Inactivación térmica de agentes patógenos y bacterias

indicadoras a temperaturas por debajo de la ebullición

Resumen.
El uso de agua de lluvia recolectada en sistemas de agua caliente sanitaria puede
resultar en una optimización, sin embargo, los beneficios ambientales y
económicos para la gestión del ciclo urbano del agua, la calidad del agua y los
riesgos para la salud de tal escenario no se han investigado adecuadamente. Se
llevaron a cabo análisis de inactivación térmica en ocho especies de no
formadores de esporas.
bacterias en un medio acuático a temperaturas relevantes para los sistemas de
agua caliente sanitaria (55-65 1C), y las susceptibilidades al estrés por calor se
compararon utilizando valores D. El valor D se definió como el tiempo requerido
para reducir una población bacteriana en un 90% o 1 reducción logarítmica.
Los resultados encontraron que ambas cepas probadas de Enterococcus faecalis
fueron las bacterias estudiadas más resistentes al calor, seguido de los patógenos
Shigella sonnei biotipo A y Escherichia coli O157: H7, y la E. coli no patógena O3:
H6. Pseudomonas aeruginosa se encontró que es la menos resistente al calor,
mientras que Salmonella typhimurium, Serratia marcescens, Klebsiella
pneumoniae y Aeromonas hydrophila mostraron capacidades de resistencia al
calor mínimas. A 65 °C, cualquier especie demostró poca resistencia térmica, con
reducciones logarítmicas en la concentración que ocurren en segundos. Los
resultados de este estudio sugirieron que el rango de temperatura de 55 °C a 65
°C fue crítico para la eliminación efectiva de componentes bacterianos patógenos
y respaldaron la tesis de que los sistemas de agua caliente deberían operar a un
mínimo de 60 °C

Introducción.

Los aumentos en la demanda de agua, las poblaciones humanas y las frecuencias

de sequías en las cuencas de abastecimiento de agua han llevado a una
comprensión de las limitaciones del paradigma de suministro centralizado de agua
para proporcionar seguridad hídrica futura (Coombes y Kuczera, 2002). Muchas
autoridades en Australia y alrededor del mundo han adoptado el concepto de ciclo
integrado de la gestión de agua, que implica el uso de agua eficiente
electrodomésticos para gestionar la demanda de agua residencial y el uso de
múltiples fuentes de agua incluyendo agua de lluvia, aguas residuales y
suministros municipales (Barry et al., 2005; Coombes y Mitchell, 2005).

Se espera que la instalación generalizada de tanques de agua de lluvia para

complementar los suministros de agua de la red doméstica reduzca los volúmenes
de aguas pluviales, mejore la calidad de las aguas pluviales urbanas, reduzca las
demandas urbanas de agua al tiempo que proporciona beneficios y permita una
mayor seguridad regional del agua (Coombes et al., 2002, 2003). La magnitud de
estos beneficios depende del volumen de agua utilizada de los depósitos de agua
de lluvia, con beneficios óptimos logrados cuando la extracción de agua los niveles
en los tanques se maximizan (Coombes et al., 2002). Utilizando agua de lluvia
para abastecer la demanda de agua caliente sanitaria, que representa una
fracción sustancial de la demanda de agua interior, ayudará a maximizar la
reducción de los niveles de agua en tanques.

La aceptación de la práctica de utilizar sistemas de agua caliente suministrado por

el agua de lluvia por las autoridades sanitarias depende en gran medida de la
calidad higiénica del agua pasteurizada. El agua caliente de los sistemas
suministrados por aguas tratadas en los municipios, han elevado la conciencia de
salud pública en el pasado debido a una serie de brotes de enfermedad del
legionario asociados con los sistemas de agua caliente que contienen el agente
etiológico Legionella pneumophila (Ezzeddine et al., 1989; Lee et al., 1988;
Wadowsky et al.,1985; Goetz et al., 1998). Es ampliamente reconocido que el
agua de lluvia colectada sin calefacción generalmente no cumple con las pautas
de la Organización Mundial de la Salud para la Calidad del Agua de Consumo
(OMS-GDWQ) (OMS, 2004) o las Pautas Australianas para el Agua Potable
(ADWG) (NHMRC / ARMCANZ, 2001) debido a la presencia de bacterias
coliformes termo tolerantes. Estudios de varios países diferentes han identificado
una variedad de bacterias fecales, patógenas y patógenas oportunistas dentro de
los tanques de agua de lluvia, incluida Escherichia coli, Enterococcus, Salmonella,
Aeromonas, Pseudomonas, Shigella, Klebsiella y Vibrio (Simmons et al., 2001;
Plazinska, 2001; Uba y Aghogho, 2000; Ariyananda, 1999; Thomas y Greene
1993; Fujioka et al., 1991).

