MICROBIOLOGIA E INMUNOLOGIA

INFORME FINAL DE GUIA DE PRACTICAS

DOCENTE:

KARIN VERA LOPEZ

INTEGRANTES:

✓ HUANCA FLORES, DIANA MERELY

✓ QUINAYA BORJAS HYRUM ARTURO

AREQUIPA - 2020
 PRACTICA N.º 8

VIROLOGÍA

✓ Los virus son los agentes

infecciosos más pequeños (20 a
300 nm de diámetro), tienen un
tamaño 100 a 1000 veces menor
que el de las células infectadas y
no pueden ser observados en el
microscopio óptico.

✓ Los virus contienen ADN

o ARN como material genético,
nunca los dos a la vez.

✓ Están constituidos principalmente por una molécula de ácido nucleico rodeada de una
capa de proteínas llamada cápside.
✓ Al conjunto de ácido nucleico y la cápside se denomina nucleocápside o Core.

✓ Además, en muchos virus, aparece una tercera estructura, más externa, que envuelve
a la nucleocápside y se llama envoltura o peplos; en algunos virus pueden observarse
otros elementos. A todo el conjunto de estructuras virales se le conoce como virión.

✓ La cápside tiene como funciones proteger el genoma viral, determinar la antigenicidad

de los virus y, en los virus sin envoltura, iniciar la infección de una célula susceptible.
Está constituida por un elevado número de subunidades llamadas capsómeros.

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La forma de replicación de un virus varía de un tipo a otro, pero se pueden distinguir una
serie de etapas:

1. Adsorción: Las estructuras de la superficie del virión se unen a receptores en la

membrana citoplasmática de la célula a ser infectada.

2. Penetración: Puede ser penetración directa cuando únicamente ingresa el genoma a

través de la membrana, esto se da en algunos virus sin envoltura; endocitosis si se
produce una invaginación de la membrana citoplasmática en el lugar donde se adhirió el
virus y posteriormente una vacuola que lleva dentro el virión, es la que emplean con
mayor frecuencia los virus sin envoltura; o fusión en la que se unen la le envoltura viral

3. Descapsidación: El virus se desprende de la cápside por medio de enzimas celulares

que la degradan y liberan el ácido nucleico que empieza a transcribirse.

4. Biosíntesis de los ácidos nucleicos y de las proteínas virales: El lugar donde se realice la
síntesis de los componentes virales varía según sea un virus con ADN o con ARN; la
mayoría de virus ADN se multiplican en el núcleo de la célula y los ARN en el citoplasma.
Se distinguen dos etapas, la temprana en la que se sintetiza el ácido nucleico y la tardía
en la que se sintetizan las proteínas de la cápside.

5. Ensamblaje y Liberación: El ensamblaje es el proceso por el que los diversos

componentes virales se unen de manera espontánea, ordenada y escalonada para
formar la nucleocápside. Tiene lugar en el citoplasma (virus ARN) o en el núcleo (virus
ADN). La liberación o salida del virus se da por mecanismos diferentes según se trate
de virus con envoltura o sin ella: los virus sin envoltura son liberados mediante la lisis de
la célula infectada, mientras que los virus con envoltura se liberan mediante gemación o
exocitosis por una zona de la membrana citoplasmática o nuclear.
6. Núcleo: Frente a la infección viral el hospedador opone un sistema defensivo constituido
por mecanismos de defensa inespecíficos y una respuesta inmunitaria de tipo humoral y
de tipo celular que a su vez puede ser específica e inespecífica. Junto a estos
mecanismos, tienen gran importancia las citoquinas, entre las que destacan los
interferones. El sistema interferón (IFN) consiste en una familia de glucoproteínas
producidas por diferentes células ante estímulos muy diversos tales como bacterias,

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 virus y protozoos; tienen un efecto antiviral, antiproliferativo e inmunorregulador por
inhibición de la transcripción y traducción del ácido nucleico viral.

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

En el laboratorio, los virus pueden diagnosticarse empleando métodos directos y métodos

indirectos.

