Deshidratado Por Liofilización

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS
ESCUELA ACADÉMICA DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
AS
IC
G
LO
O
BI
AS
EFECTO in vitro DEL EXTRACTO CRUDO LIOFILIZADO DE Allium sativum
CI
“ajo” AL 0.5, 1, 5, 10, 25% DE CONCENTRACIÓN SOBRE Staphylococcus aureus

EN
CI
DE
TESIS
PARA OPTAR EL TÍTULO DE
CA
BIÓLOGO – MICROBIÓLOGO
TE
IO
AUTOR: JULCA LEÓN GINA ELIZABETH

BL
ASESOR: Dr. PEDRO MERCADO MARTÍNEZ

BI
CO-ASESOR: Dr. GUILLERMO SEGUNDO RUIZ REYES
Trujillo – Perú
2018
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
AS
Dr. ORLANDO MOISÉS GONZALES NIEVES
IC
Rector de la Universidad Nacional de Trujillo.
G
LO
O
BI
Dr. RUBÉN CÉSAR VERA VELIZ
AS
Vice – rector Académico de la Universidad Nacional de Trujillo.
CI
EN
CI
DE
Dr. WEYDER PORTOCARRERO CÁRDENAS

Vice – rector de Investigación de la Universidad Nacional de Trujillo.
CA
TE
IO
BL
Dr. STEBAN ILICH ZERPA

BI
Secretario General de la Universidad Nacional de Trujillo.
ii
AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DE LA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
AS
IC
G
Dr. FREDDY MEJIA COICO
LO
Decano de la Facultad de Ciencias Biológicas.
O
BI
AS
DR. WILMER ZELADA ESTRAVER
CI
Secretario de la Facultad de Ciencias Biológicas.

EN
CI
DE
Dra. BERTHA SORIANO BERNILLA

Director de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología.
CA
TE
IO
BL
Ms. C. IVÁN ANGULO CASTRO

BI
Rector de Departamento Académico Profesional de Microbiología y Parasitología.
iii
PRESENTACIÓN
SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:

En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y Títulos
de la Universidad Nacional de Trujillo, presento a vuestra consideración y claro
AS
discernimiento la tesis titulada:
IC
EFECTO in vitro DEL EXTRACTO CRUDO LIOFILIZADO DE Allium sativum
G
“ajo” AL 0.5, 1, 5, 10, 25% DE CONCENTRACIÓN SOBRE Staphylococcus aureus.
LO
O
Esperando que vuestro criterio sea de comprensión por errores u omisiones cometidos en
BI
la elaboración del informe de tesis, nos sometemos a vuestro dictamen.
AS
Trujillo, marzo del 2018.
CI
EN
CI
DE
Br. Gina Elizabeth Julca León

CA
TE
IO
BL
BI
iv
DEL ASESOR
El que suscribe Dr. Pedro Mercado Martínez, asesor de la tesis titulada: EFECTO in vitro
DEL EXTRACTO CRUDO LIOFILIZADO DE Allium sativum “ajo” AL 0.5, 1, 5,
AS
10, 25% DE CONCENTRACIÓN SOBRE Staphylococcus aureus.
IC
G
CERTIFICA
LO
Que la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su correspondiente
proyecto y las orientaciones pertinentes.
O
En cuanto al informe ha sido redactado bajo mi asesoramiento, acogiendo las
BI
observaciones y sugerencias alcanzadas, por lo que autorizo al bachiller: Gina Elizabeth
AS
Julca León continúen con los procedimientos según los fines.
CI
EN
CI
DE
Dr. Pedro Mercado Martínez.

CA
ASESOR
TE
IO
BL
BI
MIEMBROS DEL JURADO
AS
IC
G
Dra. Manuela Luján Velásquez
LO
PRESIDENTE
O
BI
AS
CI
EN
CI
Dr. Pedro Mercado Martínez

VOCAL
DE
CA
TE
IO
BL
Ms.C. David Zavaleta Verde

BI
SECRETARIO
vi
APROBACIÓN
Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que la
presente tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo aprobada
por UNANIMIDAD.
AS
IC
G
LO
O
BI
Dra. Manuela Luján Velásquez
PRESIDENTE
AS
CI
EN
CI
DE
Dr. Pedro Mercado Martínez

VOCAL
CA
TE
IO
BL
BI
Ms.C. David Verde Zavaleta

SECRETARIO
vii
AGRADECIMIENTOS
Concluye una etapa importante, llena de valiosas experiencias manifiesto mi

agradecimiento a los Docentes de La Facultad de Ciencias Biológicas por brindarme
sus enseñanzas, experiencias y orientaciones que contribuyeron a mi formación
AS
profesional.
IC
G
Agradezco a mi asesor Dr. Pedro Mercado Martínez, catedrático de la Escuela de
LO
Microbiología y Parasitología, por su colaboración brindada durante esta etapa y
elaboración de la presente tesis.
O
BI
AS
CI
Agradezco a mi co-asesor Dr. Guillermo Segundo Ruiz Reyes, catedrático de la

facultad de Farmacia y bioquímica, por su atención y apoyo.
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
viii
DEDICATORIA
A mis padres Nancy León Cheffer y Felipe Julca Acevedo Por manifestarme toda la
AS
fuerza para seguir adelante, cariño, preocupación y a la responsabilidad que siempre
IC
han demostrado siendo esto fundamental en mi formación profesional
G
LO
A mi hermano Luis Felipe Julca León Por ser el pilar para lograr este objetivo, por
O
ser el motivo de superación profesional todos los días con tú ejemplo y por la confianza
BI
depositada en mí.
AS
CI
A mi hermana Isabel Margot Julca León y Fernandito por ser mi motor de

superación, mis confidentes, mis compañeros de vida, agradezco infinitamente por estar
EN
en esta gran faceta de mi vida.

CI
DE
A mi mamá Blanca Cheffer Rojas por ser mi motivo de inspiración, porque siempre
me alentaste a lograr este objetivo, porque creíste en mí.
CA
TE
Gina Elizabeth Julca León

IO
BL
BI
ix
RESUMEN
El presente trabajo evaluó la sensibilidad de Staphylococcus aureus frente a la
acción antibacterial del extracto crudo liofilizado de Allium sativum äjo¨ al 0.5, 1, 5, 10,
AS
25% de concentración. Los bubos de “ajo” fueron recolectados de San Ignacio de la
IC
Oyola-Distrito de Sinsicap – Otuzco-Perú estos fueron triturados por un extractor
G
eléctrico para luego ser liofilizados, se realizó la identificación de metabolitos secundario
LO
haciendo uso de reactivos de coloración y precipitación para la evaluación de la
O
sensibilidad se utilizó el método Kirby Bauer, en Agar Mueller-Hinton, utilizando discos
BI
de papel filtro embebido por cada concentración del extracto, independientemente se
AS
realizó un control positivo utilizando discos de Cefalexina 30µg, estas fueron incubadas
CI
a 37°C durante 24 h. Los resultados obtenidos muestran que se observa diferencia

