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PROCESOS COMBINADOS DE CONSERVACIÓN:

Una estrategia para la implantación de tecnologías emergentes en la


industria alimentaria
Javier Raso
Food Technology
University of Zaragoza
jraso@unizar.es
PROCESOS COMBINADOS DE CONSERVACIÓN:
Una estrategia para la implantación de tecnologías emergentes en la industria alimentaria

 TECNOLOGÍAS EMERGENTES EN LA INDUSTRIA ALIMENTARIA

o Aplicaciones
o Limitaciones

 PROCESOS COMBINADOS DE CONSERVACIÓN: FUNDAMENTOS

 PROCESOS COMBINADOS CON TECNOLOGÍAS EMERGENTES

oAltas Presiones Hidrostáticas


oPulsos Eléctricos de Alto Voltaje

 CONCLUSIONES
Demandas de los consumidores que influyen en el desarrollo de
tecnologías emergentes de procesado

•Elevada calidad sensorial y nutritiva


•Más adecuados a sus nuevos hábitos
•Frescos
•Naturales
•Saludables
•Seguros
Buscando el “Método Ideal” de Conservación de los Alimentos

• Garantizar la estabilidad y seguridad de los alimentos


mediante la inactivación enzimática y microbiana

• Mantener las características nutritivas y sensoriales

• No residuos ni generación de sustancias tóxicas

• Barato y fácil de aplicar

• No objeciones de los consumidores ni de los legisladores


Desnaturalización protéica
Pardeamiento no enzimático
Pérdida de vitaminas
Pérdida de componetes aromáticos
Tecnologías no-térmicas de conservación de los alimentos

 Irradiación (IR)
Mejora calidad  Luz Ultravioleta (UV)

de los Altas Presiones Hidrostáticas(HHP) Nuevos


alimentos  Ultrasonidos (US) productos
Pulsos Eléctricos Alto Voltaje (PEF)

Reducción costes energéticos


Tecnologías no-térmicas de conservación de los alimentos

 Algunos agentes de alteración de los alimentos son bastante resistentes


a estas tecnologías
•Esporos bacterianos
•Enzimas

 Tratamientos necesarios para garantizar la estabilidad y seguridad de


los alimentos son demasiado intensos
•No pueden aplicarse a escala industrial
•Pueden modificar las propiedades de los alimentos
Conservación de los Alimentos por Procesos Combinados

• Aplicación de diferentes métodos de conservación con objeto de reducir


su intensidad, manteniendo o mejorar el efecto conservador obtenido y
evitando los efectos adversos sobre las propiedades de los alimentos

Sucesivamente (Pasterización de la leche)

Simultáneamente (Altas presiones y calor)

Simultánea y sucesivamente (Acidificación de conservas vegetales)


Nonthermal Processing Technologies
Conservación de los Alimentos por Procesos Combinados
Homeostasis microbiana

Métodos de conser vación Respuesta homeostática


Reducción de la actividad microbiana
Síntesis de ácidos gr asos insatur ados
- Bajas temperaturas: Refrigeración Síntesis de pr oteínas
Congelación Síntesis de solutos compatibles
- Descenso de la aw Síntesis de solutos compatibles

- Fermentación/acidificación Eliminación de pr otones


Síntesis de de pr oteínas del choque ácido
- Conservantes químicos

- Atmósferas modificadas

Inactivación de microorganismos
- Calor Síntesis de de pr oteínas del choque tér mico
Tecnologías no-térmicas de conservación de los alimentos
Mecanismo de acción

Modificaciones estructurales Disfunciones fisiológicas

Alteracion Alteración en Agregación Modifición Inactivación


Destrucción
en el ADN los Proteíca permeabilidad enzimas
membrana
ribosomas membrana metabólicos

Altas Presiones
     

Homogeneización Altas
Presiones

Ultrasonidos

Irradiation

Pulsos eléctricos
 
Tecnologías no-térmicas de conservación de los alimentos
Daño subletal

Celulas vivas Se multiplican en medios de cultivo selectivos y no selectivos

No se multiplican en medios de cultivo selectivos y no selectivos


Celulas muertas
Celulas dañadas Se multiplican en medios de cultivo no selectivos pero no en medios selectivos

