UNIVERSIDAD DE LAS AMÉRICAS QUITO- ECUADOR

PLANTSPHERE LABORATORIES (PSL)

PROYECTO DE INVESTIGACIÓN

Aplicación de Hidrogeles a partir de Trichoderma y Algas

Unicelulares (Spirulina) para la CitoNutrición de Plantas.

Application of Hydrogels from Trichoderma and Unicellular Algae

(Spirulina) for Plant’s CytoNutrition

Báez Sotomayor, Juan David. Calle Mendoza, Pamela Dayana. Campoverde

Arias, Ligia Valeria. Eldredge Salazar, Nikole Vanessa. Merino Padrón, Natalia
Priscila. Ruano Chávez, Miguel Mateo.

Resumen
Los hidrogeles son estructuras químicas formadas a base de polímeros naturales o
sintéticos los cuales tienen diferentes aplicaciones dependientes de su estructura y
naturaleza. La presente investigación tuvo el objetivo de elaborar un hidrogel a partir
del hongo Trichoderma y algas unicelulares del tipo Spirulina que genere un
fundamento nutricional para las células del vegetal asegurando así su crecimiento y
desarrollo sin constituir un contaminante para el suelo. Mediante la utilización de un
biorreactor de constante retroalimentación se obtuvo el polímero que fue sometido a
la solución aditiva de Activadores Catalíticos vitamínico (ACV° - PLS29823) con
característica luminiscente. El resultado obtenido indicó la absorción del complejo
vitamínico por parte de planta a partir del hidrogel creado mediante la luminiscencia
expuesta bajo luz halógena violeta.

Palabras Clave: Trichoderma, Algas unicelulares, Luminiscencia.

Abstract
Hydrogels are chemical structures formed of either natural or synthetic polymers,
which have different applications depending on their nature and structure. This
research aimed to develop a hydrogel from the fungus Trichoderma and unicellular
algae of Spirulina rate, able to produce a nutritional basis for the cells of the
vegetable ensuring it’s growth and developing process without being a polluting
agent to soils. By using a bioreactor of constant feedback, the polymer was obtained
and submitted to the solution of vitamin catalytic activators (ACV° - PLS29823) with
luminescent feature. The result showed the plant’s absorption of the vitamin solution
by displaying luminescence under a violet halogen light.

Keywords: Trichoderma, Unicellular algae, Luminescence.