EN
significativa entre la acción de la Cefalexina 30µg. y las concentraciones de 10 y 25 %

CI
del extracto crudo liofilizado de Allium sativum, respecto a la identificación de

DE
metabolitos se identificó flavonoides, alcaloide, taninos, aminoácidos y compuestos
sulfurados.
CA
TE
IO
BL
BI
ÍNDICE
Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo ii
Autoridades de la Facultad de Ciencias Biológicas iii
AS
Presentación iv
IC
G
Del asesor v
LO
Miembros del jurado vi
O
BI
Aprobación vii
Agradecimiento
AS viii
CI
Dedicatoria ix
EN
Resumen x
CI
Índice xi
DE
Introducción 01
Material y Método 07
CA
Resultados 15
TE
Discusión 18
IO
BL
Conclusiones 22
BI
Recomendación 23
Referencias Bibliográficas 24
Anexos 31
xi
INTRODUCCIÓN
Las infecciones agresivas y con farmacorresistencia múltiple constituyen un problema
de salud creciente en todo el mundo. Las bacterias están desarrollando farmacorresistencia a un
AS
ritmo alarmante, de modo que hay una gran demanda de nuevos medicamentos que puedan
IC
combatir esta amenaza. El aumento de bacterias farmacorresistentes a los agentes
G
antibacterianos es el principal problema al que se enfrenta la ciencia médica en el tratamiento
LO
de las enfermedades infecciosas¨(Kümmerer,2004, pág.311); su efecto es mayor en los países
O
en vías de desarrollo, en donde por cada habitante se gasta menos de S/23.00 en salud, cifra
BI
insignificante frente a los S/ 4 875.00 a S/13 000.00 que puede costar el tratamiento de una
AS
persona que presente alguna enfermedad ocasionada por un agente patógeno resistente (OMS,
2004).
CI
EN
Staphylococcus aureus es considerado por la Sociedad Americana de Enfermedades
Infecciosas como uno de los 6 microorganismos de mayor importancia en la práctica médica

CI
diaria, esta bacteria es causa frecuente de infecciones en la comunidad y de un número

DE
importante de infecciones relacionadas con los cuidados médicos (Talbot, 2006; Gordon, 2008).
Forma parte de la familia Microccocaceae, género Staphylococcus, el cual contiene más de 30

CA
especies diferentes y muchas de éstas son habitantes naturales de la piel y las membranas
TE
mucosas del hombre. Es un coco Gram-positivo, no móvil. No forma esporas, puede encontrarse
IO
solo, en pares, en cadenas cortas o en racimos. Es un anaerobio facultativo, pero crece mejor en
BL
condiciones aerobias (Gould, 2008)

BI
Ogston introdujo el nombre de Staphylococcus, del griego staphyle que significa racimo
de uvas, para describir a los cocos responsables de inflamación y supuración (Moore, 2001). El
AS
microorganismo produce catalasa, coagulasa y crece rápidamente en agar sangre. Sus colonias
IC
miden de 1 a 3 mm, producen un típico pigmento amarillo debido a la presencia de carotenoides
G
y muchas cepas producen hemólisis a las 24-36 horas (Moore, 2001). Staphylococcus aureus es
LO
un microorganismo que posee características particulares de virulencia y resistencia a los
O
antibióticos. En los humanos causa una amplia variedad de enfermedades infecciosas. El
BI
principal impacto de este microorganismo se debe a las cepas de S. aureus resistentes a la
AS
meticilina (MRSA) (Jaime, 2006, pág 287). En la actualidad las cepas de S. aureus tienen un
amplio rango de resistencia a los antibióticos y se pueden encontrar cepas resistentes y

CI
multirresistentes.
EN
La adquisición de esta resistencia se debe principalmente al intercambio de manera

CI
horizontal de genes que son transportados por elementos genéticos móviles como plásmidos,
DE
transposones (Tn) y secuencias de inserción (IS) (Jaime, 2006, pág 287). Esta bacteria ha ido
desarrollando resistencia a muchos de los antibióticos a un ritmo alarmante, de modo que hay
CA
gran demanda de nuevos medicamentos que puedan combatir, convirtiéndose a si los

TE
fitofármacos como una alternativa terapéutica. Se puede afirmar que el uso de plantas
IO
medicinales nació con el hombre desde los tiempos prehistóricos hasta los comienzos del siglo
BL
XIX se utilizaron por ensayo error, aquellos extractos que brindaban cura a enfermedades.
BI
En las últimas décadas ha ido tomando cada día mayor importancia su estudio de
técnicas analíticas que permitan la determinación e identificación de las sustancias o principios
AS
activos contenidos en especies vegetales (López, 2002). Muchos de los principios activos son
IC
sumamente complejos, otros han sido aislados y purificados e incluso sintetizados (William,
1981).Una de las plantas que ha suscitado especial interés es el género Allium sativum “ajo” que
G
LO
es originario de Asia Central; se encuentra en la familia Liliaceae (Afsharypuor, 2010, pág 173)
O
Esta planta posee un bulbo sólido, formado por bulbillos limitados por dos caras planas y una
BI
convexa, puntiagudos en ambos extremos (Magaña, 2010, pág 657) Crece en casi todo el
AS
mundo, sobre todo en climas templados y cálidos. Es una planta anual perenne, caracterizada
por la formación de bulbos aromáticos.

CI
EN
Su nombre científico es Allium sativum. El término Allium procede de la palabra
celtaall, que significa ardiente o caliente y sativum significa cultivado. Esta planta posee hojas
CI
largas, estrechas y planas en su mitad inferior, sus flores son de color blanco-verdoso en forma
DE
de sombrilla ubicadas en el nacimiento de las hojas superiores, los bulbos crecen
subterráneamente en la base del tallo (Cardona, 2010). El género Allium contiene más de 300
CA
especies de plantas; entre ellas se encuentra el Allium sativum, que es un bulbo perteneciente a
TE
la familia Liliaceae y subfamilia Allioideae. Se conoce desde mucho tiempo atrás, habiéndose
IO
utilizado por la mayoría de las culturas, desde los egipcios, romanos, griegos, hasta en la misma
BL
India u Oriente. Su origen se ubica en Asia central, donde se extendió ampliamente y se

BI
encuentra naturalizado en muchas partes del Mundo (Udaire, 2006). El ajo aumenta la actividad
de las células defensivas del organismo como antibiótico natural (Fulder, 1997)
Actualmente se está utilizando como calmante, para tratar afecciones bronquiales y de
estómago, como antirreumática, para el tratamiento de arteriosclerosis y artrosis, como
AS
antihelmíntica, antihipertensivo, antiteratogénico, antitrombótico, antimicrobiano contra las
IC
picaduras de avispas y mosquitos, para desinfectar heridas y frente al dolor (Vallejo, 2008). Tan
G
amplio espectro terapéutico descrito se puede justificar bioquímicamente. Esta especie presenta
LO
abundantes fructosanas (hasta un 75%), aceite esencial (0,2-0,3%): garlicina, aliina o sulfóxido
O
de alilcisteína (1%), cuando el diente es macerado se libera la enzima fosfopiridoxal aliinas,
BI
esta hidroliza la aliina produciendo alicina siendo éste último componente la sustancia
AS
antibacterial del ajo, que actúa inhibiendo las enzimas respiratorias afectando sus grupos SH
(Vallejo, 2008; Florencia, 2011).

