la Ph.D. Ilse Cayo Colca
- Mandil blanco
- Casco Recomendaciones

Procedimientos 1. Según el protocolo que se está empleando, se re-

Preparar la solución salina (0.9%) en la botella de
1. Pyrex con un día de anticipación y autoclavar.
El día de la colección de ovarios agregar a la solu-
2. ción salina el antimicótico y el antibacteriano (ver
siguiente artículo) .
Colocar la solución a 37°C por un par de horas.
3. Separar unos 200 mL de la solución salina entibiada
4. en un termo.
Llevar al camal el termo, los guantes, las tijeras y los
5. otros materiales.
Recepcionar los ovarios directamente extraídos de
6. la carcasa, remover los tejidos, el oviducto y las gra-
sas y colocar solo los ovarios en el termo.
7. Transportar los ovarios al laboratorio.
comienda usar antibiótico-antimicótico de SIGMA
(A5955). Sin embargo, por no disponer del produc-
to, se (ver archivo adjunto), el cual dio buenos re-
sultados.
2. La literatura recomienda que el tiempo desde la co-
lección de ovarios hasta el retorno al laboratorio, no
debe exceder las 5 horas y la temperatura dentro
del termo debe ir entre 30° a 37°C. En nuestro caso
el promedio de horas que toma desde la colección
de ovarios hasta llegar al laboratorio esta en 4 ho-
ras. Sin embargo, se notó que la temperatura dentro
del termo decrece hasta llegar a los 20º C, lo cual no
es recomendable por tener efectos negativos en los
ovocitos. Se sugiere la adquisición de termos que
mantengan más estable la temperatura interna.

(*) Investigador y Líder del Programa Nacional de Innovación Agraria en Camélidos - INIA. thuanca@inia.gob.pe
(**) Investigador del Programa Nacional de Innovación Agraria en Bovinos y Ovinos - INIA. orengifo@inia.gob.pe
(***) Investigadora del INIA. ilse_silvia@yahoo.es
 3. Las tijeras que se vienen usando para la remoción
de los tejidos extras del ovario, no son las adecua-
das, ya que el mango es de plástico. Seria conve-
niente adquirir tijeras quirúrgicas o metálicas, ya
que este material facilita su esterilización a altas
temperaturas.
4. La colección de los ovarios debe ser directa, evitar
en lo posible aquellos ovarios que han estado mu-
cho tiempo en la intemperie. Se observo que afecta
la calidad del ovocito extraido.
5. Inmediatamente llegado al laboratorio, lavar los ova-
30 rios con el resto de la solución salina, colocarlos en
un vaso pyrex con solución salina (200 mL aprox.) y
empezar a aspirar. Se recomienda la adquisiciὁn de
pinzas metálicas para el lavado.
6. Ya que cada camal posee un reglamento interno
para el ingreso, sería prudente tener materiales ex-
tras en el laboratorio como botas, overoles, mandi-
les o cascos.
7. Evitar en lo posible que los ovarios sean expues-
tos a condiciones de tempeaturas por debajo de los
30°C por tiempo prolongado.
2. Aspiración y Lavado de Ovocitos
Materiales y Medios
- M-199.HEPES 4 mL
- Estereoscopio
- Plato Caliente
- Tubos Falcon estériles de 15 mL (2 unid)
- Jeringa estéril de 5 mL
- Papel Toalla
- Discos Petri descartable de 90 mm
- Discos Petri de 35 x 10 mm
- Guantes quirúrgicos
- Alcohol 70°
Procedimientos
1. Limpiar con alcohol el área de trabajo (mesa y sue-
lo).
2. Luego de lavar los ovarios tres veces en solución
salina temperada, mantenerlos a 30oC aprox.
3. Coger los ovarios con guantes quirúrgicos puestos y
secarlos con papel toalla.
4. Temperar la solución HEPES a 37º C en uno de los
tubos Falcon.
5. Absorber con la jeringa 0.5 mL aproximadamente de
solución HEPES y empezar a aspirar los folículos.
6. Para aspirar, introducir la jeringa en la parénquima
del ovario a unos 2 mm aproximadamente del folícu-
lo y aspirar el contenido de los folículos.
7. Aspirar la mayor cantidad de folículos posible.
8. Vaciar el contenido aspirado en el segundo Tubo
Falcon lentamente para evitar el daño al ovocitos
y la remosion de las celulas del cumulus. Repetir la
operación con todos los ovarios.
