Rev. Invest. Mar.

25(1):57-64, 2004

AISLAMIENTO Y CULTIVO DE DOS ESPECIES DE DIATOMEAS

BENTÓNICAS.
Yahima Almaguer, Elvira Alfonso y Sylvia Leal

Centro de Investigaciones Marinas, Universidad de La Habana, Calle 16 No. 114, Playa, CP 11300, Ciudad Habana, Cuba. (*)
Autor correspondiente:

RESUMEN

Aislamiento de dos especies de diatomeas bentónicas pertenecientes al género Amphora con potencialidad para ser
cultivadas y usadas posteriormente en la alimentación de las postlarvas tempranas de los camarones marinos.
Ambas especies, y una tercera traída de Brasil, fueron cultivadas en condiciones de laboratorio utilizando los
medios Guillard y A-M para probar su factibilidad para el cultivo. Se calcularon las concentraciones de clorofilas a
y c empleando la técnica de extracción con acetona y lectura de la absorbancia a 630 y a 664 nm para cada
especie en cada medio de cultivo durante el período de crecimiento. La concentración de clorofila a en los dos
medios aumentó con la edad del cultivo, mientras que en el caso de la clorofila c ocurrió lo contrario.

Palabras clave: diatomeas bentónicas; microalgas; aislamiento; cultivo; Amphora.

ABSTRACT

In this study two benthic diatoms species to Amphora’s genera, with potentials to be cultured and later used in the
nutrition of early postlarvae stage of marine shrimps, were isolated. Both species and a third, brought from Brazil,
were cultured under laboratory conditions using Guillard “f/2” and A-M medium to prove their feasibility in
culture conditions. Concentrations of chlorophyle a and c for each culture medium during growing phase were
calculated. Results showed that concentrations of chlorophyle a in the two tested culture mediums raised with
culture age, while in the case of chlorophyle c the opposite results were observed.

Key words: benthic diatoms; microalgae; isolation; culture; Amphora.

Desde la década de los noventa del pasado siglo
se ha venido realizando las primeras
investigaciones y cultivos de diatomeas
bentónicas en algunos países de Latinoamérica
con el objetivo de ser usadas en el maricultivo.
También se conoce que en laboratorios de
producción de larvas de camarones de Brasil se
usan especies de este grupo como fuente de
alimentación para organismos de cultivo (Alfonso,
comunicación personal).
En la actualidad se consideran un grupo poco
estudiado y muy rico en diversas formas, géneros
y especies, con un alto potencial para ser usado
como fuente de alimento vivo para los organismos
que se cultivan con interés comercial y que
presenten hábitos bentónicos al menos en alguna
fase de su ciclo de vida (mayormente
representados por Navicula y Nitzschia, en
proporciones similares, seguidas de Amphora con
poco más de la mitad de los taxa (Siqueiros,
1994).
Con el objetivo de optimizar el cultivo del
camarón en nuestro país se han venido
desarrollando experimentos para mejorar la
selección y producción de especies
fitoplanctónicas, pero hasta el momento no se ha
estudiado la posibilidad de incluir microalgas
bentónicas autóctonas como suplemento
alimentario de las primeras postlarvas.
Los objetivos de este trabajo fueron aislar
diatomeas bentónicas de aguas cubanas para su
posible utilización en la alimentación de las
primeras postlarvas de camarón en cultivo, probar
la factibilidad del cultivo de las especies aisladas
siguiendo el aumento progresivo de volumen hasta
los niveles intermedios y ensayar el
comportamiento de las diatomeas aisladas en los
medios de cultivo Guillard f/2 y A-M,

57
Almaguer et al.: Aislamiento y cultivo de dos especies de diatomeas bentónicas.

relacionándolo con el de una diatomea bentónica

traída de Brasil. Para el desarrollo de los cultivos se utilizó el
método de aumento progresivo de volumen;
MATERIALES Y MÉTODOS partiendo de un inóculo de 75 mL y aumentando
progresivamente hasta 4,4 litros con aireación e
Aislamiento iluminación constante, a temperatura ambiente.