CI
EN
El äjo¨ contiene por lo menos 33 compuestos azufrados, varias enzimas, 17 aminoácidos
y algunos minerales que contribuyen a su actividad antimicrobiana. Los principales compuestos

CI
azufrados son la aliína, alicina, ajoeno, trisulfuro de dialilo, salilcisteína, vinilditiínas, disulfuro
DE
de alilpropilo, S-alil-mercapto cisteína, entre otros. Entre las enzimas importantes en la
actividad antimicrobiana se encuentran la alinasa, peroxidasa y mirosinasa. Los aminoácidos y

CA
sus glucósidos, en especial la arginina, también influyen de manera importante en la actividad

TE
antimicrobiana, al igual que el selenio, germanio, telurio y trazas de otros minerales (Bhandari,
IO
2012).
BL
La alicina, de fórmula molecular C6H10OS2 y peso molecular de 162.27 g/mol, es un

BI
líquido amarillo de densidad 1.112 g/ml su pH está cerca de 6.5, tiene solubilidad en agua a
10°C de alrededor de 2.5% m/m, también es soluble en alcohol, éter y benceno. Presenta
inestabilidad en álcali caliente, pero es estable a ácidos. En general tiene estabilidad limitada en
solución (Cardona, 2010). La Alicia puede ser transformada en otros compuestos, debido a su
AS
inestabilidad, dentro de éstos se encuentra el Ajoeno [(E, Z)-4.5,9-tritiadodeca-l,6, l 1 -trieno-
IC
9- óxido], el cual posee una baja actividad antibacteriana y una excelente actividad antifúngica
G
al afectar la integridad de su pared celular. Naganawa, sugirió que la actividad antimicrobiana
LO
del ajoeno estriba en la presencia de enlaces disulfito junto con los grupos sulfimilicos presentes
O
en su estructura (Florencia, 2011).
BI
Para el caso del ajo deshidratado, a pesar de que la aliína y la enzima aliinasa sufren el
AS
proceso de secado aún se conserva el potencial de formación de alicina cuando entran en
CI
contacto con el agua (Bhagyalakshmi, 2005). Enseguida, la alicina experimenta degradación en
EN
forma rápida, permitiendo la formación de nuevos compuestos sulfurados tales como sulfuro de
dialílico, disulfuro de dialilo y trisulfuro de dialilo La reacción anterior ocurre extremadamente

CI
rápido, en ella más del 80% de aliína se metaboliza en los primeros 2 minutos (Kyung, 2001,
DE
pág 183). Asimismo, en presencia del calor, la alicina puede transformarse en ajoeno y
viniloditiínas. La alicina inhibe a más de 300 bacterias, tanto Gram-positivas como Gram-
CA
negativas, tales como Bacillus subtilis, Bacillus megaterium, Bacillus sphaericus, Bacillus
TE
polymyxya, Staphylococcus aureus, Escherichia coli (Kumar, 2010, pág 229).

IO
BL
BI
Se considera que la alicina tiene actividad antimicrobiana porque modifica la biosíntesis
de los lípidos y síntesis del RNA de los microorganismos y disminuye el perfil de lípidos de los
AS
mismos. Este compuesto activo reacciona rápidamente con grupos tiol libres, por ello se cree
IC
que el principal mecanismo antimicrobiano se produce a través de la interacción de alicina con
G
enzimas que contienen grupos tiol, como proteasas y alcohol dehidrogenasas (Rahman, 2007).
LO
Arilda y Col mencionan que dichos componentes por a su acción lipofílica tienen la capacidad
O
de atravesar la membrana celular, romper polisacáridos, ácidos grasos y lípidos, provocando la
BI
permeabilización de la bacteria, la cual produce pérdida de iones, colapso de la bomba de
AS
protones y disminución del ATP, conduciendo a la muerte celular; también se ha encontrado
que a nivel citoplasmático pueden actuar sobre lípidos y proteínas coagulando dichas moléculas
CI
(Gemmell, 2006, pág 589)
EN
En los últimos años los logros de la industria farmacéutica han sido notorios en la
CI
producción de antimicrobianos, aunque los costos son muy elevados (Gonzales, 1998). Es por
DE
ello que se escoge al género Allium sativum “ajo” porque se tendría un producto vegetal con
propiedades medicinales, cultivable en todo el Perú y de muy bajo costo. Convirtiéndose en un

CA
antibiótico alternativo. Como base a lo anterior en el presente trabajo de investigación se planteó

TE
evaluar el efecto in vitro del extracto crudo liofilizado de Allium sativum “ajo” sobre
IO
Staphylococcus aureus a concentración de 0.5, 1,5, 10, 25%.

BL
BI
MATERIAL Y MÉTODO
1. MATERIAL
AS
1.1 MATERIAL BIOLÓGICO
-Cepa de Staphylococcus aureus (ATTC 12600)
IC
G
-Bulbos de Allium sativum “ajo” procedentes del caserío San Ignacio de la Oyola –
LO
Distrito de Sinsicap - Provincia de Otuzco – Perú, latitud 2284 m.s.n.m.
O
BI
1.2 PROCEDIMIENTO
1.2.1 Identificación taxonómica del “ajo”

AS
CI
La identificación taxonómica se realizó en el Herbarium Truxillense (HUT) de la
EN
Universidad Nacional de Trujillo. (ANEXO 02)

CI
DE
1.2.2 Recolección y muestreo del “ajo”
Se recolectó 10 Kg de bulbos de Allium sativum “ajo” al azar, se esparció sobre una

CA
superficie plana y se escogió muestras de aproximadamente 1Kg de toda la superficie

TE
esparcida.
IO
BL
BI
5.2.3 Obtención del extracto crudo liofilizado de Allium sativum.
A los bulbos de Allium sativum “ajo” se le retiró la capa superficial, posteriormente se
AS
lavó con agua destilada e Hipoclorito de Sodio a 200 ppm durante 5 minutos.
IC
Seguidamente se realizó el enjuague de los bulbos en suficiente agua destilada estéril
G
para retirar el Hipoclorito residual. Posteriormente se procedió a realizar el triturado de
LO
los bulbos con extractor eléctrico. Obtenido el extracto, éste fue filtrado en dos etapas:
O
una a través de gasa plegada varias veces, para retirar los residuos más groseros y la
BI
siguiente empleando papel filtro (Papel Whatman®) realizando la filtración tres veces.
AS
Finalmente, el extracto filtrado, fue sometido a procesos de liofilización.
CI
EN
5.2.4 Identificación cualitativa de metabolitos secundarios
Se realizó la identificación de los metabolitos secundarios haciendo uso de reactivos de

CI
coloración y precipitación de acuerdo con el método de MIRANDA MARTINEZ M. y

DE
CUELLAR CUELLAR A. 2000

CA
5.2.4.1 Identificación de Esteroides – Ensayo de Lieberman – Burchart

TE
1. En un tubo de ensayo se colocó 1 mL del extracto.

