& SUPERINTENDENGIA FORMULARIO UNICO DE SOLICITUD DE PATENTE PC ENTRADA EN FASE NACIONAL [—]Patontarde Modelo aa Uiitdad, Nombre 4085 VICENTE PONE ANORED, ELENA CIENFUEDOS JOVELLANOS FERNANDEZ, SiXTO ALVIN IBARRA uvecton: Autovia A-3, Ballda 343, Cami de Forront, a/n, €-48890 Quart de Pobiat, PAA Nacionalidad 0 Nomkiio _ ESPANOLA, BSPANOLA, ESTADOUNIDENSE PCTAB20a8/001075, WO 20081115160 ® compropante ‘do page No. 98.77.358 Focha ue 8 do 2008 Inetrucclones para ol diigonclamiento del proncnta formulate, vor raveran da esta pins.Anexea [EE] Comprabarte de pago Ue ta fovs Ue preneminciin de is waiictud. ‘Documanio qua ncredila la existencia y representacién legal cuendo e! seichente sea persona hake, ‘Fovdovee, el uare nl caso, junto con ka svefRuckin del miama a a fvor ‘Documonto 60 cealin del invertor al solchirte 0 8 au causarie. (Copia a I ecctlud lnbemacional (Resumen, descripdon, revincioasiones, cigs}, ‘Traduacién ds ta slic Intaracional al castellano (Resuraen, descripeiGn, reivindicaciones, d!bufcs). ‘Copla dal examon preiiminay tniemacionel efectuado por It. Asforided intemacional de Exemen Pretmines (PEA). ‘Traducoiéin del examon profirer intamationsl eteclusdo por la (PEA. Do sor ai caso, copie del conirala deacon, TE] tots tet [2] Doser el caso, infarmacién sobre cles sojiciudes de petenis 0 uaa cbtanidos en el cxresyert pot el mismo tir (0 aU oeusante, relacionadas parcial o lofviments con la iavencion du asta wuliitud. (Be mar al caso, modificecionas sfechwudvs i ka solicited tniemacional. Ovos ‘Tarjats Propletesto, Tarjuta Temilica y Extracto pava la Publleacién Inetrucciones pam ol dfigenclamisnto dol presente formulario, ver reverso de axta pigina. - mingen. 6080-1‘LIDS VE AID APLICANG ML EXPEDIBITE He, qe Smo oe rears 1 cose RIT 1 coeL74ee2 ELIE CFNCHM CC CAR Ok = 77,338 13a + GWUME 6 5E 008 se COMSTOAACI OR tte gg res come beet rerman cseeIE SSOVSSN GUNES 1,56,008.00 4 S009 Si-st souicrremes TRANITES BE SOL, BE PATENT Co tt 463,000.07 mma 5,800.00 S08 SAATRICILATOS SESENTA Y TREE IL FES _ ifALVARO CABTELLANOS A. BCIA, ABOGADOS Cale 94 ANG. TAGE ‘Aparada 6348 6107420 gets, B.C.— COLOMBIA ‘Seftor Jafo de la Diviaién de Nuevas Creaciones: ‘Superintendencia de industria y Comercio Ministerio de Comercio, Desarrollo, Indusiria y Turismo & s. o. Ref: PODER conferido por NATRACEUTICAL, 5.4. Yo, XIMENA CASTELLANOS ABONDANO, mayor de edad, identificada y domiciliada ‘como aparece al pié de mi firma, atentamente manifiesto a Uds. que sustituyo en la Dra. MARGARITA CASTELLANOS ABONDANO, el poder que me confirid RATRACEUTICAL, SAL con domiciloen autovia A-3, Salida 343, Conf 1» E-46930 Quart Ue Poblet, 1 debidamente legalizado por Apostila bajoelNo. 12381 -@dia 20 de Septienbre da 2006 ——-———-, con Jas mismas facultades que me fueron conferidas, para tramitar la solicitud de Patente PCT Entrada en Fase Bacional, en Colombia, para: "PROCEDIMIENTO PARA PRODUCIR CONCENTRADO DE POLIFENOLES DE CACAO". AE fe Mesos hase C.C. No. 38.773.330 de Usaquén C.C. No. 39.779.664 de Usaquén LP.A, No. 58.236 del C.8.J. T.P-A. No. 70.819 dei C.S.J. Calle 94 A No. 7 A-09 = Bogota Calle 94 A No. 7 A-09 - Bogota PBX: 610 74 20 PBX: 610 74 20 D.C. ‘6080-rwrcrADR Ea RTE TUE eaten £ ADTENTICACION DE FIRMA fi MROLANTE COMPARECENCIA FERSOHAL (0. C4 EAC. moc Beet 2782 de 1089, ort. 1 mod. 38) Cunrents y Uno (41): 18 GLI INGE LTE SOIS: & AGTERTICACION DE FIRM: & upo:aate companecencla Peasnusend/2006 ; Wetario de eata Capital y de su lustre Colegio, era ncLuNDro MORNE es te 7H4418519 {ose CUTE GHORNET cuncven ¥ PODER EYPECIAL. En VALENCIA, mi reaidancda, # yeintiocho de julio de dos mil seis. Ante mi, JOSE VICENTE CHORNET CHALVER, =+-COMPARECE: - DON JOBE VICENTE PONE ANDREU, wayor de edad, solte- ro, veedno de Valencia, con domicilio en calle Denis, con O.N.I./¥..F, 29,161.68 DON JOSE VICHNTE PONS ANDREU interviene en nom- bre y Yepresentacién, como apoderado, de la sociedad wercantil WNATRACEUTICAL, 4,A., resultado de la trangformacién en sociedad anénima de ln sociedad de xesponssbilidad limitada del mismo nombre (antes BX- TRACTOS MATRA, 8.L,) de duracién indefinide, domici- lasda en Valencia, Plaza de América, 2-9* y C.I.F. Dimers A-96164662. Fue constituids come sociedad de responsabilidad limitada en virtud de escritura autorizada por 6] Nota-i rio que Eue de Valencia, don Vicente Eepert Sanz, el 1 de julie de 1.993. Adapté sup Estatutes a la legalidad vigante en virtud da escritura autorizada por el misma Fotario, a 28 de mayo de 1,998. --- Inscrita en @l Registro Mercantil de la Provincia de Valencia, al tomo 4.614, libro 1.924 de la seccién general, folio 196, hoja nimero V-28,554. --~--=--~- ‘vansformmda en sociedad antnioa en virtud de en- eritura auterizada por el Notario de Aleanar, don Agus- tin Verdera Server, en fecha doce de septiembre de dow mil dos, atmero 1.918 de protocolo, debidamente inacri- ta en el Ragistro Mervantil, ---- Regulta su representacién paxe el preseate otor- gamiento de la faqultades de le fueron conferidas jexitura de fecha 4 de noviembre de 27.005 auto- rizada por don Aguatin Verdere ever, Notaric de Torrent, némero 1.732, copia sautorisade de ia cual me exhibe y devuelvo al coaparecients, que causé 1a ingoripcién 5&*, hoja V-28554 en el Registro Marcan- tl de la provincia de Valencia en 1m, de la que re- sults con facultades para "conferir poderes a cual- quier persona, generales, mexcantiles o especiales,04/2006 7H4418520 to de su cargo como de la sociedad ‘que representa, en @1 momento del presente otorgamiento, sin limitacién sumpensién ni revocacién algunas. ----«--- Sus datos resultan de la documentacién que me ex- hiben y de sus manifeotaciones. ~---JUXCIO DE CAPACIDAD: ------------~ : Tiene, a mi juicio, 1a capacidad legal necesaria para otorgar esta escritura de APODERAMIENTO, conforne @ minuta que me presentan, que yo, el Notario, trana- cribo literalmente y, a tal efecto, --------- eoawueeees Beene aera neeeanenet DICE: ----+ Que por medio de este instrumento, su represen- tada OTORGA PODER BSPECIAL pero tan amplio y sufi- edente cuan en derecho se requiere a favor de DORA XIMBHA CASTELLANOS A. y DOHA MARGARITA CASTELLANOS A., abogadas con oficinas en la calle 94 A No. 7 A-09, Bogot4-Colombia para obtener la protacciéni de la propiedad industrial de la poderdaate, y con este fin autorizamos a dichos apoderadon para que representen a la sociedad poderdante anze cuales- quiera autoridades o personas de los ordunes admi- niatrativo, contencioso-administrativo y judicial en todo lo relacionado con los siguigntas actos y ae aaeas 8) Obtencién de patentes de invencién, modelos y dibujon industriales; registro de marcas de fabrica, de servicio, colectivas o defensivas y de denominaciones de origen, dep6eito de nombres y enseflas comerciales; su renovacién , prérroga, inscripcién de traspaso y cambio de nombre o domicilio, cancelacién voluntaria y el registro de licenciss de uso de esos derechon. b) Fara la obtencién de registros caniterios. ¢) Acciones de oposicién, observacién, cancela- cién, nulidad, medidas cautelares y en yeneral los Juicion civiles, penales, adminietrativos contencio- ao-administrativos que promueva la sociedad poderdande © le promuevan a ella. Pudiendo en todos los actos y gestiones arriba men- ustituir este mandato, transigi:, desistir,rn DeLeon NOIRE ee re 7H4418521 04/2006 recibix, cancelar, renunciar, sceptar 1 2tificacioned/y nombrar apoderados judiciales y extrajudicial Este poder ratifice la validez de todos los actos Y solicitudes que, a nombre de la porerdante hubie- gen realizado los apoderados en relacién con lag fa- cultades anteriormente enumeradas, antes del ctorga- miento del presente poder. - LAUSULA DE PROTECCIGN DE DATOS De acuerdo con lo establecido en la Ley Organica 15/1999, 1 compareciente queda informsdo y acepta la incorporaci6n de sua datos personales a ‘os ficheros au- tomatizadon existentes en esta Notaria; datoz que « conservaran en la nisma, con caracter yonfidencisl, al estar umparadon por el secreto del protocolo, sin per- juicio de las remisiones de obligado cumplimiento im- puestas por la normativa vigente. 7 '--- QOTORGAMIENTO Asi lo dice y otorga ante mi, Notario, después de hacerle las reservas y advertencios lega: cialmente: -- - Las fiscales, advirtiendo de laa obligaciones tributarias que incumban al otorgante derivadas deeste poder en su aspecto material, formal y sancio- nador, agi como de las consecuencias de su posible inexactitud y de las afecciones legaies. + ¥ las relativas a la Ley 6/1.989, de 13 de Abril, de Tasaa y Precioo Péblicos, en relacién con cuya Dis- posicién Adicional Tercera queda reflejade en esta ma- triz la liquidacién de derechos arancelarios correspon- dientes a la miama. ------ Advierto eopeciaimente do la conveniencia de que en caso de que eote poder sea sustituido > se desig- nen subapoderados se ponga este hecho en conocimien- to del poderdante con 1a mayor diligencia. ---------- AUTORIZACION Leida por m{ esta eocritura, por renunciar el c mpaxeciente al derecho que le advert{ tenia a leerla por si, se ratifica en su contenido y firma conmigo, Notario, que dey fe de la idvntidad del otorgante, de que a mi juicio tiene capa:idad y le- gitimaci6én para este otorgamiento, de que el congen- timiento ha sido libremonte prestado y de que el otorgamiento se adecua a la legalidad y ao la volun- tad debidamente informada del otorgante o intervi-‘eres erasers oct memes i ei * tp 74418522 rei , Pa 04/2006 niente, y de estar extendido este inatrumentof en rie y ndmero 7H4418516, dos sigui en orden y faté la firma del compareciente y mi sello, sig- no, firma y rdbrica. CONCUERDA con ou matriz a la que me remito y a xequerimiento de 1a parte poderdante, libro COPIA en cuatro folios de papel timbrado, serie 7H, némeros el presente y los tres anteriores en orden consecu- tivo, que aigno, firmo, rubrico y selio en Valencia, e1 uno de agosto de dos mil seis. Doy fe.octe2ae $041) (Raul Decreto 2433/1078, do 2 do ockube:}aha er Racivan NORTE ee re 7H4408236 Seleene tance 04/2006 MOMERO MIL DOSCIEWTOS BESENTA ¥ OCEO. CESION, -------- En VALENCIA, mi reaidencia, a vedutiecho de julic de dos mil seis. ---- Ante mi, JOBE VICENTE CHORNET CHALVER, Notario da VALENCIA y de su Iluatre Colegio, ------ e i COMPARECEM DON HONORATO MOWEZEO OLTEA, mayor fe edad, casadu, vecino de Paterna iValencia), Calle 22;, n* 63 la Cuie- da, con D.N,Z./N.I.F. 2%.157.116-, DOM JOSE VICEWTH PONS ANDREU, mayor da edad, solte- ro, con domicilic a estes efectos en Autovia A-TRES, selida 343, CANI DE TORRENT, S/N. Quar- de Doblet (Va- lencia 1(C.P. 46930}, con D.W.2./N.2.F 29.161.688-5. ~ Dofia ELENA CIENPURGOS-JOVELLANOS FIYUANCEZ, mayor de edad, canada, con domicilio a aston efeccos Butovla A- ‘TRES, salida 343, CAMI DE TORRENT, S/N. Quart de Foblet {(¥e- Jencia) (¢.P. 46930}, con D.N.I./N.Z-F. §3,.528,223-R. -~: ¥ DOW SYXTO ALVEH IBARRA, mayor “@ efad, casado, con domicilic a estos efectos en Autovia A-THES, palida 343, CAMI DE TORRANT, 6/8. Quart de Poblet {Valencia}en {C.P. 46930}, con N.I.B. X-4068807-s. Sen Ge nacionalidad espafiola los tres primsros y estadounidanse el ilrimo. ---- INTRRVRNCION) DORA ELEMA CIEMFUXGOS-TJOVELLANOS FRRWAMDEZ, DOW SIRTO ALVIN IBARRA y DOM JOSE VICENTE FOWS ANDRED an su propio nombre y dexecho, como inventoses, y DOW MOMORATO MOWZO OLTRA, en nombre y representacién, como apoderada, de la mercantil NATRACEUTIGAL, 4.A. retultado de la teensfoxmecién en sociedad anénina da la sociedad de responsabilidad limitads del mismo _ Hombre {antes EXTRACTOS HATRA, §.L.) de duraci6n in- definida, domicilia#s en Valencia, Plaza Ge América, 2-3" y C.I.F, némero A-96164882. - Pue conetituida como sociedad de responsabilidad limitada en virtud de escritura autorizada por el Nota- rio que fus de Valencia, don Vicente Espert.sanz, 61 1 de julio de 1,993. Adapt6 sus Sstatutos a la leqalidad vigente en virtud de eacritura autorizada por el mismo Notario, a 28 de mayo de.1.998. Ineerita en el Regiatro Marcantil] de la Provincia de Valencia, al tomo 4.614, libro 1.924 da la secciénbaf2n0s ee RUN YAW FMEA te : ap 74408237 va avtorizada por 9], Notario da Alcanax, don Agustin ver- dera Server, en facha dota de septiembre de dos mil dos, ndmere 1,018 de protocols, debidamnte inecrita en ol Re- gigtre Mercantil. --~ BL seflor MONE OLERA ect legitimado para el presente otovgumianto en virtud de poder otergedo en eaeritura de elevaciéu = pikiicos de atuerdos sociales autorigada pur #2 Notario de Torrent, don Agustin Verdern Sexver en fecha cuatro de noviemaze de dos wil cinco, col. aimexo 1.732 de protocala, que causs la sé", inseripei6iy el el Hegsatzo Mercantil de la Provincia de Valencia; euyn copia auturi- vada we ha exhibido, con facultades, qua a mi juicio son suficientes para el otorganiento de la presente escritura. Me asegura @1 compareciente la plena vigencia, tan- te de gu carge coma de la gociedad qus representa, en el momento del presente otorgamiento, sin limitacién puspensién ni revocacién algunas, ~+----«----- De su capacidad legal, segin interviens, juzgo cu- ficiente, a mi juicio, para el otorgamiento de le pre- sante escritura de CEBION, ------ tenet cent cee e cree eee foate el ‘TDENTIFICACION: Les identifico por medio de sua documentos de iden- tidad antes reaefiadoa que me exhiban. ~--- eae wene---mme JUICIO DE CAPACIDAD) =:= Juxgo a los sefiores comparecientes, segin interviens, con capacidad y legitimacién cuficiente para otorgar la presente eatritura conforwe a winuta que me presentan y qua ye, Notario, transcribe litermimente, y al efecto, -- OroRGA DORA ELENA CIENFURGOS-JOVELLANCS FERNANDEZ, DOM SIXTO ALVIN IBANRA y DON JOSH VICENTE PONS ARDREU ceden en cate acto & NATRACHUTICAL, §.A., todor loa derechos y tituloa sobre Jn invenci6n, realizada por ellos dentro del horario laboral en Natracoutical, §.A., denominada "F20CESO FARA PRODUCER. POLIWENGL CONCENTRADO UB CACAO". Dicha invencién tiene soliaitud de patinte nfimero 4a gelicitud Internacional PCT/I B DOH CERO CERO CIuCD/ CERO CERO UNO CHRO SIETE CINCO, cuys clasificacién de Patentea internacional ea A VRINTITRES G UNO/CERO CERO, © CBRD SIETE & GESENTA Y TRES/CERO CERO, titulada “PROCESO PARA PRODUCIR POLIFEWOL CONCENTRADO DE CACAO" ¥ presentada en ESPAGA (ES) 1 dia VEINTICUATRO DE MAYO98 Meer RMR MIE ae in ..7H4408238 n4n2v06 : eet / " DE ROS MIL CUATRO, Bn este mismo acto el seior DOW RONORATO ZO OL- TRA ¢n su condicdén de apedarado de la empresa NATRA- CEUTICAL, 5.A, acepta a nowbre de cu representeda el tragpaag que por medio de este acto hacen los invento- ep en su condicién paracnal. ; ACEPTACION ¥ OTORGAMIEMTO Aoi lo dicen y otorgan, Hechus las rogervar y ad- vertencias legales, sepecialmente las prevenidaa en e@), articule 98 del Real Decreto @28/S3 de Jas demic obligacion: tributaries que a efectos fiacales in- sumban a las partes, en su pecto material, formal y pancionader, asi como de lag consecuensias de sua po- sibles inexactitudes. -: Leida por mf esta escritura, por renunciar los comparecisntes al derecho que