9. Luego de finalizada la aspiración dejar los
tubos a 37°C por 10 min aproximadamente.
10. Pasados los 10 minutos iniciar la búsqueda
de los ovocitos.
11. Considerar que los ovocitos tienden a ir ha-
cia el fondo del tubo. Remover el líquido por
encima de los 2 mL.
12. La búsqueda debe realizarse en los discos
de 90 mm bajo un estereoscopio con platina
caliente.
13. En el disco pequeño agregar 1,5 mL aproxi-
madamente de HEPES temperado. Este
disco servirá para recepcionar a los ovoci-
tos encontrados.
14. Lavar los ovocitos con medio de lavado.
Recomendaciones
1. El protocolo usado no recomienda usar un
medio de recuperación de ovocitos. Sin em-
bargo, el uso de HEPES (como medio de
recuperación) facilitó| la búsqueda de los
ovocitos.
2. Los folículos aspirados varían de 2 a 7 mm de
diámetro. Los folículos que son de mayor ta-
maño contienen fibrina que coagula el fluido
colectado y dificulta la recuperación de los ovo-
citos. Los folículos de menor tamaño contienen
ovocitos meioticamente incompetentes.
3. Tanto la aspiración de los folículos como el
vaciado al tubo Falcon no debe de ser ace-
lerada ya que esto origina la pérdida de las
células del cúmulus por la presión que se
ejerce en la expulsiὁn del fluido.
.4. Se sugiere mantener los medios y el fluido a no me- Recomendaciones
nos de 30°C. Esto se puede lograr usando las plati-
nas calientes. 1. Luego de colectar los ovocitos y colocaros en el
5. Luego de terminar de aspirar dejar decantar la solu- medio HEPES, clasificarlos en base a: Número de
ción aspirada. Los ovocitos por gravedad tienden a capas de células del cúmulos que rodea al ovocito,
ir hacia la parte inferior de los tubos Falcon. coloración de las células del cúmulus, coloración del
6. Generalmente se deberían obtener entre 10 a 15 ovocito, presencia o ausencia de las células de cú-
ovocitos de buena calidad por cada ovario. En este mulus y tamaño de los ovocitos.
caso, los ovarios de camal son bastante heterogé- 2. El número apropiado de ovocitos por cada gota es
neos y la mayoría son de vacas gestantes, por con- de 10 (por cada 40 μl de gota).
siguiente el número de ovocitos obtenidos se redujo 3. Preparar con 2 horas de anticipación el disco con-
a cinco por cada ovario. teniendo las gotas de maduración (la definitiva) y 31
7. Se recomienda que los ovocitos que poseen zonas dejarla en la incubadora.
denudadas o que estén completamente denudados 4. El tiempo de maduración dependerá del protocolo a
o de coloración blanquecina o con células del cú- usar. En este caso se observὁ que 18 horas no eran
mulus muy negras o expandidas sean descartados, suficientes para que el ovocito alcance la metafase
ya que pueden estar en estado de degeneración y/o II, por lo tanto, se amplió a 22 horas.
no fertilizar. 5. Este protocolo usa stock de FSH-LH para inducir la
maduraciὁn de los ovocitos, sin embargo, se obten-
3. Maduración de Ovocitos drían mejores resultados con el uso de hMG.
6. El trabajo desde la aspiración de los ovocitos hasta
Materiales y Medios el cultivo de los mismos toma alrededor de 2 a 3
horas dependiendo del número de ovarios y la ca-
- Micropipetas lidad de los mismos. Esto significa que se inicia el
- Discos pequeños cultivo entre las 4:30 p.m. y 5:30 p.m.. En algunas
- Medio de lavado ocasiones el beneficio de vacas empieza a la 1:00
- Medio de Maduración p.m., esto significaría empezar el cultivo a las 9 de
- Stock de FSH-LH la noche aproximadamente, lamentablemente esta
- Stock de Piruvato oportunidad no es aprovechada ya que la institu-
- Aceite mineral ción cierra puertas antes de las 9:00 p.m.