IO
2. Se añadió 1 mL de Anhidrido acético.

BL
3. Luego se añadió dos gotas de Ácido sulfúrico concentrado. La reacción es

BI
positiva si hay presencia de color verde.
5.2.4.2 Identificación de Alcaloides Totales – Ensayo de Dragendorff
AS
2. Se llevó a evaporación hasta obtener un extracto más blando
IC
G
3. Se redisolvió con 1 mL de HCl 1%
LO
4. Se añadió el reactivo de Dragendorff. La reacción es positiva si hay presencia de
O
turbidez o precipitado.
BI
AS
5.2.4.3 Identificación de Fenoles – Ensayo de Cloruro Férrico
CI
1. En un tubo de ensayo se colocó 2 mL del extracto
EN
2. Se añadió dos gotas de solución de Tricloruro férrico al 5%. La reacción es

CI
positiva si hay presencia de color rojo, verde o azul.

DE
5.2.4.4 Identificación de Aminoácidos – Ensayo de Ninhidrina

CA

TE
2. Se añadió 1 mL de solución de Ninhidrina al 2%.

IO
3. Se llevó a Baño María por 10 minutos. La reacción es positiva si hay presencia

BL
de un color ligeramente azul violáceo.

BI
5.2.4.5 Identificación de Alcaloides Totales – Ensayo de Dragendorff
AS
2. Se añadió una gota de HCl.
IC
G
3. Se calentó y se dejó enfriar.
LO
4. Se añadió tres gotas de reactivo de Dragendorff. La reacción es positiva si hay
O
presencia de turbidez o precipitado.
BI
AS
5.2.4.6 Identificación de Taninos – Ensayo de Cloruro Férrico
CI
EN
2. Se añadió dos gotas de solución de Tricloruro férrico al 5%. La reacción es

CI
positiva si hay presencia de color rojo, verde o azul.

DE
5.2.4.7 Identificación de Flavonoides – Ensayo de Shinoda

CA
1. En un tubo de ensayo se colocó 2 mL del extracto

TE
2. Se añadió 1 mL de HCl concentrado

IO
3. Se añadió Magnesio metálico y se esperó por 5 minutos

BL
4. Luego se agregó 1 mL de Alcohol amílico, se mezcló y se dejó reposar. La

BI
reacción es positiva si hay presencia de color amarillo, naranja o rojo.
10
5.2.4.8 Determinación de compuestos azufrados- Prueba de Lassaigne
(fusión de compuestos orgánicos con metales)
AS
La identificación de estos elementos en la muestra se basa en su conversión en
IC
compuestos iónicos solubles en agua y en la aplicación de pruebas específicas para
G
llevar a cabo su detección. (ANEXO 04).
LO
1. Se colocó dentro de un tubo de ensayo (de 8 x 50 mm), un trozo de sodio
O
BI
metálico, de aproximadamente 3 mm de tamaño.
2. El tubo se calentó hasta fundir el metal.

AS
CI
3. Se retiró el tubo del calor y se adicionó 5 mg de la muestra mezclado en 5 mg de
EN
sacarosa.
CI
4. Se calentó nuevamente el tubo y se repitió la adición de la muestra con sacarosa

DE
por segunda vez. Entonces, se calentó el fondo del tubo al rojo vivo, por unos 5
minutos.
CA
5. Al término se dejó enfriar el tubo y se adicionó 1 mL de etanol para eliminar el

TE
exceso de sodio que no ha reaccionado.

IO
6. Se calentó nuevamente el tubo y rápidamente se traspasó a un vaso de

BL
precipitados de 100 mL conteniendo 20 mL de agua destilada.

BI
11
7. Se rompió el tubo con una varilla de vidrio, se calentó la solución hasta ebullición
y se filtró. Se obtuvo un filtrado incoloro que se usó para la siguiente prueba.
AS
8. Presencia de Azufre en la muestra original – Método de Identificación por
IC
Coloración
G
LO
9. Se colocó en un tubo de ensayos 5 mL de la solución incolora obtenida en la
reacción anterior.
O
BI
10. Se agregó 2 mL de Ácido acético diluido (pH 4-5) y luego 2 mL de Acetato de
AS
plomo al 5% y observarse la formación de un anillo color negro lo que confirmaría la
CI
presencia se azufre
EN
5.2.5 Preparación y estandarización del inóculo

CI
En 5ml de SSFe en un tubo de ensayo se procederá a preparar el inóculo para el

DE
desarrollo de la parte experimental.

CA
A partir del cultivo joven de Staphylococcus aureus (ATTC 12600) con asa de siembra
TE
se retirará suficientes colonias que serán colocadas en el tubo de ensayo, hasta que la
turbidez sea igual a la escala 1 de Mc Farland (3x108 UFC/ml).

IO
BL
BI
12
5.2.6 Prueba de sensibilidad antimicrobiana
Para esta evaluación se empleó la técnica de Kirby Bauer.
AS
Se preparó placas Petri con 20 ml de Agar Muller-Hinton se dejó solidificar y se agregó
IC
0,1 ml del inoculo, se distribuyó por toda la placa con asa de Drigalsky. Se marcó 6
G
LO
segmentos iguales debajo de las placas Petri y fueron colocados 5 discos de papel filtro
(uno por cada segmento) con un diámetro de 5mm, previamente sumergidos en el
O
BI
extracto a la concentración correspondiente, en el sexto segmento se colocó el disco de
Cefalexina 30µg utilizando pinza estéril. Una vez colocados los discos, las placas fueron
AS
etiquetadas, selladas y se incubaron a 37°C por 24horas hasta la medición de los halos
CI
de inhibición en mm los cuales fueron comparados con los halos obtenidos con el disco
EN
de Cefalexina 30 µg y reportar el promedio de las mediciones hechas. Se realizó 15

CI
repeticiones.
DE
CA
TE
IO
BL
BI
13
5.2.7 Análisis estadístico
Los datos obtenidos fueron analizados mediante el método de ANOVA, la comparación
AS
múltiple de medias se realizó mediante la prueba de Tukey HSD, usando el software
IC
estadístico R. Además se reportan la media y desviación estándar, con un nivel de
G
significancia de 5%. (Boqué, Marote ,2011)
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
14
RESULTADOS
En el Tabla N° 1 se observa que los halos formados por las diferentes concentraciones del
AS
extracto de Allium sativum difieren significativamente del halo formado por Cefalexina 30µg,
existiendo p˂5% de acuerdo a las pruebas estadísticas ANOVA.
IC
G
LO
En la Tabla Nº1 las concentraciones 0.5, 1, 5, % no se observa inhibición del crecimiento de
O
Staphylococcus aureus en cambio sí hay inhibición en las concentraciones de 10 y 25%.
BI
AS
CI
Estadísticamente se observa diferencia significativa al comparar la acción de la Cefalexina 30µg
EN
con las concentraciones de 10 y 25%, existiendo p>0.05.

CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
15
Tabla N°1. Medida promedio de los halos de inhibición en mm de las
concentraciones 0.5, 1, 5, 10, 25 % del extracto crudo liofilizado de Allium sativum “ajo”
AS
y control sobre la cepa Staphylococcus aureus (ATTC 12600).
IC
G
PROBLEMA Diámetro promedio del halo formado por
LO
Staphylococcus aureus (ATTC 12600)
O
Concentración 0.5% de Allium 5mm
BI
sativum.
Concentración 1 % de Allium AS 5mm

CI
sativum.
EN
Concentración 5% de Allium 5mm

CI
sativum.
Concentración 10% de Allium 6.73mm

DE
sativum.
CA
Concentración 25% de Allium 15.17mm
sativum
TE
Cefalexina 30 µg (CONTROL) 25.53mm

IO
BL
Fuente: Base de datos del estudiante

BI
Existiendo p˂5%.
16
Tabla N°2. Reporte de metabolitos secundarios del extracto crudo liofilizado de
Allium sativum äjo¨
AS
IC
METABOLITO RESULTADO
G
LO
FLAVONOIDES +
O
COMPUESTOS AZUFRADOS +
BI
AS
FENOLES CI -
ESTEROIDES -
EN
ALCALOIDES +
CI
TANINOS +
DE
AMINOÁCIDOS +
CA
Fuente: Base de datos del estudiante

TE
Leyenda: (+) Presencia (-) Ausencia

IO
BL
BI
17
DISCUSIÓN
AS
Constantemente se está realizando investigaciones dirigidas a buscar plantas con
compuestos antibacterial. Allium sativun äjo¨ es una planta que presenta mayor estudio prueba
IC
de ello es que es ampliamente utilizado desde tiempos antiguos por su capacidad antibacterial
G
LO
y antifúngica (DRAGO, LÓPEZ Y SAÍNZ, 2006). El ajo contiene por lo menos 33 compuestos
azufrados, varias enzimas, 17 aminoácidos y algunos minerales que contribuyen a su actividad
O
BI
antimicrobiana. Los principales compuestos azufrados son la aliína, alicina, ajoeno, trisulfuro
de dialilo, salilcisteína, vinilditiínas, disulfuro de alilpropilo, S-alil-mercapto cisteína, entre
AS
otros. Entre las enzimas importantes en la actividad antimicrobiana se encuentran la alinasa,
CI
peroxidasa y mirosinas (BHANDAR, 2012).
EN
CI
Estudios como el de PAVA 2016 obtuvo como resultados de la marcha fitoquimica de

DE
Allium sativum y Zingiber officinale evidenciaron la presencia de metabolitos secundarios como

CA
flavonoides, quinonas, cumarinas, terpenos y esteroides. Concordando así con los resultados
obtenidos en la presente investigación como se puede apreciar en la tabla N° 1 el extracto crudo

TE
liofilizado de Allium sativum presenta Flavonoides, compuesto sulfurados, taninos y

IO
aminoácidos concordando así con la referencia.

BL
BI
18
Compuestos como el timol, carvacrol, linalool, aldehído cinámico, alicina y eugenol
tienen acción lipofílica pasan las membranas celulares, romper polisacáridos, ácidos grasos y
AS
lípidos, permeabilizando la membrana celular; esta permeabilización, conduce a la pérdida de
IC
iones, al colapso de la bomba de protones y a la disminución del ATP lo cual inevitablemente
G
conduce a la muerte celular; también se ha encontrado que a nivel citoplasmático puede actuar
LO
sobre lípidos y proteínas coagulando dichas moléculas ( ROJAS, 2009). El diente de “ajo”
O
cuando se encuentra intacto posee un compuesto llamado aliina (NAGANAWA, 1996). Cuando
BI
el diente de ajo es cortado y entra en contacto con el oxígeno se libera la enzima fosfopiridoxal
AS
alinasa, enzima que hidroliza a la aliina produciendo alicina, siendo este componente el que
actúa inhibiendo las enzimas respiratorias afectando sus grupos SH (YOSHIDA, 1999).
CI
EN
CI
En la investigación encontramos que el extracto crudo liofilizado de Allium sativun a
las concentraciones de 10 y 25% si ejerce poder antibacterial concordando con la biografía

DE
debido a su composición revelada. En la evaluación de la acción antibacterial del äjo¨ se

CA
encontraron que existe diferencia significativa, existiendo p˂5%, en las medias del diámetro de
los halos de inhibición de las concentraciones de 25 % seguido del 10 % del extracto crudo
TE
liofilizado de Allium sativun, lo cual indica que a mayor concentración del extracto mayor será
IO
el efecto antibacterial concordando así con la investigación de SALAZAR 2014 que evaluó los
BL
extractos acuoso, etanólico y metanólico Allium sativun, obteniendo como resultado mayor
BI
acción antibacterial las concentraciones de 100, 75 y 50% sobre Staphylococcus aureus,
MERCADO Y ARÉVALO 2013 evaluaron la sensibilidad de los cultivos de Staphylococcus
19
aureus, Staphylococcus epidermidis y Pseudomona aeruginosa frente a la acción antibacteriana
del extracto de Allium sativum “ajo” y obtuvieron como resultado mayor acción antibacterial la
AS
concentración 100% del extracto de Allium sativum, sobre Staphylococcus aureus,
IC
Staphylococcus epidermidis y Pseudomona aeruginosa. PAVA 2016 evaluó actividad
G
antimicrobiana de extractos de Allium sativum y Zingiber officinale sobre microorganismos de
LO
importancia en patologías infecciosas de cavidad oral y obtuvo como resultado que el extracto
O
acuoso de Allium sativum a una concentración de 280 mg/ ejerce inhibición sobre
BI
Porphyromona gingivalis y sobre Staphylococcus aureus una concentración de 150 mg/ml.
AS
CI
GARCÍA 2007, evaluó la inhibición del extracto de Allium sativum, Allium fistulosum y
EN
Allium cepa sobre cinco cepas bacterianas entre ellas Staphylococcus aureus, utilizando el
CI
extracto acuoso, presentando Allium sativum el mayor potencial inhibitorio contra
Staphylococcus aureus, que fue el más susceptible a la acción del ajo generándose halos de
DE
alrededor de 12mm de diámetro, mientras que en E.coli y B. cereus el efecto antibacterial fue
CA
bajo. En la presente investigación se utilizó el extracto crudo liofilizado de Allium sativum a
las concentraciones de 0.5, 1, 5, 10, 25 % y como control positivo Cefalexina 30 µg utilizando

