Laboratorio N°4

Espectrofotometría UV-Visible.
Muestra Ambiental.

Profesora: Jessica Honores

Ayudante: Yihajara Fuentes
Integrantes: Francisco Fuentes
Matías Marambio
Fecha de práctico: 28/08/2019
Fecha entrega informe:04/09/2019
Objetivos
• Estudiar principios de espectrofotometría visible
• Determinar espectrofotométricamente el contenido de carbono orgánico en una
muestra de suelo chileno.

Resultados
Preparación de disolución estándar de sacarosa (100 mg/mL de C)

Se realiza la presente disolución con el fin de poder formar una curva de calibrado, la cual,
represente el comportamiento de las muestras problema correspondiente al suelo de la
comuna de Collipulli, IX región de Chile.

100 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝐶
× 1 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝐶 = 8.33 × 10−3 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝐶
12 𝑔 𝑑𝑒 𝐶

8.33 × 10−3 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝐶

× 1 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑆𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎 = 6.94 × 10−4 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑆𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎
12 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝐶

6.94 × 10−4 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑆𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎

× 342.3 𝑔 𝑑𝑒 𝑆𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎 = 0.2377 𝑔 𝑑𝑒 𝑆𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎
1 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑆𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎

Ahora bien, como el matraz de aforo es de 50 mL, se debe multiplicar la masa de glucosa
por 50, para así conservar la concentración solicitada, en el enunciado de 100 mg/mL.

0.2377 𝑔 𝑑𝑒 𝑆𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎
∗ 50 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 = 11.8778 𝑔 𝑑𝑒 𝑆𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎
1 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎

Una vez, determinada la cantidad de sacarosa necesaria para obtener dicha

concentración en un matraz de 50 mL, se procede a determinar la cantidad de disolución
Stock de Sacarosa a añadir en cada uno de los matraces a estudiar.

Preparación de curva de calibrado

Se preparan, en 6 matraces, en los cuales variará el volumen de la alícuota de Sacarosa
a añadir sobre el mismo, la concentración de Sacarosa en cada Erlenmeyer variará desde
0 a 50 mg, en intervalos crecientes de 10 mg.
Se empleará un ejemplo de cálculo, correspondiente al matraz que posee 10 mg de
carbono, con los demás matraces se procede de igual forma.

10 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝐶
× 1 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑠𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎 = 0.1 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑠𝑡𝑜𝑐𝑘 𝑠𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎.
100 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝐶
Tabla 1: Diferentes alícuotas de solución stock de sacarosa que se debe añadir sobre cada
Erlenmeyer.
Disolución N° Concentración (mg/mL) Volumen (mL)
1 0 0
2 10 0.1
3 20 0.2
4 30 0.3
5 40 0.4
6 50 0.5

Preparación de disolución 0.5 M de dicromato de sodio.

Se procede a preparar dicha disolución de dicromato en un matraz de 250 mL, por lo que
el volumen considerado será 250 mL.

0.25 𝐿 × 0.5 𝑀 = 0.125 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑐𝑟𝑜𝑚𝑎𝑡𝑜 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑑𝑖𝑜

0.125 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑐𝑟𝑜𝑚𝑎𝑡𝑜 𝑑𝑖ℎ𝑖𝑑𝑟𝑎𝑡𝑎𝑑𝑜

× 298 𝑔 = 37.25 𝑔 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑐𝑟𝑜𝑚𝑎𝑡𝑜 𝑑𝑖ℎ𝑖𝑑𝑟𝑎𝑡𝑎𝑑𝑜.
1 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑐𝑟𝑜𝑚𝑎𝑡𝑜 𝑑𝑖ℎ𝑖𝑑𝑟𝑎𝑡𝑎𝑑𝑜

Curva de calibrado.
Todas las absorbancias, fueron medidas en un λmax de 600 nm.
Tabla 2: Valores obtenidos al realizar la curva de calibrado a solución de sacarosa.
Concentración (mg/mL) Absorbancia
Blanco 0
0 -0.006
10 0.2193
20 0.4834
30 0.6926
40 0.8942
50 1.1186
 Curva de calibrado y = 0,0224x + 0,0058
R² = 0,9984
1,2

0,8
Absorbancia

0,6

0,4

0,2

0
0 10 20 30 40 50 60
-0,2
Concentracion (mg/mL)

Gráfico 1: Corresponde a la representación gráfica de la tabla 2.