LOS MÉTODOS DIRECTOS

Se emplean muestras (células o líquidos provenientes del enfermo) que deberán obtenerse
de preferencia en los primeros días de la enfermedad. En este grupo se encuentran:

✓ Microscopía electrónica: tiene la desventaja que no permite diferenciar entre dos virus
de una misma familia y requiere un número mínimo de viriones para ser útil.
✓ Tinciones histológicas: se hacen con la técnica H-E y buscan la presencia de cuerpos
de inclusión y otros cambios morfológicos en las células denominados efecto citopático,
estos pueden ser lisis o necrosis celulares, formación de inclusiones, formación de
células gigantes y vacuolización citoplasmática.
✓ Detección de antígenos virales: se realiza mediante pruebas inmunológicas como
inmunofluorescencia, ELISA, o isótopos radioactivos.
✓ Inoculación de la muestra en animales de experimentación: permite conocer datos de
la clínica de la infección y la obtención de viriones para su estudio.
✓ Inoculación de la muestra en huevos embrionados: Permite la obtención de viriones.
✓ Inoculación de la muestra en cultivos celulares: Se emplea actualmente para el
aislamiento e identificación de un virus a partir de una muestra. Existen varios tipos de
cultivos celulares:
✓ Cultivos Primarios o líneas celulares normales: Se emplean cultivos de células
provenientes de animales como las células de riñón del mono verde africano o las
células de ovario del hámster chino.
✓ Cultivos de Células Diploides o líneas celulares embrionarias: Son células normales que
permiten un número limitado de pases como los fibroblastos o célula de riñón de fetos
de abortos espontáneos.

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✓ Cultivos de Líneas Celulares Continuas: Son inmortales ya que permiten un número
ilimitado de pases o subcultivos, las células representativas son las células HELA.

LOS MÉTODOS INDIRECTOS O SEROLÓGICOS

Consisten en demostrar la presencia de anticuerpos específicos en el suero del paciente.

Para ello se deben tomar dos muestras de sangre: una en el memento que aparecen los
primeros síntomas y otra 10 a 15 días después con el fin de demostrar el aumento en el
número de anticuerpos o la aparición de los mismos. Entre estos métodos se incluye:

• Fijación del complemento

• ELISA

• Western - Blot

1. ¿Cuál es la ventaja del uso del inmunoensayo ELISA?

✓ Alta flexibilidad, ya que la detección se puede hacer tanto por procedimiento directo
como indirecto.

✓ Alta sensibilidad y especificidad, debido al uso de dos anticuerpos frente al mismo

antígeno.
✓ El protocolo es rápido
✓ No hay posibilidad de reactividad cruzado con el anticuerpo secundario
✓ Menor probabilidad de error debido al uso de un menor número y reactivos y pasos en
el procedimiento
✓ Desventaja
✓ Puede dar mayor ruido de fondo ya que en otras proteínas la muestra de antígeno puede
adherirse a la placa

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✓ No hay amplificación de la señal ya que no se emplean anticuerpos y lo que reduce la
sensibilidad del ensayo

PRACTICA N.º 9

PARASITOLOGÍA

Son responsables de enfermedades (patógenos) y otros son comensales del hombre;

pudiendo medir desde algunas micras hasta varios metros.
El más sencillo (parásito) depende fisiológicamente del más complejo (hospedador).

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 HELMINTOS

✓ Pueden producir manifestaciones a

nivel del tracto digestivo o colonizar la
sangre u otros tejidos.
✓ A nivel del tracto digestivo producen
diversos cuadros patológicos que tienen en
común la presencia de diarrea; en el caso
de Enterobiasis, el signo característico es el
prurito anal debido a la presencia de los
huevos de este parásito en esta zona.
✓ En sangre y tejidos son capaces de
producir enfermedades caracterizadas
principalmente por la presencia de quistes
de variada localización.

PROTOZOARIOS

✓ Son microorganismos unicelulares.

Presentan dos estadios de vida: quiste y
trofozoíto; donde el quiste es un estadio de
resistencia y propagación, mientras que el
trofozoíto mantiene la actividad metabólica.

✓ Pueden producir manifestaciones a

nivel del tracto digestivo o colonizar la
sangre u otros tejidos.

✓ A nivel del tracto digestivo producen diversos cuadros patológicos que tienen en común
la presencia de diarrea. En sangre y tejidos son capaces de producir con características
particulares.
✓ Pueden ser transmitidos por ingestión de alimentos contaminados, por vectores
(artrópodos), transmisión congénita o contaminación fecal.

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 ENTAMOEBA HYSTOLÍTICA

✓ Produce amebiasis intestinal (intestino grueso), abscesos en el hígado y otros órganos.

Presenta estadío de quiste y trofozoíto.