TE
la técnica de Kirby Bauer. Obteniendo como resultado que a las concentraciones de 10 % dio
IO
un promedio de halo de inhibición de 6.73 mm, 25 % 15.16mm siendo estos resultados

BL
diferentes a los obtenidos por GARCÍA 2007 que obtuvo diámetro de 12mm a la concentración
BI
del 100% mientras que RIBOTTY 2018 realizó el estudio del efecto in-vitro del extracto acuoso
de Allium sativum (ajo) sobre cepas de Stahylococcus aureus resistente a la meticilina
20
obteniendo como resultado, el promedio del diámetro del halo de inhibición del extracto acuosos
de Allium sativum en cepas de S. aureus resistente a meticilina (SARM) fue de 9,9 mm al 25%,
AS
15,2 mm al 50%, 19,5 mm al 100% por el método de pozos resultados muy similares a los
IC
obtenidos en la presente investigación. En la investigación se determinó según los resultado que
G
existe diferencia significativa entre las medias de las concentraciones ensayadas del extracto
LO
crudo liofilizado de A. sativum, con respecto a la Cefalexina 30µg (control) sobre
Staphylococcus aureus, existiendo p˂5%, concordando con los resultados obtenidos por
O
BI
MERCADO Y ARÉVALO 2013, que determinaron que existe diferencia significativa entre los
AS
halos formados por los discos controles (Cefalexina y Vancomicina respectivamente) y las
concentraciones del 25 %, 50 % y 100 % de extracto de A. sativum, sobre S. aureus y S.

CI
epidermidis,
EN
CI
Por lo tanto, se presume que la cepa de Staphylococcus aureus (ATTC 12600) es más
DE
sensible frente al compuesto sulfurados, flavonoides, Alcaloides, Taninos, Aminoácidos
presentes en la muestra según lo reportado por el servicio de análisis y asesoría DELTAS s.r.l.
CA
pero a mayor concentración.

TE
IO
BL
BI
21
CONCLUSIONES
AS
 Se identificaron como metabolitos secundarios presentes en el extracto crudo
IC
liofilizado de Allium sativum äjo¨ a flavonoides, alcaloides, taninos,
G
aminoácidos y compuestos sulfurados.
LO
 Se observa diferencia significativa entre la acción de la Cefalexina
O
BI
30µg(control), con las concentraciones de 10 y 25%.
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
22
RECOMENDACIONES
AS
Estudiar el efecto antibacterial del extracto crudo liofilizado de Allium sativum äjo a
concentraciones mayores.
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
23
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Abraham J. (2010). Evaluation of antimicrobial activity of herbal extracts against
AS
Salmonella. Journal of Pharmacy Research. 3(8):1981-1983.
IC
Acosta. L (2006). La Producción Agrícola de Plantas Medicinales en Cuba. Garantía de
G
LO
Calidad en la Producción de Fitofármacos. La Habana, Cuba.
O
Afsharypuor S, Tahmasian M. (2010.) Volatile constituents of the tuberous tap-root, leaf
BI
and seed of Brassica rapa L. ssp. rapa cultivated in Isfahan (Iran). J Essent Oil
Res. Ed.22 (2):173–175.

AS
CI
Bhagyalakshmi N., Thimmaraju R., Venkatachalam L., Chidambara N. K. y Sreedhar
EN
R. V.(2005) Nutraceutical Applications of Garlic and the Intervention of

CI
Biotechnology. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, Vol 45. 607621.
DE
Bhandari, P. R. (2012). Garlic (Allium sativum L.): A review of potential therapeutic
applications. International Journal of Green Pharmacy.2:118

CA
Boqué Richar y Marote Alicia (2011). El análisis de varianza. UOC. Ed 14: 23

TE
Cardona P.L, González P.P. (2010) Obtención y caracterización de la oleorresina del

IO
ajo(Alliumsativum)[tesis].Colombia.,Disponible:http://repositorio.utp.edu.co/d
BL
space/bitstream/handle/11059/480/66 400154C268oc.pdf?sequence=1
BI
24
Carretero A. (2000) Compuestos fenólicos. Plantas medicinales. Panorama Actual
MédicaEd.24(233):4.Disponobleen:http://web.udlap.mx/tsia/files/2013/12/TSI
AS
A-71-Bender-Bojalil-et-al-2013.pdf
IC
Drago S. M.L, López L. M, Saínz E. T.R (2006) Componentes bioactivos de alimentos
G
funcionales de origen vegetal. Revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas, vol.
LO
37, núm. 4, 58-68, Disponible: http://www.redalyc.org/pdf/579/57937408.pdf
O
Enriquez Flores, A. M., & Prieto Vela, E. P(2007.). Estudio farmacognóstico y
BI
fitoquímico del rizoma de Zingiber officinale roscoe “jengibre” de la ciudad de
Chanchamayo - región Junín. Perú.

AS
CI
Florencia M(2011). Estudio de procesos de deshidratación industrial de ajo con la
EN
finalidad de preservar alicina como principio bioactivo. [Tesis]. Argentina:
Universidad Nacional de Cuyo,

CI
Disponible:http://m.bdigital.uncu.edu.ar/objetos_digitales/4202/tesis-
DE
florenciagreco.pdf
CA
Ganoza M (2000). Fundamentación química de las reacciones de coloración y

TE
precipitación en la identificación de metabolitos secundarios de plantas
medicinales. Trujillo–Perú.
IO
García RR, Herrera A F (2007). Evaluación de la inhibición del crecimiento de cinco

BL
cepas bacterianas patógenas por extractos acuososde Allium sativum, Allium

BI
fistulosumy Allium cepa:estudio preliminar in vitro. BISTUA VOL 5 No. 2 Pag
68 -79, Disponible: http://www.redalyc.org/pdf/903/90350207.pdf

25
Gemmell CG, Edwards D. I, Fraise A. P, Gould F. K, Ridgway G. L. (2006). Warren
Guidelines for the prophylaxis and treatment of methicillin-resistant
AS
Staphylococcus aureus (MRSA) infections in the UK. J Anti-microb Chemother.
IC
57:589-608.
G
Gonzales M, Mendoza M, Bastardo M, Apits- Castro R (1998). Efectos del ajoeno sobre
LO
dermatofitos, Candida albicans y Malassezia furfur. Rev Iberoam Micol;
O
Ed15(4):227.
BI
Gordon JG, Lowy FD.(2008) Pathogenesis of methicillin-resistant Staphylococcus
aureus infection. Clin Infect Dis. Ed 46:350. AS

CI
EN
Gould FK, Brindle R, Chadwick PR, Fraise AP, Hill S, Nathwani D (2009). Guidelines
for the prophylaxis and treatment of methicillin-resistant Staphylococcus

CI
aureus(MRSA) infections in the United Kingdom. J Antimicrob Chemother.