les adverti tenian a leerla por si, se ratifican en su contenido y firman conmigo, que doy fa de la identidad de los otorgan- tea, de que a mi juicio tienen capacidad y legitima- cién para este ctorgamiento, de que ai consentinien- to ha sido libremente prestato y. de que al otorga- wiento se adecua a in legalidad y“a ‘ia voluntad de- ibidamente informada de los otorgantea o intervinisn- tes. y estar extendido en trea folios de papel de ugo exclusivo notarial, serie y nfimero 7H4408228, 74408229 y 672760343. ------------ eannen nna ee eee nnee Eutén los firmas de low comparecientes y mi so- lo, aigno, firma y xibrica, ------------ seers CONCUERDA con su matrix a la que me remito y a requerimianto de los interesados, libro COPIA en tres folios de papel timbrado, serie 7H, némeroa el presente y los dos anteriores en orden ccnsecutivo, que cigno, tirmo, rubrico Jlo en Velancia, el cuatro ds agosto de dos mil seis, Doy fe. ----------- esriaucaELFQUO HABILITADO PARA LEGALIZACIONED POR BL ILUSTRE COLEGIO MOTARIAL OE VALENCIA, Este follo ha quedady unido con ¢! sello de este tlustre Colegio Notartal a la Copia ‘Autorizada del instrument pdblico ororgado ante: D.JOSE VICENTE CHORNET CHALVER otarlo de QUART DEPORLET ‘el dla 28/07/2006 con el nimero 1268 de su protocol. OY5888477 ‘Apoatile (6 Legaitzacion dnicay (Convention de In Haye du 5 october (Real Decreto 2433/1978, de 2 de oct. 4 Pala: Eepaiia El presonte documento piblico ‘2-Ha aldo firmade por 2. JOSE VICENTE CHORNCT CHALVER + Actuundo on calidad de MOTARIO 4- Se halla seltadoftimbrade con SU SELLO CERTICADO S-En Valencia 6-61 20 seprienbra 2006 T- Pot Joaquin Borrell Garcia, Decane det Cotoghy Notartal de Valencia &-Con ot ndimero [7348 / 2008 1961) bre) 12a13° 10 15 DESCRIPCION La presente invenciin sa refiero a procedimiantos para obtenor productos de eacao que son ricos en polifenctes de cacao en fos que los materiales de partida son granos de cacao sin fermentar. Més especificaments, la presente invencion deavela un procedimiento para producir concentrado de polifenoles de cacao liquido ¥en polvo a partir de grancs de cacao sin fermentar. En la actualidad hay un gren interés en polfenoles de cacao no edo por su contribucién al ssbor, sino Inmbién par su actividad antioxidants y sus posibles @fectos beneficiosos para is salud. El conienido total de polifencl en granos ue cacao in formentar froscus clesgrasados y desecarlos puede variar on # Interval del 12 al 20% en pero, Los principales comuresios da jxiflenol presemios run flavonoides monoméricos como (+}-calixmina, (-Hepicatequina y flavoneiion oligoméricos como proantocianidinas, da los que ta mitad sun dimeros (81-68). Otros compuasios que so han idoniificado son quercetina y ghicésides de quercatina, luteolina, apigenina y aickios cumético, cafeico, corogénice y otros. ‘La fabricaciin de cacso implica fernentaciin, durante la cual se producen Muchas reacciones bioquimicas para desarrollar los componenies y precursors de calor y sabor da chocolate. Los procedimientos de fermentacién, enlre otros, feducen ta aatringencia, fa atidez y el amargor del cacao, Durante el procedimiento de fermentacién, se aplian granos de cacao frescos en una pia o en una caja de madera, nomelmente durante 5 dias, La fermentacién puede dividirae en dos fases principales, fermentacién snaerobia y fermentaciin erobla, Durante la fermentacién angerotwa, se forman lon precursores de sabor del cacao. El aziicer de la pulps del fruto se descompone er: os azicares reductores, fruciosa y yhicusa, y Ine jwoleinas 6a desconponon er: péplides y aminoAcidos libs Fslus prochicios forman hs precusores tle la reaccién de Mallard on la «que se dasanolian los salxsey caractertalics del case y el chocolate ducante el secado y lostado da tus yranos. La fermentacién anserubia optimiza [as condiciones para al perceamiento enziindtico, una reaccion reaiizada por polifenchoxidasa (PPO). Nonnsknente, ta fermentaciin serobio comienza después del segundo dia do fermentacién. En esta fase, fe PPO calalize la ‘oxidacién de fenoles en orto-quinonas, que son compuestos ellamente reactivos. Una vez formadas, las orto-quinones experimentan polmerizaciin esponténea pare roducir compuestos de allo peso molecular o pigmentos parios (melaninaa). Estas metaninas pueden reaocioner a su vez con aminadicidos y proteinas que intensiican 410 +3 el color pardo, Estos polimeros connensados de alto peso molecuisr ve hacen creciantemente Ineolubles cuando sumenta ef grado de polmerizacién. Adomds, tienen menos biodisponibliidsd que sus precursorcs. Les condiciones durante la fermentecién aerobia son ideales para reacciones con PPO, y la sita captacion de ‘oxigeno durante el secado promueve mas la femmentacién. ‘Muchos estudos se han centrado en inhi © impedir la activided de PPO en ‘oa slimentos. Se han desarrcfiado diversas técnicas en el curso de 108 afos para Inhibir estas actividades enziméucas indeseabies. Varian de estas ttcnicas pueden epicarss pera impedir el pardeamienio enzimético. Por ejemplo, en el articulo Utulado "The manufecture of pulyphonols of cocoa es healthy supplements bn food Products", Katlanberg y col. describan el uso da calentaniento por microondas pare Impedir la actividad de PPO en yrenos sin feamontar. EI uso cle inicroondae os, sit embargo, caro, ya que se requiere un equipo especiaizado. Ademds, cuando se usa tratamiento de microandzs es difil controlar la temperatura en lus granus sin fermenter. ‘Los granos de cacao ain fermeniar no tienen ol mismo perfil organoléplico ni ‘el mismo perfil de poiifenoles que los granos de cacao fermentados. Los granos sin fermentar enen un gusto muy amargo y eatringante con ascaso saber a chocolate parents. Durante el procesamiento del cacao, el conlenido de favonoles (monémeros) presantes en loa granos de cacao en brulo originales sin fermentar dopende prindpalmente. da ia manipulecion después de ta cosecha y de tos técnicas de procesamienio. Las elepas de fermentacién y sicatinizaciin en ta fabricaciin de palve de cacas y chocolate pueda reducir enormemente el contenido ‘en monémeros. Durante fa fermontarién, ef rihnero total da fancies en cacy a reduce af 30% de su valur Inicial y In (-) cplcalequing, of sitsttala principal do poltenctoxdasa (PPO) de coca, se reduce en ef 80% can un mumeitio proporcional en contenido de caleyuine, Los procedimientos do fermentaciin y secado aiteran el conterikla y composicion de compuestos polifendiicos. Los granes de cacao fermeniodos contionen una cantidad menor de fencles de bejo peso molecular y un contenido més afo de polifencies condensadca. Los pollfencies condensados participan en Interacciones proteina-fenol y pueden contribu a la baja digesiibiidad y el eecaso valor biolégico de fenoles y proteinas de cacao, Los estudioe han demostredo que fos polfencies de cacao aumantan fa IS10 15 2 “4. reslstoncia de oxidacién LDL-C y la capackied antioxidants del plasms, modulan la ‘actividad de plaquetas, aumentan la sintesis de éxido nilrico y ta vasodilstacion, ‘modulan la sintesls elcossnokle, protegen frente peroxinitrto y modulan el ‘sistema inmunitario. Los polifencies que son més abundentes en nuestra diets no eon ‘necesariamante los més benoficiosos, ya sea porque se absorben deficientemento en 61 Intestino y sa efminan répidamente © porque sus melabofios tienen una actividad Intrinsece baja. Los flavonoles monuméricos eo sbsorben major quo tas proantocianidinga palinerizedas. Varive ealixlivs deniuesiran que Ins prosniocianidinas no son absorbilss en al eutémago y asl su occién oe resiringa al Intestino, Ademe, los flavonolos monuméricos, como catequinas y epicaledyinos. tienen més actividad anlioxidante en estudios tn vitro @ in vivo con respecto a plasma, Por tanto, esta claro que existe una necesidad de un procedimiento sencalo ¥ econémico en el que puedan extraerse polifencies de granos de cacao sin fermentar en el que tos pollfenoies no experimenien polimertzacion al sar ccatalizados por ta enzima polfencl-oxidasa. La prosenie Invencitn proporciona un procedimiento an el que se abtieno el concentrado de pofencies de cacao, que comprende las etapas de: 8) someter granos de cacao sin fermenter @ una etapa de blanqueamiento en agua a una temperatura en el intervalo de 85 @ 100°C durante un parlodo de tempo en of intarvalo de 3.9 15 minutos parm dar granos de caceo sin fernnanter ‘con actividad reduckia de pulllenol oxidasa, b) secar los granos de cacao sin fennentar con activilnd reduckin cer pollfeno-oxidasa a una temperatura inferior 9 85°C para oblener granos de coco ‘sec08 sin fermenter con un contenido de umedud da no miss del 15% en peso: ©) sometes fos prancs da cacao secus sin fermenter a una etapa de reduccién del tamafio de particula para obtener producto Inlemiedio de granos de cacao secos sin fermentar en el que al menos el 99% en peso del producto intermedio tiene un tamafio de particule inferior o igual a 300 pm; 4) extraer polifencies del producto intermedio de granos da cacao eecos sin fermentas para dar un extracto de polifenalas de cacao y séiidos extraklos; ©) concentrar el exiracto de poilfanoles de cacao para producir un concantreda de polifencies da cacao en el que la concentraciin de pollfancl presente es al menos dal 10% en peso, y en el que el provedimiento compronde I10 20 ademis una etapa de deagrasade que a eva @ cabo antaa de ia etapa d), (Cuando se uta of tieminn sin fermentar, se reflero a granog de cacao que s° han extrakio da la vaina hece un maximo de 5 horas. Mas preferentementa, los granos de cacao se han extraido de la vaing hace mancs de 2 horas. Le Fermentncién ea un procedimienia que ocurre neturalmente desde de que los granos de cacao €a hayan extraido de la vaina en condiciones de calor y humesiad: Al ser un procediiniento natural, ccure en una escala do fienpu rolativaments denta y, ae, un grano de cacao que 6a ha exiralds de Ia valna hace oO S hores esterd susiancdulmente sin formeniiv. Oeste un punto de vigin comercial, es difloll enconvar una fuente cle uiutios granos, En una farma de resticaién de la presente invancion, puede incivires praferenietmente un etapa anicrior a'la sepa a) pam maniener el esiade 110 femmeniada de es gros de cacao ain fermenter, Dicha elapa pueds liv, por ‘ejemplo, inmexsién de fos granas de cacao sin fermenter en una solvcion de agun y ‘ékéa nactrbico, La incusién de-la-etnpa a), la etaps de blanqueamienta, as esencial para garanfzar que se produce la palimarizacién minima de los peilfencles y, aal, po conserva al ato contenido de polifenolas monoméricos presantas en los granos da cacao sin fermentar. La gtapa de blanqueamianta se fieva a cabo en agua a vie temperetura en ef intervalo de 85 8 100°C, Esla temperatura gerantiza qua by enzima polifenc-oxidasa so desneturliza y, asi, se inacliva, La etapa do blanqueamienta deberfa duet un perfodo de tlampo en el Intervalo de 3 a 115 minutes. SI la durackin de la eau frera inda larga, pexiian produckee otras, maaccones indeseables de no pardwanieniv enziniétina como Is reoccks le Mallierd, El uso de agua en in elapa da blanjeqmniaribo rip es convancioevl, ya que la practica habliual seria evilur quo los gianws de cacao sii feunerior ca humadeciaran por la razén de que cuatquiar humedad wiedida debe allmineree en ‘una elzpa posterior, Les soliilanies han encontrado, sin émnbergo, que la inclusion do una etapa da blanqueanierto usando agua produce un resultado benaficioeo ely ‘el que una alta-proporcién de los polifsncies presanies en él grano de cacao sin fermenter orighal se recuperan. Después de la ctapa 2}, los granos de cacaa sin fermentar con actividad reducida de polfenotoxidasa se secan. El contenkdo inicial de humedad en un grano fresco ain fermeniar eld one /}1 45% en peso y el 56% en peso. Después ded secado, el contanido final de humedad daberia ser inderiar al 15% en peso, preferentements inferior al 10% en peso, En una forma de realizacién de la presente invencidn, en éreas on las que al tiempo matearokigico 68 seco comparativamente en el mamemto de la coseoha, 10s ‘grange de cacao sin fermentar con actividad reducida da polifencl-onldass se secan al scl Los granos se ‘exllenden en una caps da 100 mim de grosor eproxtmadementa durente Ise horas de sul sobre esleras, artesas © torrazas. Los granos se reeirillan c Intarvaice y a¢ apilan y 5 protegen por la noche a cusuy llueve. Les aresns, comy es cumin en /unética conlral y del eur, pucetan ser suekis completos can un fecho o ir sobre ruodas. Sa cinpijait nuevamnente ef suolo por ta noche, de manara que pusdan skuorse bojo techo, unea enckue ee otras, pan ahorrer eepnolo, En Africa oceldental, los gronos se exilanden en cvaiquier supertice harizonlal adacuada (98 leek, Une lerraes de concentrado 0 wie planeta de polietilenc). El procedimienta proferide, qua ak comin en Ghang, congisle en ‘extender kes granos en asieras hechae de bambi hendido, que se colocan en. amazones de. madera bajos. Les esteras punden enrollarse para proteger le ‘granos cumndo llueve. Eata procedimiento Jene varies ventajas porque as me [él Clasificar lea granoa pars eliminar los pranos dafectuocas y el material extrafio. Ademés, existe menor riasgo de conlaminacion an comparacién con dejar fos ‘Qranot secarse af nivel del suelo. Habitualmente have fella menos de uma semarie de (iempe soleado pera secar los granos @ eiira el 7 ¥ et 8% en peso de contenido do humeded necesarion pora evitar que ca ermofezcan durante ol aimacenamiento. Alemalivenienie, ert la clapa b), lon yrauns de cxeve sin tormentar on sciidadl redhuckda de poillenol-oxikdana pucxton secarse usairdo sacotboros ¢fe aire callerie {es dacis, secaciiren inleumuilentes, secadores de reuirculnalin hwerna por loles, secadores de flujo mito y secatkwes de fujo Wansveroal), secadorse us wie sin calentar, una combinaciin de socadores de alie calienta y cin calendar, secedores de grano comerciales {como secadores de inelta), secadores par lolec i lacho fluidizado, eecadoras de contacio # presién normal o al vacio (¢ decir, artesa de vadio, banda da vaclo, placa, pelicula fina, tambar, late colalotio, ayitados horizontalmenta, agitades én vertical rotatorics indiractos) © sevedores dfsiéctricos {es decir, radiofrecuancia y mlcroondas). En ha etapa b), la tarnperatura en el grano no debe suparar los 86°C y debe ' 1°10 8 +7 ‘2ar proferertemente inferior 2 70°C, tie pralorentemerte Inferior a BO°C. Esto ne debe a que la pollmerizacién do poffenctes de cacto tiene lugar a tamperahures por encima de 70°C. Por lario, #8 neceaaro mantener temperaturas bajas durante 1 Procedimiento de secado. Cuando se usan secadares disiéciricos, debe saleoclonaree una frecuencia aproplads pera evitar le polimerzaciin. Por sjamplo, on eecedores da radiofrcuencia, son epropiadan loa frecuencies entre 15 y 38 MHz, y en él ca60 de cacadores de micoondas pueden uearse frecuencias de enire 000 y 2.900 MHz. En foe granos da cacao sacos sin feinientar obfonidos en fa etapa bj, v2 consarve una gran proporcién cel cantenido inicial de polifencl. Exto