EFECTO DEL ESTADO DE SALUD DE LA GLANDULA MAMARIA EN LA DETECCIÓN DE

CLOXACILINA EN LECHE POR MÉTODOS DE INHIBICIÓN MICROBIOLÓGICA

CERUTTI, Raul; SCAGLIONE, María Cristina; BOGGIO, Juan Carlos; ALTHAUS, Rafael
Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Litoral, Argentina. R.P.l Kreder 2805. (3980)
Esperanza. Te.: 03496-420639. Email rcerutti@inthersil.com.ar

La utilización de antimicrobianos en las explotaciones lecheras derivan principalmente de la aplicación

de tratamientos en infecciones mamarias. El estado de salud de la glándula mamaria caracterizado por un
incremento en los Recuentos de Células Somáticas (RCS) modifica la cinética de excreción de los
antimicrobiano produciendo cambios en los períodos de retirada.
Por ello, el objetivo del presente trabajo fue establecer los efectos del tiempo de retirada y del estado de
salud de la glándula mamaria sobre la respuesta de diferentes métodos microbiológicos utilizados para la
detección de inhibidores en la leche.
Se seleccionaron dos grupos de seis hembras de la raza Holstein en su tercer lactancia El Grupo "A" con
RCS < 500.000 cel/ml y el Grupo "B" con RCS > 500.000 cel/ml. A cada cuarto de la glándula mamaria de cada
animal se le administró por vía intramamaria 1200 mg de Cloxacilina. Las muestras de leche se recogieron
durante 10 ordeños consecutivos después de la aplicación del antimicrobiano y se analizaron mediante los
métodos de inhibición microbiológica BRT-AIM® LMR, Delvotest® "SP", Eclipse® "100ov" y Copan test CH®
ATK P&S ®.
El análisis estadístico se realizó mediante el modelo de regresión logística contenido en el paquete
estadístico SAS. Se observó un efecto significativo (p < 0.05) tanto para la variable "infección de la glándula
mamaria", como "número de ordeño", tal como se muestra en las siguientes Figuras.
BRT-MLR Delvotest-SP Eclipse-100ov CH ATK P&S BRT-AIM Delvotest-SP Eclipse-100ov CH ATK P&S
100 100
.

90 90
Frecuencia relativa casos p ositivos

Frecuencia relativa casos p ositivos

80 80
70 70
60 60
50 50
40 40
30 30
20 20
10 10
0 0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Número de ordeños Número de ordeños

Figura 1. Animales con altos RCS Figura 2. Animales con bajos RCS

La excreción de cloxacilina en los animales con alto RCS fue más prolongada que en los animales que
poseen bajos RCS. Por ello, los tiempos de retirada deben establecerse teniendo en cuenta el estado de infección
de la glándula mamaria a fin de evitar que la leche con residuos de medicamentos pueda llegar al consumidor.
 CAUSA DE RESULTADOS “FALSOS POSITIVOS“ DEL BIOENSAYO BRT-AIM LMR
PARA LA DETECCIÓN DE ANTIBIÓTICOS EN LECHE

ALTHAUS, Rafael; SCAGLIONE, Cristina; CERUTTI, Raul; BOGGIO, Juan; HEIN, Gustavo
Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional del Litoral. R. P. L. Kreder 2805. (3080) Esperanza.
Argentina. Te.: 03496-420639. e-mail: ralthaus@fcv.unl.edu.ar

La presencia de sustancias antimicrobianas en la leche, especialmente los residuos de antibióticos, puede