INTRODUCCIÓN
La nutrición es uno de los factores
principales en las plantas dado a que
interviene directamente en los
procesos de desarrollo, crecimiento y
cosecha. Al mismo tiempo la nutrición
se ve afectada por el uso constante de
productos químicos para la planta, los
cuales usualmente no son utilizados
de manera correcta y por ende causan
daños progresivos a los procesos de
desarrollo, crecimiento, nutrición y
cosecha del vegetal. Estos productos
no suelen ser degradados en los
suelos de cultivo y crean entonces un
desgaste del mismo a corto y largo
plazo. Para resolver esta
problemática el objetivo de esta
investigación fue la creación de un
hidrogel a base de un polímero
orgánico obtenido a partir de algas
unicelulares y hongo Trichoderma que
sea fundamento nutricional para la
planta y que además no constituya un
contaminante para el suelo.
Los hidrogeles son estructuras
poliméricas hechos a base de
sustancias naturales los cuales son
considerados viables por varios
motivos, entre ellos por su fácil
degradación. Aquellos que son
elaborados a partir de polímeros
naturales constituyen una herramienta
biotecnológica de gran utilidad para la
sociedad actual ya que su capacidad
absorbente le atribuye múltiples
aplicaciones. Varias fuentes de
biomasa son utilizadas para la
elaboración del polímero utilizado en
la fabricación del presente hidrogel.
(Rojas, B. Ramirez, M. Aguilera, R.
García, A. Prin, J. Torres, C. Katime, I.
2007).
Existen tanto biopolímeros como bio-
plásticos de carácter orgánico que han
sido elaborados a partir de fuentes de
biomasa renovable tales como: aceite
vegetal, almidón de maíz, almidón de
guisantes, entre otros. Algunas de las
ventajas de la utilización de biomasa
renovable, es la conservación de los
recursos fósiles y la reducción de
emisiones de CO2. (Oligae, 2013).
Actualmente se ha considerado a las
algas como una materia prima
excelente en la elaboración de
biopolímeros, debido a su alto
rendimiento y capacidad de crecer en
diversos entornos. Aunque
principalmente se utilizó las algas para
la elaboración de biocombustibles,
luego se fue pensando en otras
aplicaciones que al igual que los
biocombustibles, generen fuentes de
ingresos económicos. (Oligae, 2013)
Existen ciertos tipos de bio-plásticos y
biopolímeros que se forman a partir de
las algas, entre estos los más
destacados o importantes son:
biopolímeros de organismos vivos,
ácido poliláctico (PLA), Bio-polietileno,
entre otros. Todos estos utilizan a las
algas como materia prima y cumplen
con diferentes procesos. (Oligae,
2013).
El Trichoderma es uno de los hongos
más valiosos y útiles en el ámbito
biotecnológico ya que posee
cualidades que lo hace un
microoganismo excepcional. (Ashwin,
g,. Lunge and Anita S. Patil. 2012).
Su facultad productora de enzimas
catalizantes: catalasas, quitinasas,
proteasas y xilinasa lo hace un muy
efectivo catalizador de múltiples
reacciones. Su aplicación como un
antagonista fitopatógeno para el
control biológico ha sido ampliamente
estudiado y aplicado en el control de
plagas especialmente en cultivos
frutales. (Ashwin, G., Lunge and Anita
S, Patil. 2012). Por otra parte sus
mecanismos de acción tales como de
competencia, antibiosis y
microparasitismo lo han convertido en
un muy buen aliado para el campo
agrícola e industrial. Es por ello que la
utilización del Trichoderma como
catalizador en la elaboración del
hidrogel es de vital importancia ya que
las cualidades antes mencionadas
corroboraron para la producción del
polímero formador del hidrogel.
(Miguel, A,. Morales, M,. Martinez,J,.
Garza,H,. Aguilar, C,. 2011).
La sustancia nutritiva que va a ser
incorporada a la planta mediante el
hidrogel corresponde a una solución
aditiva de ACTIVADORES
CATALITICOS DE vitaminas (ACV° -
PLS29823), lo cual es una sustancia
compuesta por nutrientes
coenzimáticos básicos que posee la
propiedad de ser una fuente
nutricional para un organismo, ya sea
uni o pluricelular estimulando la
aceleración en la reacción de
asimilación nutritiva.
La agricultura ecuatoriana
actualmente representa el 6.12% de
los ingresos económicos al país.
Tomando en consideración que el
Petróleo, actual representante de la
base económica ecuatoriana tiene un
futuro incierto por su constante
devaluación, es necesario tomar
medidas que mejoren la agricultura del
país para que esta se convierta en
una de las principales actividades
económicas en el Ecuador.
El hidrogel elaborado a partir de algas
unicelulares (Spirulina) y del hongo
Trichoderma constituye un material
biodegradable a base de organismos
de simple extracción y de fácil acceso
que al ser tratados en laboratorio y
sumergidos en suplementos
vitamínicos (específicos) para el tipo
de cultivo que se desea tratar,
constituirá una base nutritiva para el
cultivo, que garantiza su crecimiento,
desarrollo y posterior cosecha. Por lo
MATERIALES Y MÉTODOS
Obtención de Trichoderma
En una olla arrocera se pre cocieron
100g de arroz con agua y fueron
distribuidos en porciones de 10g en 10
vasos plásticos, se realizó un corte a
nivel de perfil A en la planta y se
colocaron las trampas nutricionales
junto a la raíz de la misma, las
trampas se dejaron por el periodo de 7
días y seguidamente fueron
recolectadas. La coloración verdosa
en la trampa nutricional indicó la
presencia de Trichoderma, la misma
que fue purificada en una cámara de
flujo laminar, a continuación la
muestra recolectada de Trichoderma
se incorporó al medio de cultivo
(PDA) y fue colocado en la cámara de
incubación a 28.5oC durante el periodo
de 8 días.
Germinación y Plantación de
Semillas
Se plantaron semillas de rábano
(Raphanus sativus) y césped del tipo
raygrass (Lolium multiflorum) en una
cubeta plástica estéril con una
servilleta que fue constantemente
regada con agua destilada. El proceso
de crecimiento fue documentado con
datos de longitud medidos de
constantemente.
Biorreactor
Se situó la pecera de 20L en una
superficie plana y elevada del suelo,
se conectó la manguera del aereador
de pecera con la bomba peristáltica.
Se esambló un circuito extendido por
la manguera y se puso en
tanto el proyecto que se presenta
pretende la optimizar las labores
agrícolas garantizando la
productividad en las plantas tratadas,
por la absorción de suplementos
vitamínicos a partir de un hidrogel
100% biodegradable. Lo cual reduciría
el uso de insumos químicos agrícolas,
de esta manera se reduciría la carga
química a la cual el suelo está
expuesto.
funcionamiento como un sistema de
constante retroalimentación.
Obtención del Polímero
Se llenó la pecera con 20L de agua y
se adicionaron las algas unicelulares y
el cultivo de Trichoderma previamente
preparado, se adicionó un litro de
solución tampón a pH 7 de Fosfato, y
seguidamente se añadió el complejo
vitamínico PSL y se supervisaron las
condiciones de la pecera
continuamente.
Cosecha de Hidrogel y
Pulverización
Se invirtió la pecera de 20L y se vació
el agua del mismo, y se recogió la
capa lechosa que constituye el
polímero que se presentó como un
sedimentado. El polímero fue recogido
y secado en microondas,
seguidamente fue almacenado en un
frasco limpio como sustancia
pulverizada.
Preparación de Muestra
Experimental
Se sumergió el hidrogel obtenido en la
solución aditiva de activadores
catalíticos vitamínica (ACV° -
PLS29823), hasta que el hidrogel
adquirió consistencia. Al sacar el
hidrogel de la solución vitamínica se lo
dejó reposar en ciclos de 10 minutos y
se verificó su luminiscencia, la semilla
fue introducida al hidrogel por medio
de una pinza y se dejó el mismo en un
medio de condiciones estables para
que la planta se desarrollara. La
verificación de la absorción se realizó
mediante la exposición de la planta a
luz halógena violeta para comprobar
su luminiscencia.

