Guía Práctica de Laboratorio #2 - #3 - #4

Universidad de Guayaquil
Facultad de Ciencias Químicas

Carrera: Química y Farmacia
Guía de Prácticas de Laboratorio
Lab2 Análisis elemental de orina: Examen microscópico del sedimento
2.1. Objetivos de la práctica de Laboratorio
 Describir los métodos recomendados para estandarizar la preparación y el volumen de la muestra, la

centrifugación, preparación y el examen del sedimento y el informe de los resultados.
 Diferenciar entre constituyentes normales y anormales del sedimento.
2.2. Instrucciones o consideraciones previas
El análisis microscópico está sujeto a distintas variaciones del procedimiento (preparación, volumen
equipos para la visualización e informe de resultados).
El recuento de Addis permite estandarizar la cuantificación de los elementos formes de la orina.
En la actualidad están disponibles varios sistemas comerciales estandarizados (KOVA, Ursystem,

Count 10, etc).
Proporciona muchos datos valiosos para la detección, diagnóstico diferencial y valoración de las
alteraciones del tracto urinario y una serie de enfermedades sistémicas.
Es de gran valor para establecer el diagnóstico de infección al tracto urinario (bacteriurias

asintomáticas).
La valoración repetida es útil para seguir el curso y tratamiento de la infección urinaria y de la

enfermedad renal.
Proporciona una visión única del estado del parénquima renal (cilindros).
La presencia de uratos puede llevar a sospechar la hiperuricemia de la gota.
La hematuria puede ser la única manifestación de neoplasias renales o de vejiga, glomerulonefritis

aguda, lupus entre otros.
Se deben examinar muestras frescas o conservadas en forma adecuada. Las células y los cilindros
comienzan a lisarse a las 2 horas de la recolección. La refrigeración puede aumentar la precipitación
de varios uratos y fosfatos amorfos y materiales cristalinos.
Lo ideal es examinar la orina dentro de la hora siguiente a su emisión (6-8 horas). Caso contrario
habrá que refrigerarla.
En ningún caso se debe utilizar una muestra transcurrida las 24 horas.
Debe tomarse la precaución de mezclar en forma exhaustiva la muestra antes de centrifugar.

Se centrifuga una cantidad estándar de orina, por lo general entre 10 y 15 ml, en un tubo cónico. Con
frecuencia se utiliza un volumen de 12 ml, porque en esa cantidad se sumergen con facilidad las tiras
reactivas.
Si no es posible obtener una muestra de 12 ml, como sucede en los pacientes pediátricos, el volumen
de la muestra usado deberá registrarse en el informe.
La centrifugación durante 5 minutos a una fuerza centrífuga relativa (RCF) de 400g produce una
cantidad óptima de sedimento con la menor posibilidad de dañar los elementos.
No debe hacer uso del mecanismo de frenado para disminuir el tiempo de parado de la centrífuga,
causa la ruptura del sedimento.
Después de la decantación debe quedar en el tubo una cantidad uniforme de orina y de sedimento.
El factor de concentración del sedimento se usa cuando se pretende cuantificar el número de

elementos presentes por mililitro.
El sedimento debe ser resuspendido por completo mediante agitación suave. El volumen del
sedimento recomendado es de 20 ul, cuando se usa el método convencional de portaobjetos.
El número de campos mínimo a observar es de 10, primero con objetivo de 10x para detectar cilindros
y determinar la composición general del sedimento y con luz de baja intensidad.
Cuando se encuentren elementos que requieren su identificación se cambia a un objetivo de mayor

aumento 40 x.
Los resultados se informan como un promedio de los campos examinados.
La presencia de los constituyentes se reporta en los siguiente términos: escasos, algunos, muchos,
abundantes.
La identificación puede reforzarse a través del uso de tinciones del sedimento (Sternheimer-Malbin).
El hemocitómetro se usa para cuantificar los elementos del sedimento urinario. Las células y los
cilindros se cuentan y se expresan como número de células por microlitro.
Constituyentes organizados:
– Células epiteliales: escamosas, uroteliales, caudales.