se date al inactivaciin de PPO y 2 lea condiciones suaves que Intliwe! Lanta Ie degradackée como Ia polimerizacion de ios patferioies. La caracterisfica principal de estos granos de cacao eecos eh dermanint ws su inlaneo color violeta que refieja ia -estebilizackin de! polifenci, 1 contenido de polfenol on las mupstras pusde medias weary Uro de varios procedimientas. El procadimiento més comin usado es e! prooedimiento de Folin-Ciocalteau,. qua.da eI resuftado expresada en % en peso (Singleton y col, 1000). Adams, pueden usaree olras melodologias para la identificacion y cuantificnolén del perfil da los polffanoles como. por ejemplo, slimes cle " cromatografia fiquida de- ale prosién (CLAP) y eapectrémetro de masas, CL-EM, CLAP acoplada con detaccién UV, Extraccién de Fluidos Supercriica (EFS), CLAP vsanda doble datecciin en nea por sepecirofotomelria da matiz da diodos, esneciroscapls de meses (CLAP-DAS-EM) y también CL-RMN. : Opelonaimente, lon gravion de cacao secas sin fermenter obtenklos ert le etapa b) pusden daamanuzaree. Adeinds, puede aplcnise un procevinienty ae 100°C eatediizaciin por vapor}, mecdnicaments estables y quimicamente inertes. Algunos ejemplos de asin clase de membranes son lus producktos por Atech innovations GmbH, Pal ‘Corporation (es decir, Membralox) y atros. En microfitredo pueden usarse también membranas pollméricas, Dichas membranas estén hechas habltvalmente de poliproptienc, pollvinildeno, fuoruro, olitetraftucroctiiono y poliectionitrio. Las membranes adevuadas incuyen las roducidas por Koch (es decir, MFK-G18, MFK-601), Alfa Laval y altos. El extracto de polifencics de cacao jxualucide en ta etapa d) contiene una Proporeiin muy nits de los patferiolan que estaben presentes en el granc de cacy ‘sin fermentar, por ejemplo, of manos el 80%, Sin embergo, cl exiracto os muy Giuido, Por tanto, es necesario inchir una etepa de concentracién (etapa e) an ef procedimiento de la presente Invenciin, El proptsito de inclu esta etapa an eiminar cualquier exceso de liquide o disolvente para producir un concentrado de polifencies de cacao. En una forma de realizacion preferida de la presente Invencién, al extracio de polifencies de cacao se concentra usando ultrafiltrado. El uttrafitrado (UF) se ‘una pare separar las molécuas més grandes del extracio de polifenoles de cacao, EIUF implica ol uso de grandes membranas parosas y una presién bastante baja. ‘Se dejen pasar aales, azicares, écidos orgénicus, péptides pequetion y polifencies, mientras quo tas proteines, las grasaa y los polluacirklos son techazados. Para esta allomaliva puedo usarse un UF. Este sistoma dove ser capex de separer moléculas mayores qua 10.000 ilaltons (@8 decir, didmeho de membrana enire 0,05 y 0,1 um). Las mombranas UF estiv hechos hetiluatmente de cerémica, material celuldésico, poltsulfona y fluorury de pallinilideno, entre otros. Por ejemplo, so obtlenen comerciaknenla membrenas tubulares, de fibra twece, de ldminss y espirales. Aigunos ejemplos de dichas membranes son loa proporcionados por Koch Inc, (HFM-116/100, HFM-160/513, HFK-616), Alfs Laval Inc.. Inge AG Inc. (eerie Dizzer) y otros, Dichas membrangs operan a un intervalo de presién comprendido entre 70 y 700 kPa (20 y 100 psi). En la UF desefits en esta invencién, précticamente todos los polifencies pasen a través de la membrana y edlo una pequefia freccién permanece en al15 14. retenido, La pérdida de polfencies en el retenkio no debe ser superior al 10% en peso, preferentemente inferior al 6% en peso Begin se refiere en los sdidos auelos totales en el extracto de polifencies da cacao o el extracto impio de polifenoles de cacao. Después de la operaciin de UF, Ia concentracién de polfencies en los ‘sélidos disueltos totales del permeado deben ser de hesta e! 30% en peso, siendo preferantemente de mas de! 40% en peso, por ejampla, el 45% en peso, Opcionaiments, ef permeado obtenida en fa etapa de UF anterior puede hacersa pasar « través de una membrana muy fina de nenofitrado (NF) para Giminar tos minerales disuotios de Ia solucién, El NF parmite también la concentractin de la salucién por ellminacién de agua. EJ NF ne es un procediiniento do separacién tan fino como fa Semosia lnversa (Ol), y unas nymnibronss cue son ligeramente més abiertas. Si embargo, on enla otapa pueden usarse también ‘membranes destinadss # Ol. EI NF permite que pequefios lones pasen a través, a la vez que rechaza los lones mds grandes y la mayoria de los componentes inorgénicos, dependiendo dal tamafio y ia forma de la molécula. En ta prasente invencl6n, el NF usado preferentomente tlene un corte de peso molecular superior o 50 daltons, Las membranes de NF estén hechas habitusimente de material compuesio fing y material celuldsico. Las membranss NF pueden ser de fibra hveca o espirales. Aigunos ejemplos de esta clase de membranas gon los proporcionados por Koch inc, (es decir, TFC-RO, TFC-S, TFC-SR3, serie SelFRO), PCI Membrance Systems Inc. (es deci, médulo B1, médulo C10, AFC99), Alfa Laval Inc, y otros. Las membranas usadas para NF operan en un inlervalo entre 0,001 y 0,01 pm. EI NF desciito en ta prosente Invencién apore eritie 2.000 y 5.000 kPa (300 y 700 psi) En ol NF doscrto, précticamonta fakis lus palilenolas se revenen ait al retenido, La pérdida de potfonvles ual retanide no debe ser inayar «lel 10% en ‘peso, preferentemente inferior ai 5% en peso refarids 2 lve edlidos disualtos tolates presentes en el perneado obtonido después de In etapa de UF. Después de ta operacién de NF. In concentraciin de polifenalss en los sélidos disuetos totales del ratenkio esté en ol intervalo de hasta el 45% en peso, profereniementa mas del 50% en peso, por ejemplo, el 55% en peso, Es importante en ta NF operacién que ef egua se elimine, Por tanto, los shldos disueltos totales en el ratenide son mayores que en el permeado de UF Inkcial. Los sélidos disuelios totales en el permeado son preferentements suparoros10 15 15 ‘a1 5% en peso, més preferentamente superioras al 10% 6n peso, por ejemplo, tan ‘altos coma el 20% en peso. Una forma altemativa do concentrar 6l extraclo de polifenoles de cacao dala ¢tapa d) es usar evaporaciin al vaci. Cuando se usa ese procedimiento, s¢ ‘emplea un sistema de sacedor de vacio, Ente procedimiento puede usara tembién ‘edemés para concentrar el permeado de UF permeado 0 e! retenido de NF cuando ‘a8 han inchido estes etapad, Existen varias clases de secadores de vacio industriales dleponibies en el mercado que son adecuados para concantrar el exiracio de pollfenoles de cacso tomo, por ejemplo, secadores horizonisles © secadores verticales, Preferentemente, ef procedimiento debe lievarea @ cabo a una temperature interior & 70°C, mas preferenlemente inferlor 60°C, por ejemplo, 40°C, La prosin de trabajo, para oliminar ol ogua cnmno disolventa, debe ser Inferior a 30 kin (300 mbsr), preferentomente infertor a 20 kPa (200 mbev). Después de retirar of disolvenla, s6 obtiene un producto con mis dal 15% en peso do séiidos solubles, pralerontomente con més del 25% an peso de silidus solubles, por ejemplo, entre el 45 y el 65% en peso de siidos solibles. El contenido total de polllencles de cacao en el concentrado de granus de cacao oblenido representa habituaimente al menos el 10% en peso, mia prelerentemrente * al menos el 30% an peso de los ediidos solubtes toteles, 1 concentrado de polifenoles de cacao oblenido en fa elspa 6) esté an forma liquide. Para sigunas aplicaciones, puede preferirse que el concentrado de poltienoles de cacao esié en forma de povo. Asl, el procedimiento de ta presente invencién puade incluir opcionaimente une etapa final de secado para produc un concentrade en poe de polifencles de cacso. E! polvo obtenido tiene preferentemente un contenido final de humedad Inferior al 6% en peso, més preterentemente infestor al 3% ert peso. Un apsrato de secado rdecuado Inchya un secadar de vacio de bandoja y un secador de pulverizaciin, Cuando so uta un secador de vacio de barvigje, dospute del secado se oblisnen bloquos duros, Preferentemenie, estos bloques deben somaterse a triurade antes de la mollenda para reduck el tamaiio de paiticula para preperar un polve. Para triturado puede usarse un molino de tipo martilos o cuchillas, En cuanto a la molienda, pueden usarse moline de martilos, maine de agujas, moling clasificador-seprador ‘0 una combinacién de molinas. La distribucién de tamatios de particula finales es Lal 2p40 acy 35, -18- que ef 99% an voluman tiguint tin Inmane de particuia Inferior v igual a 300 pin, refarantemente de 200 pm, inda preferentemenie de 100 pin, por ejemplo. 76 yan. Cuando #6 usa secodar de pulvefieaciin, pusdon userse varios stablizadores como un vehiculo del procedimierito de secada como, por efeniplo, oma guar. E? pelve fel debe contanar preferentamente menot del 10% en peso ds establizadores, preferantemenie mence uel 3% en peso, por ejemplo, el 1% en peo. La concentractin total de poltenoles de cacao en al pive final es al menos 91 10% en pose, priferantamente al menos el 15% en peso, Preferaniemanta, en las etapas de vecado y reduccién del tamatio de particules no ge plerde mae dal 6% en paso dal contenkls total de polfencies. laure La Figura 1 muestra una representacién grafica de ejemplos de iss etapae a} 2 °): LaFigure 2 mwestra una ropreseniiacién grifica de lan elapas d) y @); LaFigua 3 muestra los ieevilados do un ativdio esledistico en el llempo ¥ ka loniperalura necossilos de ta etapa de blanummanianto a}. El sesukedo mosirado 08 ui reprepentuctén da suparficie en 3D da laa condiciones eetimad La Figura 4 —musstra los resultados adicianales del estusto entadistion levado a cabo mediantis investigacién en Ia etapa a). LaFiguaS 88 una representacion da contumo superficial de Jos resultados oblenides de. In investigaciin etindistica en lan condiciones da le etapa a). . La presente invencién ee lustreré a conlinucién con referencia = kas guienias gjemptos. Elemplos Efompio 1 La remecién de pardeamiento enzimético produce ef ascuracmianto de lor Producios wimentarion ficos on compuestue fendicos chirenle eu tranap.ule, aimacanamienio y procasaniienio, Eslos ragecioves no desaadas en los products alimantarios producen ustangiss resyoneabiles ce vores y oabores desagradabion, El objetivo erm inaclivar ki polifonoboxidaen por celentainiento, especificamente, por tratamiento lérmiico en agua (blanqueamienio) ¥ estudiar ‘condiciones da Insctivaciin (ralaclones ‘Tiempo-Temperatura) en ralacion con el or"10 15 -T control da la reaccién de pardeamiento enziméllca medida por el cambio de color {aniitsis de color sensorial), 80 realizeron nveve ensayas en Wes combinaciones ditsretige de tiempo y ‘temperatura. ‘Temporaturaa = 75, 85 y B&°C; Tlempo = 5, 10 y 15 minutos. Se us6 catecol a1 1% como restive paca ocelerar ei perdeamienlo. A continuacién se misib él pardeerienis para cuanificar qua Wempu y oti Wrelamiento térmico era necesarios pare optimizer Ia iihiblein de ta raaccién de pardeamlents (melanosic) . de semilias de cacao. Se empied un escols de ninlanusis para medir al nivel de petdeemignto dantra do les eemiias. Procedinfenio experimental: Mates prima: Semiflas de cacao frescas sin fermentar. ‘Aparato: Tesmopar Cronémetio Cuchilla de caro inoxidable Baflo de agus con control de temperature. Vidrio da relo} Reactivos: Calecol al 1%: ‘Se sumergieron 80 gramos de cacao en 2 lites de agua caliente y sa mantuvo en un bafio de egua ala lemperaluea y al lempo Indicados antariormanie. Se enfié el cacao la mas répdamenle pasiie baja un grlfo. Sa colocaron las ‘semilas de cacaa en un vidrio do roid y 98 corlaron por Ia mitad con una cuca, Se calocaran golas de catecol ol 1% on Ia superticie y se ubserxt el cxlor de lat eomiigs de cacao. Se ragisiraron tos ceaullados 1a cumin se Musira an la Tabla 1 y Tabla 2 0 ‘continuacion. Tabla 1. Eacala de color usada para deseribir el avence de la meianosis ‘EMI. Malanosla Escala Desoripclin th : sth> 0 <9EP> No pardeamiento Sal o> 2 Lave pardeemiento, Observade on algunas senilas <3EP> de cacno, 210 16 -18- to - 4 Leve pardeamienta. Obearvado en la mayorle de los semflas ‘stb> de cacav, th tbe 0 Moderada pordeamionio. Observe an lp mayoria de “SEF? los eamillas tbe «the de cacao. the the @ <8EP> Inensa pardeamiento, Observado on fa mayorta da Lae somillas od dt de vaca, > > 10 Intersa pardemmienlo. <8EP> Tutalnente inaceptoble. La Infreduccién de las seinitas en bane de egua caus! un descense de temperatura de 10°C, Esio sa dabe a la Inansforancia da temporntura dal agua a tas emilee, En todos los casos, la modida del tiempo cameanz’ cusnda Ia temporpouta da tag samilize ec iqualé a Is Lamperatura praajualada del agus, Tabla 2, Resultados de ia Inacthvackia tle PPO Emo we RESULTADOS- de BLANGUEAMIENTO eeeee10 15 me th ‘ Tampo/min 5 min 10 min 15 min Temperatura"C Metanosis Melanosis Melanosis EE i te ‘ 75°C 6 6 8 ‘stb> 85°C 4 2 4 th th ‘ 96°C 0 2 4 th Como puede verse @ partir de los resultados presentados en le Tabla 2, el Gempo y la temperatura que optimizaron |e Inactivacién de polifencloxidasa fueron a ‘95°C durante 5 minutos. En estes condiciones, se observé una ausencia completa de metancals 0 pardeamionto en las semnflas de cacao. - ‘Segén los resultados mostrades en las Figuras 3 a 5, se aprecia que ol cambio en la temperatura (p < 0,05) tiene un efecto mucho mayor en al nivel de melanoals que el cambio en el Hampo (p > 0,05). Se observa un efecio decraciente ‘en el nivel de meianosis cuando aumenta ta temperatura, debido a le inactivacion de poliienoloxidasa. Adamés, el nivel de melanosis sumentado oun uti aurneniio er ‘I tiempo, dabido a reacciones wwindticas de no pardeamienio © rerccnes de Maillard que dependen de teniperaturas elevauas durante pertodos de Uempo profongades. Por tanto, el tratamiento ténnico confimade necesario para evitar In metanosis 0 fa reaccién de pardeamiento es a 95°C durante 5 minutos. Tiempos més legos producen pardeamiento debido 8 reacciones de Maillard, Para una escala de melanosis entre 0 y 8, @! nivel de desarroiic de meianosis @ una temperatura de 95°C duranle 5 a 7 minutos es de 0,8. Puede concluirse que el tratamiento térmico prolongado durante 2 minutos no ofrecerd un nivel superior 8 1 ‘enia escala de melanosis.10 15 eeeeeees -20- jemplo 2. Solubliizacién de polifenolos Se axirejeron 26 g de producio intermedio de granos de cacao secos, desgrasados y ein fermentar que contenia 2,31 g do polifencies totales (9,25% en eso) inicialmente con ague en una proporcién de 1:15 (cacao:egua). La extracciin 80 levé @ cabo a una temperatura de 30°C durants un perfodo de tiempo de 2,5 horas. Después de la primera exiracciin, ve cantrifugs Ie mezcis, Se obluvieron dos fracciones: un liquida y sélidos agotedos, Los edlides agotados se sometioron 81 procedimiento de extracciin precedente dos veces mas, Se mantuvieron tas mismas condicines, con fa excepcién de que la proporciin sdiido:disolvente on las dos ditimas extracciones fue de 1:10. Los resultados del experimento 6a ilustrani on ta Tabla 3. Tabla 3, Rosultados de soluhilizacién de pollfenoios do cacao EMI20.1 tb Polfenoies Volumen de Tots! sbiidos Total » en : ‘ polilenoles recuperados en le centrifuge (9) aeeee | i : Exiraccién 49,11 335 4,55 1,13 3210 20 =a. <> <> ‘b> Extracelén 41 .18,51 126 0,86 , 0,188 the ste tbe ‘ctb> Extraceidn 11 13.48 133 0,43 0,104 <> te > <> Tole .81,08 504 5,04 1,42 Appartirde los restitedos niostrados on ta Talila 3 eaté claro que después de le tercare extraccién, 86 recupara an la soluctin el 81.08% de los polfenoles. Se obtlenen 504 mi de soluciin de los que 5,84 g son séiidos tolales (0,98% on peso) y 1.42 g son polfenoles totetes. Los polfenoles lotales representan el 24,27% de es s6iidos totsles presentes en la solucion. Ejempio 3 Los granos de cacao frescos sin fermenter contienen en promadio 6! 