Crioconservación

La crioconservacion es un proceso para enfriar y almacenar células tejidas o

órganos a temperaturas muy bajas o en su defecto para guardarlas para un
futuro.

Técnica de congelación en muchas porcicolas a nivel mundial se trabaja sobre la

reproducción y mejoramiento genético, sin embargo la técnica de congelación es
muy poco usada pero si se ha practicado con esta técnica los lechones nacieron
hace 30 años

Es importante esta técnica porque se puede realizar importación exportación de

semen de verracos de alta calidad genética sirve como prevención en caso de que
se presente como se presentó en Europa dejo una sote de peste porcina clásica y
se perdieron muchos animales.

Como ventajas permite inseminar un mayor número de cerdas mejoras sanitarias

ya que se evita el contacto hembra macho, evitando enfermedades de transmisión
por contacto

Permite el intercambio a larga distancia puesto que el semen puede ser

transportado con las condiciones necesarias si se conserva bien se puede
transportar de un país a otro de una granja a otra por un largo tiempo que sería
por un tiempo indefinido ya que se congelan los espermatozoides. Y la
descongelación se hace depende del tiempo que la persona lo vea necesario.
Creación de bancos genéticos, se pueden almacenar diferentes viales de
diferentes animales y con esto se crea un banco de espermatozoides de diferentes
características que requiera cada productor.

Estudio sobre la congelación de semen de cerdo, y la evaluación de la

calidad biológica descongelada: se realizó en 5 reproductoras estabuladas en
corrales de 2,5 por 3m con un alimento de 2kg de concentrado y agua a voluntad
se escogieron dos razas 2 pig 2 yorkshire y 1 landrace, con edades entre 1 y 2
años, la recolección de semen se hizo una vez cada 15 días hasta obtener 12
eyaculados en 1 mes

Para recolección del semen; se preparó al animal, se lavó la zona de prepucio,

se realizó el corte de vellosidades, el semen se recolecto en un tubo de
precipitado con una bolsa plástica adaptada al aparte interior cubierta con un filtro
de doble capa ajustada con una banda elástica. Técnica para la extracción de
semen es mano enguantada

Evaluación macroscópica para este estudio: se realizó antes de la congelación

y 15 días posteriores a este, el volumen es un eyaculado de 150 a 320 ml se mide
con un beaker a temperatura de 37grados Tª óptima para los espermatozoides
este volumen depende de la edad del animal, cuando el animal es joven producirá
menos de lo que produce un animal adulto de 3 años. El volumen no refleja la
capacidad del animal, este refleja la duración del estímulo al eyaculado. Color
debe ser lechoso, grisáceo no debe contener pus no debe contener manchas
rosadas o rojizas porque evidencia que hay presencia de sangre el olor debe ser
fresco, tienen olor particular, no debe tener presencia de orina o pus porque
representa una infección a nivel testicular del animal, consistencia debe ser denso,
opaco, y viscoso Ph de midió con papel tornasol y debe oscilar entre 6,8 y 7,4

Evaluación microscópica: se hace una evaluación antes de congelarlo y 15 días

posteriores a la congelación se evalúa la motilidad en masa, ya que se hace con
una gota de semen que seria 10 micro litros esta se observa en microscopio y se
evalúa de acuerdo con la escala de Holy Escala de Holy : se hace de acuerdo a
la formación de remolinos que son las olas espermáticas que son los movimientos
de los espermas estas deben aparecer y desaparecer del campo visual del
microscopio la intensidad de remolinos va relacionada con la densidad y el
porcentaje de espermatozoides vivos y el grado de actividad de este.

Profe: tener en cuenta la calificación

Motilidad individual de los espermatozoides

Se hace con una gota de semen con aproximadamente 20 micro litros en 80 micro
litros de solución salina fisiológica. Se observa en el microscopio y la evaluación
se hace de acuerdo a 4 movimientos que son movimiento progresivo rectilíneo,
movimiento circular, movimiento retroactivo circular, pendular, el retroactivo
  Primer movimiento progresivo rectilíneo: los espermatozoides siguen el
rumbo hacia adelante
 Movimiento circular en remolino
 Movimiento se dan por el efecto de la cola y el cuello de los
espermatozoides
 Retroactivo: va hacia adelante y se devuelve hacia atrás
 Pendular: es el movimiento del espermatozoide avanza un poco, o es
inmóvil y mueve solamente la cola.