Las muestras de agua utilizadas en la búsqueda de Comparación de los medios de cultivo.

microalgas bentónicas fueron tomadas de los
estanques de engorde de camarón L. schmitti en la
región de Santa Cruz del Sur, Provincia Camaguey.
El aislamiento de las cepas se llevó a cabo por la
combinación de dos métodos: diluciones sucesivas
y aislamiento en placas. El método de las
diluciones fue el primero en aplicarse (Alfonso y
Leal, 2000). Una vez que apareció coloración en los
tubos se seleccionaron aquellos cuya muestra
estaba más diluida, convirtiéndose en puntos de
partida para la aplicación del aislamiento en
placas.
El medio de cultivo utilizado para el desarrollo de
las microalgas bentónicas fue el medio Guillard
“f/2” (Guillard, 1975): Para las diluciones sucesivas
se utilizó el medio en forma líquida y la siembra en
placa se logró con el mismo medio solidificado con
agar-agar a razón de 20 g/L.
Los cultivos se desarrollaron a temperatura
controlada e iluminación constante dentro del local
del cepario.
Fueron aplicados dos tratamientos que
consistieron en poner a crecer a las diatomeas en
dos medios de cultivos diferentes: Medio Guillard
f/2 (Guillard, 1975) y Medio A-M (Alfonso y
Martínez, 1988).
La comparación fue realizada en el último paso del
aumento progresivo de volumen donde se trabajó
con tres réplicas en cada caso. El medio de cultivo
utilizado para los pasos anteriores (75 y 800 mL)
fue el Guillard f/2.
El paso de un volumen a otro se hizo en la fase de
crecimiento exponencial de estos cultivos para
asegurar que las microalgas estuvieran en un
estado fisiológico óptimo.
En la Tabla 1 se especifican las cantidades
volumétricas utilizadas en cada paso del
experimento.
Tabla 1. Volúmenes utilizados en el aumento
progresivo de los cultivos.

Una vez aisladas, las diatomeas fueron VOLUMEN VOLUMEN VOLUMEN DE VOLUMEN
identificadas por especialistas en Taxonomía. Para FRASCO INOCULO MEDIO CULTIVO TOTAL
100 mL 25 mL 50 mL 75 mL
la descripción se observaron detalladamente al
2 litros 75 mL 725 mL 800 mL
microscopio biológico, se les hicieron 5 litros 400 mL 4 litros 4,4 litros
microfotografías bajo el microscopio electrónico y
se efectuaron mediciones de 30 células con
micrómetro ocular determinándose la longitud La salinidad del agua para el caso de los
promedio para cada especie en la fase exponencial volúmenes de 75 mL y de 800 mL fue ajustada a
del cultivo. 35‰ y para los de 4,4 litros (expuestos a
temperatura ambiente) fue ajustada a 34‰, para
Aumento progresivo de volumen. amortiguar el aumento de la misma por
evaporación durante el transcurso del experimento
Para la determinación de la factibilidad del cultivo
de las dos especies aisladas se realizaron tres Los cultivos se mantuvieron con iluminación
experimentos, dos de ellos siguiendo el desarrollo constante.
de las diatomeas aisladas y un tercero con una
diatomea perteneciente al género Amphora traída La temperatura estuvo controlada dentro del
del Laboratorio de Producción de Postlarvas de cepario a 210C y se mantuvo un registro diario de
Camarón AQUATEC Ltd., Rio Grande do Norte de la misma para los volúmenes de 4,4 litros. El pH
Brasil a manera de comparación.

58
 Rev. Invest. Mar. 25(1):57-64, 2004

se registró en días alternos para los cultivos de 4,4 Como resultado del proceso de aislamiento fueron
litros. aisladas dos especies de diatomeas: Amphora cf.
marina (Wm. Smith) Van Heurck 1880-1885 y
Crecimiento de los cultivos. Amphora cf. terroris Ehrenberg 1853 (Figs 1 y 2).

En estas especies de diatomeas, al ser bentónicas,

resulta muy difícil conseguir una muestra
homogénea para cuantificar su crecimiento a
través de la numeración directa en cámaras de
conteos. Esto ha hecho que para conocer la
evolución del cultivo se haya implementado la
técnica de extracción de pigmentos con acetona
(Arredondo-Vega et al., 1997) la determinación de
la absorbancia por medio de espectrofotometría lo
que permite la determinación de las
concentraciones de clorofilas a y c presentes en las
diatomeas.

La cuantificación del crecimiento se tuvo en cuenta Fig 1. Amphora cf. marina (Wm. Smith) Van
para la comparación entre los dos medios de Heurck 1880-1885
cultivo en los frascos de 4,4 litros de volumen,
realizándose dos muestreos por cada réplica (seis Amphora cf. marina tiene una valva
muestreos por tratamiento) en días alternos semilanceolada, margen ventral ligeramente
durante una semana. arqueado y los ápices ligeramente redondos con
13.83 µm de longitud, Amphora cf. terroris tiene
A los valores de absorbancia se le aplicó las valva semilanceolada, margen ventral ligeramente
fórmulas propuesta por Arredondo-Vega et al. arqueado y los ápices ligeramente capitados con
(1997) : 18.46 µm de largo.