traer graves consecuencias tanto desde el punto de vista toxicológico como tecnológico, ya que estos residuos
pueden producir efectos negativos sobre la salud humana, provocando perturbaciones pasajeras en la flora
intestinal, desarrollo de antibiorresistencias a las bacterias patógenas y reacciones alérgicas. Desde el punto de
vista tecnológico, la presencia de residuos de antibióticos retrasa e incluso inhibe completamente los procesos
bacterianos implicados en la elaboración de algunos productos lácteos (queso y yoghurt).
Durante los últimos años se han desarrollado diferentes métodos de cribado, mucho de los cuales son
de tipo microbiológico e indican la presencia o ausencia de “sustancias inhibidoras” capaces de inhibir el
crecimiento del Bacillus stearothermophilus subss. Calidolactis presente en el medio.
Un problema que presentan estos métodos es la presencia de resultados anormales llamados “falsos
positivos”, que son resultados positivos cuando las muestras de leche están libres de residuos de antibióticos.
En el presente trabajo se utilizaron 273 muestras de leche de vaca procedentes de animales que no
recibieron tratamiento farmacológico ni alimentación medicamentada durante el experimento.
Sobre cada muestra de leche se determinó la respuesta al método de inhibición microbiológica BRT-
AIM LMR, composición química (grasa, proteína, lactosa, sólidos totales y sólidos no grasos) mediante un
equipo de infrarrojo cercano Bentley-2000, recuentos de células somáticas (RCS) con un microscopio continuo
Fossomatic FT-120 y concentraciones de los componentes del sistema lactoperoxidasa (LP: enzima
lactoperoxidasa, SCN-: tiocianato y H2O2: peróxido de hidrógeno) mediante técnicas fotométricas, a fin de
estudiar su posible influencia sobre los resultados anómalos.
La utilización del modelo de regresión logística en su opción stepwise señaló un efecto significativo para
la concentración de proteínas (2 = 6.0741, p = 0.0137) y [H 2O2] (2 = 30.9263, p = 0.0001). La ecuación
matemática que permite estimar la frecuencia de resultados "falsos positivos" es la siguiente:
Lij = - 7.4701+ 1.3460 [P] + 0.4041 [H2O2 ] (concordancia = 76.7 %)
Las muestras con alto porcentaje de proteínas y concentración de H2O2 presentaron mayor frecuencia de
resultados “falsos positivos” al método BRT-AIM  que las muestras con bajo nivel de proteína y H2O2.Por ello,
sería necesario llevar a cabo análisis de confirmación e identificación posteriores, como por ejemplo,
determinaciones por HPLC, en aquellas muestras de leche que presentan elevados niveles de proteínas, H 2O2 y
respuesta positiva al método BRT, a fin de verificar la presencia de residuos de medicamentos en la leche.
 DETECCIÓN DE ANTIMICROBIANOS EN LA LECHE MEDIANTE DETERMINACIONES
FOTOMÉTRICAS DE UN BIOENSAYO QUE UTILIZA BACILLUS STEROTHERMOPHILUS

ALTHAUS, Rafaela; Molina, M. Pilarb

a
Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional del Litoral. R. P. L. Kreder 2805. (3080) Esperanza.
Argentina. Te.: 03496-420639. e-mail: ralthaus@fcv.unl.edu.ar b Departamento de Ciencia Animal. Universidad
Politécnica de Valencia. Camino de Vera s/n Apartado 22012. 46071 Valencia. España.