RESULTADOS

La formación del polímero útil para la

realización del hidrogel con fines cito-
nutritivos para la planta fue evidente,
se registró de manera visual y Fig. 1 Inicio del proceso de formación de las
células de Spirulina
estadística la formación del polímero a
partir del hongo Thrichoderma.
El proceso experimental registró
varios estadios, los cuales estuvieron
comprendidos desde la activación y
formación de las estructuras célulares
de Spirulina hasta la medición y
cuantificación del tiempo requerido
para la creación del polímero. Además
se registró de manera fotográfica el Fig. 2: Formación de la estructura celular de la
efecto de la sustancia añadida Spirulina .
mediante el hidrogel a las plantas de
Rábano y Césped. A continuación se
detallan cada uno de ellos.

Proceso de activación de la
Spirulina.
El proceso de activación de las
cápsulas de Spirulina de la marca
Mazon fue realizado durante un
tiempo aproximado de 26 días,
durante los cuales las estructuras
celulares de estas algas unicelulares
se formaron completamente, tomando
en cuenta que las mismas serán el
alimento para el posterior desarrollo
del Trichoderma este proceso fue
registrado mediante microscopía
electrónica y de los cuales se
registraron las siguientes fotografías
que muestran dicho procedimiento de
formación.
Fig. 2 Inicio del funcionamiento de la memoria
celular en las células de Spirulina.
Formación del polímero
Al ser adicionado la cepa de
Trichoderma a la solución de buffer y
Spirulina se registró la aparición de
sustancias de aspecto gelatinoso
similar a la nata en la superficie de la
solución preparada, lo cual indicó que
la actividad enzimática del hongo está
siendo ejercida de manera favorable.
La formación del polímero juntamente
con la activación de la Spirulina se
describe de manera estadística
mediante la curva indicada a
continuación, donde se registró una
función lineal cuyo valor de coeficiente
de correlación fue de 0,9807 lo cual
indica que los datos resultantes son
muy efectivos y que la formación del
polímero fue exitosa en el término de
los días indicados.