- Estereoscopio
- Platina Caliente 4. Fertilización In Vitro
- Alcohol 70º
Materiales y Medios
Procedimientos
- Discos de pequeños
1. En un disco de pequeño colocar gotas de 20 μl - Disco de 90 mm
de medio de maduración. El número de gotas de- - Micropipeta
penderá de la cantidad de ovocitos que se tengan. - Medio de lavado
Agregar aceite mineral previamente incubado a 37 - Medio de fertilización
ºC. Colocar 20 μl de gotas a cada gota anterior (total - Aceite mineral
40 μl).
En un disco de 90 mm colocar
gotas de 600 μl aproximadamen-
2. te (no necesita ser exacto ya que
solo es para lavar) de medio de
lavado y medio de maduración
(la mayor cantidad de gotas de
medio para ambos casos).
Transferir los ovocitos colecta-
dos a la primera gota de medio
3. de lavado y de ahí a la segun-
da, etc. Luego de lavarlos (por
lo menos tres veces) transfe-
rirlos a las siguientes gotas de
medios de maduración y repetir
la operaciὁn y finalmente trans-
ferirlos a la gota de maduración
definitiva.
4. Llevar el cultivo a la incubadora
a 38,5º C, 5%CO2 y 95% hu-
medad.
5. Dejarlo decantar de 18 a 24 horas.
32
- Estereoscopio
- Platina caliente
Procedimietos
1. Preparar el disco de fertilizaciὁn con las gotas de
medio de fertilización con dos horas de anticipación
y meterlas a la incubadora (de la misma forma con
la que se preparὁ el de maduración).
2. Preparar las gotas con el medio de lavado y lavar
los ovocitos maduros por lo menos tres veces en
tres gotas distintas.
3. Transferir los ovocitos a la gota de fertilización con
una hora de anticipación antes de fertilizarlas.
4. Agregar 2 μl de gota de semen a la gota donde se
encuentran los ovocitos madurados.
5. Agregar 2 μl de heparina stock..
6. Meter el disco nuevamente a la incubadora por un
mínimo de 6 horas hasta un máximo de 20 horas.
Este laboratorio usa 20 horas.
Recomendaciones
1. Luego de pasar las horas de maduración separar a
los ovocitos y agruparlos según el grado de expan-
sión de las células del cúmulos.
2. La separación de los espermatozoides viables y su
capacitación se realiza por Percoll 45/22,5 y hepari-
na. Dio buenos resultados.
3. Al hacer la trasferencia hacia las gotas de fertili-
zación demorar el menor tiempo posible ya que el
cambio de pH parece ser inmediato (en estas con-
diciones).
4. Lo conveniente seria realizar la fertilización por 18
horas. Sin embargo, coincide con la recepción de
los ovarios en el camal.
5. Selección de Espermatozoides (Percoll)
Materiales y medios
- Tubos Falcon de 15 mL
- Solución TL-Stock
- Percoll 45 y 22.5 (ver anexo)
Blastocistos producidos por fertilización In Vitro
Procedimientos
1. Preparar gradiente de Percoll 45/22,5 en un tubo Falcon.
2. Depositar 0,5 mL de semen en la parte superior de
la gradiente y tapar el tubo.
3. Centrifugar a 2.000 RPM por 30 minutos.
4. Remover el líquido y dejar el pellet formado.
5. Agregar TL stock (30 μl aprox.) y mezclarlo con el
pellet lentamente hasta uniformizar.
6. Determinar la concentración final y su viabilidad.
Recomendaciones
1. El protocolo recomienda primero el uso de la gra-
diente de 90/45, pero el mejor resultado lo obtuvi-
mos con la gradiente 45/22,5.
2. También se observo que el protocolo emplea 700
RPM, sin embargo se trabajó a mayor velocidad y
se observó una mejor formación del pellet.
3. Todas las soluciones que se usan deberán estar
previamente temperadas.
4. Realizar siempre una evaluación de motilidad.
5. Aunque el protocolo menciona 32 horas de incuba-
ción con los espermatozoides, se sugiere que este
periodo se acortado por menos de 24 horas para
evitar la polispermia. Sin embargo, cabe mencionar
que algunos protocolos mencionan 6 horas de incu-
bación con los espermatozoides. Lamentablemente
no se ha podido probar este periodo de tiempo ya
que la culminación de esta parte del procedimiento
cae a altas horas de la noche, cuando las puertas
de la institución se encuentran cerradas.
6. También seria recomendable realizar la fertilización
dentro de la cámara de flujo laminar, por lo cual se
sugiere que se adquiera un estereoscopio exclusi-
vamente para la cámara de flujo laminar.