ENTAMOEBA GINGIVALIS

✓ Comensal de la cavidad bucal se localiza comúnmente en el borde de la encía y en bolsa

periodontal. Presenta solo estadío de trofozoíto, es de 8 a 11 micras tiene un cariosoma
central o ligeramente excéntrico

TRICHOMONA TENAX

✓ Comensal de la boca de 6.5 micras de largo, flagelado tiene de 4 flagelos anteriores y

uno al borde de la membrana ondulante

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 TRICHOMONA VAGINALIS

✓ Presenta las mismas estructuras que T. tenax, mide de 7 a 23 micras y tiene de 3 a 5

flagelos anteriores se localiza en la vagina y uretra. Es considerada patógena. Solo se
ha observado en estadío de trofozoíto

PRACTICA N.º 10

MICOLOGÍA

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✓ La mayoría de los hongos son bifásicos, es decir existen tanto como levaduras e hifas,
dependiendo de los nutrientes y el medio ambiente que se les proporciona. A las
estructuras formadas por un conjunto de hifas se le denomina micelio o talo.

✓ Los hongos se clasifican fundamentalmente sobre bases morfológicas.

✓ La mayoría de los hongos son bifásicos, es decir existen tanto como levaduras e hifas,
dependiendo de los nutrientes y el medio ambiente que se les proporciona.

✓ A las estructuras formadas por un conjunto de hifas se le denomina micelio o talo.

TIPOS DE ESPORAS

CONIDIA: Son esporas producidas por estructuras llamadas conidióforos. Se observan

fácilmente en los hongos saprofíticos y proporciona el color

BLASTOSPORAS: Son simples esporas que se forman por hinchamiento de la célula. Se

observan en cultivo

ARTROSPORAS: Se forman por engrosamiento de cualquier región de la pared micelial

que luego se fragmenta en esporas individuales.
característico de muchos, como el Cándida

ASCOSPORAS: Son esporas sexuadas que se forman dentro de una envoltura y se

observan frecuentemente en las levaduras.

CHLAMYDOSPORAS: Se forman por concentración del protoplasma en el micelio

originando esporas redondeadas con pared gruesa cuyo diámetro es mayor que la hifa
original.

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DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

1. Toma de Muestra

Biopsia de las lesiones.

2. Microscopía

✓ Se observan células de levadura con

pared gruesa que en forma característica
tiene múltiples gemaciones de base
estrecha, lo que lleva a su caracterización
como “rueda de timón”.

3. Cultivo

✓ A temperatura ambiente en agar Sabouraud

dan lugar a colonias con pequeños conidios.

✓ En cultivo enriquecidos como el Agar sangre y

al Agar Infusión Cerebro y Corazón.

✓ Después de 14 días a un mes de incubación se

observa un desarrollo de tipo plegado (de aspecto
cerebriforme) de superficie rugosa, aspecto
mucoide y color blanco amarillento.

4. Pruebas de Confirmación

Se emplean pruebas serológicas de titulación de anticuerpos empleando la

paracoccidioidina como antígeno. Un título significativo de anticuerpos denota la afección
de los tejidos con la enfermedad y los títulos de fijación del complemento de 1:2048 o más
ocurren en la enfermedad activa.

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 PRACTICA N.º 11

ECOSISTEMAS ORALES

✓ OBJETIVO:

1. Aislar e identificar los microorganismos más frecuentes del microbiota oral,

presentes en muestras de saliva, dorso de lengua y mucosa oral.

2. Describir los fenómenos de adquisición y adherencia bacteriana.

✓ INTRODUCCION:

La cavidad oral está formada por un conjunto de tejidos, con numerosos

microorganismos asociados a ellos, constituyendo un ecosistema. Estos distintos
microorganismos pueden estar distribuidos en diversas zonas de la cavidad oral
y en distintas proporciones constituyendo ecosistemas primarios o nichos
ecológicos. Los ecosistemas primarios poseen características diferentes que
permitirán el desarrollo de unas y otras especies microbianas

✓ MATERIALES

1 placa de agar Manitol salado

1 placa de agar Tripticasa de Soya

1 placa de Agar Saboraud

1 tubo con caldo Tioglicolato

1 frasco de muestra estéril

Hisopos estériles

Mecchero.

✓ PROCEDIMIENTO:

1. Rotular y dividir las placas.

2.alumno voluntario dejará muestra de saliva en el frasco estéril.