Sin embargo, la capacidad del calor para reducir las cargas microbianas es una
fenómeno conocido y la recomendación generalizada de hervir agua todavía es
emitida por proveedores de agua municipales durante tiempos de contaminación.
Estudios de campo limitados han revelado que los sistemas de agua caliente
sanitaria que funcionan a temperaturas de ebullición también pueden reducir en
gran medida las concentraciones bacterianas de los suministros de agua de lluvia
(Coombes et al., 1999, 2003; Lye, 1991). Siguiendo los resultados de la
demostración del proyecto, han revelado que las aguas pluviales tratadas a través
del almacenamiento en sistemas de agua caliente (temperaturas 50-65 °C) y calor
instantáneo los sistemas de agua (temperatura 55 °C) pueden producir agua que
cumple con las directrices australianas de agua potable para el índice organismos
(Coombes et al., 2002, 2003). Sin embargo, la relevancia de los resultados de la
calidad del agua caliente basada en índices de organismos patógenos específicos
es desconocido debido a la falta de datos para comparar las tasas de inactivación
térmica de organismos indicadores y patógenos en un medio de agua dulce.

La cantidad limitada de investigación sobre las tasas de inactivación térmica de

especies relacionadas con el agua se han centrado principalmente en especies de
Legionella y, en menor medida, Pseudomonas y Staphylococcus (Dennis et al.,
1984; Sanden et al., 1989; Stout et al., 1986). Los datos de inactivación térmica
para una amplia gama de otros patógenos se han desarrollado dentro de los
alimentos y productos perecederos (por ejemplo, Blackburn et al., 1997; Juneja
Marmer, 1999; Oteiza et al., 2003) y dentro de nutrientes líquidos y en solución
salina (ICMSF, 1996). Sin embargo, se ha demostrado claramente que las
variables ambientales, como el pH, la actividad de agua y el contenido de grasa
del medio, pueden influir mucho en las tasas de inactivación térmica (Humphrey y
Lanning, 1987; Goepfert et al., 1970; Gibson, 1973; Oteiza et al., 2003), haciendo
difícil la extrapolación de estos resultados a la inactivación por calor en un medio
de agua dulce. La fase de crecimiento y la disponibilidad de nutrientes se sabe
que también tienen influencias pronunciadas sobre la resistencia al calor, con
células estacionarias y hambrientas que demuestran resistencia máxima, debido al
menos en parte a la traducción del gen regulador global rpoS (Fujita et al.,1994;
Loewen y Hengge-Aronis, 1994; Miksch y Dobrowloski, 1995; Yildiz y Schoolnik,
1998). La resistencia al calor de las bacterias dentro de los tanques de agua de
lluvia también puede verse influenciadas por la temperatura del agua, ya que el
agua de lluvia almacenada es generalmente significativamente a temperatura más
baja, típicamente 12-25 °C, que las temperaturas dentro del tracto intestinal de
animales de sangre caliente.

Hay una variedad de bacterias que son relevantes para la salud con implicaciones
en los sistemas de agua potable, para los cuales son poco aplicables los datos
que existen acerca de la inactivación térmica. Los objetivos de esta investigación
fueron divididos en tres: en primer lugar, fue determinar los valores D en un medio
de agua para seis bacterias no formadoras de esporas utilizadas para evaluar la
calidad del agua potable; en segundo lugar, fue determinar si las células de fase
estacionaria que habían sido privadas de nutrientes eran más resistentes al calor
que aquellas pertenecientes a la fase estacionaria que sí habían recibido
nutrientes; y finalmente, evaluar los efectos de los dos crecimientos a
temperaturas de susceptibilidad al calor.