DE
63:849-61.
CA
Herrera FC, García-Rico RO. (2006). Evaluación in vitro del efecto bactericida de
extractos acuosos de laurel, clavo, canela y tomillo sobre cinco cepas bacteriana
TE
patógenas de origen alimentario. 4(2), 13-19.

IO
BL
Homer J., Ritchie J., Rabbino H.(2000) Toward a dynamic theory of antibiotic
resistance. System Dynamics Review. Ed16: 287.

BI
26
Jaime A. B, Martínez A. H, Partida M. G (2006) Staphylococcus aureus la reemergencia
de un patógeno en la comunidad Rev Biomed. 17:287-305, Disponible:
AS
http://www.revbiomed.uady.mx/pdf/rb061746.pdf
IC
Kuklinski C. (2000) Farmacognosia. Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas
G
de origen natural. Ed 1: 4
LO
Kumar, R. y Jain, P. (2010). Antimicrobial activity of Allium sativum ethanolic extract
O
BI
against food associated bacteria and fungi.Drug Invention Today: 2(4):229-232.
AS
Kümmerer K.(2004) Resistancein the environment. The Journal of Antimicrobial
CI
Chemotherapy. Ed.54: p 311.
EN
Kyung, K. H. y Lee, Y. C. (2001). Antimicrobial activities of sulfur compounds derived

CI
from s-alk(en)yl-l-cysteine sulfoxides in allium and brassica. Food Reviews
International. 17(2):183–198
DE
Liu C, Bayer A, Cosgrove SE, Daum RS, Fridkin SK, Gorwitz RJ.(2011) Clínical
CA
practice guidelines by the infectious diseases society of America for the

TE
treatment of methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections in adults and

IO
children: executive summary. Clin Infect Dis. 52:285-92.

BL
Lock O (1998). Investigación Fitoquímica. Pontificia Universidad Católica del Perú. Ed

BI
1:13.
27
López M.(2002) Plantas medicinales y aromáticas estudio, cultivo y procesado. España.
Ediciones Mundi-Prensa.
AS
Magaña AMA, Gama L, Mariaca R 2010. El uso de las plantas medicinales en las
IC
comunidades Maya–Chontales de Nacajuca, Tabasco, México. Polibotánica. Ed
G
29:213-262
LO
Mercado M.P, Arévalo L.C. 2013. Sensibilidad de cultivos de Staphylococcus aureus,
O
BI
Staphylococcus epidermidis y Pseudomona aeruginosa frente a la acción
antibacteriana del extracto de Allium sativum “Ajo”. Disponible en:
AS
file:///C:/Users/cabina19/Downloads/168-317-1-PB.pdf
CI
EN
Miranda M, Cuellar A 2000. Manual de Prácticas de Laboratorio: Farmacognosia y
Productos Naturales. 1ª ed Ed. Universidad de la Habana. pp.: 1, 34–50.

CI
Moore P.C.L, Lindsay J.A. (2001) Genetic variation among hospital isolates of
DE
methicillin-sensitive Staphylococcus aureus: evidence for horizontal transfer of

CA
virulence genes. J Clin Microbiol. 39:7-2760

TE
Munayco P. E.( 2011.) Efecto antimicrobiano del extracto hidroalcohólico de Allium

IO
sativum sobre cepas estándares de la cavidad bucal [tesis]. Lima: Universidad

BL
Nacional Mayor de San Marcos. Facultad de Odontología.

BI
28
Naganawa, R., Iwata, N., Ishikawa, K., Fukuda, H., Fujino, T., Suzuki. A.( 1996)
Inhibition of microbial growth by ajoene, a sulfur-containing com pound derived
AS
from garlic Appl Envinron Microbiol; 62:90-110.
IC
Navarre A. (2016) Reunión internacional e investigación en productos naturales.
G
Latinoamericana de química. Ed 12: 283.
LO
O’Gara E. A., Hill D. J. y Maslin D. J. (2000). Activities of garlic oil, garlic powder,
O
BI
and their diallyl constituents against. Helicobacter pylori. Applied
Environmental Microbiology. 66:2269–2273.
AS
CI
OMS. (2004)Informe sobre las enfermedades infecciosas. Organización Mundial
EN
(16):25.
Rahman, M. S. (2007). Allicin and other functional active components in garlic: Health
CI
benefits and bioavailability. International Journal of Food Properties. 10:245–

DE
268.
RIBOTTY S.V. (2018). Efecto in-vitro del extracto acuoso de Allium sativum (ajo) sobre
CA
cepas de Stahylococcus aureus resistente a la meticilina. Disponible en

TE
http://www.repositorioacademico.usmp.edu.pe/bitstream/usmp/3212/3/ribotty_
IO
sv.pdf.
BL
BI
29
Rojas CP, Villca V R. (2009) Determinación de la actividad antibacteriana In vitro del
ajo (Allium sativum) contra Streptococcus pyogenes mediante el método por
AS
dilución.SCIELO,Disponible:http://www.revistasbolivianas.org.bo/pdf/ucs/n4/
IC
n4_a03.pdf
G
Smith, R. Coast, J. (2002) Antimicrobial resistance: A global response. Bulletin of the
LO
World Health Organization. 2002. Ed. 80: 126.
O
BI
Talbot GH, Bradley J, Edwards JE, Gilbert D, Scheld M, Bartlett JG.(2006) Bad bugs
needs drugs: an update on the development pipeline from the antimicrobial
availability task force. Clin Inf Dis. Ed 42: 657. AS

CI
EN
Vallejo J, Peral D, Carrasco M (2008). Las especies del género Allium con interés
medicinal en Extremadura. Vol.2.

CI
William A, Thompson D.( 1981) Guía práctica ilustrada de las plantas medicinales.
DE
Barcelona: Blume;
CA
TE
IO
BL
BI
30
AS
IC
G
LO
O
BI
ANEXOS CI
AS
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
31
ANEXO 01 Clasificación sistemática de la especie vegetal
Especie botánica: Allium sativum
AS
Nombre vulgar: äjo¨
IC
G
Procedencia: San Ignacio de la Oyola – Distrito de Sinsicap - Provincia
LO
de Otuzco – Perú,
O
Altura: 2284 m.s.n
BI
ANEXO 02 Clasificación taxonómica de la especie botánica AS
CI
Clase: Equisetopsida
EN
CI
Subclase: Magnoliidae
DE
Superorden: Lilianae
Orden: Asparagales
CA
TE
Familia: Amaryllidaceae
IO
Género: Allium
BL
Especie: A. sativum L
BI
32
ANEXO 03. Medidas de los halo de inhibición en mm de las concentraciones 0.5, 1,