50% en peso de humedad, el 24% en peso da grasa, el 3,5% en peso de polifenoies totalee, 617,8% en peso de cdscara y el 14,7% en peso de olros compuestos. Sa binnquaaron 1.000 kg de granos de cacao frescos sin fermentar en agua caliente a 95C duranta 7 mintilos para Inactvar enzima PPO, Después de blanqueamiento, tos granos se lavarun an agua fria. A cantinuacién, loa granos, con tun contenido de humeded del 44% er: peso, se seceron al sol duranie una semane para reducit el contenido de humedad al 6% en peso. Después de secade ea ‘obtuvieron 532 kg de granos de cacao secos sin fermantar con acthided PPO énormeinente reduci’s yo Inactiveda. Este subproducto contenta al 6.57% de polfenoies, En uns elapa siguiente, se redufo el tamafo de perticula de los granoa 3310 15 35 -22- ‘secos por agrietamiento y posterior molianda, El ogrietamiento se renlizé usanuto un molino de martilos para ablenor padacs. Después del ayrietamiento, se motioron los pedazes en un motino de ogulas crloyénico usando nitréyeno como medio do congelackin para evitar I fuslin de los grases. Ourante ta mollenda criogénica, 60 congelé | subproducto por delisjo de -5°C, La distribucién final de tamafio de particulas fue de! 99% en paso por debajo de 150 pm. ‘Se'desgrasé el polve de cacao sin fermenter para promover fa dlsoluciin, en las operaciones siguientes. Para desgrasado se usé un sistema de extracciin de CO; supereritico. Después de Ia extracciin, se obtuvieron 205 kg de producto Intermedio de granos de cacao desgresados sin fermenter. Eate subproducto contenia e! 11,65% de polilencies totales y @! 1% de grasa. También se obtuvieron 237 kg de menteca de cacso. Esta manteca es adecuada para consume humana. Para exiaer los polfenoles por solublizacién, los 295 kg de polo desgrasado ain fermentar se mezcian con 4.425 kg de aqua (1:15) pora la prinera extracciin, Se extrae ta inezcla en un reactor, por agilaciin a 35°C durante 2.5 hores, En esta extraccién, of 64% de los pollfonolas iurdales estaban on auknzin, Después de la extracelén, se saparsron los sélidos usando un decanlador scquida de centrifugado. Se obluvieron dus frocclonos. Una fracciin liquida do 4.201 ky quer conteniz of 1,88% de sélides disuollus tolaies TDS {80,76 kg) de la que el 20% son polifencies (21 kg). Esta freccién se denomina primera solucién. La otra fraccién ‘esté formada por 428,48 kg de los séikios ‘semiagotados que contienen humedad Gel 50%. Los sdlides ayotades contienen ain el 40% de los polfencies que estsban presenios en los granos de cacao sin fermenter, Los 426,48 kg de silidos agolados (50% de sdiidoe) se sometieron a une negunda etapa de extraccién con 1.713,02 kg de agua (1:10) en iss mismas condiciones de la extraccién anterior. Como en al caso anterior, se obtuvieran dos fracciones. Una fracclén fquida de 1.760,58 kg que contenia of 1,32% de sélidos disuatios totales (23.33 kg) de los que ef 30% eon poffenoles (7 kg). Esta fraccién se denomina segunda solucién. La otra tracciin contiane 381,82 kg de séiidos ayvlados, e! 50% de fo cual os humedad. Los sdliukw ‘fagotados contienen adn 7 kq de pallfencies que pueden visulverse en fulurac extrecclones si sa desea. En Ia etapa aiguente, ta solicién obtonida en las exiracciones prlinata y segunda se mezclé conjuniamente en un dapésito de producto intermedio. La mezcla de ambas soluciones representa 6,052.1 kg que contisnen el 1.71% de 3410 26 -23- sélides disuelios totsles (104,1 kg) de los que el 26,0% son polfencies (28 ka). ‘A continuacion, s@ pasé la soluciin a trevés de una membrona de uitrafitrado pore efiminar las particulan més grandes (es decir, protelnes, hidratos e carbono, etc. ), La membrana usada tenis un corta de 10.000 daltons. Después del uttrafitrado se abluvieron dos fracclones. un relenida y un permesdo, El retenido pessba 605,21 kg y conienta el 6,21% de ediidos disualtos tolales (37,6 kg) de Jos que el 3,72% eran polfenoies (1,4 kg). E! permendo pesaba 5.446,21 kg en Solucién qua contenia el 1,22% de sdtidos diauelios totales (68,5 kg) de los que el 40% son potencies (28,6 kg). La siguiente elapa tiavada a cabo fue un nenofitrada reaizedo para concenirer fos stiidos disueltos totales y para sliminar parcialmenie las sales. Los 5.446,21 kg de permeado de UF se hicleron pasar a través de un nanofliro. Como ‘en la operacién anterior de separacién de membrana, se obtuvieron dos fracciones. El pormaado esté formade por 4.851,89 kg que contienen el 0,14% de sdides diaueltos tolsles (7 kg), que son principsimente ssies disueltas. £1 retenido enriquecido pesaba 595 kg y contenla el 10% de sdlidos disvetos totalos (50,6 kg) de los que el 44.7% eran polifencies (28,6 kg). En una etapa siguiente, loo 695 kg da permeado de NF @ concentraron usando un secador de vacio vertical 55°C y 300 mbar, En el procedimianio ve tecado, 86 elminaron 495,04 ky de agua. Tinalmenie, se obluvieron 80,18 ky Ja concentrado liquido de polifenules de cacao qua contenia ef 00% de sitios disuelios totales (59,5 kg). Eale producto contiena el 26,82% de pollfenctes (26,6 ko). Opclonaimonta, ei concentrado tiquido de polifenoles de cacao puede ‘Secarse mas para obtener un polvo, Para este propéaito, se mezciaron 89,16 kg do ‘concentrado liquide de polilenoles con 5 kg de goma guar. A coniinuacién se hizo Pasar ta mezcia a través de un secador de pulverizecién. Finalmente, se obtuvieron 67.1 kg de concentrado en poivo de poiifencies de cacao que contenla el 4% de humedad y el 39.64% de polifenolos. 3s—10 =24- REIVINDICACIONES: 1, Un procedimiento en ol que se obliene concanirado de palifenolas de cacao que comprende (as tapas de: 48) someter grancs de cacao ain fermentar a una etapa de blenqueamiento en agua una temperatura en ol Intervalo de 85 8 100°C durante un perkodo de tlampo en of intervalo de 3 a 15 minutos j.are dor granos de cacao ain fermenter con actividad reduckda da polifenct-oxidasa; b) secer fos granos de cacao sin formentar con actvdad reduckla de poflenot oxkdasa @ una tomperalura Inferior @ 85°C para obtener granos de cacao secos sin fermenter can un contenido de humedad de no més del 15%; ¢) tometer tos granos de cacao secos sin fermentar a una etapa da reducciin del tamafio de particule para obtener producto intermedio de granos de cacao eecos ‘tn formentar en of que a menos el 86% en peso del producto Intarmedio Wane un tamafio de particula Inferior 0 igual a 300 prn; ) extraer polifenaies del producto Intermedio de granes de cacao secos sin fermentar pera dar un extracto da polifenoles de cacao y eétides extraldos; ©) concanirar el extracto de polifenales de cacao para product un concentrado do olifenoies de cacao en al qua In cancentracion de polifencl presente es al mence del 10% on peso; y en el que el procedimionio compreniie ademas una otapa det desgrasado que se lleva a cabo antes de a olopa a). 2 El procedimiento segin In seivindicacién |, on of que fa etaps de desgrasad0 se lava a cabo después ue Is etapa b) pero antes de fa etapa c). 3% procedimiento segiin la reivindicacién 1, en el que la etapa de desyrasado ‘ea Teva a cabo después de ia etapa c) pero antes da la etapa d). 4. Elprocedimionto segin las relvindlcaciones 2 6 3, en el que en Ia etapa de desgrasado de los granos de cacao secos sin fermentar o el producto Intermedio de ‘granos de cacao se prenssn para formar una torta de prensa y grasa que se elimina. 5. El procedimiento segin la relvindicachin 4, en el que el prensado se lleva 3 cabo usando una prensa de simazara 0 una presiin de 50 MPa aproximadanarita,10 15 -25- & —_El procedimiento segiin Ia relvindleacién 4, en el que la torta de prensa formada se somale a une etapa de triturado en la que ol tamaiio de particula se reduce hasta ser Inferior o igual @ 6.000 pm. 7. El procedimiento eegin las reivindicaciones 2 6 3, en ol que en fa etapa de desgrasado se omplea extracrién por CO, auparcztiicn, 8. —_El_procedimionto segin cusiquiera de les reivindicaciones precedentes, en ol que en la etapa de reduccii: dol lamafio de particula, we imuelon los granus the cacao secos sin fermeniar, 8. El procedimiento seyin Ia reivindicacién 8, en el que en a etapa de reduccién det lsmafo de pariicula, los granoe de cacao sacos sin fermenter ae mueien usando un moline csiogénico, 10, El procedimiento segiin cuaiquiera de las relvindicaciones 1 @ 7, en el que en la etapa de reduccién del tamerto de particula los granos de cacao sin fermentar ‘80008 se muelen usando un molino-separador. 11, El procedimiento segtin la reivindicacién 10, en ef que la etaps de motiende incluye una etapa final de ctesificacién para dar un producto intermedia de granos da cacao secos sin fermenter en el que al menos el 88% en peso del producto intermedto tlene un tamafio de pasticula interior o igual @ 120 pm. 12. El procedimiento segin cualquiera ue las reivindicaciones precedenies, en el que en le etapa 0), los polilenvles se exliaen usando un disolvente. 13. El procedimiento segin Ia reivindlcacién 12, en al que el disolvente es ayua ‘0 etancl o una mezcia de los dos. 14, El procedimienta segin la relvindicscién 12 6 13, en ol que la proporcién entre producto Intermedio de granas de cacao sacos sin fermeniar y dieclente ests ‘en el intervalo de 1:5 @ 1:30 en peso, la extraccién se leva a cabo a una temperatura de no més de 75°C y. durante la extraccién, est presente una ‘aghacién continua. : at10 15 20 3 15. El procedimiento segin cusiquiera de tas ralvindicaciones 1 a 11, en el que en la etapa d) los polfenoies #0 extraen por centritugedo o fitrado. 16. 8 procedimiento sagiin cualquiera de tas relvindicaciones precedentes, en i que In etapa ¢) inctuye una etapa de solubilizacién preliminar. 17, El procedimiento ségin ls relvindicacién 16, en el que e! extracto de polifenclas de cacao obtenido en Ia etapa d) ae somete 8 una etapa de extracciin adicional. 18. El procediniento seginn Ia reivindicacién 17, an el que la etapa de extraccion ediclonal implica centritugade o microfiltrado, 18. El procedimiento seyin ciralyuiora do las relvindicaclones 12 18, en el que ‘on Ia etapa ©) el extacto de pollfencies de cacau se concentra por ultrafitrade para dor un permeado de poilfenctes de cacao, 20. El procedimlento sogin la reivindicacién 19, en el que en ia etapa e) se lieve @ cabo una etapa de nenofitrado adicional después de ullrafiltrede para dar un Fatenido de polifencies da cacao. 21, Et procadimianto segin cuaiquiere de las reivindicaciones 1 a 18, en ol que en Ia olapa 6) el extracto de poitfenoles de cacao $e concentra por evaporacién al vacio. 22, _ El procedimiento sogin tas reivindicaciones 19 6 2U, en el yue el permeudo, ylo retenido de pollfenoies de cacao se concentra més por evaporacién al vacto, 23. El procedimiento de cualquiera de Ins reivindicaciones precedenles que comprende ademas una etapa final de secado del concenirado de polifenoles de cacao para obtener un concantrado en palvo de polifanoles de cacao, 24. EI procedimiento segin ta relvindicacién 23, en el que ef concentrado de polifenoles de cacao se seca usando un secador de vacio o un secador de pulvertzacion,-27- 25. EI procadiinierio segim ln reWindicauiin |, que compranda na etapa adicional de deamenuzamisniv y aventado desmés de ta atapa b) y antes de ta etapa c). 26. El procedimiento segun cusiquiera de las relvindicaciones precedentes, en ‘21 que en la etapa b), los granos de cacso sin fermentar con activided reducida de Polifencl-oxidasa se secan por exposicién al sol. 27. El procedimiento segin cusiquiera de las relvindicaciones 1 8 25, en el que ‘en fa tape b). los granos de cacao sin fermentar con actividad reducida de pafenol-oxidasa se socen usando un sacador de sire caliente, un secador de aire ‘sin calentar, un secador de granos comercial, un secador de foles de lecho fuidizado, al vacio o un secader dieléciico.RESUMEN Un mocediniioto on al que sc oblinn: concantades de pollenvics de cacan que comprende Lin cloprs da. if reenter aries te cance sits leonora a ura ebayer es ‘Danqueaniona en upiin a1 104) amipxnluca en cf Infervale ste 18 9 YOO"G dienes wr perforin de Gompa un al interedo de 1a 1S nmiutos para ditr qranes de cuca: ut fermenter con uctividadd rednwh ks de poblung: weir. 1) Brea bug ¢yanes do cxcin sin teumantor cou oetividil sexhe-hla de polkancloxédaas a une tomperniuia fave 2 18S*C porn oblener granos. di 12x au Soom sin omemr con un canionide dé humetad do no mas del 15%, c) sorters los grammes do cacao ceo gin fommentr & wna otapo de roduceidn del tomaho de: purticula pura oblewer pioduckn inleumedia de gronos ck carao sod0s sin fermneninr en el que al manus of 99% en pend det producto Infermedio tiene un fomniio da porttala inferior © tquul 2 300 pm, v) extrmer pubfenoinn del produclo wiermedio de gmans de cacao xacus sin fermentur porn dat wn Oxlrach> che Politenuics ve carao y Sdlidon exluklos; f) cuncontror Al extracto de policuoion de cocan pai ploducr im concaultads do polfanuies de cacan, y en ef qu: ct Procudawiqnio romprende acenvies uno etapa de dasqrasealo que Be Rava niko onin de ta ctapa d). 