Clorofila a = 11,43 (A 664 nm) – 0.4 (A 630 nm)

Clorofila c = 27.09 (A 630 nm) –3.73 (A 664 nm)

para determinar las concentraciones ( µg/mL) de

clorofilas a y c para cada muestra por día. A los
valores medios de clorofilas se les aplicó una
Prueba t con nivel de significación de 0.05 para
comparar las concentraciones de estos pigmentos
por día de muestreo en los dos tratamientos
aplicados y así conocer el comportamiento de cada
especie en cada tratamiento.

La cuantificación del crecimiento se tuvo en cuenta
para la comparación entre los medios de cultivo en
los frascos de 4,4 litros de volumen, tomándose
dos muestras por cada réplica (seis muestras por
tratamiento) en días alternos durante una semana.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Aislamiento.
Fig 2. Amphora cf. terroris Ehrenberg 1853
En relación con la identificación de las especies
aisladas, no fue posible confirmar la clasificación
hasta especie, siendo nombradas Amphora cf.
marina y A. cf. terroris. Al respecto, Siqueiros
(1994) plantea que aún cuando los taxa tienen una
amplia distribución geográfica y temporal, a
menudo resulta imposible una determinación
taxonómica completa. Esto se debe a que cada

59
Almaguer et al.: Aislamiento y cultivo de dos especies de diatomeas bentónicas.

estudio debe revisar una flora particular, con La Tabla 2 muestra el resultado de la Prueba t
variaciones morfológicas y quizás subespecies, para las medias de los dos medios de cultivo
según las condiciones propias de la localidad. En (Guillard y A-M) en cada día de muestreo.
la mayoría de los estudios son referidas solamente
como grupo o en el mejor de los casos, solamente
se determinan a nivel genérico. Tabla 2. Resultado de la Prueba t para las medias
de los dos medios en cada día de muestreo.
Aumento progresivo de volumen.
DÍAS CLOROFILAS T P (UNA
Tanto las dos diatomeas aisladas como Amphora COLA)
sp. importada de Brasil, crecieron en condiciones a 0,25 n.s. 0,41
1ro
c - 1,59 n.s. 0,09
de cultivo en volúmenes de hasta 4,4 litros, a 3,35 ** 0,01
siguiendo el aumento progresivo desde tubo de 3ro
c 1,61 n.s. 0,08
ensayo. Las diatomeas aisladas manifestaron un a 0,10 n.s. 0,46
5to
comportamiento en cultivo similar a los que se c 0,65 n.s. 0,27
obtienen en Brasil para Amphora sp. a través de a 2,61 * 0,02
7mo
c 2,89 * 0,02
los pasos del aumento progresivo de volumen
hasta los volúmenes probados (Alfonso,
comunicación personal).
A manera de resumen se puede decir que para esta
Amphora sp. especie de Amphora se van incrementando los
valores de clorofila a en la medida que evoluciona
el cultivo. Se encontraron diferencias entre los
Los registros de temperatura para ambos
medios para este pigmento resultando los mayores
tratamientos osciló entre 24 y 26 0C. Los valores de
valores de concentración en el medio Guillard.
pH a lo largo del experimento estuvieron entre 8.38
Para la clorofila c podemos resumir que se
y 8.99 para el tratamiento 1 y entre 8.17 y 8.75
mantiene en valores bajos durante todo el
para el tratamiento 2.
experimento tanto para un medio como para el
otro, y que de manera general no se encontraron
En la Fig. 3 se muestran las curvas de
diferencias entre los medios para las
concentración de las clorofilas a y c en el tiempo.
concentraciones de este pigmento excepto para el
Como se puede observar las concentraciones de la
último día.
clorofila a en ambos medios tienen un
comportamiento muy similar durante el
Amphora cf. marina
crecimiento del cultivo, las mismas se van
incrementando en el tiempo.
Los registros de temperatura para ambos
2.5 tratamientos oscilaron entre 28 y 30 0C. Los
valores de pH para el tratamiento 1 estuvieron
Conc (µg/ml)

2
entre 8.55 y 9.46, para el tratamiento 2 fueron
1.5 8.22 y 8.76.
1 Clorofila a Guillard

Clorofila a A-M En la Fig 4 se muestran las curvas de

0.5 Clorofila c Guillard
concentración de las clorofilas a y c en el tiempo.
Clorofila c A-M
0 Como se puede observar las concentraciones de la
1 2 3 4 clorofila a en ambos medios tienen una tendencia
Tiempo (días alternos) a incrementarse en el tiempo.