Determinación de carbono orgánico en muestra de suelos.

Tabla 3: Corresponde a masa y absorbancia de 3 muestras de suelos a analizar mediante
UV-Vis.
Numero de muestra (N°) Masa de muestra (g) Absorbancia
1 1.1458 0.7667
2 1.1587 0.5720
3 1.1470 0.5845

Haciendo uso del grafico 1, se puede obtener la ecuación de la recta correspondiente a la

curva de calibrado formulada con sacarosa.
𝑦 = 0.0224 𝑥 + 0.0058
De la recta, empleando la ley de Lambert-Beer, se puede obtener las concentraciones de
las 3 muestras problemas de suelo.
El valor de la absorbancia se debe reemplazar por “y”, mientras que el valor de “x” entregará
la cantidad de carbono presente en dicha MP. Se ejemplificará con la muestra N°2 para
determinar la cantidad de carbono.
0.572 = 0.0224𝑥 + 0.0058
0.572 − 0.0058 𝑚𝑔
= 𝑥 ; 𝑥 = 25.277
0.0224 𝑚𝐿
Ahora bien, con la cantidad de carbono obtenido por cada muestra, se puede determinar el
porcentaje de carbono en la misma, empleando una relación simple:
25.277 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝐶
× 100% = 2.1815 % 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑟𝑏𝑜𝑛𝑜 𝑒𝑛 𝑀𝑃 𝑁°2.
1158.7 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝐶
Tabla 4: Corresponde a la concentración de cada muestra de suelo.
Muestra Numero (N°) Concentración (mg/mL) Porcentaje
1 33.96875 2.9646%
2 25.27678 2.1815%
3 25.83482 2.2524%
Promedio 28.36011 2.4662%

Tabla 5: Parámetros estadísticos

Promedio Desviación Estándar Coeficiente de Varianza
28.36011 4.8652 17,1909%

Discusión
En el presente practico, se emplea la técnica de espectrofotometría UV-visible, con el fin de
determinar y cuantificar diferentes concentraciones de un compuesto en solución, en este
caso, muestras de carbono orgánico en suelo de la comuna de Collipulli. Para esto se
realiza un tratamiento previo de la muestra que consiste en una combustión húmeda de
ésta con dicromato de sodio (𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7 ) y ácido sulfúrico (𝐻2 𝑆𝑂4 ) con el fin de reducir el
Cromo, determinando su concentración por UV-Visible y así el porcentaje de Carbono en la
muestra ambiental.
Primeramente, se realiza una curva de calibrado utilizando sacarosa como disolución
estándar, para posteriormente realizar la combustión húmeda y medir la absorbancia de las
disoluciones. Para determinar la linealidad de un método, se realiza una curva de calibrado
que se puede traducir como la capacidad de un método analítico para obtener resultados
que sean directamente proporcionales a la concentración de un compuesto en una muestra
dentro de un determinado intervalo de trabajo, en este caso se obtiene una ecuación de la
recta (𝑦 = 0.0224 𝑥 + 0.0058) con un coeficiente de correlación lineal (r2) igual a 0,9984,
traducido analíticamente como aceptable para realizar las mediciones. Relacionando la
absorbancia y la curva de calibrado es posible determinar la concentración de carbono en
la muestra de suelo, teniendo como resultado un 2,466% de Carbono promedio en la
muestra.