F
 Tiempo de Incubación y formación de polímero
(min)
10000
9000 f(x) = 336.14 x + 754.08
8000 R² = 0.98
Tiempo de Incubació n (min)
7000 Linear (Tiempo de
6000 Incubació n (min))
5000
4000
3000
2000
1000
0
0 5 10 15 20 25 30
Fig. 3 Gráfica de formación de polímero mediante la activida enzimática del
Thrichoderma

La variables descritas en el gráfico

expuesto corresponden al día de cada
activación y los minutos que
transcurrieron en dicho tiempo, de
esta forma se puede interpretar la
formación del polímero durante su
tiempo de incubación.
Los procedimientos posteriores a la Fig. 4 Estado y apariencia del polímero antes
cosecha del polímero tales como del proceso de secado y estabilización
purificación y secado dieron como
resultado estructuras sólidas y semi
blandas las cuales presentaron un
característico color verde con textura
rugosa propia de la naturaleza de la
biomasa. A continuación se presentan
algunas fotografías de dichos
resultados:

Fig. 5 Estado del polímero durante el proceso

de secado

También se realizaron pruebas de

microscopia del polímero una vez
formado y se registraron estructuras
poliméricas complejas, fibrosas y
compactas, las cuales demostraron la
perfecta formación del mismo. En las
siguientes imágenes se presentan las
mismas.

