Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann

Facultad de Ciencias – Biología Microbiología

ECOLOGIA MICROBIANA

ANALISIS MICROBIOLOGICO DEL AIRE

(MÈTODOS)

ALUMNA: Diana Dolores Aro Vizcarra

CODIGO: 2015-118043

DOCENTE: Ángela Choque

 Análisis microbiológico del aire
I. MÉTODO Y PROCEDIMIENTOS:

A. TÉCNICA DE SEDIMENTACIÓN EN PLACA

El método utilizado es el de sedimentación en placas de agar,

que consiste en exponer placas con un medio nutritivo sólido al
ambiente durante un periodo determinado, incubar las placas y
hacer el recuento de las colonias obtenidas.

Con este método se detectan los microorganismos que caen sobre

la superficie de la placa, lo cual simula lo que ocurre normalmente
cuando estamos trabajando en el laboratorio. Como las
condiciones ambientales influyen en la sedimentación de los
microorganismos es necesario que, cuando se realiza este método,
las placas se expongan siempre en el mismo lugar y bajo las
mismas condiciones para poder comparar los resultados
obtenidos.

• Verter el medio PCA en las placas Petri.

• Destapar la placa de PCA en el lugar cuyo nivel de contaminación
se desee examinar durante diferentes intervalos de tiempo: 0,5;
1; 1,5 horas.
• Tapar las placas e incubar durante 24-48 horas a 37 °C.
• Determinar el número de aerobios mesófilos totales ambientales.
B. TÉCNICA POR PLACA DE CONTACTO TIPO RODAC PARA
EL MONITOREO DE SUPERFICIES.

El método de la placa de contacto (Rodac) cuenta con placas

llena de un medio nutritivo sólido con una superficie convexa que
se presionan sobre la superficie plana a evaluar. Es utilizado para
superficies planas. Algunas de las desventajas de este método es
que no se utilizan para superficies irregulares, si el medio es
humedecido puede ocurrir la concurrencia de microorganismos y
el residuo del medio puede ser eliminado del sitio de la muestra.
Las superficies son monitoreadas por métodos microbiológicos a
través de la técnica por placa de contacto tipo Rodac. El
desarrollo de esta técnica comienza a partir de placas Rodac con
medio Agar ATS y se hace contactar la superficie con el agar para
luego incubar en las condiciones indicadas y los resultados se
expresan como UFC por placa.
C. MUESTREO POR MÉTODO VOLUMÉTRICO EMPLEANDO
JERINGA DE 60 mL

 Se preparará un matriz conteniendo caldo para cultivo BHI,

considerando 3.3 g del mismo para 90 ml de agua destilada.
 Para muestrear el aire se utilizó jeringas de 60 ml cada una para
cada área a muestrear, se realizará 20 aspiraciones en cada área.
 Después de realizada cada aspiración se descargará el aire
contenido en la jeringa dentro de un matraz con medio BHI. Se
utilizará la metodología de impinger o burbujeo, que consiste en
tomar aire con un dispositivo automático o mecánico y depositarlo
en forma inmediata en un medio de cultivo líquido.
 Incubación de muestras con BHI
 El matraz que contiene el medio BHI para crecimiento de
bacterias se incubará a 37°C por u tiempo de 48 horas.
 Enumeración de bacterias

 Para la enumeración se utilizará el método de recuento en placa,

con la ayuda de una pipeta se obtuvo 0,1 ml de muestra del matraz
con BHI y se vierte en una placa Petri vacía y esterilizada, a la cual
después se agregará 10 ml de Agar Plate count.
 Luego se agitará mediante movimientos suaves hacia la derecha
e izquierda y se dejará solidificar por 10 minutos.
 De ahí se llevará las placas a estufa a 37°C por 48 horas.
 Después de ese tiempo se realizará el conteo de bacterias

UFC/ml = Nº colonias x inóculo x factor de dilución

Según Norma UNE 100012-2005:

 Estándar microbiológico de superficies interiores previo a la

limpieza: Se considera INACEPTABLE la cantidad de flora
microbiana en superficies interiores, cuando el recuento es
superior a 100 ufc/25 cm2.

 Estándar microbiológico de superficies, posterior a la limpieza:

Se considerarán dos niveles obtenidos por comparación de los
valores previos y posterior a la limpieza:

1. El valor límite de aceptabilidad de flora microbiana, que deberá

ser menor de 100 ufc/25 cm2.
2. El valor de porcentaje de reducción, que deberá ser mayor al
85%.