106
Medio no selectivo
supervivientes

Medio selectivo
105

104

103

Tiempo
Conservación de los Alimentos por Procesos Combinados

Tratamiento individual
Tratamiento individual Efecto aditivo
Tratamiento combinado

Tratamiento individual
Tratamiento individual
Tratamiento combinado Efecto sinérgico

Tratamiento individual
Tratamiento individual
Efecto antagónico
Tratamiento combinado

Efecto conservante
Conservación de los Alimentos por Procesos Combinados

• Mejor conocimiento de los mecanismos de acción de los métodos


de conservación

• Desarrollo experimentado por la microbiología predictiva

• Posibilidades que ofrece la conservación de los alimentos por


procesos combinados para superar algunas de las limitaciones
que presentan las tecnologías emergentes de conservación
Conservación de los Alimentos por Procesos Combinados
Mecanismos de acción
Protein aggregation DNA alterations
E. coli stationary phase 200 MPa 8 min E. coli stationary phase 200 MPa 8 min

Fluorescent dye: 4´,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)


Fluorescent dye: Fluorescein isothiocyanate (FICT)
DNA staining
Protein staining
Mañas and Mackey, 2004, AEM, 70: 1545.
Conservación de los Alimentos por Procesos Combinados

• Mejor conocimiento de los mecanismos de acción de los métodos


de conservación

• Desarrollo experimentado por la microbiología predictiva

• Posibilidades que ofrece la conservación de los alimentos por


procesos combinados para superar algunas de las limitaciones
que presentan las tecnologías emergentes de conservación
Conservación de los Alimentos por Procesos Combinados
Microbiología Predictiva
Inactivación de L. monocytogenes 5672 por PEF a distintas temperaturas en presencia de nisina

0 nisina DESIGN-EXPERT Plot 100 ppm nisina 200 ppm nisina


-EXPERT Plot DESIGN-EXPERT Plot
Response 1
se 1 X = A: ph Response 1
h Y = B: T X = A: ph
Y = B: T

of inactivation
3.94957
3.43126
Actual Factor
actor

of inactivation
4.16063
C: nisina = 100.00 Actual Factor
a = 0.00 3.06273
C: nisina = 200.00

of inactivation
inactivation

2.42034 3.06159
ofofinactivation

2.17589
1.40942 1.96255
1.28904
Response 1

cycles
0.398504 0.863516
1

1
Response

LogResponse
0.402203
cycles

-0 . 6 1 2 4 1 5 -0 . 2 3 5 5 2 3
cycles
cycles
Logcycles

LogLog
Log

3.50
3.50 3.50
50.00
50.00 4.38 50.00
4.38 4.38
38.50
38.50 5.25 38.50
5.25 27.00 5.25
27.00 27.00
pH pH
pH
A: ph 6.13
15.50
A: ph
pH 6.13 pH
A: ph
15.50 Temperature Temperature
B: T 6.13
15.50
Temperature
pH
B: T 7.00 4.00 Temperature Temperature
B: T
7.00 4.00 7.00 4.00
Conservación de los Alimentos por Procesos Combinados

• Mejor conocimiento de los mecanismos de acción de los métodos


de conservación

• Desarrollo experimentado por la microbiología predictiva

• Posibilidades que ofrece la conservación de los alimentos por


procesos combinados para superar algunas de las limitaciones
que presentan las tecnologías emergentes de conservación
Conservación de los Alimentos por Procesos Combinados

Altas Presiones Pulsos Eléctricos Ultrasonidos Irradiación

Temperaturas Simultáneamente Simultáneamente Simultáneamente Simultáneamente


Moderadas Sucesivamente Sucesivamente Sucesivamente
Simultáneamente Sucesivamente Sucesivamente
Refrigeración
Sucesivamente

Atmósferas Sucesivamente Sucesivamente


modificadas
Simultáneamente Simultáneamente Simultáneamente
Acidificación
Sucesivamente Sucesivamente
Simultáneamente Simultáneamente
Antimicrobianos
Sucesivamente
Simultáneamente
Irradiación
Sucesivamente
Simultáneamente Simultáneamente Simultáneamente Simultáneamente
Descenso aw

Simultáneamente
Altas Presiones
Sucesivamente
Combinaciones con Altas Presiones Hidrostáticas

•Aplicación al alimento de presiones hidrostáticas


comprendidas en el rango de 100 a 1000 MPa durante un
periodo de tiempo (1-30 min)