𝐶12 𝐻22 𝑂11 + 11 𝐻2 𝑆𝑂4 → 12 𝐶 + 11 𝐻2 𝑆𝑂4 𝑥 𝐻2 𝑂

2 𝐶𝑟2 𝑂7 −2 + 3 𝐶 + 16𝐻 + → 4 𝐶𝑟 3+ + 3 𝐶𝑂2 + 8 𝐻2 𝑂 [1]

La oxidación del carbono orgánico se produce por una mezcla oxidante de dicromato de
potasio y ácido sulfúrico concentrado. El carbono orgánico reduce los iones 𝐶𝑟 6+ amarillo-
naranja del dicromato inicial a iones 𝐶𝑟 3+ de color verde, lo cual se puede seguir
espectrofotometría UV-Vis.
La cantidad de luz absorbida por una solución está directamente relacionada con la
concentración del analito en la solución, esta relación se expresa de manera lineal en la ley
de Beer, la cual tiene la forma: A = ε x L x C donde A es la absorbancia de un analito en
solución, ε corresponde al coeficiente de absortividad molar y C es la concentración que
tiene dicho analito en la solución.[2]

Preguntas
1.- Defina detalladamente cada uno de los componentes principales de un
espectrofotómetro [3]

• Fuente de radiación: Esta, debe generar un haz de radiación con potencial suficiente
para que la señal sea detectada, comúnmente es una lampara de filamento de
Wolframio. Existen fuentes de radiación continuas, como la de Wolframio o Deuterio
y fuentes de líneas, estas ultimas son mas utilizadas en fluorescencia molecular y
atómica o espectroscopia Raman.
• Rendijas: Parte del monocromador. Su principal rol o función es eliminar las
interferencias presentes, permitiendo que solo la longitud de onda adecuada incida
sobre la muestra.
• Prisma: Parte del monocromador. Este, permite convertir la luz policromática en
monocromática, dispersando todas las longitudes de onda, permitiendo así
seleccionar de forma adecuada aquella que sea únicamente necesaria.
• Cubeta con muestra: Celda, comúnmente de cuarzo, sobre la cual se vierte la
muestra y el blanco, con el fin de hacer incidir el haz de luz sobre el y así poder,
mediante el detector, tomar la absorbancia requerida.
• Detector: En palabras simples, son los conversores de la luz monocromática a una
señal que si puede ser recibida por el computador. Existen de dos tipos, de fotones
y de calor. Entre los detectores de fotones están las celdas fotovoltaicas los
fototubos, tubos fotomultiplicadores, detectores de fotoconductividad, fotodiodos de
silicio, detectores de transferencia de carga. Dentro de los detectores de calor, se
encuentran detectores que no son tan eficaces como si lo son los detectores de
fotones.
2.- Mencione las ventajas de usar el espectrofotómetro UV-Visible en el análisis
cuantitativo

• Primeramente, se puede identificar la espectrofotometría UV-Visible como una

técnica no destructiva por lo que se podría utilizar nuevamente la muestra para
análisis posteriores, por otra parte, existe una relación lineal entre la absorbancia y
la concentración, lo que permite una determinación rápida sin una gran preparación
previa de la muestra

Conclusiones
• Se obtiene un 2,4662% de carbono orgánico promedio en la muestra de suelo con
una desviación estándar de 4.8652 y un coeficiente de varianza de 17,1909%

• El carbono orgánico de muestras de suelo se puede determinar por esta

metodología.
Bibliografía
[1] “Análisis químico cuantitativo”, Harris D. Ed. Reverté, EE.UU, 3º Edición (2007)
Pág. 360-371
[2]: “Química analítica “. G. D. Christian. Editorial Mcgraw–hill. España. 6º edición (2009)
Pág. 482-497.
[3]: ‘Principios de Análisis Instrumental’’, D.A. Skoog. Ed. McGraw-Hill, México, 5°
Edición. (1994). Pág. 152-200.