3. Recoger el inóculo de saliva del frasco con el asa de siembra y hacer estrías
en el área rotulada, del medio sólido.

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 4. Recoger un segundo inóculo con el asa de siembra y realizar siembra por
suspensión en el caldo de cultivo.

5. Recoger un hisopo estéril y humedecerlo

en suero fisiológico, recoger una muestra de
la superficie de la lengua de un estudiante y
luego dejar en el inóculo en el ares
correspondiente del medio sólido con
movimientos de rotación en un solo lugar y
hacer el estriado con el asa de siembra
estéril y fría.

6. Repetir el procedimiento con el hisopo y

recoger de la muestra de la mucosa del
carrillo.

7. Realizar este procedimiento para todos

los medios sólidos.

PRACTICA N.º 12

ESTUDIO MICROBIOLOGICO DEL BIOFILM DENTAL

✓ MATERIALES:

1 placa de Agar Mitis Salivarius

1 placa de agar Mitis Salivarius con Bacitracina

1 placa de Agar Rogosa

1 vortex

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 4 tubos de Ensayo con 0.9 ml de agua destilada
estéril.

1 micropipeta calibrada en 100 microlitros (0.1ml)

1 envase plástico para toma de muestra estéril

Hisopos estériles.

Mechero.

✓ PROCEDIMIENTO:

1. Recoger una muestra de saliva no estimulada en el envase de plástico estéril.

2. Hacer una dilución seriada de la saliva (1/10, 1/100, 1/1000 y 1/10,000).

3. Recoger un inóculo de 0.1ml con la micropipeta y dejar en el tubo 1 y agitar en

el vortex 1 minuto. Repetir este procedimiento recogiendo el inoculo del tubo 1 al

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tubo 2. Continuar del mismo modo hasta el tubo cuatro para lograr la dilución de
1/10,000.

4. Recoger los inóculos de 0.1ml del tubo 4 para sembrar en cada placa de medio
de cultivo y sembrar por diseminación con el hisopo estéril. No olvidarse rotular
con el apellido del donante de muestra de saliva

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✓ FLORA MICROBIANA ORAL

La microflora oral es un complejo ecosistema que contiene una amplia variedad

de especies microbianas. (Tabla 1) La boca es colonizada por varios
microorganismos antes de la erupción de los dientes, sin embargo, los recién
nacidos son esencialmente libres de microorganismos. Con la erupción de los
dientes, la placa dental se desarrolla en las superficies dentales expuestas las
cuales están cubiertas por una película amorfa, casi invisible compuesta
principalmente por glicoproteínas salivales. De no tomarse medidas de higiene
oral, las superficies de los dientes acumulan grandes masas microbianas,
mientras que la descamación de células epiteliales no permite la acumulación en
las superficies de la mucosa oral. El número de bacterias en placa dental puede
alcanzar 108 por mg (peso húmedo).

PRACTICA N.º 13

DIAGNOSTICO MICROBIOLÓGICO DE CARIES

✓ INTRODUCCIÓN

La caries dental es una enfermedad crónica, infecciosa, multifactorial y

transmisible. Es muy prevalente y es la causa principal de pérdida de las piezas
dentarias. Se caracteriza por la destrucción localizada de los tejidos duros del
diente. Los factores principales que influyen en la caries dental son: presencia de
microorganismos cariogénicos en saliva y placa dental, diente susceptible,
sustrato adecuado como azucares y almidón. Los microorganismos que con
mayor frecuencia se relacionan con el inicio y desarrollo de la caries son:
estreptococos del grupo mutans, Lactobacillus sp., y Actinomyces sp., estos
pueden ser aislados a partir de placa dental y en saliva. Estos se caracterizan
porque son capaces de trasportar hidratos de carbono en competencia con otros
microorganismos, que pudiesen estar presentes en la placa; la capacidad de
fermentación rápida de este sustrato conformado por azucares y almidón y por
su capacidad acidogenica productos de ácidos- y acidúrica – capaces de realizar
diversas funciones en condiciones de extrema acidez. El marcado descenso de
pH, contribuirá con la desmineralización del diente, favoreciendo la aparición de
lesiones cariosas en los tejidos duros: esmalte, dentina y cemento. La prueba
microbiológica es uno de los predictores de riesgo que se pueden emplear y debe
ser asociada con otros predictores como experiencias pasada de caries, hábitos

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 dietéticos, control de placa bacteriana por mencionar algunos. Por otro lado, la
importancia de esta prueba radica en los fines de investigación en la que esta se
puede aplicar.