En España, la leche de oveja se destina casi exclusivamente a la elaboración de quesos, por lo que
resulta necesario controlar los residuos de medicamentos para disminuir inconvenientes en su fabricación y
aquellos relacionados con su posterior transmisión al consumidor.
Con el propósito de evitar que la leche con residuos antiinfecciosos llegue al consumidor, se han
desarrollado diferentes métodos de cribado para la detección de estos residuos. Muchos de estos métodos se
basan en la inhibición del crecimiento del Bacillus stearothermophilus subss calidolactis.
El objetivo del presente trabajo fue calcular los límites de detección de 27 agentes antimicrobianos
utilizados en el tratamiento del ganado ovino mediante el bioensayo Eclipse  "100ov" y comparar los valores
obtenidos con los Límites Máximos de Residuos (LMRs) establecidos por Unión Europea (UE).
Para el cálculo de los límites de detección se utilizaron muestras de leche procedentes de 24 ovejas
individuales. Para cada fármaco, se prepararon ocho concentraciones diferentes a partir de cada muestra de leche
(224 disoluciones por fármaco). Se colocó 100 l de cada solución en un pocillo de la placa y se dejó reposar 1 h
a 4 °C, posteriormente se lavó y se incubó a 64 + 1°C, durante 2 h 30 min. Se determinó la absorbancia a 590-
650 nm mediante un lector de placas ELISA (Wallac 1420, Victor Multilavel Counter).
Los límites de detección calculados mediante el modelo de regresión logística fueron: 5.2 g/kg
amoxicilina, 4.3 g/kg penicilina "G", 68 g/kg cloxacilina, 25 g/kg oxacilina, 78 g/kg cefadroxil, 101 g/kg
cefalexina, 86 g/kg cefoperazone, 60 g/kg cefuroxime, 1950 g/kg gentamicina, 16400 g/kg kanamicina,
4800 g/kg neomicina, 7900 g/kg estreptomicina, 700 g/kg eritromicina, 15500 g/kg espiramicina, 230
g/kg tilosina, 4800 g/kg ciprofloxacina, 3700 g/kg enrofloxacina, 90000 g/kg flumequine, 9100 g/kg
norfofloxacina, 1700 g/kg sulfadimetoxina, 2300 g/kg sulfanilamida, 4300 g/kg sulfametazina, 2500 g/kg
sulfatiazole, 1500 g/kg clortetraciclina, 230 g/kg doxiciclina y 460 g/kg tetracycline.
Se puede concluir que el método Eclipse "100ov" presenta muy buena sensibilidad para detectar
residuos de antibióticos beta-lactámicos. Por el contrario, los aminoglucósidos, macrólidos, sulfonamidas,
tetraciclinas y quinolonas no son detectadas a los niveles de LMRs establecidos por UE. Por esta razón, debería
mejorarse la sensibilidad del B. stearolhermophilus subsp. calidolactis a fin de poder detectar un mayor número
de agentes antimicrobianos o utilizar otros microorganismos de prueba como Bacillus cereus o Bacillus subtilis
que presentan mayor sensibilidad para tetraciclinas y sulfonamidas, respectivamente.
 EFECTO DE LOS RECUENTOS DE CÉLULAS SOMÁTICAS SOBRE LOS COMPONENTES DEL
SISTEMA LACTOPEROXIDASA EN LECHE DE VACA HOLSTEIN

ALTHAUS, Rafael; SCAGLIONE, Cristina; CERUTTI, Raul; BOGGIO, Juan; HEIN, Gustavo
Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional del Litoral. R. P. L. Kreder 2805. (3080) Esperanza.
Argentina. Te.: 03496-420639. e-mail: ralthaus@fcv.unl.edu.ar

La acción antimicrobiana del sistema lactoperoxidasa (SLP) se produce cuando están presentes la
enzima lactoperoxidasa (LP), el ión tiocianato (SCN -) y el peróxido de hidrógeno (H2O2), constituyendo de este
modo un inhibidor natural de la leche.
La enzima LP es una de las más abundantes en la leche, es inactiva y para manifestar su poder
inhibitorio necesita de la presencia del SCN - y el H2O2. El SCN- proviene de los glucosinolatos y la
detoxificación de glucósidos cianogénicos presentes en los alimentos, mientras que el H 2O2 se produce en forma
endógena a partir de numerosos microorganismos y mediante los sistemas generadores de H 202 como las
oxidaciones del ácido ascórbico, la hipoxantina por acción de la xantina oxidasa y los nucleótidos piridínicos
reducidos por peroxidasas.
El objetivo del presente trabajo fue analizar el efecto de los Recuentos de Células Somáticas (RCS)
sobre la composición y niveles del SLP en leche de vaca, evaluando su posible acción antimicrobiana.
Se utilizó muestras de leche procedentes de 273 vacas de la raza Holstein del Departamento Castellanos
(Santa Fe, Argentina) y se realizaron las siguientes determinaciones: composición química mediante un equipo
de infrarrojo cercano Bentley-2000, RCS con un microscopio continuo Fossomatic FT-120, actividad de LP con
el ácido 2,2’ azino bis (3-etil benzilthiazonil-6-sulfónico)-ABTS, concentración de SCN - por fotocolorimetría del
catión tiocianato férrico y los niveles de H 2O2 midiendo la absorbancia del producto formado por la peroxidación
del leucocristal violeta catalizado por la adición de peroxidasa. Los niveles de los componentes del SLP son:
Niveles de células somáticas
Parámetro < 300 000 >300 000 Valor “F” Valor “p”
(n=216) (n=57)
LP (U/ml) 1.24a + 0.03 1.41b + 0.05 9.43 0.0024
SCN- (mg/l) 8.30 + 3.91 9.01 + 4.24 1.52 0.2190
H2O2 (mg/l) 2.625 + 2.355 2.382 + 2.121 0.54 0.4635
Las muestras de leche con elevados RCS (>300.000 cél/ml) presentaron mayor actividad de la enzima
LP en comparación con las muestras de leche con bajos RCS (< 300.000 cél/ml). El incremento de la acción
antimicrobiana del SLP con los RCS contribuye a mejorar los mecanismos de defensa de la glándula mamaria
frente a posibles agresores patógenos.
Se concluye que los niveles de los componentes del SLP de la leche de vaca resultan insuficientes para
lograr su activación, motivo por el cual no podría utilizarse este mecanismo en forma natural para preservar la
leche en aquellos lugares donde no se dispone de un mecanismo adecuado de frío.
PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS DE LA LECHE DE OVEJA FRISONA-CORRIEDALE
 SOSA, Jorge1; ALTHAUS, Rafael1; SCAGLIONE, Leticia1; ELIZALDE, Eduardo1; MOLINA, Pilar.2
1
Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional del Litoral. R. P. L. Kreder 2805. (3080) Esperanza.
Argentina. Te.: 03496-420639. e-mail: ralthaus@fcv.unl.edu.ar 2 Departamento de Ciencia Animal. Universidad
Politécnica de Valencia. Camino de Vera s/n Apartado 22012. 46071 Valencia. España.