6. Cultivo de Embriones
Materiales y medios
- Discos pequeños
- Medio de cultivo
- Medio de lavado
Procedimientos
1. Preparar una placa de 90 mm con gotas de medio
de lavado y de medio de cultivo. El número de gotas
dependerá de la cantidad de zigotos que se tenga.
Los zigotos deben pasar por tres lavadas.
2. Luego de pasado las horas de fecundación (en este
caso aproximadamente 22 horas), transferir los zi-
gotos hacia el medio de lavado y denudarlos con
ayuda de un vortex (buen resultado) o con pipeta
de vidrio fina (buen resultado), para este caso se
uso el último por estar mas adaptada a su uso.
3. Lavar los zigotos denudados en las gotas del medio
de lavado. También se realiza otro lavado con el me-
dio de cultivo. De forma mencionada líneas arriba.
4. Transferir los zigotos al medio de cultivo definitivo y
mandarlos a la incubadora por espacio de 48 horas.
Recomendaciones
1. Luego de fertilizados remover las células del cúmulos,
así como las células del cúmulos se encargan de nutrir
al ovocito también pueden suprimir el desarrollo de los
zigotos.
2. Las gotas son generalmente de 40 μl. En cada gota se
colocan entre 10 a 15 ovocitos con 10 μl aprox. de medio.
3. La trasferencia hacia las gotas de cultivo definitivas
debería realizarse en la cámara de flujo laminar. La-
mentablemente no se cuenta con un estereoscopio
dentro de ella. Y se está transfiriendo en un ambien-
te no estéril. El cultivo corre riesgo de contamina-
ción. Afortunadamente, a simple vista, no se tuvo
problemas de contaminación.
4. El medio de cultivo que menciona el protocolo es
KSOM-AA. Pero se tuvo que reemplazar por el culti-
vo SOF, ya que no se disponía de EDTA. Sin embar-
go, los resultados obtenidos son aceptables.
5. El cambio de medio de los zigotos debe realizarse al
menos una vez. Algunas literaturas mencionan cada
48 horas. De no haber cambio de cultivo el número
de blastocistos disminuyen (puede también deberse
a otros factores).
6. Se sugiere cambiar constantemente los tips para la 33
micropipetas o en el caso de usas una pipeta de vidrio
fina lavarlo constantemente en el medio disponible.
7. Trabajos Realizados
Colección de Ovarios y Aspiración Folicular
La colección de Ovarios se realizὁ de 2 a 3 veces por se-
mana y se obtuvo de 10 a 20 ovarios por vez. Se observó
el beneficio de vacas (y muchas veces preñadas) y en
menor grado vaquillas y se colectὁ de ambas. Se descar-
taron aquellos ovarios que presentaron folículos muy pe-
queños o muy rojos (presencia de sangre) o no presentan
folículos o los folículos son más grandes que 7 mm.
Maduración de Ovocitos
Se realizaron tres trabajos exclusivamente de madura-
ción, es decir, se maduró entre 22 a 32 horas y se observó
Maduración de ovocitos (expansión de células de cúmulos).
 el estadio en el que se encontraban los ovocitos (previa
remoción de las células del cúmulus). Aquellos que pre-
sentaban expansión de las células de cúmulos y presen-
cia de cuerpo polar eran clasificados como MII y aquellos
que no, se asumió que no habían iniciado la meiosis (lo
cual no necesariamente es cierta ya que podrían haber
desarrollado hasta MI, pero esto solo es visible con el uso
de tinción). Se intentó usar el protocolo de Japón pero re-
sulto difícil por no contarse con la mayoría de los materia-
les requeridos.. Los resultados se muestran en la tabla 1.
y el tiempo de 30 minutos, bajo esas condiciones se
observa buena formación del Pellet.
3. No se realizó conteo espermático, sólo se evaluó
motilidad. Se está empleando 3 μl por cada gota de
50 μl de medio de fertilización.
4. Para diluir el pellet formado se empleo 30 mL de
TL-stock o medio de fecundación. No se observó
ningún efecto en la fecundación.
Fertilizacion In Vitro y cultivo de embriones

34 Tabla N° 1. Maduración In Vitro de Ovocitos (%) 1. Tanto los espermatozoides como los ovocitos permane-
cen en la gota de fecundación por un promedio de 22
Tiempo Hormona N° de Ovocitos Inmaduros MII Degenera- horas. No se evaluó a menores tiempos de fecundación.