Materiales y Métodos.
Selección de especies y cultivos bacterianos. Las especies de bacterias
utilizadas en estas investigaciones incluyeron dos cepas de Enterococcus faecalis
(no hemolítico y hemolítico), dos cepas de E. coli (EHEC patógena O157: H7
ATCC 43895 y O3 no patógeno: H6), Pseudomonas aeruginosa, Salmonella
typhimurium (LT2), Serratia marcescens, Klebsiella pneumoniae (ATCC 13883),
Aeromonas hydrophila y Shigella sonnei (biotipo A) las cuales se obtuvieron de
TAFE NSW Hunter Institute, o aisladas de tanques de agua de lluvia. Las ocho
especies estudiadas son encontradas en alimentos comunes y patógenos
transmitidos por el agua, y son definidos por la OMS y el ADWG como organismos
de preocupación significativa para la salud o como indicador clave e indicadores
de organismos, y han sido aislados de un número de sistemas de captación de
agua de lluvia en todo el mundo (para ejemplo, Simmons et al., 2001; Plazinska,
2001; Uba y Aghogho, 2000; Ariyananda, 1999; Thomas y Greene, 1993; Fujioka
et al., 1991). Las especies seleccionadas han estado implicadas en una variedad
de enfermedades clínicas, incluida la gastroenteritis, neumonía bacteriana,
infecciones del tracto urinario e infecciones oportunistas de la piel, oídos y ojos.
Dos cepas de E. faecalis y E. coli fueron usadas para evaluar las diferencias en la
resistencia de calor entre cepas patógenas/hemolíticas y no patógenas /
hemolíticas, ya que estas especies son actualmente los dos tipos de organismos
indicadores más utilizados para el monitoreo de calidad de agua. Un requisito
importante de un organismo indicador es que exhibe un valor comparable o de
menor respuesta susceptible al estrés ambiental en comparación de los patógenos
a los que representan. Por lo tanto, fue necesario evaluar una gama de
organismos patógenos relevantes junto con los organismos indicadores.

Condiciones de crecimiento. Los cultivos se mantuvieron en agar sangre (todos

los caldos y agars comprado de Oxoid) y periódicamente re cultivado. Cada la
cepa se cultivó en caldo de infusión de cerebro corazón (BHI) de 100 ml en
matraces de 250 ml incubados aeróbicamente en una incubadora con agitación
(180 rpm) a 37 ° C, por dos veces consecutivas de 12 h (E. coli, S. typhimurium,
S. sonnei) o de 22 h (K. pneumoniae, P. aeruginosa), obteniendo transferencias
hechas con 100 ml de inóculo. En porciones de diez mililitros del final de la fase
estacionaria de los cultivos (OD 480 =1. 4), se centrifugaron (3373 g, 10 min) a 4 °C,
y los gránulos se re suspendieron en 1,5 ml de agua desionizada estéril
(esterilizada en autoclave), para dar concentraciones aproximadas de 2 x 1010
células/ml. Las concentraciones de inoculo se determinaron por dilución en serie y
su subsecuente dispersión en medio de agar nutritivo.
Para determinar la influencia del consumo de nutrientes (hambre) en la resistencia
de calor de las células de la fase estacionaria, los sedimentos centrifugados fueron
re suspendidos en agua desionizada estéril (deficiente en multi nutrientes) y se
dejó a temperatura ambiente (24 1C) durante 24 h. Para determinar la influencia
de la temperatura de crecimiento en la resistencia de calor, una bacteria
relativamente susceptible al calor (S. typhimurium LT2) y otra bacteria
relativamente resistente al calor (S. sonnei biotipo A y E. coli O157: H7) fueron
cultivadas aeróbicamente en BHI a 20 1C durante 48 h (para alcanzar la fase
estacionaria) de la misma manera a la descrita anteriormente para las células “sin
hambre”.

Configuración experimental y aplicación de calor. Se usó un soporte de réplica

para suspender ligeramente la muestra contenida en el matraz Erlenmeyer, el cual
está encima de un bloque calefactor Thermolyne Cimarec 2s con agitador
magnético. La configuración fue diseñada para garantizar un rango de fluctuación
de temperatura de¿ ± 0.15° C, según lo recomendado por Pflug y Holcomb (1991).
Un agitador magnético estéril y dos detectores de resistencia de temperatura
(RTD), se colocaron en la muestra dentro del matraz Erlenmeyer. El agitador
magnético se ajustó a baja velocidad para crear un vórtice ligero, mezclado
adecuada llevado a cabo por 3 s según lo determinado por los controles. Los RTD
son registrados directamente en un registrador de datos Dataker DT50 que está
conectado a una computadora portátil programada para mostrar los perfiles de
temperatura en intervalos de 1 s, utilizando el software DeTransferTM.
Un volumen fijo de agua desionizada estéril (199 ml) fue colocado en un matraz
Erlenmeyer sostenido sobre el plato caliente y se calienta por convección a la
temperatura letal apropiada (55, 60, 65 °C) antes de la inoculación. Después de la
temperatura de estabilización, se inyectó 1 ml de cultivo re suspendido en el medio
de agua y la sincronización se inició inmediatamente. El mezclado rápido se
observó visualmente y se confirmó mediante muestreo multipunto del control, con
concentraciones uniformes (<0.2 de variación logarítmica) lograda en 3 s. Se
tomaron muestras de un mililitro a tiempos predeterminados para inmediatamente
después de apagarlos, diluirlos en agua desionizada a temperatura ambiente.