40412Figura 3 Figura 4 Tomparnluina tywo 20087115160 Ax (DLNAICONITT (12) INTERNATIONAL. APPLICATION PUBLISIED UNDER THE PATENT COOPERATION TREATY (PCT) (U5) World Intalleccnal Property ‘Organization Incrastional Uereas ‘DBAS (43) laternationsl Publication Date (20) Internatiomu Pubfieation Number 4 December 2005 (08.12.2005) pcr WO 2005/115160 Al (52) Suternatlona) Putest Chaediication™: A2G V0, Sook Vicente WOVES], Autovis A~1, Snide 342, Cami de (CTR 63700 Porrent. wh, 146930 Quart che Poblot (ES). CHENFUE- GOS JOVELLANOS, Bloom [ESUS}: Auevtt A, Sal (21) Interaationa! Application Numbers $a 3S, Cas da Tron, in, 4087 oat Pubes FOTUMRUOSONIOTS——_ RSL AWA, Alva (US/EN, Attvia Ack. Sakle W, (2) tndernadna) Fg tates 20 Ape 2005 (20012008) de Toure. wn 40090 Qua oe Vote (5), ‘Ageat: MARQUES MOMALCS, domo Ferns (250 tng Langa: toon Se vamos Boncore en (26) Publication Languages Aglsh (1) Mhenignated Staten (unless ocherietse Indicaind, for every oo fates kul of eaionat proeecthon anatiahin): AB AQ. AL. aM, Hand Mey 2001G4510) OB AT. ALL, AY, RA, BB, BG. WIL NW, BY, BZ. CA.CIL ON, (71) Applicant (for ail dertpnined Stune except US: NA- THACKITICAL, SA. [KEM]; Amovia A.3, Salida HAD, Casal de Torre, wn, 146980 Quaet 18 Pen (SL Naweotoes: andl LaventirdApplicants (for US rely: PONS-ANDREL, 33 ©, CR, CU, CZ. DE Dk, DM, DZ. BC. fil HEY SFT, GB, GD. CA. Git, GM, HR, HU, WD, HN, 15, FP, KE, Gi, KM, KP, KR, KZ 1A EK, UR, US, LT LU, 14 MA, MD.MO, MI, MAL MW, MX, MZ,RA NL NO, 820M, PG, PH.IM., PT, RO, RU,SC. SD, SH 8G,SK,SLSM.SY. ‘TAT, TN, TRTT TZ UA, UC. US UZ, VCE. YI), ‘2A, DA ZW. (Comte on now paget (34)"Tke. PROCESS FOR PRODUKING COCOA POLYPHENOL. CONCENTRATE, qs(20) Resignate Nini (wees utherwise Indica for every Rov ntotrner cue and ether ebiveviacns afer tts “Ould- Und ef piel proveciton allabla): ARIPO (BW. Ul, ex Notes un Cader and Abbrestons” arpecrieg atthe begin (GM, RE, LS. MW. MZ. KA, SD, SL. $2.1%, 0, 2M, sing of each egal lune of the ACT Oazene. ‘TWi Boratan (AM, AZ, BY. KOL K/. MD, RU,T2.TM, European (AT, BE, BO, CH, CY. (2%, DB, DK, BA EF, 14, CR, GR, HU. PE 18,7217, LU, MC, 81 PI PTO, ‘SEL SL, TH), OAPI (BF, BL CP, OX, C1, CM.GAON. (0.67%, 241, MRNA. $94 7D, TOL Pabtded: ‘shh stermatonal earch sport‘WO 20087115160 PCraaz0esmo1e7s 10 as 25 30 Process lor producing eacoa polyphenol concentrate ‘The present Invention relates to processes for obtaining cocos products which are rich in cocoa polyphenols where the starting materials ‘are unfermented cocoa beans. More specifically, the present invention discloses 8 process for producing liquid and powdered cocoa polyphenol concentrate from unfermented cocoa beans. ‘At present there is a great interest in cocoa polyphenols not only because of their contribution to flavour, but also for their antioxidant activily and possible beneficial health effects. The total polyphenal content in fresh unfermented defatted and dried cocoa beans can vary in the range from 12 to. 20 wt%. The principal polyphenol compounds present are moriomeric flavonoids such as (+)-catechin, (-)-apicatechin and oligomeric flavonoids ‘such as proanthocyanidins, of which half are dimers (81 - £8). Other compounds which have been identified are quercetin and quercetin glycosides, quercetrin, luteolin, apigenin and pcoumaric, cafeic, chiorogenic acids and others, Manufacturing cocoa involves fermentation, during which many biochemical reactions occur in order to develop the components and precursors of chocolate colour and flavour. Fermentation processes, among olhers, reduce the astringency, acidity and bitterness of cocos, : ‘During the fermentation process, fresh cocoa beans are heaped in a pile or in a wooden bax, typically for 5 days. Fermentation can be divided Into two principal stages, anaerobic fermentation and eerobic fermentation. During anaerobic fermentation, the cocoa flavour precursors are formed. ‘Sugar from the fruil pulp is braken dawn into the reducing sugars, fruciose and glucose, and proteins are braken down into peptides and free amino acids. These products form the precursors for the Maillard reaction ia which the characteristic cocoa and chocolate flavours are developed during he drying and roasting of the beans. Anaerobic fermentation optimises the conditions for enzymatic browning, @ reaction carriod out by Polyphenol, qr4& ‘WO 2005118160 PCTAwWUS/O0107S a0 1S 25 30 2 Oxidase (PPO). Normally, aorobic fermentation begins after the second day of fermentation, In this stage, PPO catalyses the oxidation of phenols into ‘ortho-quinones, which are highly raactive compounds. Once formed, ortho- quinones undergo spontaneous polymerization {o produce high-molecular- weight compounds of brown pigments (melanins). These melanins may in {um rekact with amino acids and proteins intensifying the brown colour. ‘These high molecular weight condensed polymers become increasingly Insoluble as the degree of palymerization increases. Furthermore, they have fess bicavallabllity than thelr precursors. Conditions during aerobic fermentation are ideal for reactions with PPO, and the high oxygen uptake luring drying further pramotes fomentation, : Many studies have focused on either inhibiting or preventing PPO ‘activity in foods. Various techniques have been developed over the years to Inhibit these undesirable enzymatic activities, Several of these techniques can be applied in order to prevent enzymatic browning. For example in the paper tiled * The manutacture of cocoa polyphenols a3 healthy supplements in food products’, Kattenberg et al, describe the use of microwave heating to prevent PPO activity in unfermanted beans. The use of microwaves is, however, expensive as specialised equipment is required, Furthermora, when using microwave treatment, it is difficult to cantrol the temperature within the unfermented beans. Unfermented cocos beans have neliher the same organoleptic profits, ‘for the same polyphenol profile as fermented cocoa beens. Unfermented beans have a very bitter and estringent taste with little apparent chocolate flavour, ‘During cocoa processing, the contant of flavonols (monomers) Present in the original unfermented raw cocoe beans depends largely on post-harvest handling and processing techniques. Both the fermentation and alkali steps in cocoa powder and chocolate manufacture can greatly ceduce the monomer content. During fermentation the total number of phenols in cocoa are reduced to 30% of their initial value and (-}-“10 as 20 30 4) 3 epicatechin, the prificipal substrate of cocoa polyphenol oxidase (PPO), is reducad by 90% with @ proportional increase in catechin content. The fermentation and drying processes alter the content and composition of polyphenolic compounds, Fermented cocoa beans contain a smaller amount of low molecular weight phenots and a higher content of condensed polyphenols. Condensed polyphenolics are involved in prataire phenol interactions and may contribute to the low digestibility and poor biological value of phenols and cocoa proteins, é ‘Studies have demonstrated thal cocoa polyphenols incraases the resistance of LDL-C oxidation and plasma antioxidant capacity, modulate platelet activity, increase nitric oxide synthesis and vasodilatation, modulete eicosanoid synthesis, protect against peroxynitrite and modulete the immune ‘aystom. : The polyphenols thai are most abundant in our diet are not necessarily the most beneficial, either because they are poorly absorbed from the intestine and rapidly eliminated, or because thelr metabolites have ‘8 tow intrinsic activity. Monomeric flavonols aro better absorbed than polymerized proanthocyanidins. Several studies show that the proanthacyanidins are not absorbed in the stomach and so their action is restricted to the intestine. Additionally, monomeric flavanols, such as catechins and epicatechins, have more antioxidant activity in both in vitro and in vivo studies regarding plasma. Itis therefore clear that there is a need for a simple and economical process whereby polyphenols can be extracted from unfermented cocoa beans wherein the polyphenols have nol undergone polymerization as catalysed by the polyphenol oxidase enzyme. : ‘The present invention provides a process in which cocoa polyphenol concentrate is obtained comprising the steps of: 8) subjecting unfermented cocoa beans to a blanching step in. water al a temperature in the range from 85-100°C for a time period in the range from 3 to 15 minutes 10 give unfermented cocoa bean with reducedWO TuNS7115160 PCT yna0soLU7 Ft 15 20 as 3a polyphenol oxidase aciivity, b} drying the unfermented cocoa beans with reduced polyphenal oxidase activily at a temperslure of lass than 85°C ta obtain dried unfermentad cocoa beans with 4 mozature content of no more than 151%; ¢) subjecting the drled unfermented cocoa bans fo # particle size reduction slop to obtain dry unfermented cocoa bas intermediate whereby atleast Swt% of the intermediale has « partici size lees than or equal to 300 um; 3} extracting polyphenols from tha dry unfermented cocoa bean intermediate to give @ cocoa polyphenol extract and extracted sollds; 2) concentrating the cocoa polyphenol extract to yiokd a cocoa polyphenel concentrate wherein the contentration of polyphenol present is atast 10 wi'k: and wherein the process further comprisas a defalting step which is carried out prior to step d). ‘Where the term untermeniad is used, fl refers io cocoa beans that have been removed from the pod for a meximurn-of 5 hours. More preferably the cocoe beans have begn removed fram the pod for less than 2 hours. Fermentation is @ process which occurs naturally after cocoa beans have bean removed from the pod in wanm and humid conditions. Being a netural Process tf occurs on a relatively slow timescale and €1us 2 cocoa bean which has been removed from the pod for only 6 hours will he substantially unfermanted. From @ conmercial point of view, i Js difficult to find a source ‘of such beans, In one embodiment of the present invention, ff may be preferably to ‘include a step prior 1a step a) in order to malntain the unfermented state of (he unfermented cocoa beens, Such 6 stap can Include, for example, immersing the unfermented cocoa beans in a colullon of water and ascorbic acl ‘The Inctusion of stap a}, the blanching step, is essential in order to ensure that minimet polymertzation of the polyphenols occurs and thus the high content of monomeric polyphenols present In the unfermented cocoawo 2003/5108 POT ANUYONIOTS 5 25 30 e besns is preserved. The blanching step is carried oul in water af a temperaiur® in tha range from 85-100°C. This temperature ensures that the polyphenol oxidase enzyme is denatured and thus inactivaled. The blanching step should Iss! for a tine period in the range fram 3 40 15. minute’. I the duration af the step were any fonger then other undestreble For-enzymatic browning reactions such ae the maillard reaction mey occur. ‘Tha use of water in the blanching step is not conventional es it would . be usual practica fo avoid making the unfermented cocoa beans wet for the reason that any moisture eddec’ has to be removed in a subsequent step, ‘Tha Applicants’ have, however, found thai the innlusion of a blanching step using water produces a beneficial result whersin a high propamtion of the polyphenols presen in the original unfermented cocoa bean mre recovered. Following step 2}, the unfermentsd cocoa beans with reduced polyphenl oxidase activay are dried. ‘The Inidial moisture content in @ fresh unfermanted bean ld between 45 wit end Swit. After drying, the final moisture content should be less than 45wt%s, preferably less than 10vA%s. In one embodiment of the present invention, in areas where ihe ‘weather Is comparatively dry at harvest time, the unfarmented cocoa beans ‘with reduced polyphenol oxidase activity ara dried in the sun. The beans are spread oul in 2 layar of about 100 mm thick during sunlight on mats, trays or terraces. ‘The beans ere raked over al intervals end heaped up arsd protected at night or when # rains. The Ifeys can, a 16 common In Central ‘and South America, be whole floors with a roof or an wheels. These are * pushed back ever the floor at night 80 that several can be run under # roof, ‘one above tha others, t¢ seve space. In West Africa, the beans are spread on any suitable horizontal surface (i.e. a concentrate terrace or polyaihyl ne sheet). The preferred method, whieh is common in Ghana, Is to spread the beans on mate made of splK Sabon, which are then placed an lw wooden frames, The mais cen be rolied up (o protect the beans when & rains. This method has several advantages in that it is easier to sort the beans in order eiat WO 2515160 PCTIBIIOSOOENTS 10 20 30 6 : gL th rernave defective beans and forelgn malarial. Additionally, there Is less tisk of contamination compared with beans being dried al ground level. ‘usually takes about @ week of sunny weather 10 dry the beans to 7 to &at% ‘moisture content needed te prevent mould during storage. ‘Alternatively in step b), ihe unformented cocoa beans with reduced polyphenol oxidase activity canbe dried using heeted-alr dryers (Le. intermittert dryers, batch intemal-reciroulant dryers, mix-flow dryers ‘and crosa flow dryers), unheated-air dryers, a combination of heated- and unhealed- ak dryers, commercial grain dtyere (like malt dryers), batch fluidized bed dryers, contac| dryers at normal pressure or under vacuum (i.@, vacuum trey, Vacuum band, plate, thin film, drum, rotating bakch, horizonlally agitated, indiect rotatory vertical agitated), or dielectric. diyars {l.e, radiofrequency and microwave). In siep b) the ternperature In the ban should not axceed 85°C and” should preferably be bees than 70°C, mora preferably tess than 50°C, This 1s because cocoa polyphenol polymerisation acours at temperatures above 70°C. Tharefore, It Is necessary to maintain low temperatures during the drying process. When using dielectric dryers, an appropriale frequency must ‘be setected to avoid polymerizstion. For example, In radio-traquency dryers, frequencies between 15 to 35 MHz are appropriate, and in the case of microwave dryers frequencies belween 900 and 2.200 MHz can be used. Inthe ded unfermented cocoa beans obtained In step b), a karge proportion of the initial polyphenol content is preserved, This is due to both PP inactivation end sofl conditions inhibiting both degradation and palymedzation of the polyphenols. The principal cheracteristc of these cried Unfermenied cocoa beans is their intense violet colour that reflects the stsbilization of the polyphenol, ‘The polyphenol content in the samples can ba measured using one af several methods. The most common method used Is the Folin-Ciocaltesu method, which givas the resuk expressed In wit (Singlaton et al, 1989). Additionally, ether mathadologies for the Idenifiostion und quantification ofWo 2oassr1si6n 10 20 25 PCTAB200S/00 1075 53 7 the polyphenols profile can be use, for Instance High Prassure Liquid Chromatography (HPLC) systems and mass spectrometer, LC-MS, HPLC coupled to UV detection, Supercritical Fluid Extraction (SFE), HPLC using double onine detection by diode array spectrophatometry, mass ‘spectroscopy (HPLC-DAS-MS) and also LC-NMR. "Optionally the dried unfermented cocoa beans obtained in step b) can then be cracked. Furthermore a winnowing process can be applied to the dried bean in order to separate the shells. This gives two products one with shell content and tha ofher without the shell. The technotogy for these processes is currently available in the cocoa powder industry. The polyphenal content in the product without shell i.e. dried unfermented cocoa bits with shell is In the range from 3 to 10 wt%, and the polyphenol content in the product without shell i.e. drled unfermented cocoa bits with shell is in the range from 4 and 11 wt%. After step b), the dry unfermented cocoa beans obtained aré subjected to 8 particle reduction step c). Inclusion of the particle sizo Traduction step is necessary in order to favour polyphenol extraction in the later extraction step d). Following step c), at least 99wt% of the dry unfermented cocoa bean intermediate produced has a particle size of less than of equal ta 