LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD

METODO ANALITICO DE PRODUCTO TERMINADO

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE PRODUCTOS NO ESTÉRILES

1. DESCRIPCIÓN DEL PROCESO

Antes de proceder al análisis de estos productos se deben preparar y tener los siguientes
elementos: materiales, equipo de protección, desinfectantes, medios.

2. ALCANCE

Este método microbiológico aplica para el análisis de Agua Oxigenada elaborado para
DISELSA

3. MATERIALES

Cajas tripetri estériles

Cajas petri estériles
Pipeta Automática y puntas estériles
Asa para siembra
Frascos de 100ml
Erlenmeyers de 1, 2 Litros
Frascos Tapa rosca de 50, 100, 250 ml
4. EQUIPOS

Estufas para incubar

Mechero
Balanza
Autoclave
Cocineta

5. EQUIPO DE PROTECCIÓN

Mascarilla
Guantes
Traje
6. DESINFECTANTE

Alcohol 70%
7. MEDIOS

Lactosa
TSB (Tryptic Soy Broth)
Tween
Peptona
TSA (Tryptic Soy Agar)
SAB ( Sabouraud Dextrose Agar)
 LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD

METODO ANALITICO DE PRODUCTO TERMINADO

MCK ( MacConkey Agar)

CET (Cetrimide Agar)

8. PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MEDIOS

La preparación y esterilización de los medios se realiza de acuerdo a lo indicado en la

información de cada frasco de medio, el volumen a distribuir es de acuerdo a lo
indicado en la USP.

8.1.1. Caldo Lactosa

Pesar 13g de lactosa y disolver en 1000 ml de agua purificada. Dosificar 90 ml de

medio en frascos de vidrio y tapar con tapón normal y asegurar con capacete rasgable.

Esterilizar los frascos en autoclave a 121°C y 21lb/pies2 por 15 minutos. Identificar con
el nombre del caldo y la fecha de preparación, almacenar en la esclusa del área de
microbiología.

8.1.2. Caldo TSB

Pesar 30g de Medio y disolver en 1000 ml de agua purificada. Dosificar 90 ml de medio

en frascos de vidrio y tapar con tapón normal y asegurar con capacete rasgable.
Esterilizar los frascos en autoclave a 121°C y 21lb/pies2 por 15 minutos. Identificar con
el nombre del caldo y la fecha de preparación, almacenar en la esclusa del área de
microbiología.

8.1.3. Caldo Tween-Peptona

Pesar 30g de Medio y disolver en 1500 ml de agua purificada, agitar vigorosamente con
ayuda de un agitador magnético, adicional 60ml de Tween agitar y calentar hasta total
disolución. Dosificar 90 ml de medio en frascos de vidrio y tapar con tapón normal y
asegurar con capacete rasgable.
Esterilizar los frascos en autoclave a 121°C y 21lb/pies2 por 15 minutos.

Identificar con el nombre del caldo y la fecha de preparación, almacenar en la esclusa

del área de microbiología.

8.1.4. TSA

Pesar 40g de Medio TSA y disolver en 1000 ml de agua purificada, agitar y aplicar
calor hasta ebullición, hervir por 1 minuto. Dosificar 40 ml de medio en frascos de
vidrio Boeco con tapa rosca de 50ml de capacidad, tapar no totalmente.
 LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD

METODO ANALITICO DE PRODUCTO TERMINADO

Esterilizar los frascos en autoclave a 121°C y 21lb/pies2 por 15 minutos. Identificar con
el nombre del medio y la fecha de preparación, almacenar en la refrigeradora del área de
microbiología, perfectamente tapados

8.1.5. SAB

Pesar 65g de Medio SAB y disolver en 1000 ml de agua purificada, agitar y aplicar
calor hasta ebullición, hervir por 1 minuto. Dosificar 40 ml de medio en frascos de
vidrio Boeco con tapa rosca de 50ml de capacidad, tapar no totalmente.
Esterilizar los frascos en autoclave a 121°C y 21lb/pies2 por 15 minutos. Identificar con
el nombre del Medio y la fecha de preparación, almacenar en la refrigeradora el área de
microbiología, perfectamente tapados

8.1.6. MCK Agar

Pesar 50g de Medio y disolver en 1000 ml de agua purificada, agitar y aplicar calor
hasta ebullición, hervir por 1 minuto. Dosificar 500 ml de medio en Erlenmeyer de
1000ml de capacidad.
Esterilizar los Erlenmeyer en autoclave a 121°C y 21lb/pies2 por 15 minutos.

8.1.7. CET Agar

Pesar 45.3g de medio y 10ml de glicerina, disolver en 1000 ml de agua purificada,

agitar y aplicar calor hasta ebullición, hervir por 1 minuto. Dosificar 500 ml de medio
en Erlenmeyer de 1000ml de capacidad.
Esterilizar los Erlenmeyer en autoclave a 121°C y 21lb/pies2 por 15 minutos.