Conteo de sobrevivientes y análisis de datos. Las bacterias supervivientes se

enumeraron mediante diluciones apropiadas en placas de dispersión en agar
nutritivo (células sin hambre) o R2A agar (células hambrientas) e incubación a 37
°C durante 48 h. El tipo de agar utilizado no se cree que sesgue los resultados, ya
que experimentos preliminares no mostraron diferencias entre recuentos en placa
de células no inanimadas con choque térmico en nutrientes y agar R2A. El valor D
se define como el tiempo requerido para
reducir una población bacteriana en un 90% o bien, 1 reducción logarítmica
(Prescott et al., 1993). Se realizó un mínimo de tres réplicas para cada
experimento, y se obtuvieron valores D mediante la fórmula:

( T 2−T 1 )
D x=
( log C 1−logC 2 )
Donde:
donde D x es el valor D en segundos para la temperatura x, T 2 es el número de
segundos transcurridos desde el tiempo cero hasta el punto en la muestra final, T 1
es el número de segundos transcurridos en el punto de muestra inicial desde el
tiempo cero, C 1 es la concentración de bacterias en T 1, y C 2 es la concentración de
bacterias en T 2. Los datos fueron analizados usando Microsoft Excel para calcular
valores D y realizar análisis de varianza (ANOVA) Los controles consistieron en
suspensiones celulares inoculada en agua a temperatura ambiente. El mismo
experimental se utilizó la configuración, incluida la inserción de los dos RTD y
agitador magnético. Las muestras de suspensión celular utilizadas para los
controles fueron tomadas de los cultivos iniciales utilizados en los experimentos
después del paso de centrifugación.

Resultados y discusiones.
Inactivación por calor.
Se observaron reducciones significativas en los recuentos bacterianos viables
para todas las bacterias probadas cuando se estresaron térmicamente a 55ºC. 60
y 65 °C como se muestra en la figura 1a – j, que representa una compilación de
todos los puntos de datos de al menos tres réplicas de experimentos para cada
especie. Se observaron grandes variaciones en las tasas de inactivación térmica
entre las especies de bacterias probadas, así como entre las tres temperaturas de
prueba para cada especie
Las dos cepas de E. faecalis mostraron las mayores capacidades de resistencia al
calor en estas condiciones experimentales, seguido por las dos cepas de E. coli y
S. sonnei. Se encontró que a 55 ° C la E. coli O3: H6 no patógena fue
significativamente más resistente al calor que la E. coli patógena O157: H7
(Po0.01), mientras que la E. faecalis no hemolítica fue más resistente, aunque
estadísticamente menos significativo, que la cepa hemolítica. Esto es de interés
dado que son principalmente cepas no patógenas de E. coli las que son
detectadas durante el monitoreo de la calidad del agua. Ya que los organismos
indicadores son idealmente no patógenos y poseen ligeramente mayores
capacidades de resistencia al estrés que los organismos que representan
(Feachem et al., 1983), lo encontrado en este estudio nos da una seguridad
ligeramente conservadora de medir en casos donde las muestras de agua caliente
dan positivo para E. faecalis o E. coli.

Cuando se desafió a 55 °C, varias cepas exhibieron un período de retraso inicial

donde la resistencia al calor parecía ser la máxima. En estos casos, el valor D se
tomó directamente de la sección de línea del gráfico donde la mayoría de las
reducciones de registros ocurrió, como se muestra en las Figs. (1a, c – e y h) y se
resumió en Tabla 1. Esto demuestra una de las limitaciones del uso de Valor D
para describir datos de inactivación térmica, que asume una tasa de reducción
constante en el tiempo. Es importante, por lo tanto, que las evaluaciones de riesgo
y desempeño de los sistemas de agua no se basen únicamente en datos de valor
D sino también reconocer la dinámica de inactivación de las especies relevantes.