Fig. 3. Concentraciones de las clorofilas a y c en

los medios Guillard f/2 y A-M para Amphora sp.

60
 Rev. Invest. Mar. 25(1):57-64, 2004

2.5 c -0,97 n.s. 0,19

2 7mo a -2,81 * 0,02

Conc (µg/ml)

c -3,11 * 0,01
1.5

Clorofila a Guillard
0.5 Amphora cf. terroris
Clorofila a A-M
0 Clorofila c Guillard
1 2 3 4 Clorofila c A-M
Los registros de temperatura para ambos
tratamientos oscilaron entre 28 y 30 0C. Los
Tiempo (días alternos) valores de pH para el tratamiento 1 estuvieron
entre 8.33 y 9.29, para el tratamiento 2 fueron
Fig. 4. Concentraciones de clorofilas a y c en los 8.15 y 8.70.
medios Guillard f/2 y A-M para Amphora cf.
marina. La Fig. 5 nos muestra las curvas de concentración
de las clorofilas a y c en el tiempo. Las curvas de la
Haciendo el mismo análisis para la clorofila c clorofila a durante los siete días de duración del
vemos que de manera general tiene un experimento tienen un comportamiento similar ya
comportamiento totalmente diferente a la clorofila que muestran una tendencia al incremento, claro
a, se aprecia que la tendencia de las curvas a lo está que una curva respecto a la otra tiene sus
largo del experimento es a un decremento en las particularidades según el medio de cultivo donde
concentraciones de este pigmento se desarrollaron las microalgas.
correspondiéndose los valores más bajos con los
últimos días de muestreo. 2.5

La Tabla 3 muestra el resultado de la prueba t 2

Conc (µg/ml)

para las medias de los dos tratamientos (Guillard y

A-M) en cada muestreo.
En general, se puede decir que para esta especie
de diatomea se produce en el inicio del cultivo una
mayor cantidad de clorofila a en el medio de
cultivo Guillard “f/2”que en el medio A-M, ahora
bien, durante la evolución del cultivo las mayores
cantidades de clorofila a se obtienen en el medio A-
M, aunque en ambos medios el crecimiento se
evidenció de manera satisfactoria. Para la clorofila
c, con concentraciones menores que la clorofila a y
tendencia a disminuir en el tiempo, los mayores
valores se obtuvieron en el Medio Guillard “f/2”en
los primeros días del experimento.
Tabla 3. Resultado de la Prueba t para las medias
de los dos tratamientos en cada día de muestreo.
DÍAS CLOROFILAS T P (UNA
COLA)
1ro a 4,08 **
c 3,57 **
3ro a -1,41 n.s.
c 2,28 *.
5to a -2,40 *
1.5
1 Clorofila a Guillard
Clorofila a A-M
0.5
Clorofila c Guillard
0 Clorofila c A-M
1 2 3 4
Tiempo (días alternos)
Fig. 5. Concentraciones de las clorofilas a y c en
los medios de cultivo Guillard f/2 y A-M para
Amphora cf. terroris.
Analizando el comportamiento de la clorofila c,
pigmento que se mantiene estable para ambos
medios de cultivo, se encontró que los valores se
mantienen en concentraciones muy bajas si se
compara con los de la clorofila a para los mismos
períodos de tiempo.
0,005
0,008 Para esta especie no se observan diferencias
significativas entre las dos curvas de la clorofila c
0,11 para los medios de cultivo comparados durante los
0,04
siete días de duración del experimento. Aunque en
0,03 el gráfico se observa un ligero incremento de la

