UNIVERSIDAD DEL QUINDÍO

FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGÍAS

PROGRAMA DE QUÍMICA
LABORATORIO DE FITOQUÍMICA II
Presentado por: Dahiana Peñuela Prado
Prof. Fernando Agudelo A.

Té: Aislamiento, identificación y cuantificación

de Cafeína
25 g. de hojas secas de Té

Reactivos.
100 g de Carbonato de calcio en polvo
10 g de Acido salicílico
50 mL de éter de petróleo (60-90)
50 mL de tolueno
2.0 litros agua destilada
500 mL diclorometano
100 g. Sulfato de magnesio
Hojas de papel filtro (5 x grupo)
50 mL Ácido clorhídrico al 1%
30 g de adenina (patrón interno)
100 mL Dimetilsulfóxido

Materiales.
Balanza de 200 g con tres cifras decimales
1 Balón de 3 bocas
1 Condensador de reflujo
1 Estufa eléctrica
1 Beaker 600 mL
1 Buchner y su respectivo Erlenmeyer con desprendimiento lateral
1 Erlenmeyer de 50 mL
1 Erlenmeyer 150 mL
1 Probeta 100 mL
1 Espátula metálica
1 Embudo de gravedad sin caña.
1 Embudo de separación de 250 mL.
1 Pinza y su nuez
1 Aro para fijar el embudo de separación
1 Equipo Rotaevaporador
1 Pesa sales
1 Frasco lavador
1 Pipeta de 5 mL graduada
1 pipeta de 10 mL graduada
1 Pera succionadora
1 balón aforado de 25 mL
1 balón aforado de 50 mL
 AISLAMIENTO DE LA CAFEÍNA

Coloque 25 g de hojas secas de té, 10 g de carbonato de calcio en polvo, y 250

mL de agua destilada en un balón de tres bocas de 500 mL. Ajuste a un
condensador de reflujo. Selle las bocas restantes utilizando tapones de caucho.
Efectúe calentamiento suave alrededor de 30 minutos (agite ocasionalmente
durante este lapso). Mientras la solución permanezca caliente, filtre al vacío
utilizando un lienzo apropiado. Filtre utilizando papel filtro (5 hojas x grupo de
laboratorio). Enfríe el filtrado a temperatura ambiente, y usando un embudo de
separación de 500 mL, extráigalo con una porción de 50 mL de diclorometano.
Agite la mezcla vigorosamente por un minuto. Las capas se separarán después
de algunos minutos, aunque algo de emulsión se presentará en la capa
orgánica inferior. La emulsión puede ser destruida y la capa orgánica secada al
mismo tiempo, pasando lentamente la capa inferior a través de sulfato de
magnesio anhidro como sigue. Pase la capa orgánica directamente desde el
embudo de separación a un recipiente seco que contenga el agente secante.
Se persiste la emulsión adicione otros 50 mL de diclorometano y repita el
proceso con el agente secante.

Una vez separada la capa orgánica, vierta el extracto orgánico seco en un

balón y rotaevapore, en baño de agua, hasta sequedad. El residuo en el balón
es la cafeína.

Estructura de la Cafeína

DERIVATIZACIÓN

Disuelva 50 mg de cafeína y 37 mg de ácido salicílico en 4 mL de tolueno en un

Erlenmeyer pequeño. Caliente la mezcla en un baño de agua. Adicione 1 mL
(20 gotas) de éter de petróleo y permita que la mezcla se enfríe y cristalice.
Puede ser necesario enfriar el Erlenmeyer en un baño de hielo o adicionar una
pequeña cantidad extra de éter de petróleo para inducir la cristalización.
Colecte los cristales por filtración al vacío utilizando un Buchner. Seque el
producto al aire y determine el punto de fusión. El salicilato de cafeína funde a
137 °C. Obtenga el espectro IR y efectúe su análisis.
 IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN MEDIANTE ESTÁNDARES
INTERNOS

- Preparación de la muestra para la caracterización analítica

En el balón aforado de 25 mL seco y previamente lavado y remojado en ácido

clorhídrico al 1%, introduzca 100 mg de la cafeína extraída en los pasos
anteriores, seguidamente adicione 3 mL de metanol grado HPLC y afore el
balón. Para eliminar los sólidos no disueltos, cargue la muestra en una jeringa,
coloque un filtro de jeringa en la punta y presione el émbolo para expulsar la
muestra a través del filtro. La muestra recolectada ahora está completamente
preparada y lista para el análisis. Con esta solución madre se crea 3
estándares de cafeína.

- Preparación de la curva de calibración del estándar interno

Pese con precaución 100 mg de adenina (patrón interno), seguidamente

disuélvalos en 20 mL de dimetilsulfóxido y mezcle la solución. Una vez que la
adenina se haya disuelto, vierta la solución en un balón aforado de 50 mL y
afórelo hasta la marca con DMSO. Este procedimiento da como resultado una
solución de patrón interno con una concentración de 2mg/mL.

Luego, agregue 0.2 mL del estándar interno, adenina, a cada matraz preparado
en el paso anterior y Llene cada uno hasta el volumen final con
metanol. Transfiera cada solución a un vial de muestra y finalmente, ejecute
cada estándar de cafeína a través de un cromatógrafo de gases. Calcule la
proporción de áreas pico para la cafeína versus el estándar de adenina.

PREGUNTAS

1. ¿En qué consiste la derivatización?

2. ¿Cuáles son los criterios para la elección de un reactivo derivatizante?
3. Enuncie y explique las principales teorías de derivatización en GC
4. Explique por lo menos tres ejemplos de la utilidad de la derivatización.