La calidad de la movilidad de los espermatozoides se hace de acuerdo al

movimiento rectilíneo progresivo que eso evaluaría la calidad entre más
movimiento haya es mejor, entre menos movimiento es pobre

`Profe: para un procesamiento de semen cual sería la calificación tanto en

motilidad masiva, como individual con qué porcentaje pasa (procesa)

 R/Motilidad masiva El porcentaje sería el de mayor motilidad que serían

los dos últimos entre el 60% y el 80%
 En la individual también sería partir del bueno 60%

Concentración; metieron a una cámara bunker y a esta adicionaron 1 ml de

semen se le agrego 99 ml de espermicida compuesta con 10% de formaldehido
con cloruro de sodio al 0,9% este evaluaron a 40 x contaron 8 series de 5 cuadros
cada uno por 3 veces y luego se promedió de 1 a 100 es decir 1ml de semen con
99% de diluido. La viabilidad se utilizó el método blom: este método se realiza por
medio de la tinción de eosina la cual diferencia los espermatozoides vivos y
muertos, esta solución fue utilizada al 1% y se calentó a una temperatura igual al
del semen, y se observa una coloración rosada a los espermatozoides muertos a
los que ya estaban agonizantes tenia tinción rosada a la parte caudal
Anormalidades espermáticas: utilizaron rojo neutro para la morfología y azul de
metileno para el acrosoma: .

Primarias
 Cabeza
 Cuello
 Cola
Secundarias
 Separación de cabeza
 Separación de Capuchón cefálico
 Colas flexionadas
 Defectos en el cuello
 Espermatozoide sin acrosoma

Protocolo de congelación
 con el eyaculado
 obtuvieron una tercera parte del diluyente
 el diluyente se calienta a 32ªC
 Se equilibró por 90 minutos a temperatura ambiente generalmente a 22 ªC
 luego se equilibró a 15ªC por 120 minutos y finalmente se centrifugo a 800
revoluciones por 10 minutos con espermatozoides de 5 x 10)9
 En este procedimiento se elimina el plasma seminal
 Se agrega 3,5 ml de lactosa o yema este se equilibra a 120 minutos y se
llega a los 100ªC y se adiciono 1,5 ml de yema más glicerina
 Este procedimiento se hace inmediato por lo que se realiza la congelación
con nitrógeno a 5 cm de altura por durante 20 minutos
 Conforme avanza el procedimiento se va adicionando el diluyente

Protocolo de congelación
 Se utiliza lactosa 8 gramos
 Agua destilada 80ml
 Yema 20ml
 Composición

Lactosa yema más glicerol

 lactosa o yema 95ml
 glicerol 5ml

Técnica utilizada para los pequeños productores, para los grandes productores se
utiliza el comercial