300ym, preferably less than 100yum, more preferably less than 80pm, for example 40ym, In an embodiment of the present invention where the dry unfermented ‘cocoa beans of step b) have not been defatted prior to step c), it is preferable that step c) employs the use of a cryogenic mill, Cryogenic milts are unique in that other milts would be blocked up by the fat content of the dried urfermented cocoa beans when the temperature exceeds thet of the melting point of the fat, Cocoa usually contains between 50 and 55% of fat, depending on the variety and the type of cocoa, This fat ‘commonly known ag cocoa butler has a melting point between 30 and 37 °C. Current milling technologies work in this range of temperature, melting the Product within the machine and making operation extremely difficult.wo mesnpsian PCTUIRS/OOINS ‘ sf Br) is Nitrogen or carbonic acid fiquid can be used as @ refrigerant 40 lower the temperature of the milling process, The appropriate temperature far milling whole beans should be Jess than O°C, preferably bess than -5 °C, more preferebly less than -10 °C, for example ~15 %C. A current commercial cryogenic mill canbe used in this step, Howbvar, there ere several kinds of mills that can be adapted with a preiiminary cryogenic step, for example pin mills, knife mills, classificatory-seperstcr mille, hammer mill, and others, Other advariiages of the cryogenic mill are thet the ky temperature preserves the polyphenots stability, and also avoids oxidation by use of en inert atmosphere, These positive effects not only are applied to the polyphenols bul also to the fal, which is vary sensitive to the high Jemperature nd oxygen. The tolsl polyphenol conta in the died untermanted cocoa been intermadiiate produced is In the range trom 4 to * $401 ‘Whare the defatting step hes been included prior tn step c), it lt preferable that the particle reduction step involves the use ot a mill separator. There are also other miting systems which are suitable for use, for exemple, pin mids. A final stage of clastifiention can alsa be included in this step to give a dried unfermentad cocoa bean intormediete wherein at least 99M% has a particle size of leas than 120um. Where a mili-separalor {y used, the final particle size is achieved by adjusting the separator speed and feeding flow. In this eribodimant, the total polyphenol contant of the Product of step c) Is in the range from 5 to 230%. The process of the present invention includes m defafting step in Which fal is removed ftom the unfermented cocoa bean. The stage at which thie defatting stop is included can be varied but N must be carried out at @ stage prior to the extraction step dj. {n one embodiment of the present invention, the defatling step is carried of after step b} but prior to step c). isn this embodiment that step c) then preferably employs tha use of # mill separator, Alternatively, in a farther embodiment of the present Invention, the defatting step Is carried out etter step c) bul prior to step d}. In boih of e 3%wo 20081115160 PCT/TA2005,001075 10 415 25 these cases, several technologies can be used t0.reduced the fat content of tha dried unfermented cocoa beans, for example, pressing, solvent extraction or supereritleal fluid extraction, {in ans embodiment of the present invention, the defalting step involves pressing the dried unfermented coco beans or intermediate using either an expalier or screw press. Preferably expeller prassing a! pressures upto SOMPa is used. The resulting defatted product then has a fat content of no more than 15wi%, The defalting process provides a presscake and tat which is then removed. One example of an expeller consists of a screw (or worm), rotating inside a cylindrical cage (barrel). The material to be pressed is fed between the screw end the barrel and propelled by rotating the screw in a direction parallel (0 the axis. The configuration of the screw and its shaft is such that tha material is progressively compressed gs it moves on, towards the discharge end of the cylinder. The gradually increasing pressure releases: the oil, which flows out of the press through the slots, provided on the periphery of the barrel, while the presscake continues to move in the direction of the shaft, towards a discharge gate installed in the other ‘extremity of the machine. Expeller presses are commonly used in the oil ‘seed industry. The major advantage of the expeller press is that @ larger ‘amount of fal can be removed, for example, reducing the fat content of the press cake to about 8 to 9 wi%, CE eee ee aaa preferably between 60 and 75°C. The fat content in the defatted intermediates obtained is lower than 20 wt and preferably less than 15 ‘wt%, for example 10 wt%. The content of total polyphenols in these defatted intermediates is between 5 and 15 w%. Alternatively solvent extraction can be used in order to reduce the fat content. This procedure can be applied directly to the dried unfermented cocoa bean intermediates or fo the defatted intermediates obtained by pressing (he products obtained In steps b) or c). Preferably the solventPCTITRDOOSIOO1078 Wo 2005/115160 10 1s 20 25 10 ‘extraction is applied to the defatted intermediate obtained by pressing the products obtained in steps b) or c). Hexane, diethyl ather, ethyLacetate or ‘other non-polar solvents suitable for use in the food industry can be used as a solvent for extracting the fal. Haxane is particularly preferred. The final fat content after solvent extraction should be fess than 10 wt%, lass than S wt %, preferably less than 1 wt %, for example 0.5 wt%. ‘The content of total polyphenols afler solvent extraction is in the range from 9 to 23 wi%. After ‘solvent extraction, the residual solvent must be removed, __ Instead of using an organic solvent for tha extraction of cocoa fat in a preferred embodiment of the present invention, supercritical CO, can be ‘employed andlor another supereritical gas such as butane or propane. Although this process is more expensive, it avoids the problems of solvent residues in the powder and of waste disposal, The advantage af using ‘supercritical CO, over organic solvents in food processing is that it leaves no Tesidue in the fina! product and does not thermally damage the polyphenols In the product, ‘The final fat content after supercritical CO, extraction should be less than 10wt%, preferably less than Swi% and more praferably less than 20t%, . An essential step of the process of the present invention is extraction of the naturally occurring polyphenols from the dry unfesmented cocoa bean intermediate af step c). . ‘The polyphenols are preferably extracted from the dry unfermented ° cocoa bean intermediate by @ solid-liquid extraction using @ solvent. The Product obtained is a cocoa polyphenol extract. For extracting the cocoa polyphenols several kinds of solvents may be used, preferably polar solvents approved by the Codex Alimentarius intended for human consumption, More preferably the use of water, ethanol or,a mixture of both. - ‘The ratlo of dry unfermented cocoa bean intermediate to solvent by- products/solvent may be In the range 1:5 to 1:30 based on weight for @xample 1/10 wt. The temperature of extraction is preferably less than 75°C,‘WO 20087115160 PCTAB2OOIO107S 10 15 20 as 30 nu for example belween 20 to 70°C in arder to avold polyphenols polymerization and exidation during the process, Inthe extraction, the mixture of by-products and solvents must be stirred. The extraction step is carried oul in a reactor. In this respect, apprapriate equipment intended for the food industry must be used, for example a 316 L reactor composed of slainiess steel, or even # 304 L.reactor composed of stainless steel. ‘The process of the present invention may include a preliminary ‘solubilization of the by-products for extracting the polyphenols from the soluble media. . ‘The required extraction time varies depending an the efficiency of the process. An appropriate time for an extraction step is for example, more than 1 hours, for example betwean 2 to 5 hours. Where possible, it Is better to.use multiple batch extractions for extracting polyphenols fram the same sample. For example, a sample can be extracted in Gne step, and then the liquid (rich in polyphenols) and the extracted solids are separated by cantrifugation or filtration, The moisture content in the exhausted solid usually Is between 55 to 70 wi%. Optionally, this operation can be repeated, with the same conditions @s previously described, with the extracted solids ‘an additional three or four times depending on the yield of extraction desired. Preferably no more (han four extractions are carried out as the Increase of the yield percentage is nat justified by the cost. tna further embodiment of the present invention, the solid-iquid separation involves centrifugation. Appropriate centrifugation equipment should be used, for example a decanter for separating the remaining oil and water in the dry unfermented cocoa bean intermediate. Industrial decanters #re available on the market. The centrifugation step generally produces ‘more than 1 wi% af soluble extract, preferably more than 3 wt%, more preferably more than S wi%, As anothar altemative, step d) can employ the use of filtration with stainless steel paper or @ cellulose filter having an sperture in the range 10 to 150 ym, preferably in the range 2 to 30 ym. Suitable filters are Nutcha >‘WO 1908115160 1a a5 30 13 type filers available from BachiBer 8.A. (Spain). ‘The content of polyphenols in the cnoos palyphanal extract obtalned io 1 the range from 10 16 SO-wi%, for example 25 wi%. The cocoa : polyphenol extract obtained js ine quid form. Ine further embodiment of the present Invention, cantrifugation or optional Microfiltration (MF) can be used ina second extraction step in order fo ramove further dlesoived solids ftom tne coana palyphenal extract obtained in the extraction step detailed above, In order to achieve this, centrifugation |s preferred. : Centrkugation by decarter is based on the separation of two matarials, where She driving mechanisms is due to a difference in the epacfic gravities of the twa materials and an applied force derived from a change In angular velocity. Disk type cenirifuges work up to 10,000 G. With this technology the dissolved sofid with a parlicia size larger then 0.45pm ‘canbe remaved from the cocoa polyphenc# extract. These kind of centrifuges are also known a9 clarifiers or deslungers. Such cenlyifuges ara cummerciatty available. (1.8, Weallalla Separator Inc. Alfa Laval inc.) Microfittration ean be carried out both as @ sross-fow separation process and a5 convenuonal dead-end fitration, Preferably in the present invention microfitration using the aross-flow principle Is usad. In this method sollds, bacterla and fal globules ere rermally the only substances rejected. Miccofiltration usually opersiag at pressures lower than 207 kPa (30 pai). ‘Thera ara several kinds of membranes thal can be used for clarifying the capa polyphenol extracl obtained in step ¢) using microfitralion, For exemple, melal membranes can be used. These membranes have @ stable Porous matrix, are compressed and sintered Preferably she membranes ¢nust have precise bubble point contrcl, pore size determined by ASTM-E- 128, unifora permenbilily, uniform parosily, high efficiency, b-directionel flow, and should be made of 3161 stainless steel, nickel, Incomel, hastalay, and tlanium), Such membranes sre availabe commercially from Graver ‘Yechnologies (ie. Scepter) and Atach Innovations GmbH amonget others.WO 208501 15168 PETTERS LOTS 19 1s 20 as 30 B (Other kind of membrane that can be used for microfittration are ceramic membranes, Ceramic membranes are tubular and multi-channel, ‘They are usually made from pure c-AL,O, and a porous membrane layer from a-AL,O,, TiQ, of ZrO,. Such membranes ara chemically stabla (pH O- 14 using organic solvents), thermally stable (>100°G sterilization by steam), machenicaity stable end chemically inert. Examples of thesa kind of membranes are those produced by Alach Innovations GmbH, Pal Carporation (Le. Memibrefox) and others. Polymeric membranes can alao-be upad in microfitralion, Such membranes are usvally made of polypropyfene, polyvinitydane, fivaride, Polyfetrafuoroathylene, and potyuiionfryle, Sultable membranes inchide those produced by Koch (Le, MFK-618, MFK-601}, Alfa Lavel and there. The cocoa polyphenol extract produced in slap d) contains a very high proportion of the polyphenols that were present inthe unfermented ~ cocoa bean, for example, al least 80%, However, the extract is very dinte. Itls therefore necessary to Include a concentralion step (step e) in the Process of the presen! invention, “The purpose of Including this step Is to feamove any excess liquid or solvent lo yield a cocda polyphenol canientrate, + Ina preferred embodiment af the peasant irverdion, the cocoa polyphenol extract Is concentralad using ullrafitration, UNrafiltration (UF) is usad in order to separate the largest malecutes from the cocoa palyphenot extract, UF Involves using larga pora membrenes and fairly low pressure. Salts, eugers, ofganit acids, smatier peptides and polyphenols ara allowed ta pass, while proteins, fat and polysaccharides are rejected. For thle altemative a UF can be used. This system should be capable of separating motecules lergér than 10,000 delion (Le. membrane dlameter between 0.05 ta0.1pm). ; UF membranes are usuatty nade of ceramics, callulosics, polysulione and polyvinylidene fluoride among others, For example, tubuler, hollow fiber, plate and spira| membranes commercially obtained, Examples of such membranes are those provided by Koch Inc, tle. HFM-116/100, HFM-‘WU 20US/1 3160, PCTIBWONVOINS 19 15 20 30 4 160/513, HFK-616}, Alfa Laval Inc,, Inge AG Inc. (Le. Dizzer series) and others, Such mambranea operate al prasaure range between 70 in 700 kPa {2010 100 pei). In the UF described in this invention, practically ll the polyphenols: pass through tha membrane end only a smal fraction remain in the retentete. The Joss of polyphenols In the refartate should be no higher than 144%, preferably leat than Sit% ae referred tn the total digsolved solids in the cocoa polyphenol extract or clef cocoa polyphenol exirect, After tha UF operation, the concentratian of polyphenols in the total dissolved sofids of the permeate should be up to 30wi% being preferably more than 40wi%, for example 45u4%, Optionally the permaate obtained:in the previous UF step may be arsed through a very thin Nenofitration (NF) membrane in orcer to ailminate the dissolved minerals from the solution, NF afso allows ” coneentration of the solution by eliminating water. NF Isnot 9s fine & Separation process as Reverse Osmosis (RO}, and uses membeanes that ere sfightly more open. However membranes Intended for RO can also bo ‘used in thia sie. NF allows small ions to pags through while rajecting largar Jons and most inorganic componients, depending on the size and shape at the