Fig. 6 Estructura del polímero
Fig. 7 Estructura del polímero una vez formado
Fig. 8 Polímero desde otro ángulo de enfoque,
rodeado de esporas de Trichoderma
Fig. 9 Estructura compacta fruto de la memora
celular además rodeada de esporas de
Trichoderma
Comprobación de la capacidad
absorbente mediante la adición de
la solución aditiva de Activadores
Catalíticos vitáminicos (ACV-
PSL29823) y fluorescencia en las
plantulas.
La aplicación de la solución (ACV-
PSL29823) al hidrogel una vez
formado fue de manera directa
mediante la preparación de dicha
solución con una concentraciónde 50
ul en 100 ul de solución buffer. La raíz
y la zona de crecimiento de las
plántulas fueron introducidas en los
cubiculos de gel preparados. Así como
se indica en las siguientes imágenes:
Fig. 10 Introducción de la plantula de Césped
en el gel preparado
Fig. 11 Preparación de 3 plántulas de Rábano
y Césped respectivamente en el gel preparado
Las plántulas preparadas reposaron y
tuvieron un tiempo de incubación
durante 30 minutos y los resultados
demostraron la absorción efectiva de
la solución aditiva vitamínica (ACV-
PSL29823) la misma que se manifesto
en la plántula de manera luminosa
exhibiendo una luminiscencia
particular propia de la solución. Las
imágenes que comprueban dichos
resultados fueron tomadas en un
ambiente obscuro con luz halógena.
Tal y como se muestra a continuación:
Fig. 12 Luminiscencia demostrada en la
plántula mediante la adición de la solución
(ACV-PSL29823)
Fig. 13 Resultados de la luminiscencia en la
plántula
Fig. 14 Comprobación de la capacidad
absorbente.
DISCUSIÓN
Para la elaboración de este polímero
fue esencial la utilización del hongo
Trichoderma y de algas unicelulares
como la spirulina, ya que conocemos
que tanto el Trichoderma como la
spirulina, poseen características
únicas y particulares. Tal es el caso
del  Trichoderma que es un
microorganismo antagonista, con
varios mecanismos de acción como
son: la competencia, antibiosis y
microparasitismo. En base a estas
cualidades lo convierte en un gran
aliado para el campo agrícola e
industrial. (Miguel, A. Morales, M.
Martinez, J. Garza,H, Aguilar, C.
2011). Por otro lado se encuentra
también la spirulina, una fuente rica en
minerales y vitaminas, además es una
fuente natural de B12, con una
excelente fuente de proteínas. Es rica
en clorofila y en ficocianina, colorante
típico de algas verde-azules.
(Superalimentos, s.f). Este es el
motivo por el cual se decidió utilizar a
estos organismos como materia prima
para la elaboración del polímero
natural.
Las algas unicelulares (spirulina) junto
al Trichoderma generaron el gel , esto
se debe a que el Trichoderma actúa
como catalizador en un medio óptimo,
en donde una vez activada la
spirulina se forma un conjunto de
células vivas de las cuales el
Trichoderma se va a nutrir, esto se
debe a la memoria celular que posee
la spirulina, siendo estas capaces de
unirse y sintetizar las sales del buffer,
para que de esta forma el
Trichoderma tenga una mejor fuente
de alimento y se produzca el polímero.
Es así que a diferencia de otras
materias primas, la spirulina  y el
Trichoderma no necesitan de tan
exhaustivo cuidado, el Trichoderma es
un hongo filamentoso presente en
todas las plantas por lo cual está bien
adaptado a varias condiciones del
medio, mientras que la spirulina al
encontrarse a manera de cápsulas
presenta cuidados previos, y pueden
ser activadas en laboratorio sin
generar mayores complicaciones,
como se pudo observar en la curva de
activación de spirulina , está toma
varios días en llevarse a cabo, con
una rotación y temperatura constantes
(Ver figura 1) . Mientras que, cuando
se utiliza como materia prima
biomasas, estas necesitan factores
como la luz (es decir la intensidad, la
naturaleza de la radiación y los
períodos a los cuales se encuentran
expuestas), además de la
temperatura, pH, salinidad,
movimientos de la marea, entre otros
factores, que  afectan directamente a
la cantidad de biomasa de algas que
se puede cultivar. Cuando se observó
la curva de biomasa cultivada en
laboratorio, se puede ver que el
crecimiento es irregular , debido a los
factores antes mencionados, es decir
se debe de tener especial cuidado con
el manejo de los factores que simulan
el ambiente de las algas para obtener
un crecimiento adecuado de la
biomasa a cultivar (Ver figura 2).
Además para que un sistema de
producción de biomasa funcione de
manera óptima debe de operar a
densidades, producción y REFERENCIAS
monoespecificidad permanentemente
(Aragon Biomasa, 2011). Por lo cual
“El problema de la producción de
algas para producir biomasa no es
tanto la producción, sino el
cosechado”  (Aragon Biomasa, 2011)
CONCLUSIONES
La actividad enzimática del hongo
Trichoderma permitió la síntesis del
polímero útil para la producción de
hidrogeles con fines absorbentes, que
facilitó la absorción del complejo
vitamínico y por ende favoreció la
CitoNutrición de las plantas de
Rábano (Raphanus sativus) y césped
(Lolium multiflorum). Los resultados
obtenidos demostraron la efectividad
de la utilización de la presente
biomasa lo cual sugiere para próximas
investigaciones nuevas formas de
aplicación.
AGRADECIMIENTOS
Agradecemos en primer lugar a Dios,
por permitirnos la oportunidad de
investigar y acompañarnos durante
todo el camino recorrido. Al Dr. Carlos
Falconí de PSL por abrirnos las
puertas de su laboratorio, por el vasto
conocimiento entregado y por su
constante apoyo y dedicación durante
el desarrollo del proyecto. A los
funcionarios de laboratorios PSL:
Andrés Cárdenas, Carlos Carranza y
María Isabel Larrea por su
incondicional ayuda, sus palabras de
aliento, su dedicación, perseverancia y
sobretodo por su bella amistad. De la
misma manera extendemos nuestros
agradecimientos a los miembros de
nuestras familias quienes han hecho
de nosotros, las personas que somos
ahora y quienes nos apoyan y nos
endurecen cuando el rumbo se torna
difícil. A nuestros mentores, Ing. Carla
Sandoval, Ing. Cristina Almeida e Ing.
Santiago Zárate, por su constante
apoyo y dedicación y por ver en
nosotros a los investigadores del
mañana.
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