MPa
0,03
Objetivos

0.1
•Incrementar el efecto inactivador de las altas
presiones

100 •Conseguir el mismo efecto inactivador con una


menor presión o con un menor tiempo de tratamiento

1000 •Inhibir o retrasar la multiplicación de los


microorganismos supervivientes al tratamiento
36000
Combinaciones con Altas Presiones Hidrostáticas

Altas presiones hidrostáticas y calor

Log supervivientes 6

10 20 30 40 50 60
Temperatura (ºC)
Combinaciones con Altas Presiones Hidrostáticas
Altas presiones hidrostáticas y calor
Combinaciones de altas presiones hidrostáticas y calor que permiten obtener una inactivación de ≥ 6 ciclos
logarítmicos

Presión Temperatura Tiempo


Microorganismo Medio ( MPa) (ºC) (min)

Serratia liquefaciens a 0,l % peptona 207 50 5

Leuconostocmesenteroides a 0,l % peptona 138 50 5

Lactobacillus sake a 0,l % peptona 345 50 15

Escherichia coli O157:H7 a 0,l % peptona 207 50 10

Salmonella typhimurium a 0,l % peptona 207 50 5

Listeria monocytogenes a 0,l % peptona 207 50 5

Staphylococcusaureus b Leche UHT 500 50 15

Escherichia coli O157:H7 b Carne de pollo 400 50 15


Combinaciones con Altas Presiones Hidrostáticas
Altas presiones hidrostáticas y calor

345 MPa, 5 min, 25ºC 345 MPa, 5 min, 50ºC


Ciclos logar ítmicos de inactivación

Ciclos logar ítmicos de inactivación


8 8
7 7
6 6
5 5
4 4
3 3
2 2
1 1
0 0

•(Alpas et al. 1999. Appl. Environ. Microbiol.),


Combinaciones con Altas Presiones Hidrostáticas
Altas presiones hidrostáticas y calor
Mbr plamática Mbr externas
y pared celular

Germinación Inactivación
Protoplasto
Cortex Esporo
Esporo germinado Esporo
inactivado
latente
Bacillus cereus
Germinación Inactivación
690 MPa
Esporos sin germinar (UFC/ml)

1x10 8 l 1x10 8 lllll l l l


1x10 7 l

Supervivientes (UFC/ml)
l l 20 ºC 1x10 7
1x10 6 l 1x10 6
l
5 l
1x10 l l 30 ºC 1x10 5
l
1x10 4 1x10 4 l
l 60 ºC
1x10 3 l 1x10 3 l l
1x10 2 l 1x10 2 l l
l l l
1
1x10
l
l l 1x10 1 l
1x10 0 1x10 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 0 5 10 15 20 25 30
Tiempo (min) Tiempo (min)
Combinaciones con Altas Presiones Hidrostáticas
Altas presiones hidrostáticas y antimicrobianos

•Lisozima Peptidoglicano de la pared celular

• Nisina Membrana citoplasmática

Gram + Gram -

Membr ana
exter na
Par ed
celular
Par ed
celular

Membr ana
citoplasmática Membr ana
citoplasmática
Combinaciones con Altas Presiones Hidrostáticas
Altas presiones hidrostáticas y antimicrobianos
Escherichia coli
AP: 270 MPa, 15 min, 25 °C
N: Nisina (100 UI/ml)
7 L: Lisozima (10 µg/ml)

5 Lisozima Nisina

3
Membrana
externa
2
Pared
celular
1
Membrana
citoplasmática
0
AP AP+N AP + L AP+N+L
Combinaciones con Altas Presiones Hidrostáticas
Altas presiones hidrostáticas y bajas temperaturas

Objetivos

•Inhibir la actividad enzimática y el crecimiento de los microorganismos


supervivientes al tratamiento

•Mantener las propiedades sensoriales del alimento tras el tratamiento


Combinaciones con Pulsos Electricos de Alto Voltaje
•Aplicación de pulsos de alto voltaje (kV) y corta duración (µs) a un material biológico
colocado entre dos electrodos

