Laboratorio de Farmacología y Toxicología Escuela de microbiología

DETERMINACIÓN DE LA DOSIS EFECTIVA, DOSIS TOXICA y LETAL DE UNA SUSTANCIA

OBJETIVO:
Comprender los aspectos relacionados a la determinación de la Dosis efectiva (DE50), Dosis
toxica (DT50) y DL50 de una sustancia.

Introducción
Para que un nuevo, principio activo salga al mercado debe pasar por un largo proceso de
descubrimiento y desarrollo.
Por ley, la seguridad y la eficacia deben definirse antes de que éstos puedan comercializarse.
Además de los estudios in vitro, la mayoría de los efectos biológicos de la molécula deben
caracterizarse en animales (fase preclínica o fase 0). Los compuestos deben evaluarse
cuidadosamente para detectar riesgos potenciales antes de iniciar las pruebas clínicas.
Dependiendo del uso para el cual se destinará la sustancia las pruebas de efectividad y
toxicidad preclínicas incluyen todos, o casi todos, los siguientes procedimientos:
- Dosis efectiva 50
- Toxicidad aguda, subaguda , crónica
- Dosis letal50
-Toxicidad funcionales: carcinogenicidad, mutagenicidad, reproducción, Fertilidad,
Teratogenicidad (malformaciones)

La dosis efectiva 50 (DE-50)

La DE-50 se define, como aquella dosis mínima de fármaco o sustancia que produce un efecto
farmacológico determinado (deseado) en el 50% de los animales expuestos a la dosis. La DE-
50 se obtiene por medio de las curvas de logaritmo de dosis respuesta. Para ello se grafica
el porcentaje de animales que presentó el efecto deseado (eje Y) vs el logaritmo de la dosis
administrada (eje de las X).

Determinación de Toxicidad
Aunque ningún producto puede certificarse como totalmente “inocuo” (libre de riesgo), ya que
todas las sustancias químicas son toxicas a determinada dosis, es posible estimar el riesgo
inherente a la exposición del producto en condiciones específicas si se llevan a cabo pruebas
adecuadas.
Además, la investigación de la toxicidad de una sustancia se debe realizar antes de proceder
con los estudios farmacocinético y farmacodinámico de la misma. La precisión de la
definición de toxicidad depende de la especie animal, de la vía de administración, de la
dosis, del tiempo de exposición, entre otros.

La administración de una determinada dosis de una sustancia en una misma especie animal
puede producir un efecto terapéutico o uno toxico. El cual no siempre puede ser exactamente
igual en todos los individuos expuestos a la misma dosis. Esta diferencia se interpreta como
una “variabilidad biológica”.

De acuerdo al tiempo de exposición la toxicidad se clasifica en toxicidad aguda (una dosis y

observación por 24- 48 horas), subaguda (varias dosis y observación de 14 a 28 días) y
crónica (de un mes a años). Generalmente se inicia con la aguda, seguido de la subaguda y
finalmente crónica.
Al momento de determinar la toxicidad de un fármaco o sustancia se deben tener en cuenta
aspectos como:

La elección de la especie y el sexo: Para minimizar la variabilidad de la respuesta del

biomodelo experimental se deben mantener lo mas homogéneamente posible el tamaño, peso,
estadio de la especie y el sexo. Además, se debe contar con una adecuada calidad de los
mismos (estado de salud).
En el caso de fármacos la sustancia se evalúa siempre, al menos, en dos especies mamíferas
de las cuales una de ellas debe ser un roedor. El ensayo se hace en machos y hembras porque
a veces la sensibilidad puede variar en función del sexo.
La vía de administración, la dosis y el tiempo de observación: La vía de administración de la
sustancia serán las que se considere para su empleo. La elección de las dosis se basa en
datos de ensayos in vitro, dosis descritas para moléculas similares o se emplean dosis en
rangos amplios para determinar si la toxicidad es en bajas o altas dosis y posteriormente hacer
rangos más estrechos. El tiempo dependerá de la toxicidad que se va a evaluar.

Las normas existentes en la actualidad, tanto en Colombia como a nivel mundial, con el fin de
proteger los animales de experimentación teniendo en cuenta la tendencia de las 3 R de
Roussell (Refinamiento, Reemplazo y Reducción) y el alto costo y la gran cantidad de
sustancia requerida para estos ensayos, son razones que han llevado a restringir el empleo de
mamíferos, y solo se emplean para evaluaciones finales y cuando ya se han realizado
modelos in Vitro o con otras especies inferiores o diferentes a mamíferos. Además si la
sustancia no está destinada para usarse en seres humanos sino para otras especies animales
se deberá evaluar la dosis efectiva en la especie donde se usará.

Practica
Se realizará la determinación de la dosis Efectiva 50(DE50) y la Dosis Letal50 (DL50) de una
sustancia, empleando un modelo de larvas de Aedes aegypti.

Procedimiento y Actividades a desarrollar

1. Preparar diluciones de la sustancia a evaluar en un volumen de 1mL. Se indicará en el
lab. las concentraciones (Revisar fórmula para preparación de soluciones a partir de
una concentración inicial).
2. A cada mL adicionar 3 mL de solución salina para un volumen final de 4mL
3. Adicionar 4 larvas por cada dilución de la sustancia.
4. Dejar los tubos en observación a temperatura ambiente por 40 minutos mínimo.
5. Realizar las lecturas, contando el número de larvas muertas por tubo. El criterio de
muerte se considera cuando no se detecta movimiento y las larvas se depositan en el
fondo del tubo.
6. Realice una tabla que incluya una columna para la dosis, una para la mortalidad, otra
para los sobrevivientes y otra para el porcentaje de respuesta

Informe
1. Realizar una tabla con los resultados (dosis, logaritmo, respuesta y %rpta)
2. Construya una gráfica del logaritmo de la dosis y hallar la DE50 que en este caso por el
efecto que se desea coincide con la dosis letal 50(DL50).
3. Obtener el antilogaritmo para dar la DL-50 en unidades aritméticas
4. Cual fue la dosis efectiva 100?.
5. Con los datos hallados podría hablar o decir cuál es la potencia y eficacia de la
sustancia? Especifique
6. Si una sustancia H hubiese dado una DE50 mayor, pero una DE100 por debajo de la
de la piperazina, podríamos decir que H es más potente y eficaz que la sustancia
piperazina?. Justifique su respuesta y grafique con otro color una posible curva
teneindo en cuenta lo mencionado, en la gráfica de la de la piperazina. Elegiría la
piperazina o la sustancia H para un tratamiento. Justifique.
7. Que es el índice terapéutico?. Con los datos se podría hallar el índice terapéutico?
Aplicaría en este caso Porque?
8. En la siguiente grafica señale la DE50 para cada uno de los medicamentos e indique
cual sería el de mayor eficacia y el de mayor potencia.

Referencias
Practica tomada y adaptada de la guía Determinación de la concentración efectiva 50 de una sustancia, en larvas de mosquitos del LABORATORIO DE
FARMACOLOGÍA de la Facultad de Química Farmacéutica. 2012.