✓ STREPTOCOCCUS GRUPO MUTANS

Se caracterizan por ser cocos agrupados en cadenas grampositivos anaerobios

facultativos. pueden síntetizar polisacáridos intracelulares y metabolizarlos, estos
son factores de virulencia, ya que esto permite que mantengan su energía y
producir ácido durante largos periodos de tiempo

✓ LACTOBACILLUS SPP

Son bacilos grampositivos, se agrupan en cadenas o empalizadas y

habitualmente inmóviles; destacan por ser productores de ácido láctico, es decir
son acidógenas, acidúricas y acidófilas.

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✓ ACTINOMYCES SPP.

Son bacilos grampositivos no esporulados so pleomórficos, anaerobios

facultativos, y tienen pili importante factor de adherencia. Tienen actividad
proteolítica moderada desarrollan bien agar Sangre Agar Infusión cerebro
corazón y caldo tioglicolato, tras 7 a 14 días de incubación

✓ MICROSCOPÍA:

Proceder a observar al microscopio con el lente de inmersión.

En la actualidad existen pruebas microbiológicas sencillas que pueden ser

llevadas a cabo en un consultorio dental para determinar el riesgo de tener caries,
el cual se puede medir mediante un recuento de estreptococos del grupo mutans
y lactobacillus en saliva. Los métodos más usados son Dentocult LB El paciente
masticará un pedazo de parafina durante 1 minuto. Se recolecta la saliva y una
copa y se procesa i8ncubando a 37°C durante 4 días. Después se observará el
control.

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✓ PRUEBA DE SNYDER Y DE ALBAN

Estas pruebas están basadas en determinar la capacidad de las bacterias para

producir ácido cuando una muestra de saliva es inoculada en un medio con agar
rico en glucosa y que contiene indicador de pH que modifica el color verde original
del medio a amarillo

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 PRACTICA N. º14

DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE ENFERMEDAD PERIODONTAL

✓ OBJETIVO:

Aislar bacterias del surco gingival en medios selectivos para patógenos

periodontales. En su cuaderno de práctica investigar para cada especie
bacteriana de los patógenos periodontales sus características morfológicas,
metabólicas, enzimas y toxinas, así como las características microscópicas y de
cultivo

✓ PATÓGENOS PERIODONTALES

➢ PORPHYROMONA GINGIVALIS:
Porphyromonas gingivalis es un cocobacilo Gram-negativo, no móvil,
anaerobio estricto, asacarolítico, perteneciente al filo Bacteroidetes. Es una
bacteria periodonto patógena altamente prevalente, tanto en periodontitis
crónica como agresiva, y rara vez se encuentra presente en un periodonto
sano

➢ PREVOTELLA INTERMEDIA
Prevotella intermedia es una bacteria gramnegativa patógena anaerobia
estricta que participa en infecciones periodontales, incluidas gingivitis,
periodontitis y la gingivitis ulcerosa aguda. Suele aislarse de los flemones
dentales, donde predominan los anaerobios obligados

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➢ TANERELLA FORSITHYA
Tannerella forsythia es una especie de bacteria gramnegativa y anaeróbica
de la familia Porphyromonadaceae. Está relacionada con enfermedades
periodontales y es un miembro del complejo rojo de patógenos
periodontales.

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➢ AGREGATIBACRE ACTINOMYCETENCOMITANS

La bacteria actinomycetem comitans fue descrita por Klinger como las

bacterias aisladas cocobacilares junto con Actinomyces en lesiones
actinomicóticas del hombre. Fue reclasificado como Actinobacillus
actinomycetemcomitans por Topley y Wilson

➢ FUSOBACTERIUM NUCLEATUM

Fusobacterium nucleatum es una bacteria indígena de la cavidad oral de los

humanos, que desempeña un papel en la enfermedad periodontal. Este
organismo es comúnmente recuperado de diferentes infecciones
monomicrobianas y mixtas en humanos y animales

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➢ TREPONEMA DENTÍCOLA

Treponema denticola es una bacteria espiroqueta gramnegativa, obligatoria

anaerobia, móvil y altamente proteolítica. Permanece en una comunidad
microbiana compleja y diversa dentro de la cavidad oral y es altamente
especializada para sobrevivir en este ambiente

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