Membrana
citoplasmátia

Medio Externo
citoplasma
Electroporación

Reversible Irreversible
- Transformación de células - Inactivación microbiana
- Introducción de sondas moleculares - Mejora transferencia de masa
- Introducción de medicamentos
Combinaciones con Pulsos Electricos de Alto Voltaje
Mecanismo de inactivación
-Captación colorantes fluorescentes -Pérdida de la capacidad de plasmólisis en medio hipertónico
-Salida de material intracelular (260-280 nm) -Liberación de ATP

Electroporación

Outer
membrane

Cell wall

Cytoplasmatic
Gr am + bacter ia membrane
Gr am - bacter ia
Combinaciones con Pulsos Electricos de Alto Voltaje

Microorganismo vivo

Microorganismo inactivado

REVERSIBLE

Microorganismo vivo
Microorganismo dañado reparación

Microorganismo inactivado
No reparación
Membrana
citoplasmática Membrana externa

Cortex Microorganismo inactivado


PERMANENTE

Esporo bacter iano


Combinaciones con Pulsos Electricos de Alto Voltaje
Pasteurización por PEF: definición

Tratamiento de pulsos electricos de alto voltaje que aplicado a un alimento reduce las
células vegetativas de los microroganismos patógenos hasta un nivel que no presenta
riesgo para la salud del consumidor durante la distribución y almacenamiento del
producto

Requerimientos

 Identificar los microorganismos patógenos más resistentes a los PEF

 Establecer las condiciones de tratamiento por PEF que reduzcan la población de


los microorganimos patógenos a un nivel que no supongan un riesgo para la
salud
Combinaciones con Pulsos Electricos de Alto Voltaje
Factores que afectan la inactivación microbiana por PEF

Parámetros de procesado Características del medio de Características de los


tratamiento microorganismos
•Especie y cepa
•Intensidad campo eléctrico •pH •Tamaño y morfología
•Tiempo de tratamiento •Actividad de agua •Condiciones de crecimiento
•Temperatura •Composición •Fase de crecimiento
•Temperatura de crecimiento
•Forma del pulso •Conductividad
•Medio de crecimiento
•Frecuencia
•Energía específica •Condiciones de recuperación
•Medio de recuperación
•Temperatura de recuperación
•Tiempo de recuperación
Combinaciones con Pulsos Electricos de Alto Voltaje
Identificación de las cepas más resistentes a los PEF
pH 4,0 pH7,0 30 kV/cm, 100 µs
5 4465 BJ4L1
471 976
4466 4465
722
878 976
4590 443 880
4 4459 4466
880

E. coli O157:H7 443 932


4032
5366
BJ4
L.
4590
monocytogenes
878
5672
4031 4630
3 BJ4L1 4630
722
Salmonella Typhimurium 878 4459
S. aureus 4459
W3110
2
O 157:H 7
BJ4 5672
932
471 5366
1
4032
5672
O157:H7
4031
W3110
0
Combinaciones con Pulsos Electricos de Alto Voltaje
Identificación de las cepas más resistentes a los PEF

E. faecium L. monocytogenes S. cerevisiae 1172 S. cerevisiae 11034


0 0 0 0
-1 -1

Log10 Nt/N0

Log10 Nt/N0
Log10 Nt/N0

Log10 Nt/N0
-2 -2
-2 -2
-4 -4 -3 -3
-4 -4
-6 -6
-5 -5
-8 -8 -6 -6
0 500 100015002000 0 500 100015002000 0 250 500 750 1000 0 500 100015002000
Time (µs) Time (µs) Time (µs) Time (µs)

E. coli S. typhimurium S. enteritidis S. senftenberg Y. enterocolitica


0 0 0 0 0
Log10 Nt/N0

Log10 Nt/N0
Log10 Nt/N0

Log10 Nt/N0
Log10 Nt/N0

-2 -2 -2 -2 -2

-4 -4 -4 -4 -4

-6 -6 -6 -6 -6

-8 -8 -8 -8 -8
0 500 100015002000 0 500 1000 1500 0 500 1000 1500 0 500 100015002000 0 500 100015002000
Time (µs) Time (µs) Time (µs) Time (µs) Time (µs)

2.5 kV/cm (), 4 kV/cm (), 5.5 kV/cm (), 9 kV/cm (), 12 kV/cm (), 15 kV/cm (▲), 19 kV/cm (), 22 kV/cm (), 25 kV/cm () y 28 kV/cm ()
Combinaciones con Pulsos Electricos de Alto Voltaje
Modelos Predictivos

Y = α X1 + β X2+ δ X3 + λ X4 +..........