– Cilindros: hialinos, céreos, fibrosos, granulosos, de grasa, epiteliales, hemáticos, con
piocitos, bacterias.
– Hematíes (0-2 x campo).
– Leucocitos (< 5 x campo).
– Piocitos.
– Espermatozoides.
– Bacterias.
Constituyentes no organizados:
– Cristales de: ácido úrico, uratos, oxalato de calcio, cistina, leucina y tirosina.
– Cristales de: fosfato triple (amónico-magnésico), fosfatos amorfos, carbonato de calcio.
Sustancias extrañas y artefactos
En la actualidad, se dispone de dos sistemas para el análisis automático del sedimento urinario, el Sysmex,
con sus modelos UF-50, UF-100 y UF-1000i y el Iris iQ200. Los sistemas Sysmex son citómetros de flujo,
mientras que el iQ200 emplea el análisis de imagen para clasificar las partículas utilizando una cámara de
video.
Los resultados de los análisis en UCI y UCC, deben estar terminados e informarse hacia las 10 de la
mañana.
Los análisis inmediatos deben estar terminados e informarse en el transcurso de 30 min de la

obtención de la muestra.
En el análisis preoperatorio, notificar tan pronto como sea posible para que puedan ser analizados
antes de la cirugía.
Una vez en cada turno, el responsable a cargo revisará los informes de los análisis de orina para
aclaraciones.
Si ha habido error, o los resultados son dudosos, se repite la prueba en la misma muestra, si está
disponible o en caso contrario solicitar otra muestra.
1. Examen microscópico
 Leucocitos: registrar número promedio por campo.
 Eritrocitos: registrar número promedio por campo.
 Células epiteliales:
 Escasas: una en cada cinco campos.
 Ocasionales: 1 x campo.
 Pocas: 2 a 5 x campo.
 Moderadas: 5 a 10 x campo.
 Abundantes: 10 o más x campo.
 Tiras de moco: pocas, moderadas, abundantes
 Cristales: se notifica igual que las células epiteliales.
 Material amorfo: poco, moderado, abundante.
 Cilindros: identificar tipo por campo de bajo aumento. Notificar el número presente por
campo de bajo aumento.
2.3. Reactivos de Laboratorio
No aplica
2.4. Materiales de Laboratorio
Tubo de centrífuga (capacidad 15 ml).

Gradilla portatubos.
Placas portaobjetos.
Laminillas cubreobjetos (22 x 22 mm).
Papel absorbente.
2.5. Equipos de Laboratorio
Centrífuga.
Microscopio binocular.
2.6. Actividades por desarrollar/ técnica operatoria
Mezclar perfectamente la orina por inversión suave evitando la formación de espuma.
En un tubo de centrífuga se deposita aproximadamente 15 ml de orina.
Centrifugar a velocidad moderada y constante (RCF = 400 g) por 5 minutos.
Eliminar el líquido sobrenadante.
El sedimento se mezcla con la pequeña cantidad de orina (0,5-1,0 ml) que permanece en el tubo.
Con un gotero se toma una gota de sedimento homogenizado y se lleva a la parte central de una
lámina portaobjetos, se cubre con laminilla cubreobjetos y se examina al microscopio.
El análisis microscópico debe conducirse con prontitud para evitar la evaporación del líquido.
Examinar toda la zona del cubre con lentes de bajo aumento (10x), de esta forma se identifican los
cilindros (tienden a colocarse cerca de los márgenes del cubreobjetos).
Para detalles e identificación de estructuras más pequeñas, por ejemplo, pus y células sanguíneas,
utilizar lentes de alto aumento (40x).
Los resultados microscópicos se deben correlacionar con los hallazgos físicos y químicos para
asegurar la exactitud del informe.
2.7. Resultados obtenidos (Observaciones, cálculos, datos, ecuaciones, tablas, gráficos, figuras,
fotos)
Tabla 1
Tabla 2
Hematíes
Leucocitos
Células epiteliales
2.8. Conclusiones (escribir las conclusiones generales en base a los objetivos planteados en la
actividad).
2.9. Recomendaciones (escribir las recomendaciones necesarias para mejorar la práctica).
Rotular los tubos de las muestras.