Descongelación: introducir la pajilla a un baño maría de 42ªC durante 40

segundos se adiciona 5 o 45 ml de diluyente

crio conservación del semen: esta técnica de refrigeración

Profe: es importante mencionar cuales son los parámetros que se manejan

en la técnica de crioconservación
Dania: los estudios se realizaron en cinco animales pero no dio buenos resultados
en razas Landrace y Yorkshire, la técnica solo se aplicaba a animales PIC por que
presentaban los mejores parámetros en cuanto a lo que se evaluaba. Para
aplicarlas en las otras os razas debían hacerse estudios sobre tiempos del
tratamiento, tiempos de descongelación. Los únicos buenos resultados en cuanto
descongelación y viabilidad de los espermatozoides fue la raza PIC.
PREGUNTA PROFE: ¿Las razas con malos resultados no se preñaron o los
parámetros fueron bajos?
Dania: los parámetros en cuanto a lo de los espermatozoides fueron bajos porque
el estudio solo se realizó sobre la parte de congelación de los espermatozoides.
Andrés: los parámetros son bajos ya que los espermatozoides en congelación
sufren un choque térmico bastante drástico, menciona que los espermatozoides al
ser congelados van a tener un menor porcentaje de fertilidad, por lo que existen
muy pocos estudios en cuanto a congelación.
Continúa Anita
Este método es más utilizado, siguen haciéndose más investigaciones porque es
una congelación extracelular por lo que no dañara al espermatozoide
CAPACIDAD FECUNDANTE
Dura varios días y se puede utilizar diluyentes de larga o corta duración, antes de
realizar esta prueba los eyaculados son diluidos y posteriormente conservados a
una temperatura de 15 a 17°C. Las ventajas de esta técnica son:
 Permite una mayor difusión del potencial genético.
 Mayor selección: se pueden obtener lechones más homogéneos.
 Beneficio sanitario: se reduce el riesgo de trasmisión de enfermedades
infectocontagiosas vía sexual.
 Se puede controlar la calidad del esperma.
En cuanto a las enfermedades que se pueden trasmitir se encuentran la peste
africana, la fiebre aftosa, enfermedad de Aujeszky y la enterovirus.
Para tener en cuenta al hacer las inseminaciones los espermatozoides sobreviven
entre 20 y 24 horas. Al utilizar el semen refrigerado se usan las pautas de
inseminación, es decir, dos inseminaciones bajo las 0 y 24 horas o bien a las 12 y
24 horas.
PRESERVACIÓN DE LA CALIDAD DEL SEMEN: el uso de los diluyentes le
adiciona un mayor costo al semen, la temperatura juega un papel fundamental a la
hora de la conservación ya que una temperatura que no esté a 17°C va a sufrir
cambios drásticos y pueden morir.
A una temperatura se va a encontrar una menor motilidad espermática y una
menor función del metabolismo.
DILUYENTES
Juegan un papel fundamental a la hora de conservación del semen al igual que el
agua, estos permiten aumentar el volumen del eyaculado, preservan las
características funcionales de las células, mantienen el nivel de fertilidad y
proporcionan un medio de conservación de la vida.
Los diluyentes contienen una fuente de energía la cual mantiene la célula
espermática. Esta fuente de energía se conforma de glucosa y fructosa los cuales
aportan los nutrientes necesarios para el mantenimiento metabólico. Estos
diluyentes contienen el BSA (albúmina sérica bovina) la cual la protege del
cambio brusco de temperatura que hay (pasa de 37°C a 17°C), también controla el
pH de medio el cual se encuentra entre un 6,8 y 7,5 el pH es controlado mediante
el bicarbonato, controla la presión osmótica a partir de cloruro de sodio y el de
potasio y la indivisión del desarrollo microbiano; hay diferentes antibióticos como la
penicilina y la neomicina.
Diluyentes de corta duración: duran de 1 a 3 días
Diluyentes de larga duración: son de más de 4 días, lo máximo que se puede
llegar a conservar es de 7 días.
Profe menciona que hay diluyentes hasta de 14 días.
Andrés dice que estos bajan el porcentaje de fertilidad
Profe dice que dependiendo del medio pueden funcionar muy bien.
PROCEDIMIENTO:
El material a utilizar debe estar limpio y estéril, el agua debe estar purificada (se
debe utilizar agua destilada), también se usa el diluyente y el que comúnmente se
utiliza es el de larga duración. Se recoge las fracciones espermáticas del
eyaculado con el fin de reducir las sales que se encuentran en el plasma luminal.
El diluyente se diluye en un periodo inferior a 15 minutos desde la recogida del
semen, el diluyente debe estar en las proporciones de 1 a 10 a 37°C. La
concentración mínima por dosis es de 2x10 9 de espermatozoides en 100 cm3 y la
máxima de 8x109 de espermatozoides en 100 cm3, se desciende lentamente la
temperatura inicialmente se tiene una de 37°C y se va descendiendo en un lapso
de tiempo de 1,5 a 2 horas a una temperatura de 29°C y posteriormente se la
mantiene a temperatura de laboratorio que puede estar entre un rango de 20 a
25°C, luego se la introduce a la estufa a una temperatura de 16°C en la cual ya
está apta para la refrigeración.
A la temperatura de 20 a 22°C se van adaptando los espermatozoides al nuevo
medio donde se encuentran y posteriormente son llevados a conservación a una
temperatura de 15 a 17°C.
Pregunta: ¿cuánto tiempo se lo puede mantener en refrigeración?
R// Depende el tipo de diluyente que se vaya a utilizar si es de corta o larga
duración. Recordar que el diluyente es el que tiene el tiempo de conservación.
Pregunta: ¿al momento de refrigerarlo se puede decir que los
espermatozoides entran en un estado de latencia?
R// Si, se toman muestras pero previamente se calientan en el portaobjetos se
aclimatiza toda la muestra.
Continua Andrés: se debe conservar en anaerobiosis a 16°C, esto quiere decir
que en los recipientes en que van a ser llevados deben estar libres de aire.
Se debe comprobar la temperatura al interior de la nevera de conservación y no se
debe exponer el semen durante periodos largos de tiempo a luz directa. El semen
almacenado debe ser rotado cada 12 horas con el objeto de mantener el semen
en suspensión, las dosis seminales almacenadas antes de ser utilizadas deben
ser observadas en el microscopio con el fin de observar la motilidad que tienen los
espermatozoides.