•Establecer las condiciones de tratamiento que permitan obtener


alimentos seguros y estables.

•Establecer los requerimientos de los equipos para poder aplicar los


tratamientos a escala comercial

•Realizar análisis de costes


Combinaciones con Pulsos Electricos de Alto Voltaje
Definición de las condiciones de tratamiento
5 5
pH 3,5 100 µs; tª 20-30ºC pH 4,5

Ciclos logarítmicos inactivación


Ciclos logarítmicos inactivación

4 4

3 3

2 2

1 1
E. coli O157:H7

0 L. monocytogenes 5672 0

15 20 25 30 35 15 20 25 30 35
Salmonella Typhimurium 878 Intensidad de campo eléctrico (kV/cm)
Intensida de campo eléctrico (kV/cm)
5
5 S. aureus 4459 pH 7,0
pH 5,5
Ciclos logarítmicos inactivación

Ciclos logarítmicos inactivación


4
4

3
3

2
2

1
1

0
0
15 20 25 30 35
15 20 25 30 35 Intensidad de campo eléctrico (kV/cm)
Intensidad de campo eléctrico (kV/cm)
Combinaciones con Pulsos Electricos de Alto Voltaje
Definición de las condiciones de tratamiento
5 5
pH 3,5 100 µs; tª 20-30ºC pH 4,5

Ciclos logarítmicos inactivación


4 4
Log cycles of inactivation

3 3

2 2

1 1
E. coli O157:H7

0 Applicación de PEF a temperaturas moderadas L. monocytogenes 5672 0

15 20 25 30 35 15 20 25 30 35
Salmonella Typhimurium 878 Electric Field Strength (kV/cm)
Electric Field Strength (kV/cm)
5
5 S. aureus 4459 pH 7,0
pH 5,5

Ciclos logarítmicos inactivación


4
4
Log cycles of inactivation

3
Combinación de PEF con antimicrobianos 3

2
2

1
1

0
0
15 20 25 30 35
15 20 25 30 35 Electric Field Strenght (kV/cm)
Electric Field Strength (kV/cm)
Combinaciones con Pulsos Electricos de Alto Voltaje
Combinaciones con temperaturas moderadas

Escherichia coli O157:H7


30 kV/cm

pH 3.5 ZumoApple juice


de manzana
0
inactivación

0 20ºC

inactivación
30ºC

Log cycles inactivation


20ºC -1
cycles inactivation

-1
35ºC
-2
-2
logarítmicos

30ºC -3

Ciclos logarítmicos
-3
35ºC -4
-4 40ºC

10
10

40ºC
CiclosLog

-5 -5 45ºC
45ºC
-6 -6
0 25 50 75 100 0 25 50 75 100
Time (µs)
Tiempo (µs) Time (µs)
Tiempo (µs)
Combinaciones con Pulsos Electricos de Alto Voltaje
Combinaciones con antimicrobianos

PEF: 30 kV/cm, 100 µs


Nisina: 100 ppm
Temperatura: 4-50ºC
Nisina

30 kV/cm, 100 μs
Combinaciones con Pulsos Electricos de Alto Voltaje
Combinaciones con antimicrobianos

PEF: 30 kV/cm, 100 µs


LAE: 50 ppm
Temperatura: 4-50ºC
Etil lauroil arginato (LAE)
Combinaciones con Pulsos Eléctricos de Alto Voltaje
Tratamiento en flujo continuo

Cámara de tratamiento
estática

E. coli O157:H7 en zumo de naranja

Intensidad de campo eléctrico: 20, 25, 30 kV/cm


Tiempo de tratamiento: 0-140 µs
Anchura de pulso: 3 μs
Energía específica: 80-180 KJ/kg
Temperatura de entrada: 20, 30, 40ºC
Temperatura de salida: 50, 55, 60ºC
Tiempo de residencia: 0.8 sec
Combinaciones con Pulsos Eléctricos de Alto Voltaje
Tratamiento en flujo continuo
E. coli O157:H7 en zumo de manzana
Tin 20ºC 20 kV/cm Tin 40ºC
0 0 Tin 30ºC 0
Ciclos logarítmicos de inactivación