A medida que aumenta la temperatura, las variaciones en las resistencias térmicas

entre especies se hicieron menos pronunciadas. La capacidad de resistencia al
calor de S. typhimurium, S. marcescens, K. pneumoniae y A. hydrophila disminuyó
mucho a 60 °C con varias reducciones de registro que ocurren dentro de 1 min.
Los valores D60 para E. faecalis, E. coli y S. sonnei fueron de dos a siete veces
más rápidas que los del L. pneumophila serogrupo 1 (D60 138–288 s) como lo
reportado por Stout et al. (1986) A 65 °C, los valores D fueron menores de 6 s para
cada especie, con excepción de E. faecalis (7–19 s) que es comparable con los
hallazgos de Dennis et al. (1984) que informaron D65 de 9 s para el relativamente
resistente al calor L. pneumophila.
Influencia del consumo de nutrientes en la fase estacionaria de las células.
Cuando el estrés por calor fue precedido por 24 h inanición de multi nutrientes, las
capacidades de resistencia al calor de varias especies se redujeron
significativamente, como se indica en la Tabla 1. Células de fase estacionaria de
E. coli O3: H6, P. aeruginosa y S. typhimurium fueron significativamente más
susceptibles a 55 °C de estrés por calor cuando ya no tiene hambre con
reducciones en los valores D como se muestra en Tabla 1 (P<0.05, <0.01 y <0.05,
respectivamente). Este descubrimiento sugiere que estas bacterias pueden
comenzar a perder su capacidad para resistencia al calor en periodo de un día de
entrar en una reserva de agua oligotrófica. La E. coli patógena O157: H7 no
mostró alteración alguna en sus características de resistencia al calor después del
hambre. S. sonnei y ambas cepas de E. coli continuaron exhibiendo una fase de
retraso inicial cuando se desafía a 55 °C, después de someterse a inanición de
multi nutrientes (datos no mostrados).
Se pensó que varios mecanismos intracelulares están involucrados en la
respuesta al estrés, incluida la producción de proteínas protectoras resultantes de
la traducción de los rpoS gene. El gen rpoS codifica un factor sigma alternativo, σ s,
una subunidad de ARN polimerasa responsable de traducir una cierta cantidad de
genes involucrados en varias respuestas al estrés (Lange y Hengge-Aronis, 1991).
Aunque la expresión de rpoS no se midió directamente en este estudio,
investigaciones previas ha establecido que el hambre de E. coli O157: H7 durante
24 h a 20 °C es adecuado para inducir la expresión del gen rpoS y la traducción de
varias proteínas protectoras reguladas por rpos involucrado en la respuesta al
estrés (Zhang y Griffiths, 2003; Cheville et al., 1996). En este estudio, se encontró
que la resistencia al calor de las células de fase estacionaria hambrientas acordes
a un periodo de 24 h, no fue mayor que el de las células de fase estacionaria sin
hambre. Esto bajo la suposición de que esto se deba a que el gen rpoS fue
traducido al entrar en fase estacionaria, y que el desencadenante adicional para la
expresión de rpoS (inanición) no induce la transcripción adicional de rpoS o una
respuesta al estrés por efecto de calor.

Temperatura de crecimiento.
Dado que es probable que las bacterias presentes en los sistemas de agua de
lluvia sean expuestas a un rango de temperatura de 12–25 °C en la mayoría de los
climas moderados en el mundo, la influencia de una menor temperatura de
crecimiento por resistencia al calor fue investigada para E. coli O157: H7, S.
typhimurium y S. sonnei. Curiosamente, la temperatura de crecimiento no parece
influir en todas las especies, pero ocurre de una manera específica en cada
especie. Si bien los cambios no son estadísticamente significativos en el valor D
que se asociaron con el crecimiento en 20 o 37 °C para E. coli O157: H7 o S.
sonnei, nuestros resultados mostraron que tras un aumento en la temperatura de
crecimiento de 20 a 37 °C se presentó un aumento de la resistencia al calor de S.
typhimurium a 55 °C por aproximadamente tres veces (P<0.05). Manas y col.
(2003) encontrado que hubo un aumento de cuatro veces en la resistencia térmica
de S. typhimurium cuando la temperatura de crecimiento aumentó de 10 a 37 °C, y
se notificó un fenómeno similar para Yersinia enterocolítica de Pagan et al. (1999).
Si bien se ha informado que estructuras como la pared celular y la membrana
externa puede cambiar su funcionalidad en respuesta a cambios en el crecimiento
temperatura, los mecanismos exactos por los cuales la temperatura de crecimiento
influye en la resistencia al calor no se entienden completamente. El grado de
saturación de los ácidos grasos de membrana aumenta con aumento de la
temperatura de crecimiento como medio para mantener un grado constante de
fluidez dentro de las membranas celulares, y esto tiene se especula que influye en
la resistencia al calor (Manas et al., 2003; Pagan et al., 1999; Tsuchiya et al.,
1987).