molecule. In the present invention the NF used preferably has a Molecular weight cut off higher than 50 daltons, NF membranes ere uyuellly mada of thin film composite ond ceffulnsics, NF membrenes can be hofow fiber or spiral. Exampies of this kind of membranes are Whose provided by Koch Inc. (1.2. TFC-RO, TFC-S, ‘TFC-SR3, SelFRO series), PCI Membrance Systems Inc. (i.e. 81 module, C10 module, AFC98), Alfa Laval Inc, and others. The membranes uasd for NF operate at a range beeen 0.001 to @.01um. NF described In the : present icvention operake between 2000 fa $000 KPa (300 to 700psi}. Inthe NF described, practically all he polyphenols are retained in the eelentale. The kes of polyphenols from ihe relantala should be no higher co fo40 ‘wo 70087115160 PCT/UB20001U75 10 1s 20 25 30 Is of than 10%, preferably less than Swt% as referred to tha total dissolved solids present in the permeate oblained afler the UF step. ‘After the NF operation, the concentration ct polyphenols in the total dissolved solids of the retentate Is in the range up to 45wt%, preferably more than 50W1%, for example 55wt%, Importantly in the NF operation, water is removed. Therefore, the tolal dissolved solids in the retentate is higher than in the iniliat UF permeate, The tolal dissolved solids in the permeate Is preterably higher than 5wi8, more preferably higher than 1Owt%, for example as high as. 200%. : ‘An alternative way of concentrating the cocoa polyphenol extract of ‘step d) is to use vacuum evaporation. Whare this method is usd, @ vacuum, dryer system is employed, This method can also be further used to concentrate the UF permeate or NF rententate where these slaps have been included. ‘There are several kinds of industrial vacuum dryers available in tha: market that are suitable for concentrating the cocoa polyphenol extract @.9. horizontal dryers or vertical dryars. Preferably, the procass should bo canied out at a temperature less than 70 °C, more preferably less than 60 “C, for example 40 °C. The working pressure, for removing woter as solvent, should be less than 30 kPa (300 mber), preferably less than 20 kPa (200 mbar), ‘After remaving the solvent, 3 product with more than 15 wi% of soluble solids is obtained, preferably with more than 25 wi% of soluble solids, for example between 45 and 65 wt% of soluble solids. Tho total 000 polyphenol content in the cocoa bean concentrate obtained usually represeris at least 100%, more preferably at least 30w1% of the total solubla solids, “The cocoa polyphenol concentrate obtained in step e) Is in a liquid form, For some applications, it may be preferred that the cocoa polyphenal concentrate is in a powder form, Thus the process of tha present invention‘Wo 200s/118160 PTA 20US/NIO7S 10 1s 20 25 30 16 can optionally Include final drying slap to yleld 8 powdered coca polyphenol concentrate. The powder obtained preferably has a final moisture content of less than 61%, more preferably less than 3wi%, Suitable drying apperatus include @ pan vacuum dryer and a spray dryer, Where a pan vacuum dryer is used, after drying, hard blocks ere obtained. Preferebly, these blocks should be subjactad fo grinding before milling in order to reduce the particle size for making » powder. For grinding ‘a hammer or knife type mill can be used. As for milling, a hammer mill, pin mill, clasificalor-separator mill or a combination of mills can be used. The final particte size distribution is such that 99 vol% have a particle size of loss than or equal to 300 ym, preferebly 200 pm, more preferably 106 jim for example 75 ym ‘Where a spray dryer Is used caveral stabilizers can be used as a cartier in the drying process, for example guar gum. The final powder should preferably contain less than 10 wi% of stabilizers, preferably less than 3 ‘wi%, for example 1 wi%. The total cocoa polypheno! concontration in the final powder is at Jeast 10wt% preferably at least 150%. Preferably no mare than 50% of the total polyphenol content is lost in the drying and particle size reduction steps. Figures Figure 1 shows a graphical representation of examples of steps a) to oh Figure 2 shows @ graphical representation of steps d) and e); Figure 3 shows the results of a statistical study into the necessary time and temperature of the blanching step a). The result shown is a 3D surface representation of the estimated conditions. Figure 4 shows the further results of the statistical study carried out investigating step a).ae. WO musiiisi60 PCTAB200SIOLOTS a 20 15 20 7 G2 Figure 5 Is 8 surface contour representation of the resutts obtained {rom the statistical investigation inlo the conditions for step a). “The prosent invention will now be illustrated furhor by reference to tha following exemples, : Examples Exampie1 ‘The enzymatic browning reaction produces the darkening of food - products rich in phenolic compounds during thelr trensportation, storage, and processing. These undesired reactions in food products produce substances responsible for disagresable smeits and tastes. ‘The objective was to inactivate the polyphenol oxidase by heating, specifically, by thermal treatment in water (blanching) and to study the conditions of inactivation (Tine-Temperature relationship) regarding the control of the enzymatic browning reaction measured by the change of calor (sensory color analysis). Nine trials were performed under three different time and temperature combinations. ‘Temperatures= 75, 85 and 95 °C; Time= 5,10 end 15 minutes, 1% Catecol was used 88 a reagent to accelerale the browning. The browning was then measured to quantify what time and thermal treatment is necessary to optimize the inhibition of the browning reaction (melanosis) of cocos seeds. ‘Amelanosis scale was employed to measure the level of browning within the seeds. Experimental Procedure: Rew Material: Fresh unfermented cocoa seeds. Apparatus; ‘Thermocouple ‘Stopwatch ‘Stainless steel knife‘WO 20081115160 PCT US2005/001075 10 15 20 25 1 64 Water bath with temperature control Watchglass Reagents: Catecol 1%. 60 prams of cocoa were submerged in 2 litres of hot water and maintained in a waterbath at the temperture and time indicated above, The cocoa was cooled as quickly as possible under a tap. The cocoa seeds were placed in a watchglass and cut in half with a knife, Drops of 1% catecol were placed on (he surface and the color of the cocoa seeds was abserved. The results were recorded as @lustrated in Table 1 and Table 2 below. Table 1. Color scale used to describe the progression of malanosis Slight browning. Observed in some cocoa seeds. ‘Slight browning. Observed in the majority of cocoa seeds. Moderate browning, Observed in the majority of cocoa seeds, ‘Strong browning. Observed in the majority of cocoa seeds. [10° _[ Strong browning. Totally unacceptable. Introduction of the seeds into the water bath caused a temperature drop of 10°C. This is due to the transfer of temperature from the water to the seeds. In all cases, timing commenced when the temperature of the seeds equalled the preset temperature of the water,WO TRIS BC TURODSAOLHTS 20 15 35 10 w os Table 2. Results of the Inactlyalion of PPO RESULTS OF BLANCHING [__Smin 10min” Smin_| 6 & 4 2 4 2 4 As can be seen from the results presented in Table 2, the time and temperature that optimized the inactivation af polyphenoloxidase was at ‘95°C Tor & minutes. Under thase conditions, a completa absence of metanosis or browning was observed In Ihe cocoa seeds, According {o the results shown in Figures 3-5, the change In temperature (p<0.05) Is seen to have # muctt ferger effect on the level of imelanoste than the changg in time (p>0.05). A descreasing effect is seanon the leval of melanosis as tamperature ts Increased, due to the inactivation of Polyphenoloxidase. Furthermore, the lavet of metanosis Increased wilh an Increase in time, due to nonenzymatic browning reactions or Maillard reactions {hal depend on elevated temparaluras over prolonged lima Periods, Therefore, the confirmed thermal treatment necessary to avoid mmélanosis ar browning reaction is ef @5°C for 6 minutes, Longer tlmes reduce browning due to Metierd reactions. For a Melanosis scale between 0-8, the level of melanosis development al a temperature of 94°C far &-7 minutes is 0.8. fl can be concluded that thermal treatment prolonged for 2 minutes will not give a level higher tien 1 on the malanosts scale. Example 2. Polyphencle solubilization 25g of dry, defetted and unfermented cocoa been intermediate ‘containing 2.51 g of total polyphenols (8.25 wi%) was extracted Inklelly with water In a ratlo 1:15 {cocaa:water). The extraction was carried out al & temperature of 30 °C for a time period of 2.5 hours,“a ‘Wo 200118160 PCTrsz00sm01075 10° 1s 20 2s 30 ob 20 Alter the first extraction, the mixture was centrifuged. Two fractions were obtained: a liquid and exhausted solids. The exhausted solids were subjected to the preceding extraction process a further two times. The conditions were maintained the same, except that the ratio of solid:solvent In the last two extractions was 1:10. ‘The results of the experiment are illustrated in Table 3. ‘Table 3. Results of solubilization of cocoa polyphenols ‘cnanae ‘of =| Total rooovredin inthe a Bs (W1%) soution t Extraction) | 4at1 PaaS ass 113 | Exraction [18.51 | 26 0,88 0,185 | Exraction [1348 | 4334s 0,104} ft otal 81,08 [| 504584 142 Wis clear from tne results displayed in Table 3 thal after the third extraction, 81.08% of polyphenols are recovered in the solution, 584 mi of ‘solution is obtained from which 5.84 g are Total Salids (0,98 wt%), and 1.42 9 are total polyphenols. The total polyphenols reprasants 24.27% af the total ‘solids present in the solution. Example 3 Ufifermented fresh cocoa beans, contain on average 50 wt of moisture, 24 wi% of fat, 3.5 wt% of total polyphenols, 7.8 wt% of shell and 14.7 wt% of other compounds. 1000 Kg of fresh unfermented cocoa beans, were blanched in hat water at 95°C for 7 minutes to inactivate PPO enzyme. After blanching, the beans were rinsed In cool water. Next, the beans, with a molsture content of 44 wi%, were sun dried for a week to decrease the moisture content to 6 wt, Afler drying 532 Kg of dry unfermented cocoa beans with greatly‘WO 2008/1 15160 PCTAB 2004001075 2 0 as 20 30 a . 67 reduced andior inactivated PPO activity were obtained. This by-product coniained 6.57% of polyphenols, Ina next step, the particle size of the dry beans was reduced by ezacking and subsequent milling. The cracking wes done using @ hammer= mill for obtaining bits. Afler cracking, the bils were milled in a cryogenic pin- milf using nitrogen as a freezing media to avoid fat melting. During cryogenic milling, the by-product was frozen under — 5*C. The final particle size distribution was 890% under 150m. ‘The unfermented cocoa powder was defatted in order to promote dissolution, in the follawing operations. For de-fatting, a supercritical CO, extraction system was used, After the extraction, 285 Kg of unfermented defatled cocos bean Intermediate was Is obtained. This by-product contained 11,86% of total polyphenols and 1% of fat. Also 237 Kg af cocoa’ butter obtained. This butter Is suitable for human consumption. For extracting the polyphenols by solubifization, the 295 Kg of unfermented defatted powder is mixed with 4.425 Kg of water (1:15) for the first extraction. The mixture Is extracted in @ reactor by agitalton at 35 °C for 2.5 houra, In this extraction, 60% of the initial polyphenols wara in solution. After the extraction, the solids were separated using a decanter followed by 8 centrifuge, Two fractions were obtained. A fiquid fraction of 4.281 Kg containing 1.88% Total dissloved solids TDS (80,76 Kg) fram which 26% aro polyphenols (21 Kg). This fraction Is called the 1* solution. The other fraction Is made of 428,48 Kg of the semi-exhausted solids containing 50% moisture. ‘The exhausted solids still coniain 40% of the polyphenols which were present in the unfermented cocoa beans, The 428,48 Kg of exhausted Solids (50% of solids) were subjected to @ second extraction stop with 1.713,92 Kg of water (1:10) at the same conditions of the previous ‘extraction. As in the previous cass, two fractions were obtained, A liquid fraction of 1760,58 Kg conlaining 1.32% total dissolved solids (23,33 Kg) from which 20% are palyphanols (7 Kg). This fraction is called the 2 solution, The other fraction contains 381,82 Kg of exhausted solids 50% ofWO 2081 S108 “10 a5 20 30 PT AR2ONSRLIe7S 4F 22 3 which is moisture, The exhausted sods silll contain 7 Kg of polyphenols which can be dissolved in lulure extractions if desired. In the next step the solutions obtained in the 1% and 2" exlractions, were mixed together In an intermediate tank. The mixture of both solutions represents G052,1 Kg conlaining 1,71% total dissolved solids {04,1 Kg) of ‘which 26,9% are polyphenols (28 kg). ‘Then, the solution wats passed (rough an Ulirafitration membrane in order to remove the bigger particles (j.e. proteins, carbohydrates, etc.}. The membrane used had @ cut of 10.000 dalton. Afler tno ulrafittration two fractions are oblained, a retentaie and a permeste, The retetertale weighed 605,21 Kp and coralned 6,21% total dissolved solids (37,6 Kg) fram which 3,72'% wete polyphenals (1,4 Kp). The permeate weighed 5.446,21 Kg in solution contahning 1,22% total dlesalved solids (86,5 Kg) from which 40% ‘ate polyphenols (28,6 Ky). : ‘The next step carted out was 4 nanofiltralian performed in order to. ‘concentrate the total dissolved solids and to partially eliminate the salts, The 5,446.21 Kg of UF permeate wes passed through # nanofifter. As in the previous mambrane separation operaiion, Iwo fractions were oblained, The permoate Is made of 4,851,89 Kg containing 0,14% lotal dieanived solids (7 Kg), which are mainly dissolved saita. The enriched relentale weighsd 525 Kg and contained 10% total dissolved sollds (68,5 Kg) fram which 44,7% ‘were potyphonols (26,6 Kg}. Ine end step, the $85 Kg of NF permeate was concenirated using a ° vertical vacuum dryer at 55 °C and 300 mbar, in the drying process, 495,04 kg of water was removed, Finally, 99,16 Kg of liquid cocoa polyphenol soncentrals containing 60% total dissolved solids was obiained (59,5 Kg). This product contains 28,62% of polyphenols (26,6 Kg}. Optionally, the liquid cocoa polyphenols concentrate can be further fied In order to oblaln @ powder. For this purpose, the 88,18 Kg of Liquid Polyphenol Concentrate was mixed with 5 Kg of gum guar. The mixture was Ihen passed trough a apray dryer. Finally, 67,1 Kg of powdered cocoawo 20081118169 PCTHIB200N001075 44 2 polyphenol concentrate containing 4% of molsture and 39,64% of Polyphenols was oblained,‘WO 200115160 PCT/LN200S/001078 10 15 25 30 Glaims 1. A process in which cocoa polyphenol concentrate is obtained comprising the steps of 8) —_sudjecting unfermented cocoa beans to a blanching step in water at a lemperatura in the range from 85-100°C for a time period in the range from 3 10 15 minutes to give unfemmenied cocoa beans with reduced polyphenol oxidase activity, b) drying the unfermanted cocoa beans with reduced polyphenol oxidase activity at a temperature of less than 85°C to obtain dried unfermented cocoa beans with a moisture content of no more than 15%; ¢) subjecting the dried unfermented cocoa beans to a particia sizo reduction step to obtain dry unfermanted cocoa bean intermediate whereby at least 991% of the produc! has @ particle size less than or equal to ‘00pm; d) extracting polyphenols from the dry unfermented cocoa bean Intermediate to give @ cocoa polyphenol extract and extracted solids; ) concentrating the cocoa polyphenol extract to yield a cocoa polyphenol concentrate wherein the concentration of polyphenols present is ‘at least 10w1%; and wherein the process further includes a defatting slap which is carried out prior to slep d). 