Una vez esterilizados los medios MCK, CET y TSA dosificar en cajas tripetri
desechables estériles. Identificar cada porción de medio con el nombre del Medio y la
fecha de preparación, almacenar en la refrigeradora del área de microbiología.

9. PROCEDIMIENTO DE SIEMBRA

9.1.1. Dosificar 10g de muestra en cada uno de los caldos: Lactosa, TSB, Tween-Peptona,
agitar para disolver el producto.

9.1.2. Los frascos de caldo TSB y Lactosa incubar en estufa a 35°C, por 48horas.

9.1.3. Del frasco de Tween-peptona más el producto disuelto, tomar 4mL con una jeringa
estéril y dosificar 1ml en cuatro cajas Petri estériles que previamente también están
identificadas. Previo a este paso se debió haber des-solidificado el TSA y SAB, cuando
la temperatura de los medios es de 30 a 40°C dosificar 20ml a cada caja Petri. Esperar a
que los medios se solidifiquen y guardar en estufa para incubar. Las cajas sembradas
con TSA, incubar por 48horas en estufa a 35°C y las de SAB incubar por 7 días a 25°C.
 LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD

METODO ANALITICO DE PRODUCTO TERMINADO

9.1.4. Al término de 48 horas de los frascos de lactosa y TSB con la ayuda de un asa estéril
estriar en cajas tripetri con TSA, CET y MCK previamente identificada, incubar a 35°C
por 24 horas. En el caso de crecimiento se procede a tomar una muestra para realizar
una tinción Gram.

10. RESULTADOS

Una vez concluido el tiempo de incubación de los medios TSA y SAB verificar si existe
ó no crecimiento, en caso de tener crecimiento se debe determinar el número de
microorganismos presentes tomando en cuenta para el resultado final las diluciones
realizadas para la siembra.
El límite máximo de unidades formadoras de colonias (ufc) por g ó ml de bacterias
aerobias, mohos y levaduras esta dado en el siguiente cuadro:
 LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD

METODO ANALITICO DE PRODUCTO TERMINADO

CRITERIOS DE ACEPTACIÓN PARA LA CALIDAD MICROBIOLOGICA

DE FORMAS FARMACÉUTICAS NO ESTÉRILES

Recuento Total
Combinado de
Recuento Total de Mohos
Microorganismos Filamentosos y
VIA Aerobios Levaduras Microorganismo (s)
ADMINISTRACIÓN (ufc/g o ufc/ml) (ufc/g o ufc/ml) Especificos(s)

Ausencia de Escherichia coli

Preparación no acuosa para
uso oral 1000* 100* (1 g o 1 ml)

Ausencia de Escherichia coli

Preparación acuosas para
uso oral 100* 10* (1 g o 1 ml)

Ausencia de Staphylococcus
Uso cutáneo 100* 10* aureus (1 g o 1 ml)

Ausencia de Pseudomona
Uso vaginal 100* 10* aeruginosa (1 g o 1 ml)

* Especificaciones basadas de acuerdo a la USP 36 capítulo 1111, página tabla 1

Las especificaciones microbiológicas de la tabla de productos farmacéuticos no estériles son tomadas de

referencia para los productos farmacéuticos orales, los límites están dados en la tabla siguiente:

CRITERIOS DE ACEPTACIÓN PARA LA CALIDAD MICROBIOLOGICO DE

SUSTANCIAS NO ESTÉRILES PARA USO FARMACÉUTICO

Recuento Total de Microorganismos Recuento Total Combinado de

Aerobios Mohos Filamentosos y Levaduras
(ufc/g o ufc/ml) (ufc/g o ufc/ml)

Sustancias
para uso
Farmacéutico 1000* 100*
 LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD

METODO ANALITICO DE PRODUCTO TERMINADO

* Especificaciones basadas de acuerdo a la USP 36 capítulo 1111, página tabla 1

11. TEST DE GÉRMENES ESPECIALES

Después de encontrar crecimiento microbiano en los agares no específicos o caldos TSB

ó LAC se realiza la coloración Gram y se procede a aislar la colonia en medios
específicos según se indica en la tabla adjunta:

TEST DE MICROORGANISMOS ESPECIALES

PRUEBA
TINCION MEDIO MORFOLOGIA DE CONFIRMATOR
BACTERIA GRAM SELECTIVO LA COLONIA IA

Staphylococcus Cocos gram (+) Agar Manitol Colonias amarillas Prueba de

aureus en grupos Salado con zonas amarillas coagulasa

Colonias
Pseudomona generalmente Prueba de oxidasa
aeruginosa Bacilos gram(-) Agar Cetrimida verdosas (+)

Agar sulfito de Colonias de color

Salmonella spp bismuto negro o verde

Colonias de color rojo

ladrillo, puede tener
Bacilos gram(-) Agar Mac zona de bilis
Escherichia coli (coco-bacilos) Conkey precipitada alrededor

__________________________
Gisela Jiménez Torres
Q.F. Responsable
LIC.918 L 4 11 31