Cálculos

Diplomado Sena – Ver. 1 – Agosto 2017 – Jesus Acedo

 En esta sección se discutirá:
• El análisis cualitativo
• El análisis cuantitativo
• Métodos de calibración (estándar interno, externo) .
• Calibraciones simples y de Múltiples puntos
• La diferencia entre precisión y exactitud.

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 Análisis cualitativo.

• Determina que está presente en la muestra.

• Compara los tiempos de retención de un compuesto
desconocido con el de un estándar en las mismas
condiciones, debe ser la misma fase estacionaria,
longitud de la columna, velocidad lineal, temperatura de
la columna, etc.

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 Análisis cuantitativo
(Cuantificación )

Análisis cuantitativo:
• Determina la cantidad de un componente en una
muestra.
• Midiendo la altura o el área del pico ( se usa
preferiblemente el área del pico)
• Compara la respuesta de una muestra desconocida con la
respuesta en la concentración de una muestra conocida

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 Cuantificación - Cálculos
Se pueden elegir cualquiera de los procedimientos
para cuantificar:
• Área % o altura %.
• Estándar externo (ESTD).
• Estándar interno (ISTD).

La calibración es el proceso que relaciona el área o la

altura del pico de un componente con la concentración

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 % Área y % altura:
procedimiento sin calibrar
Cuantas de • Análisis de una muestra que
área Área % contiene cantidades desconocidas
C12 280 26.2 de C-12, C14, C-16 y C-18.
C14 250 23.4
• Esteres metílicos del ácido graso
(“Fame”) por el método de % de
C16 220 20.6 área
C18 320 29.9
280
Area % de C12 = X 100 = 26.2
1070 100 280 + 250 + 220 + 320

AREA (pk)
Nota: el % de área y del pico conducen a menudo
a resultados incorrectos. Esta técnica asume que  AREA (pk)
todos los máximos dan respuesta equivalente y
que todos los picos detectables representan el
100% de la muestra, Estas 2 suposiciones
raramente son ciertas.
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 Cuantificación por
estándar externo
Principio:
• Se utilizan compuestos de referencia, preparando soluciones estándar con
concentraciones conocidas.
• La respuesta se determina por área o altura
• La respuesta se grafica contra las cantidades conocidas

Respuesta respuesta

Respuesta x

cantidad
Cantidad x
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 Cálculos por el método
del estándar externo
Cuentas de
área Área % FR
C12 250 20.2 25/250 = 0.100
C14 290 23.4 25/290 = 0.086
C16 330 20.6 25/330 = 0.076
C18 370 29.9 25/370 = 0.068
1240 100.0

Calibración de una muestra estándar externo que contiene 25 ng de cada uno C-12, C-14, C-16, C-18
(FAME )
El factor de respuesta es usado para determinar la cantidad de cada componente en la muestra que
contiene cantidades desconocidas de C-12, C-14, C-16, y C-18
FACTOR DE RESPUESTA = CANTIDAD / AREA
CANTIDAD DESCONOCIDA = AREA (pk) X RF(pk)
El factor de respuesta considera que las cantidades iguales no dan respuesta
igual al detector.
NOTA: EL ESTÁNDAR EXTERNO REQUIERE VOLUMENES DE INYECCIÓN REPRODUCIBLES

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 Calibración con un
punto y múltiples puntos
C

C A
C A
C A B
A B
B
B

1 0.5 1.5 1.5 1.0 2.0 2.0 1.5 3.0 3.0 2.0 4.0
LEVEL 1 LEVEL 2 LEVEL 3 LEVEL 4

SINGLE POINT FOR

COMPONENT A
AREA/HEIG

Level 4
HT

Level 3

AREA/HEIG
Level 2

HT
Level 1
Area
Response of
Unknown
CONCENTRATION CONCENTRATION
Calculated
MULTI-LEVEL FOR
Amount
COMPONENT C

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 Cuantificación por
estándar interno
Principio:
Un compuesto característico que no esta presente en la muestra se agrega en
concentración conocida a las soluciones, estándar y a la muestra.
- Se calcula el cociente de la respuesta del ISTD y del analito.
- Se grafica el cociente de la respuesta contra el cociente de la
cantidad.
ISTD Relación de la
R 5
respuesta
e
s
p 2 3
o 4
n 1
6
s
e
time
Cantidad del Relación de
compuesto 5 ?
cantidad
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 Cálculos con el estándar interno
Calibración de un solo punto de un muestra
Estándar que contiene 25 ng de cada compuesto,
Calibración Calibración por un solo punto de una muestra estándar
que contiene
Cuentas de
área FR 25 ng de C-12, C-14, C 15, C-16, C-18 donde el
C – 15 actúa como estándar interno
C12 250 0.100
Muestra
C14 290 0.086 desconocida
C15 310 0.081
FR X Área ISTD CONC ISTD
C16 330 0.076 Cuentas de área (ESTD) AREA ISTD X FR ISTD Resultado

C18 370 0.068 C12 280 28.0 ng X 1.10 = 30.8 ng

C14 250 21.5 ng X 1.10 = 23.7 ng
C15 280 22.7 ng X 1.10 = 25.0
C16 220 16.7 ng X 1.10 = 18.4
C18 320 21.8 ng X 1.10 = 24.0 ng
ISTD Factor de Corrección : 25 / 22.7 = 1.10

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 Cálculos con el estándar interno
Relación de Respuesta = Respuesta x
Respuesta ISTD
Cantidad de x = ( Relación de la respuesta * FR x) *(cantidad ISTD)
*M*D

RF x = factor de respuesta del componente x

M = multiplicador
D = factor de dilución

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 Criterios para elegir el
estándar interno.
• No debe estar presente en la muestra.
• Fácilmente disponible
• Químicamente similar a la muestra.
• Encontrase en el rango de concentración de la muestra
• No reaccionar con la muestra.
• No eluir cerca de los compuestos de interés
• Picos limpios y aislados
• Cromatógraficamente estable.

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 Precisión y exactitud

• Precisión
medida de la reproducibilidad, la
cual depende de la habilidad para
xx definir y controlar las condiciones
xx
del instrumento de análisis
• Exactitud
dependiente del sistema de
calibración con estándares
confiables
Buena precisión y mala exactitud.

Buena exactitud, pero mala precisión .

x Buena precisión y exactitud

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