(h) Examinados dos 2. Antes de ingresar los ovocitos a la gota de fecunda-
22 FSH-LH 30 13 10 (33%) 7 (23) ción, deben ser clasificados según el grado de ex-
pansión de las células del cúmulus, para tener una
idea general de que ovocitos se deben descartar a
32 FSH-LH 25 11 4 (16%) 10 (40) la hora de iniciar la maduración.
Estradiol 3. Se evitó en lo posible manipular los embriones durante
24 FSH-LH 36 10 18 (50%) 8 (22) el cultivo por lo tanto los datos que se tomaron fueron
(2x) a las 48 horas de cultivo y al termino del mismo.

1. El periodo de tiempo tuvo que ser elegido para coincidir Los resultados más representativos que se obtuvieron
con el tiempo en que los ambientes estaban disponibles. figuran en la Tabla 2.
2. Se esperaba obtener mejores resultados con
el uso de estradiol y a tiempo más prolonga- Tabla N° 2. Fertilización In Vitro de embriones (%)
do. Pero sucedió lo contrario. En realidad no
se sabe la concentración del stock del estra- División a 7 días (A) Degenera-
diol (solo se contaba con stock ya prepara- Corrida Hormona N° Ovocitos División dos o SD
dos y sin fecha de elaboración) y se empleó Examinados a 48 hr 2 -8 cell Morula Blastocitos al final del
asumiendo que eran las concentraciones cultivo (B)
que figuraban en el protocolo. Probablemen- 1 FSH-LH 54 24 (44) 12 0 6 (11%) 36 (67)
te el producto ya este caducado, el dilutor
no es el adecuado, las concentraciones son 2 FSH-LH 42 24 (57) 6 4 (10) 6 (14%) 26 (62)
inadecuadas y lejos de ejercer algún benefi-
cio lo desmejora. Se sugiere no descartar la 3 FSH-LH 55 20 (36) 8 6 (11) 4 (7%) 37 (67)
“idea” del estradiol, la adquisicion de un lote (2x)
nuevo seria lo indicado. 4 FSH-LH 48 22 (46) 13 0 6 (13% 29 (60)
3. La concentración de FSH-LH tuvo que ser el (2x)
doble del recomendado por el protocolo. El 5* FSH-LH 47 40 (85) 0 7 (15) 19 (40%) 21 (45)
protocolo sólo menciona el nombre genéri- (2x)
co mas no la compañía. Esto podría explicar 6 FSH-LH 40 26 (65) 9 8 (20) 9 (23%) 14 (35)
por que la diferencia del efecto en las con- (2x)
centraciones empleadas. 7 FSH-LH 60 36 (60) 7 7 (12) 12 (20%) 34 (57)
4. La evaluación que se realizó para clasificar- (2x)
los como inmaduros, maduros o degenera- FSH-LH: se adicionὁ una dosis mas de hormonas que la del protocolo
dos es subjetiva, para poder realizar una me- FSH-LH 2X: se adicionὁ el doble de dosis de hormonas.
jor clasificación se debería emplear la tinción SD: Sin división
con aceto-orceina (no se cuenta con esos Los números entre paréntesis representan los porcentajes en relación al número
materiales). de ovocitos examinados.
5. Se observó que se tiene un mayor porcentaje de N° Ovocitos examinados = A+B
MII al emplear el doble de concentración de hormo-
nas sugeridas. Aunque los porcentajes de Maduracion aun 1. Debido a que el porcentaje de blastocistos obtenidos
son bajas. fue bajo al inicio, se optó por clasificar los ovocitos al
inicio de la maduración, se está descartando aquellos
Capacitación espermática ovocitos que no reúnan las condiciones de capas de
células del cúmulus, coloración, tamaño y denudados.
1. Se probaron dos gradientes de Percoll: 22,5/45 y 2. El porcentaje de blastocistos incrementó aunque los
45/90. El primero fue el que funcionó. En el segundo resultados siguen saliendo variables.
caso los espermatozoides quedaron suspendidos en- 3. Aquellos ovocitos con muestras clara de degene-
tre las fase de 45 y 90 y no se observo ningún pellet. ración tales como coloración, forma y/o sin división
2. La centrifuga: la velocidad usada es de 2.000 RPM (SD), fueron agrupados en una sola categoría.
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