61
Almaguer et al.: Aislamiento y cultivo de dos especies de diatomeas bentónicas.
clorofila c en los cultivos en el Medio Guillard para
el séptimo día de muestreo, la prueba estadística
no arrojó tampoco diferencia entre las medias ese
día.
La Tabla 4 muestra los resultados de la Prueba t
para las medias de los dos tratamientos para cada
día de muestreo.
Tabla 4. Resultados de la Prueba t para las medias
de los dos tratamientos para cada día de uestreo.
P DÍAS CLOROFILAS T Tratándose de un proceso productivo continuo
COLA)
1ro a 1,00 n.s.
c 0,51 n.s,
a 8,10 ** 2,3E-04
3ro
c -0,60 n.s
5to
a -2,60 *
c -1,06 n.s.
7mo a -2,59 *
c 2,00 n.s.
Resumiendo, durante los primeros días de
desarrollo del cultivo los mayores valores de
clorofila a se encuentran en el medio Guillard
y a medida que va evolucionando el cultivo los
valores mayores de concentración de clorofila
a se observaron en el Medio A-M. La clorofila
c, con poca variación a través del experimento,
mostró que las concentraciones en el medio
Guillard y en el A-M fueron muy similares.
Una vez analizados los resultados de los tres
experimentos, se considera en este trabajo que
los niveles de clorofila a resultaron
indicadores de crecimiento del cultivo, aunque
no exista una relación directa de la
concentración de clorofila a con la
cuantificación en términos numéricos de las
células, es decir, no se puede establecer una
relación: concentración de clorofila/
concentración celular. Se afirma que la
correspondencia entre la concentración celular
y las determinaciones de la cantidad de
pigmentos y otros componentes, no es
constante ya que estos dependen de diferentes
factores como el estado fisiológico de la célula
y la fase de crecimiento del cultivo, así como
de las condiciones físico-quimicas a que están
sometidas las células (Alfonso, 1999).
También Brown et al. (1997) ha planteado que
la composición bioquímica de las microalgas
puede estar sustancialmente alterada por
otras condiciones de los cultivos, tales como,
la longitud de onda de la fuente de luz que se
utilice y el fotoperíodo al que se sometan así
como por la fase de crecimiento del cultivo.
(UNA
y a gran escala, en nuestro país debido a los
problemas económicos y la escases de
0,18 recursos a la que se tiene que enfrentar no es
0,31
práctico realizar determinaciones de
pigmentos u otras técnicas de colorimetría
0,29
0,02 como fueron ejecutadas en este trabajo de
0,17
0,02
investigación para poder comparar el
0,05 desarrollo de las especies en cultivo. Tampoco
es práctico utilizar otras técnicas más
sofisticadas para la dispersión de las células
para después contarlas, como la expuesta por
Voltolina (1991) de aplicación de ultrasonido
de baja frecuencia que no daña las células,
pero se hace incosteable a nivel comercial.
Ante este reto de la cuantificación de las
microalgas bentónicas que forman grumos,
consideramos que en la producción de cultivos
masivos para la alimentación de larvas a nivel
comercial el desarrollo de los mismos debe
estimarse por la intensidad de la coloración
que van adquiriendo en el tiempo, realizando
pruebas previas y con el correspondiente
entrenamiento del cultivador, así como seguir
probando e implementando nuevos métodos
que se ajusten a las necesidades reales del
centro de producción dónde sean utilizadas
estas especies como alimento vivo para
organismos de cultivo.
Las tres especies estudiadas tuvieron un
comportamiento diferente en el tiempo en las
concentraciones de las clorofilas a y c,
respectivamente. También se presentaron
diferencias en los niveles de concentración de
ambas clorofilas entre los dos medios de
cultivo utilizados.
62