5, 10, 25 % del Extracto crudo liofilizado de Allium sativum “ajo” y Cefalexina 30µg
(control) sobre la cepa de Staphylococcus aureus (ATTC 12600)
AS
REPE Diámetro Diámetro Diámetro Diámetro Diámetro Diámetr
IC
del halo de del halo de del halo de del halo de del halo o del
TICIÓ inhibición inhibición inhibición inhibición de halo de
G
(mm) de la (mm) de la (mm) de la (mm) de la inhibición inhibició
N concentrac concentrac concentrac concentrac (mm) de n (mm)
LO
ión 0.5% ión 1 % de ión 5% de ión 10% la de la
de Allium Allium Allium de Allium concentra Cefalexi
O
sativum sativum sativum sativum ción 25% na 30 µg
de Allium
BI
sativum
REP 1 5 5 5
AS 7 13.5 26
CI
REP 2 5 5 5 7 20 25
EN
REP 3 5 5 5 8 14 27
CI
DE
REP 4 5 5 5 6 16 25
REP 5 5 5 5 6 15 24
CA
REP 6 5 5 5 5 14 26
TE
IO
REP 7 5 5 5 7 15 24
BL
REP 8 5 5 5 10 16 27
BI
REP 9 5 5 5 9 17 26
33
REP 10 5 5 5 6 14 27
REP 11 5 5 5 7 15 26
AS
REP 12 5 5 5 5 14 25
IC
REP 13 5 5 5 6 15 24
G
LO
REP 14 5 5 5 5 15 26
O
REP 15 5 5 5 7 14 25
BI
AS
Prome 5 5 5 6.73 15.17 25.53
dio
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
34
ANEXO 04 Muestra el tamaño promedio de los halos de inhibición formados por el
extracto de äjo¨ a las concentraciones de 0.5, 5, 10, 25% y la Cefalexina 30µg.
AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
Reacción de la Identificación de “azufre”

DE
ANEXO 05
CA
Sol. Incolora
contiene: 1) AcOH (pH 4-5)
Ppdo Negro:
TE
Na2S + NaX + NaCN PbS

2) Pb(OAc)4
IO
BL
BI
35
ANEXO 06 Bulbos pelados de Allium sativum äjo¨,
AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
ANEXO 07 Diluciones del 0.5, 1, 5, 10, 25 % del extracto crudo liofilizado de Allium
sativum “ajo”
CI
DE
CA
25%
TE
IO
BL
BI
36
ANEXO 08 Halos de inhibición formado por la concentración de 10, 25 % del extracto
crudo liofilizado de Allium sativum äjo¨ y control
AS
IC
Control
G
LO
25%
O
BI
AS
CI 10%
EN
CI

DE

CA
TE
IO
Control
BL
BI
10%
25%
37
AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
25%
CI
DE
10%
CA
TE
Control
IO
BL
BI
38

Deshidratado Por Liofilización

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Deshidratado Por Liofilización

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

“ajo” AL 0.5, 1, 5, 10, 25% DE CONCENTRACIÓN SOBRE Staphylococcus aureus

AUTOR: JULCA LEÓN GINA ELIZABETH

ASESOR: Dr. PEDRO MERCADO MARTÍNEZ

CO-ASESOR: Dr. GUILLERMO SEGUNDO RUIZ REYES

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Dr. WEYDER PORTOCARRERO CÁRDENAS

Dr. STEBAN ILICH ZERPA

Secretario General de la Universidad Nacional de Trujillo.

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DE LA

Secretario de la Facultad de Ciencias Biológicas.

Dra. BERTHA SORIANO BERNILLA

Ms. C. IVÁN ANGULO CASTRO

Rector de Departamento Académico Profesional de Microbiología y Parasitología.

SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:

Br. Gina Elizabeth Julca León

DEL EXTRACTO CRUDO LIOFILIZADO DE Allium sativum “ajo” AL 0.5, 1, 5,

Dr. Pedro Mercado Martínez.

MIEMBROS DEL JURADO

Dr. Pedro Mercado Martínez

Ms.C. David Zavaleta Verde

Dr. Pedro Mercado Martínez

Ms.C. David Verde Zavaleta

Concluye una etapa importante, llena de valiosas experiencias manifiesto mi

Agradezco a mi co-asesor Dr. Guillermo Segundo Ruiz Reyes, catedrático de la

A mi hermana Isabel Margot Julca León y Fernandito por ser mi motor de

en esta gran faceta de mi vida.

Gina Elizabeth Julca León

El presente trabajo evaluó la sensibilidad de Staphylococcus aureus frente a la

a 37°C durante 24 h. Los resultados obtenidos muestran que se observa diferencia

significativa entre la acción de la Cefalexina 30µg. y las concentraciones de 10 y 25 %

del extracto crudo liofilizado de Allium sativum, respecto a la identificación de

metabolitos se identificó flavonoides, alcaloide, taninos, aminoácidos y compuestos

Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo ii

Autoridades de la Facultad de Ciencias Biológicas iii

Las infecciones agresivas y con farmacorresistencia múltiple constituyen un problema

de salud creciente en todo el mundo. Las bacterias están desarrollando farmacorresistencia a un

Staphylococcus aureus es considerado por la Sociedad Americana de Enfermedades

Infecciosas como uno de los 6 microorganismos de mayor importancia en la práctica médica

diaria, esta bacteria es causa frecuente de infecciones en la comunidad y de un número

Forma parte de la familia Microccocaceae, género Staphylococcus, el cual contiene más de 30

condiciones aerobias (Gould, 2008)

amplio rango de resistencia a los antibióticos y se pueden encontrar cepas resistentes y

La adquisición de esta resistencia se debe principalmente al intercambio de manera

gran demanda de nuevos medicamentos que puedan combatir, convirtiéndose a si los

técnicas analíticas que permitan la determinación e identificación de las sustancias o principios

por la formación de bulbos aromáticos.

Su nombre científico es Allium sativum. El término Allium procede de la palabra

de sombrilla ubicadas en el nacimiento de las hojas superiores, los bulbos crecen

India u Oriente. Su origen se ubica en Asia central, donde se extendió ampliamente y se

Actualmente se está utilizando como calmante, para tratar afecciones bronquiales y de

estómago, como antirreumática, para el tratamiento de arteriosclerosis y artrosis, como

(Vallejo, 2008; Florencia, 2011).

El ¨ajo¨ contiene por lo menos 33 compuestos azufrados, varias enzimas, 17 aminoácidos

y algunos minerales que contribuyen a su actividad antimicrobiana. Los principales compuestos

de alilpropilo, S-alil-mercapto cisteína, entre otros. Entre las enzimas importantes en la

actividad antimicrobiana se encuentran la alinasa, peroxidasa y mirosinasa. Los aminoácidos y

sus glucósidos, en especial la arginina, también influyen de manera importante en la actividad

La alicina, de fórmula molecular C6H10OS2 y peso molecular de 162.27 g/mol, es un

dialílico, disulfuro de dialilo y trisulfuro de dialilo La reacción anterior ocurre extremadamente

polymyxya, Staphylococcus aureus, Escherichia coli (Kumar, 2010, pág 229).

Se considera que la alicina tiene actividad antimicrobiana porque modifica la biosíntesis