25 kV/cm

Ciclos logarítmicos de inactivación

Ciclos logarítmicos de inactivación


-1 30 kV/cm -1 -1
-2 -2 -2
54ºC (90 kJ/kg)
-3 54 ºC (180 -3 55 ºC (134 kJ/kg) -3
56ºC (94 kJ/kg)
kJ/kg) 56ºC (131kJ/kg)
-4 56ºC (179 kJ/kg ) 55ºC (88 kJ/kg)
55ºC (163 kJ/kg) -4 55ºC (126 kJ/kg) -4
-5 -5 -5
-6 -6 -6
-7 -7 -7
0 50 100 150 0 50 100 150 0 50 100 150
Tiempo de tratamiento (µs) Tiempo de tratamiento (µs) Tiempo de tratamiento (µs)

E. coli O157:H7 en zumo de manzana + 50 ppm LAE


in
Ciclos logarítmicos de inactivación

20 kV/cm
Ciclos logarítmicos de inactivación

Ciclos logarítmicos de inactivación


0 0 0
25 kV/cm Tin 30ºC Tin 35ºC
-1 Tin 20ºC -1 -1
30 kV/cm
-2 -2 -2

-3 -3 -3

-4 -4 -4

-5 -5 -5 85 kJ/kg
188 kJ/kg
142 kJ/kg
-6 -6 -6 72 kJ/kg
170 kJ/kg 180 kJ/kg 130kJ/kg 83 kJ/kg
-7 -7 -7
0 50 100 150 0 133 kJ/kg50 100 150 0 50 100 150
Tiempo de tratamiento (µs) Tiempo de tratamiento (µs) Tiempo de tratamiento (µs)
Combinaciones con Pulsos Eléctricos de Alto Voltaje
Optimización

5 log10 ciclos de inactivacíón


E. coli O157:H7 in zumo de manzana + 50 ppm LAE
Tiempo de tratamiento (µs)

120

Energía específica (kJ/kg)


100

80

60 20 kV/cm, 50 µs
20ºC
40 25ºC
30ºC
20 25 kV/cm, 30 µs 35ºC
30 kV/cm, 20 µs
0
20 22 24 26 28 30
Intensidad de campo eléctrico (kV/cm) Intensidad de campo eléctrico (kV/cm)
Combinaciones con Pulsos Eléctricos de Alto Voltaje
Validación
25 kV/cm; Temperatura de entrada 35ºC
Zumo de manzana + 50 ppm LAE Zumo de manzana

25 kV/cm, 30 µs 25 kV/cm, 38 µs 25 kV/cm, 50 µs 25 kV/cm, 63 µs


Temperatura de salida: 50ºC Temperatura de salida: 55ºC Temperatura de salida: 60ºC Temperatura de salida: 65ºC
8 8
8
7 7
7
6 6
6

Log 10 inactivación

Log 10 inactivación
Log 10 inactivación

5 5
5
4 4
4
3 3
3
2 2
2
1 1
1
0 0
0
EC ST SA LM EC ST SA LM EC ST SA LM EC ST SA LM

EC: E. coli O157:H7 SA: S. aureus 4459


ST: Salmonella Typhimurium 878 LM: L. monocytogenes 5672
Combinaciones con Pulsos Eléctricos de Alto Voltaje
Condiciones de tratamiento para pasteurización por PEF

Zumo de manzana Zumo de manzana + LAE

Intensidad campo eléctrico 25 kV/cm 25 kV/cm


Temperatura entrada 35ºC 35ºC
Tiempo de tratamiento 63 µs 38 µs
Temperatura de salida 65ºC 55ºC
Energía específica 125 kJ/kg 83 kJ/kg
Tiempo de residencia 0.8 sec 0.8 sec
Combinaciones con Pulsos Eléctricos de Alto Voltaje
CONCLUSIONES
PROCESOS COMBINADOS DE CONSERVACIÓN:
Una estrategia para la implantación de tecnologías emergentes en la industria alimentaria

•Prolongar el tiempo de conservación y la calidad sanitaria de los


alimentos refrigerados

•Desarrollo de nuevos productos


1st World Congress on Electroporation and Pulsed Electric Fields
in Biology, Medicine and Food and Environmental Technologies
September 6-10, 2015
Portoroz, Slovenia

...we will all be there.

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