2. The process according to claim 1, wherein the defatling step is carried out afler step b) but prior to step c), 3. The process according to claim 1, wherein tHie defatting step Is carried out after step c} but prior to step d). : 4. The process according to claims 2 or 3, wherein in the defatting step the dried unfermented cocoa beans or cocoa bean intermediate are Pressed to form a presscake and fet which is removed. 5 ‘The process according to claim 4, wherein the prassing is carried out using en expeller press at a pressure of about 50 MPa, 3Womeansie PCTamzes/w01078 10 15 20 2s as 7 6, The procass according to claim 4, wherein the prasscake formed is subjected to a grinding step in which the particle size is reduced to less than or equal to SO0Oum. 7. The process according to claims 2 or 3,whersin in the dafatting step supercritical CO, extraction is employed. 8, Tha procass according to any preceding cialm, wherein in the particle size reduction step, the dried unfermented cocoa beans are milled, 8. The process according to claim 8, wherein in the particle size reduction step, the dried unfermented cocoa beans are milled using a exyogenic mill. 10. The procass according to any of claim 1 to 7, wherein in the particle size reduction step, the dried unfermented cocoa beans‘ar milled using @ mill-separator. 11, The process sccording to claim 10, wherein the milling step includes a final classification step to give a dry untermented cocoa bean intermediate whereby at lexst 9w1% of (he inlermadiate has a particle size of fess than or equal to 120m. 12. The process according to any preceding claim, wherein in step 4), the polyphenols are extracted using a solvent, 13, The process according lo ciaim 12, wherein the solvent is water of ethanol or mixture of the two. 14. The process according to claim 12 or 13, whorein the ratio of dry unfermented cocoa bean intermediate to solvent is in the range from 1:5 to 1:30 by weight, the extraction is carried ou al temperature of no mare than 75°C and during the extraction, continuous stirring is present. 15, The process according to any of claims 1 to 11, wherein in step 4), the polyphenols are extracted by centrifugation or filtration. | 16. The process according to any precading claim, whersin step d) includes a preliminary solubilization step,‘wo 20050115160 PCréumz0si00107S 10 1s 25 30 % 47. The procass according to claim 16, wherein the cocoa polyphenol extract obtained in step d) is subjected to a further extraction step. 16. The process according to claim 17, wherein the further exdraction step involves either centrifugation or microfiltration 19. The process according to any of claims 1 (a 18, wherein iri step €), the cocoa polyphenol extract is concentrated by ultra filtration to give a ‘cocoa polyphenol permeate. ‘20. The process according claims 19, wherein In step ¢), a further step of nanofiltration is carried out after ultrafiltration to give @ cocoa polyphenol retenate, 21. The process according to eny of claims 1 to 18, whérein in step 8), the cocoa polyphenol extract Is concentrated by vacuum evaporation. * 22, Tha process according to claims 19 or 20, wherein the cocoa polyphenol permeate and/or retentate Is further concenirated by vacuum evaporation. 23. The process of any preceding claim which further comprises @ final step of drying the cocoa polyphenol concentrate to obtain a powdered ‘cocoa polyphenol concentrate. “24, The process according fo claim 23, wherein the cocoa polyphenol concentrate is dried using @ vacuum drier or a spray drier. 25. ‘The process according to claim 1, which comprises an additional step of cracking and winnowing afer step b) and prior to step c). 26. The process eccording to any precading claim, wherein in step b), the unfermented cocoa beans with reduced polyphenol oxidase activity ‘are dried by exposure to the sun. 27. The process according to any of claims 1 to 25, wherein in step b), the unfermented cocoa beans with reduced polyphenol oxidase activity are dried using a heated air dryer, an unheated gir dryer, a commercial grain dryer, a baich fluidized bed dryer, under vacuum or a dielectric dryer.‘wo 20087115160 Figure 1 PCTIA200S/001075 92WO ANETINGD PCTARAOSONIOTS an af‘WO 20087118160 PCripz00s008n78 ar Figure 3PCTALS2WUSI00 1078 wo 2008115160 “ss Figure 5 3— PCT/182005/001075 US 6 O15 913 A (KEALEY ET AL) 18 January 2000 (2000-01-18) column 3, lines 1-14 column 13, Hines 11-16 colum 15, line 16 - column 16, line 6 figures 2A,; EP 1 026 164 A {ADA COCOA B.¥) 9 August 2000 (2000-08-09) paragraphs ‘0001! - “0007!, ‘0012! - ‘oot clein 1 aEPO 906 761 A (aac Bente oe COMPANY; ARCHER-DANTEL: aKY) 7 Apri 1999 (1999-06-07; a paragrache “ooa)! - “00031, ‘00241, 24,27 PATENT ABSTRACTS OF JAPAN 03, -30) 8 Py 11 346656 A PORTMAGR Samp; CO LID), 21 December 1999 (1999-12-21) abstract wi eae ‘A (BARRY CALLEBAUT FRANCE; ]EAN-PAUL; YERCAUTEREN, JOSEPH) 2002-02-21) 1, Vines 810 page 3, line 22 = page §, Tine 33 Us 6 265 589 Bi (BEST BERND ET AL) 24 duty 2001 (2001-07-24) column 3, Hine 58 - colum 4, line 22 column 7, lines 23-84 Fe Orainan aaa da oo “a Aowtaaton he PeT/182005/003075 127 12 page 2 of 2A EP 1026164 A €P 0906761 a aeCVRE pao ar GREAEREESSRRASSERILS ; d a 8 FRRERASSAGSIRRSSEEAG ‘er pete #eT/182005/001075 4336097 A 26-01-1998 9713196 & ‘31-10-2000 2264822 M1 12-03-1998 1235528 AC 37-11-1999 3014804 41 95-07-2000 1023038 AL 24-09-2008 128848 A 14-08-2002 2001500016 T 09-01-2001 2003204788 4 22-07-2003 ‘2247880 C2 27-12-2006 2002132018 AL 19-09-2002 2002136819 AL 26-09-2002 6194020 I 27-02-2001 9809533 Al 12-03-1998 6312753 Bi 06-11-2001 6372267 B1 16-04-2002 25-03-2008 6908715 $1 = 14-06-2005 2061007693 AL 32-07-2001, 6737088 61 18-05-2006 zon2o4so02 Al 13-04-2002 2002054586 12 30-05-2002 1026164 Al 09-08-2000 779856 62 17-02-2605 2977400 & 25-08-2000 (OO07835 A 10-09-2002 2361531 Al 10-08-1 1256815 AZ 20-11-2001, 29-10-2002 513896 A : 0045769 A2 10-08-2000 2003211186 AL 1-11-2003 2006224906 AL 1-11-2004 6576275 81 10-06-2003 6261565 81 17-07-2091 270894 T 18-07-2004 748832 B2 13-06-2002 22-04-1999 6518319 81 2002187211 At 13003168 Al 6399072 BI page 1 of 2INTERNATIONAL SEARCH REPORT PCT/182005/001075 us 6391308 8) US 6392309 81 21-05-2002 us 6395279 Bt 28-15-2002 a 9806962 A 13-09-1999 us 6391310 BL 21-95-2002 OP 11346656 A 21-12-1999 NONE wo 9214281 A 21-02-2002 FR 2812873 AL 15-02-2002 wD 942380) A 25-02-2002 R 0113198 A 08-07-2003 CA 2818984 AI 21-02-2002 ep 1909532 AL 14-05-2003 wo 0214251 AL 21-02-2002 ap 2005506948 T 10-93-2005 WX PA03001292 A 30-07-2004 ‘US 2004096566 AL 20-05-2004 US 6265593 Bl «24-07-2001 EP 0943675 AL 22-08-1999 at 242795 T 2003 A 226643 Al 13-09-1999 59808693 DI. 17-97-2003 es 2201354 13 16-03-2004 vr 943675 ‘31-10-2003 ICA ay Tony page 2 of 2* PATENT COOPERATION TREATY a gl Fomine DITERNATIONAL SEARCHING AUTHORITY ee ee AS Lt PCT es eiPCTaAA | WRITTEN OPINION OF THE INTERNATIONAL SEARCHING AUTHORITY {PCT Rule 430%s.1) aang —— dlaphmcraivyand) eee toera PCTASAZ10 (ensord shoo a eee et WERACTON FEEEEEE 806 form PCTASAZ20 eee atoe marae pone aaa ae mena) —— | Reva ener —— | PCT#B2008.001076 20.04.2005 24.05.2006 1 ‘reorestnal Peet Gnesenin (°C) or beth mona casa and TRC : 4236100, CO7B6LO0 ' RATRACEUTICAL 8A. fi — a => 1. This opinion contains indications relating to the tolowing keme: {@ GoxNo.! Basle ofthe opinion BoxNo.n Priority: D Borie tl Nor-esisblahream of opinion with regard 1o novelty, lnvendve step and Indusval applicablay 1D Bor No 1V Lack of unty of Inventin 3 boco.VRensoomd staan unde Pe bla) th gard mwa, nthe eo ori Cl BoxNo.VI Certain documemns eed D BoxNo. Vil Certain defects In the international application Gi Bor No. Vil Certain ebseivations on the International application 2 FURTHER ACTION demand for internation ‘eaamination le made, ths opinion wi unutly be ooraidered to be a ‘Stas ophion of to trical PotanaryEsarany |. Howoves, this does not apply were an ‘other than tls one wo be the ‘chosen (PEA haa nated the ‘under Pe 68 bi(o tat wrian pind of thls inberaaSonal Searching Authoaly (1. cptn i prone evo, conalared tm he a wrinn ophon of PEA. te apart i te to i submit i the (PEA a wrimes , whara aperopriain, with sinendinonts, before the expiration of tie Tact ton tcf malig Pom POTBAE ras reno me for a aa For further options, see Form POT&SA€20. 12 For further datall, seo notes to Foam PCTAGAZZ0. | Mane ond rag wines of the A; Tiltoteed Oleer eS — @) Form (POTSBAQOT) (Comer Sneel (hrary 2004)if WRITTEN OPINI NF THE Imemasonal epplication INTERNAT] NAL SEARCHING AUTHORITY PGT4B2005001075 Bor Nec Bestectthecpinios 1. Wath regard 00 the nis oplsion has been eased onthe baal ofthe memaronal appicaon the language In which it wes tied, unless otherwise indicated under this hem. Q cee are sete jor baal enu vom tho orgie tangas ln he otoweg > Namciy we dat tenn, i pein hs Don ented on be bese oe ao a. type of material: Os emquence tsting tablets) related to the sacuence lating ‘format of material; LU inwetten format C_incomputer readable fonn ‘©. ume of flingturnishing: © contained in te imometional appsication as fed. Oded together wilh the Intemational application in computer readable form, D tumished subsequently to thia Authorty for the purposes of sassch. 20 rater ete rote beard Ours alba ara ba eg Seba Copia ts Wetcalto tat ha epee eo done ct go bayer (0s fled, on appropriate, wore furniahod. — 4. Additional comments: Ferm POTIGN297 (deraary 2004)WRITTEN OPINION OF THE Intemational apptcation No. INTERNAT] NAL SEARCHING RITY_ ‘TE. PCT/AB2005/001075 Re tem V. Reference is made to the tollowing documents: + US 6015913 A (KEALEY ET AL) 18 January 2000 + EP 1 026 164 A (ADM COCOA B.V) 8 August 2000 : EP 0 806 761 A (ARCHER DANIELS MIDLAND COMPANY; ARCHER-DANIELS- MIDLAND COMPANY) 7 Apzil 1999 + PATENT ABSTRACTS OF JAPAN vol. 2000, no. 03, 30 March 20008 = JP 11 346656 A (MORINAGA & CO LTO), 21 December 1999 + WO 02/14251 A (BARRY CALLEBAUT FRANCE; LECOUPEAU, JEAN-PAUL; VERCAUTEREN, JOSEPH) 21 February 2002 : US 6 265 583 81 (BEST BERND ET AL) 24 Juty 2001 8 & ® BRE 2 Novelty and Inventive step 2.1 Document D1, which is considered to represent the most relevant state of the art, discloses a process for producing solids comprising active polyphenols from preferably untermented cocoa beans. Tho process of D1 comprises the key steps of micronization (= Infra-red heating), miifing, fat extraction, and solvent extraction of the polyphenols from the defatted solids. From this, the subject-matter of independent claim 1 differs in that the micronization elep Is replaced by a blanching step. Thus, the claimed process is now (Art. 33(2)PCT). 2.2 The blanching atep allows to Inhibit the polyphenol oxidase and thus, to preserve the active polyphenols against unwanted polymerization. This is not an obvious alternative to & micronization step, even If micronization probably aflows to obtain thal result also, because in D1 micronization Is said to be used to loosen the shells (col.3 .1-3). Nane of the other Prior art documents suggests a blanching step, or any other equivaient step, for the Inhibition of the polyphenol oxidase. Further, the claimed process eppears to provide advantages in terms of simplicity, cost, and polyphenol profile (p.3 U.23-28 of the description). Thus, It la considered that the prooass according to claims 1-27 involves an inventive step (Art. 33 (3) PCT). Ferm PCTASA/2S7 (Separate Shaw (Sheet 1} (EPO January 20041WRITTEN OPINI NF THE International eppication No INTERNAT! NAL SEARCHING AUTHORITY PCTAB2005001075 oF Box No. V__ Reasoned statement under Rule 43bis.1(a)() with regard io novelty, Inventive step or [raetfal apgiicebity elatians snd explanatione sup orang ‘such statement iad 1, Seatoment Nowaby (N) 127 levers step I'S) ‘Incuatrial applicabity (1A) 197 fa FE HE fF EE 2. Citatinan and explanations eum POTIRA/2I7 jJanuary 2004)Ren re 1, 8S y BE —Tuyekos - ExhuloFuRtincain : Rad: 08-104443- -00000-0000 iG ae: 9008-10-17 144049 Op, 3020 MUECREACIONER Industria y Come a is TUPERINTENDENCIA de Propiedad Industrial Division de Nuevas Creaciones REQUISITOS NECESARIOS PARA PRESENTACION Y AGILIZACION DEL TRAMITE USUARIO RADICADOR PATENTE DE INVENCION ( X ) MODELO DE UTILIDAD( ) } ) _edeactin do qua se acca ta concesién de une patorie (%) O) fe identifieacién del solictante o de la persona que presenta ebeld (x) ) = Descripcién de la invencién xy a) ~ Dibujos de ser estos pertinentes C) a) - Comprobanie de pago de ins tasas establecidas (%) Ob COMPLETA ( ) INCOMPLETA (X) DISENO INDUSTRIAL ( ) Ei eoeigraerdsrrhanhronp wtier vet tartar a) 0) - Ostos de idantificacién del solicitante o de ia persona que presenta la solickud o) o) - fotogrifica del Disefo Industrial = { o> muestra del material qua incorpara el - Comprobante de pago de Iss tasas eatablecidas oy o) COMPLETA ( } INCOMPLETA ( ) EZQUEMA DE TRAZADO | } Indicaciin de que se solicita el registro de Disefo Industrial = Datos de identificacién del soliciante o de la persona que presenta ta sofcud = Representaciin grifica del Esquema de Trazado - Comprobante de pago de las tasas estableckiss COMPLETA ( ) INCOMPLETA ( ) Fira responsable:_Frewnenda B rere: ID-ocl @REPUBLICA DE COLOMBIA SUPERINTENDENCIA DE INDUSTRIA ¥ COMERCIO 46 Polio 2020 ¥ Bogota D.c., Doster (a) CARTELLAWOS ARONDANO MARGARITA Apoderafio{a) y/o Reprosentante do NATRACBUTICAL &.A. RSFERENCIA Radicacién No. 06 s044a3 + Solicitud internacions! — PCT/1B2005/001075 Fecha inicio tase nacional 24/12/2006 Trémite a Bvanto 378 Actuacién 416 Oficio No. 1994 Folica 1 ‘Teniendo en cuonta qué la solicitud de privilegio da patente quo ae tramita bajo el expediente indicade en 1s referencia, reine los requisites de forma eatablecidoo an a Deciaign 486 de la Comisién de lo Commidad Andina, el Tratado de Cuoperucién en Materia de Patentes (PCT), el Roglamente y la Ciroular Gnica do 1a Superintondencia da Industria y Comercio, se envia el extracto de le solicicud a la Oficina de Cemunicacionod para efecto da mu publicacién en la Gaceta de Propiedad Industrial. Cimplase . Dado en Yogots DC, Oc. aap ALIX CARDENZA Dg VERGEL Jefe de ln én de Nuevas Creacionas adpand