Durante el procedimiento leer cuidadosamente las instrucciones
Usar el equipo de protección adecuado
2.10. Bibliografía
Strasinger, S & Di Lorenzo, M. (2010). Análisis de Orina y de los líquidos corporales. 5ta. Edición.
Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires. ISBN: 978-950-06-1938-7.
2.11. Anexos
Hematíes Leucocitos y piocitos Células epiteliales Cilindros hialinos

Oxalato de calcio Ácido úrico Fosfato triple Fosfato de amonio y
magnesio
Hongos y levaduras Espermatozoides Uratos amorfos Gránulos de almidón

Lab3 Determinación de Urea
Describir el principio y las precauciones del procedimiento analítico, que se utiliza para la
determinación cuantitativa de urea en suero por el método enzimático específico.
La Urea constituye la fracción de nitrógeno no proteico más importante en la mayoría de los líquidos
biológicos. En el hombre es el producto final del metabolismo proteico. Se produce en el hígado y es
excretada por la orina a través de los riñones.
Una elevación de la concentración sérica, se interpreta generalmente como una posible disfunción renal. Sin
embargo, no debe dejarse de lado el hecho de que los valores séricos de Urea se encuentran íntimamente
relacionados con la dieta y el metabolismo proteico, por lo que cualquier alteración en estas variables se
traducirá en un cambio de la concentración de urea en suero.
La ureasa descompone específicamente a la urea produciendo dióxido de carbono y amoníaco, éste

reacciona con fenol e hipoclorito en medio alcalino produciendo azul de indofenol que se determina
colorimétricamente.
ureasa
CO(NH2)2 H 2O CO2 2NH 3
NaOH
2NH 3 NaClO fenol C12H9O2N (azul de indofenol)
Na Fe(CN) NO = catalizador
2 5
Suero: 20 - 45 mg/dl
Orina: 20 – 40 g/24 horas
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
Standard: solución de urea 60 mg/dl.
Reactivos:
: disolver el contenido del frasco con agua destilada de acuerdo con las indicaciones
del rótulo. Mezclar por inversión hasta disolución completa. Etiquetar.
o Nombre del reactivo:

o Fecha de preparación:
o Fecha de vencimiento:
o Almacenamiento:
o Precauciones:
o Responsable:
: listo para usar
Tubos de ensayo (15 x 100 mm).

Tapones de caucho (rojo).
Gradilla porta tubos.
Cubeta de caras paralelas (1 cm).
Pipeta automática volumen variable (100-1000 µl).
Pipeta graduada (10 ml).
Reloj.
Auxiliar de macropipeteado (0,1 – 100 ml).
Piseta con agua desionizada o destilada.
Punta para pipeta color amarillo (2-200 µl).
Punta para pipeta color azul (50-1000 µl).
Papel absorbente.
Espectrofotómetro Uv-vis o fotocolorímetro.
Baño de agua a 37 °C.
Marcar 3 tubos con B (Blanco), St (estándar) y No. de muestra.
Mezclar con agitación suave e incubar 5 minutos a 37 °C. Luego agregar:
Mezclar por agitación suave e incubar 5 minutos a 37 °C. Luego agregar:
Mezclar por inversión y retirar del baño. Después de 10 minutos leer en fotocolorímetro con filtro
verde (510-550 nm) o en Espectrofotómetro Uv-vis a 540 nm, llevando a cero con el blanco.
En orina utilizar la misma técnica diluyendo la orina 1/10 con agua o solución fisiológica. Para el
cálculo multiplicar por el factor de dilución.
El color de reacción final es estable 12 horas, por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese
lapso.
fotos)
actividad).
Las muestras deben ser preferentemente frescas.
La urea en suero o plasma suero pueden conservarse varios días en refrigerador o 6 meses en
congelador, sin agregado de conservantes. En orinas de pH < 4 es estable 4-5 días en refrigerador
(2-10 °C).
Los anticoagulantes que contenga fluoruros inhiben la acción de la ureasa.
La hemólisis intensa puede producir resultados falsamente elevados que no sobrepasan el 5 %.

Esta interferencia puede corregirse utilizando blanco de suero.
No se observan interferencias por hemólisis ligera o moderada o bilirrubina hasta 400 mg/l.
Medicamentos: referirse a la bibliografía.
Los reactivos provistos son estables a temperatura ambiente hasta la fecha de vencimiento indicada
en la caja.
El reactivo de trabajo es estable por 1 año en refrigerador (2-10 °C) a partir de la fecha de su
preparación.
Los reactivos son para uso “in vitro”.
El fenol es tóxico e irritante.
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de química
clínica.
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a las leyes ambientales vigentes.
Las contaminaciones con vapores amoniacales producen deterioro de los reactivos. Lecturas del
blanco > 0,150 D.O., indican contaminación con amoníaco, en tal caso desechar.
Deben emplearse distintas pipetas para los Reactivos 1 y 2 y no deben intercambiarse las tapas de
los frascos ya que la contaminación de un reactivo con el otro produce su deterioro definitivo.
Evitar contaminaciones con amoníaco provenientes del ambiente (humo de cigarrillo, vapores
amoniacales).
Los detergentes, metales pesados y cianuros son inhibidores enzimáticos.
3.10. Bibliografía
Wiener Laboratorios S.A.I.C. Uremia. Wiener Lab. Rosario-Argentina

