POST-LABORATORIO

FUNDAMENTOS DMICROBIOLOGIA.
LABORATORIO.

PRESENTADO POR: MARY CARMEN LÓPEZ GENES.

SEBASTIÁN GARCÍA CARO.
MARÍA JOSÉ LÓPEZ GENES.
NEVIS ESTHER PEÑA VERTEL

PRESENTADO A: GLORIA VERGARA.

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA.
FACULTAD DE LA SALUD.
PROGRAMA REGENCIA EN FARMACIA.
SEMESTRE II
2020

DIAGRAMA DE FLUJO.
 IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA BACTERIANA.
Existe un conjunto de medios de cultivo que son muy usados para la identificación de bacterias. La siembra de este
conjunto o batería de pruebas bioquímicas debe realizarse a partir de colonias aisladas.

Principales pruebas para la identificación de bacilos gram (-) TSI: (triple sugar iron), agar que permite el estudio de la
capacidad de producir ácido y gas a partir de moléculas de glucosa, lactosa y sacarosa.

MIO: (movilidad indol ornitina), medio semi- solido que permite evidenciar la movilidad, la producción de indol y la
descarboxilación de la ornitina. PROCEDIMIENTO Inoculación: picadura en forma vertical Tiempo: 28-48 hrs
Temperatura 35 -37°C

Citrato: permite evidenciar el uso de citrato por parte de la bacteria, como única fuente de carbono. PROCEDIMIENTO
Se toma una colonia bien aislada de la superficie de un medio de aislamiento primario y se siembra en forma de estría
única en el pico de flauta (agar inclinado) del tubo de agar citrato. El tubo se incuba a 35 °C durante 24 a 48 horas.

Sin incolurar. citrato

Urea: contiene urea y rojo fenol como indicador, si la bacteria posee la enzimaureasa, la degrada y produce amonio el
cual alcaliniza el medio y se ve rosado. PROCEDIMIENTO El medio liquido se siembra con un ansa de cultivo puro del
microorganismo por probar. La superficie inclinada del agar (pico de flauta) se siembra en estría con el microorganismo
por probar. Ambos medios se incuban a 35 °C durante 18 a 24 horas.

VOGES- PROSKAUER

PROCEDIMIENTO Sembrar un tubo de caldo MR/VP con un cultivo puro del microorganismo por probar. Incubar 24
horas a 35 °C. Finalizada la incubación, transferir 1 ml del caldo a un tubo de ensayo limpio. Agregar 0,6 ml de a-naftol al
5%, seguidos de 0,2 ml de KOH al 40%. Es esencial que los reactivos sean agregados en ese orden. Agitar suavemente el
tubo para exponer el medio al oxigeno atmosférico y dejar el tubo en reposo durante 10 a 15 minutos.
 Los cultivos Voges-Proskauer negativos

Producir un color cobrizo, que se puede

Sin inocular interpretar como un positivo falso.

ROJO DE METILO

PROCEDIMIENTO 1. Sembrar el caldo MR/VP con un cultivo puro del microorganismo en estudio. Incubar el caldo a 35 °C
durante 48 a 72 horas (no menos de 48 horas). 2. Finalizada la incubación, agregar 5 gotas del reactivo de rojo de metilo
directamente al caldo.

el desarrollo del color rojo estable como otros microorganismos pueden producir
en la superficie del medio indica las pequeñas cantidades de acido del sustrato
suficiente producción de ácido como probado, puede observarse un color naranja
como para disminuir el PH a 4.4 intermedio entre amarillo y rojo. Esto no indica
una prueba positiva.

TSI: TRIPLE AZÚCAR HIERRO.

PROCEDIMIENTO Inoculación: por picadura y estría, inóculo liviano. Temperatura: 35-37°C Tiempo 18-24 hrs.
principio Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar un aminoácido (lisina y arginina) para formar
una amina con la consiguiente alcalinidad.

Después de 18-24 hrs, el medio permanece El metabolismo proteico se produce en la superficie

Amarillo, reacción acido sobre acido. De la zona inclinada donde el oxígeno es abundante
Fermentador de lactosa. La producción de 18-24 hrs de incubación: zona inclinada roja fondo
Gas romperá el agar o lo empujará hacía del agar amarillo. (metabolismo anaerobio de
(A/A) arriba. Reacción A/A más gas. glucosa inicial). Reacción alcalina sobre acido K/A.

Las bacterias que fermentan glucosa también pueden formar productos alcalinos a partir de la utilización de la peptona,
sobre la zona inclinada. Reacción (K/K).

 K/A: fermentación de glucosa solamente (Pico de flauta alcalino/profundidad ácida). Característico de bacterias no
fermentadores de lactosa como Shigella.

A/A: fermentación de glucosa y lactosa (Pico de flauta ácido/ profundidad ácida). Característicos de E. coli y grupo
Klebsiella-Enterobacter.

K/K: No fermentación de glucosa y lactosa (pico de flauta alcalino/profundidad alcalina). Característico de bacterias no
fermentadoras como Pseudomas aeruginosa
LIA: AGAR LISINA HIERRO

 Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar un aminoácido (lisina y arginina) para formar una
amina con la consiguiente alcalinidad.

 PROCEDIMIENTO Inoculación: por picadura y estría, inóculo liviano. Temperatura: 35-37°C Tiempo 18-24 hrs.

 K/K: Azul de Prusia/azul de Prusia. Desaminación oxidativa/descarboxilación.

• K/A: azul de Prusia/lila. No desaminación.

• Producción de H2S: Ennegrecimiento del medio

• Producción de gas: burbujas o levantamiento del medio de cultivo de las paredes del tubo.

AGAR SANGRE.

El agar sangre es una combinación de un agar base (agar nutritivo) con fuente proteica (digeridos trípticos, digeridos
proteicos de soja) el cual tiene un agregado de 5 % de sangre ovina, (también puede usarse sangre humana, para
cultivos en una placa de Agar) con una pequeña cantidad de hidratos de carbono naturales y cloruro sódico.

Se usa para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos (que es un factor de virulencia). Observando
los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemólisis que posee:

• Alfa: halos verdosos

• Beta: halos incoloros

• Gamma: inexistencia de halos.

 Hemólisis alfa
 Hemólisis beta
 Hemólisis Gamma

Principales pruebas fisiológicas para la identificación de cocáceas Gram (+)

Catalasa: es una enzima que contiene un grupo heme como grupo prostético y que en presencia de H2O2, cataliza que
se desdoble en agua y oxígeno, con desprendimiento de burbujas.

• Coagulasa: enzima capaz de coagular el plasma humano citratado

.• Hemolisinas: enzimas que destruyen los glóbulos rojos liberando hemoglobina.

 Βeta hemolisis(total)

• hemolisis (parcial)

• Gamma hemolisis (no hemolisis)