Para la realización de este trabajo se utilizó un grupo de 30 ovejas de la raza Frisona en dos niveles de
cruzamiento con la raza Corriedale (15 ovejas 50%/50% y 15 ovejas 75%/25%) procedentes de la localidad de
Sunchales (Departamento Las Colonias, Santa Fe) en condiciones de pastoreo mixto bovino/ovino sobre
pastizales naturales. Las muestras procedían del ordeño matutino de media leche correspondientes a los días 30,
45, 60, 75 y 90 posteriores al parto. Sobre las muestras se determinó: materia grasa (MG), proteínas (P), lactosa
(L), sólidos no grasos (SnoG) y sólidos totales (ST) mediante un equipo de infrarrojo cercano Bentley-2000.
Para estudiar los efectos del cruzamiento y estado de lactancia sobre los parámetros fisicoquímicos de la
leche de oveja se utilizó el procedimiento General Lineal Model para medidas repetidas del paquete estadístico
SAS, mediante el modelo: Yijkl =  + ELi + Cj + Ok + ijkl
Siendo: Yijk = variable dependiente;  = media general; ELi = estado de lactación (n=5).; Cj = efecto
cruzamiento; Ok = oveja (n=30) y ijkl = error residual del modelo.
La composición media de la leche de oveja analizada fue: MG = 6.45 + 2.13 g/100g, P = 5.77 + 0.63
g/100g, L = 4.74 + 0.38 g/100g, SnoG = 11.42 + 1.16 g/100g, ST = 17.95 + 2.18 g/100g.
El siguiente Cuadro expone la composición de la lecha para ambos tipo cruzamiento a lo largo de la
lactancia, así como también las diferencias significativas halladas para cada parámetro analizado.

Período de lactación (días)

Componente Químico Valor "F" Valor "P"
30 45 60 75 90
Materia Grasa (g/100g) 3.38a 7.35 b 7.35b 6.60c 8.13d 60.11 0.0001
Proteína (g/100g) 5.46a 5.71 a 5.79b 6.00b 5.95c 3.59 0.0082
Lactosa (g/100g) 5.14a 4.75b 4.75d 4.59c 4.36d 28.11 0.0001
Sólidos no Grasos (g/100g) 11.68a 11.46 a
11.55 b
11.55a 10.77b 2.54 0.0428
Sólidos Totales (g/100g) 15.03a 18.81 bc
18.90 bc
18.15b 19.35c 38.80 0.0001

No se observaron cambios significativos provocados por el efecto cruzamiento de las razas de oveja
sobre las componentes químicos de la leche, mientras que los niveles de materia grasa, proteínas y sólidos totales
aumentaron en forma significativa a lo largo de la lactancia, acompañados de una disminución significativa en la
concentración de lactosa a medida que este período avanza.