https://www.youtube.com/watch?v=XLPjkBsG9QE.
Lab4 Determinación de Creatinina
Describir el principio y las precauciones del procedimiento analítico, que se utiliza para la
determinación cuantitativa de Creatinina en suero por el método de Jaffé.
La creatinina, compuesto sumamente difusible, se elimina del organismo casi exclusivamente por filtración
renal. Se forma en los músculos a partir del fosfato de creatinina y un 2% de dicha sustancia se convierte
diariamente en creatinina. Se excreta principalmente por los riñones y una pequeña parte por las heces. La
determinación de creatinina sérica es más utilizada como índice de funcionamiento renal.
La creatinina y otros compuestos de la muestra reaccionan con el ácido pícrico en medio alcalino, dando un
complejo color rojo (complejo de Janovski) que se cuantifica mediante lectura fotométrica.
La determinación de Creatinina puede efectuarse, por medio de una técnica de punto final, o por una técnica
cinética, eliminándose en ambas el color que se debe a los cromógenos no creatinina.
En el primer caso, la adición de ácido al medio, destruye el picrato de creatinina pero no el color formado por
los demás compuestos. Por lo tanto la diferencia entre la lectura fotométrica antes y después del agregado
de ácido, permite cuantificar la creatinina en forma específica.
En la lectura cinética, los cromógenos no creatinina, reaccionan dentro de los primeros 30 segundos de
iniciada la reacción, que se comporta como cinética de primer orden para la creatinina. De manera que entre
los 30 segundos y los 5 minutos posteriores al inicio de la reacción, el incremento de color se debe
exclusivamente a la creatinina.
Suero: 0,8 - 1,4 mg/dl
Orina: 0,9 – 1,5 g/24 horas
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
: solución de Creatinina 2,0 mg/dl.
 PLE: Polioxietilén lauril éter
Mezclar en frasco plástico partes iguales de Acido pícrico y Buffer/PLE.

Rotular (nombre del reactivo, fecha de preparación y vencimiento, almacenamiento, precauciones y
responsable).
Tubos de ensayo (12 x 100 mm).

Gradilla porta tubos.
Cubeta de caras paralelas (1 cm).
Pipeta graduada (10 ml).
Probeta (según volumen de reactivo de trabajo a preparar)
Reloj.
Auxiliar de macropipeteado (0,1 – 100 ml).
Piseta con agua desionizada o destilada.
Punta para pipeta color amarillo (2-200 µl).
Punta para pipeta color azul (50-1000 µl).
Papel absorbente.
Espectrofotómetro Uv-vis.
Baño de agua a 37 ° C.
En tres tubos marcados B (blanco), S (Standard) y D (Desconocido) colocar:
Mezclar. Incubar 10 minutos en baño a 37 °C. Dentro de los 15 minutos de retirado del baño, leer el
Standard (S) y el Desconocido (D) en espectrofotómetro a 510 nm llevando a cero con el Blanco.
Luego agregar:
Mezclar. Dejar 5 minutos a temperatura ambiente y volver a leer el Desconocido (D), llevando 0,000
Absorbancia con el Blanco. El color de reacción es estable durante 6 horas, por lo que la lectura debe
efectuarse dentro de ese lapso.
fotos)
actividad).
Sueros con concentraciones elevadas de bilirrubina > 50 mg/l producen valore erróneos.
No interfiere: hemólisis ligera o moderada, hiperlipidemia, disproteinemia, ni cromógenos no

creatininícos (glucosa, ácido ascórbico, cetoácidos, glutatión o ergotionina).
Ver la bibliografía con relación a los medicamentos.
No se requiere de aditivos.
La creatinina en suero es estable hasta 24 horas y en orina hasta 4 días, en refrigerador sin agregados
de agentes conservantes.
Los reactivos son para uso “in vitro”.
Los reactivos provistos son estables a temperatura ambiente hasta la fecha de vencimiento indicada
en la caja.
El reactivo de trabajo es estable a temperatura ambiente y protegido de la luz durante 15 días a partir
de la fecha de su preparación.
Es importante asegurarse que el mezclado después de agregar cada reactivo sea correcto, para evitar
errores en los resultados.
El uso de plasma proporciona resultados falsamente disminuidos e un 8 a 15 %.
Manipular con precaución los equipos.
Medir correctamente las alícuotas indicadas.
Rotular los tubos donde va a realizar las determinaciones.
Durante el procedimiento leer cuidadosamente el inserto.
Usar el equipo de protección adecuado.
4.10. Bibliografía
Wiener Laboratorios S.A.I.C. Creatinina directa. Wiener lab. Rosario-Argentina.

https://www.youtube.com/watch?v=jSK4BirXsNc

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 Describir los métodos recomendados para estandarizar la preparación y el volumen de la muestra, la

 Diferenciar entre constituyentes normales y anormales del sedimento.