Aplicación de las fuentes de suministro de agua y sistemas de calentamiento

de agua.

Se han estudiado aislados patógenos u oportunistas patógenos encontrado en

tanques de agua de lluvia en todo el mundo (para ejemplo, Simmons et al., 2001;
Plazinska, 2001; Uba y Aghogho, 2000; Ariyananda, 1999; Thomas y Greene,
1993; Fujioka et al., 1991) y es un consenso general que el agua de lluvia
almacenada no tratada a menudo no cumple con pautas relevantes para el agua
potable. Se ha generado interés en el uso del agua de lluvia recolectada dentro de
los sistemas de agua caliente ya que se ha demostrado que este escenario da
como resultado una mejora significativa en la gestión del agua urbana. Los
sistemas de agua caliente originalmente recibieron atención como riesgo para la
salud pública después del aislamiento de L. pneumophila de varios sistemas
hospitalarios de agua caliente implicados en brotes nosocomiales de la
enfermedad del legionario. Muchos de estos sistemas de agua caliente mostraron
que estos funcionaban a temperaturas insuficientemente altas (<50 °C), lo que
permitía que L. pneumophila se multiplicara a concentraciones consideradas como
peligrosas. En Australia, un se hizo una recomendación posterior indicando que
los sistemas de agua deben operar a un mínimo de 60 °C para inhibir el
crecimiento de L. pneumophila (por ejemplo, AS3500.4.2) (Normas Australia,
1997). Las investigaciones de apoyo a esta recomendación para el control de
otras especies no formadoras de esporas sugieren el uso de E. faecalis como el
organismo marcador para la calidad del agua caliente en lugar de la que
comúnmente se usa, la cual es E. coli, esto con el fin de llevar la vigilancia de
forma más apropiada.

Mientras que las bacterias no formadoras de esporas examinadas en este estudio

se inactivaron rápidamente a temperaturas superiores a 60 °C, no se puede
garantizar que todos los sistemas de agua caliente sanitaria operen a esta
temperatura. El rango de temperatura debajo 55 °C es crítico en términos de tener
un impacto sustancial en capacidad de supervivencia del patógeno. Por debajo de
50 °C, las regiones de temperatura letal y temperatura de crecimiento comienzan a
fusionarse para un creciente número de patógenos no formadores de esporas. Las
pequeñas variaciones en la temperatura podrían dar lugar a diferencias
sustanciales en las estimaciones del valor D y, en consecuencia, en la calidad
bacteriana del agua calentada.

Conclusiones.

Las mayores diferencias en resistencia al calor entre especies se observaron a 55

°C, con E. faecalis, demostrando la mayor resistencia al calor. El aumento de la
temperatura en 5 °C a D60 resultó en una reducción sustancial de la capacidad
resistencia al calor en todas las especies, con reducciones de ocho a doce veces
en D-valores. La exposición al calor a 65 °C dio como resultado valores D de 7–19
s para E. faecalis y menos de 6 s para todos los demás probados organismos Los
resultados de este estudio sugirieron que el rango de temperatura de 55 a 65 °C
fue crítico para una efectiva eliminación de componentes bacterianos
entéricos/patógenos, y apoyó la tesis de que los sistemas de agua caliente
deberían funcionar a un mínimo de 60 °C. Disminuyendo la temperatura inicial de
crecimiento de S. typhimurium y E. coli hambrienta O3: H6, P. aeruginosa y S.
typhimurium antes de los tratamientos térmicos resultó en una mayor sensibilidad
al calor para estas bacterias. El trabajo futuro debería centrarse en investigar la
ecología del microbioma de los trenes de tratamiento de agua de lluvia y el agua
almacenada para determinar los tipos de organismos que probablemente existan
en estos sistemas.