En el presente trabajo con el género Amphora
se observó que al evolucionar el cultivo se
fueron incrementando las concentraciones de
clorofila a y disminuyendo las de clorofila c.
Sin embargo, en un estudio realizado a una
especie de diatomea planctónica, en este caso,
Skeletonema costatum, se encontró que al
avanzar la edad del cultivo fue decreciendo la
concentración de clorofila a, a la vez que
aumentaba la de clorofila c (Castellví, 1963).
Esta diferencia pudiera estar relacionada con
el taxa o con las condiciones del cultivo, como
pudiera ser la composición del medio en
términos de tipos y cantidades de sus
componentes, o quizás con la combinación de
estos y de otros factores.
Las diferencias en los niveles de clorofila a y c
que se establece como patrón en las tres
especies cultivadas, así como las diferencias
de cada pigmento entre los medios pueden
deberse a muchos factores como son:
iluminación; composición del medio del cultivo
donde influyen tanto los componentes iniciales
del mismo, como productos secundarios que
se forman del propio metabolismo de las
células; la edad del cultivo; las características
de la especie en cuestión, así como la edad de
la cepa en cultivo.
Abalde et al. (1995) plantean que los diversos
nutrientes tienen un marcado efecto sobre la
formación de clorofilas en microalgas y que
deficiencias de hierro, nitrógeno y magnesio
inhiben la síntesis y acumulación de clorofila.
La abundancia de carbono orgánico en el
medio y la alta intensidad luminosa inhiben
también la formación de clorofilas en algunas
microalgas. Aplicando el planteamiento
anterior de Abalde et al. a este trabajo se debe
considerar que algunas diferencias
encontradas en las concentraciones de
clorofilas en los dos medios de cultivo
utilizados pudieran estar relacionadas con el
hecho de que el medio Guillard contiene en su
formulación hierro y magnesio, mientras que
el A-M sólo tiene hierro como micronutriente.
Guillard f/2 es mundialmente utilizado por ser
un medio completo e idóneo para el
63
Rev. Invest. Mar. 25(1):57-64, 2004
mantenimiento de las cepas en el laboratorio,
e incluso para la producción en grandes
volúmenes, mientras que el medio A-M no es
tan completo como el Guillard aunque ha
ofrecido buenos resultados en el crecimiento
de los cultivos de diatomeas del plancton,
siendo menos costoso.
CONCLUSIONES
1. Las especies aisladas son factibles de
cultivar en volúmenes de hasta 4,4
litros, siendo viables para su uso
potencial en la alimentación de
postlarvas de camarón en cultivo.
2. Tanto las dos especies aisladas como la
importada de Brasil se desarrollaron
exitosamente en los medios de cultivo
(Guillard y A-M).
3. Las concentraciones de clorofila a tanto
en el medio Guillard como en el medio
A-M tienen una tendencia a aumentar a
medida que envejece el cultivo,
mientras que las concentraciones de
clorofila c tanto en el medio Guillard
como en el medio A-M tienen una
tendencia a disminuir a medida que
envejece el cultivo.
4. Los valores medios de concentración de
clorofila a fueron muy superiores a los
de clorofila c independientemente del
medio donde se cultivó.
5. Las concentraciones de clorofila a
sirven como indicador para evaluar el
crecimiento de estas especies, no
ocurriendo lo mismo con las
concentraciones de clorofila c.
AGRADECIMIENTOS
Las autoras desean agradecer al Dr. Sergio
Licea del Instituto de Ciencias del Mar y
Limnología de la UNAM, México, el haber
realizado y facilitado las fotografías
electrónicas de las especies.
 Almaguer et al.: Aislamiento y cultivo de dos especies de diatomeas bentónicas.

bioquímicas aplicadas a ficología. CICESE,

REFERENCIAS Universidad de la Coruña, España, 41 pp.

Abalde, J., A. Cid, P. Fidalgo, E. Torres y C. Brown, M.R., S.W. Jeffrey, J.K. Volkman y
Herrero (1995): Microalgas: Cultivo y G.A. Dunstan (1997): Nutritional properties of
Aplicaciones. España, Universidad de La microalgae for maricuture. Aquaculture 151,
Coruña, Monografías 26, 210 pp. pp: 315-331.

Alfonso, E. y L. Martínez (1988): Medio de Castellví, J. (1963): Pigmentos de la diatomea

cultivo para microalgas marinas. Rev. Invest. marina Skeletonema costatum (Grev.) en su
Mar. 9(1). 69-76 pp. dependencia de los factores ambientales y de
la dinámica de las poblaciones. Inv. Pesq.
Alfonso, E. (1999): Cultivo de Alimento Vivo: 24:129-137.
actualidad y perspectivas.Congreso
NATURAMIGOS ´99, Cancún, México, del 24 al Guillard, R.R.L. (1975): Culture of
27 de Junio de 1999 (Conferencia Magistral). phytoplankton for feeding marine
invertebrates. In: Culture of Marine
Alfonso, E. y S. Leal (2000): Creación y Invertebrates Animals (W.L. Smith and M.H.
mantenimiento de un cepario de microalgas Chanley, eds.), pp: 29-60.
marinas. Universidad de la Habana, Centro de
Investigaciones Marinas, 22 pp. Siqueiros, D. (1994): Asociaciones de
Diatomeas Bentónicas Marinas; Análisis de su
Arredondo-Vega, B., B. Cordero, C. Herrero y estructura y aplicación. Tópicos Selectos sobre
J. Abalde (1997): Manual de técnicas Microalgas, Universidad Autónoma de
Baja California Sur, Serie Científica. 2(1): 59-
71.

Voltolina, D. (1991): A Comparison of methods Aceptado: 15 de diciembre del 2003 for the
dispersion of cultures of benthic diatoms. Cryptogamie Algol. 12(3):183-187.

64