2.2. Instrucciones o consideraciones previas

El recuento de Addis permite estandarizar la cuantificación de los elementos formes de la orina.

En la actualidad están disponibles varios sistemas comerciales estandarizados (KOVA, Ursystem,

Es de gran valor para establecer el diagnóstico de infección al tracto urinario (bacteriurias

La valoración repetida es útil para seguir el curso y tratamiento de la infección urinaria y de la

La presencia de uratos puede llevar a sospechar la hiperuricemia de la gota.

La hematuria puede ser la única manifestación de neoplasias renales o de vejiga, glomerulonefritis

En ningún caso se debe utilizar una muestra transcurrida las 24 horas.

Debe tomarse la precaución de mezclar en forma exhaustiva la muestra antes de centrifugar.

El factor de concentración del sedimento se usa cuando se pretende cuantificar el número de

Cuando se encuentren elementos que requieren su identificación se cambia a un objetivo de mayor

Los resultados se informan como un promedio de los campos examinados.

– Células epiteliales: escamosas, uroteliales, caudales.

Los análisis inmediatos deben estar terminados e informarse en el transcurso de 30 min de la

2.3. Reactivos de Laboratorio

2.4. Materiales de Laboratorio

Tubo de centrífuga (capacidad 15 ml).

2.5. Equipos de Laboratorio

2.6. Actividades por desarrollar/ técnica operatoria

Mezclar perfectamente la orina por inversión suave evitando la formación de espuma.

En un tubo de centrífuga se deposita aproximadamente 15 ml de orina.

Centrifugar a velocidad moderada y constante (RCF = 400 g) por 5 minutos.

Eliminar el líquido sobrenadante.

2.9. Recomendaciones (escribir las recomendaciones necesarias para mejorar la práctica).

Rotular los tubos de las muestras.

Hematíes Leucocitos y piocitos Células epiteliales Cilindros hialinos

Hongos y levaduras Espermatozoides Uratos amorfos Gránulos de almidón

3.2. Instrucciones o consideraciones previas

La ureasa descompone específicamente a la urea produciendo dióxido de carbono y amoníaco, éste

Standard: solución de urea 60 mg/dl.

o Nombre del reactivo:

: listo para usar

3.4. Materiales de Laboratorio

Tubos de ensayo (15 x 100 mm).

Espectrofotómetro Uv-vis o fotocolorímetro.

Baño de agua a 37 °C.

3.6. Actividades por desarrollar/ técnica operatoria

Marcar 3 tubos con B (Blanco), St (estándar) y No. de muestra.

Mezclar con agitación suave e incubar 5 minutos a 37 °C. Luego agregar:

Mezclar por agitación suave e incubar 5 minutos a 37 °C. Luego agregar:

3.9. Recomendaciones (escribir las recomendaciones necesarias para mejorar la práctica).

Las muestras deben ser preferentemente frescas.

La hemólisis intensa puede producir resultados falsamente elevados que no sobrepasan el 5 %.

Medicamentos: referirse a la bibliografía.

Los reactivos son para uso “in vitro”.

El fenol es tóxico e irritante.

Los detergentes, metales pesados y cianuros son inhibidores enzimáticos.

Wiener Laboratorios S.A.I.C. Uremia. Wiener Lab. Rosario-Argentina

4.2. Instrucciones o consideraciones previas

Orina: 0,9 – 1,5 g/24 horas

Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

4.3. Reactivos de Laboratorio

: solución de Creatinina 2,0 mg/dl.

 PLE: Polioxietilén lauril éter

Mezclar en frasco plástico partes iguales de Acido pícrico y Buffer/PLE.

4.4. Materiales de Laboratorio

Tubos de ensayo (12 x 100 mm).

4.5. Equipos de Laboratorio

4.6. Actividades por desarrollar/ técnica operatoria