ALISTAMIENTO E IDENTIFICACION DE ORGANISMOS DE INTERES

VLADIMIR PEÑA PRIETO

LUIS ALBERTO QUESADA
JHON ANDRES CRISTANCHO
VANESA BENAVIDES

SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE- SENA

CENTRO DE GESTIÓN INDUSTRIAL
TECNOLOGÍA QUIMICA APLICADA A LA INDUSTRIA
BOGOTA D.C.
2019
 VLADIMIR PEÑA PRIETO
LUIS ALBERTO QUESADA
JHON ANDRES CRISTANCHO
VANESSA BENAVIDES

ALISTAMIENTO E IDENTIFICACION DE ORGANISMOS DE INTERES

Instructores Especialidad
Magaly Sánchez

SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE- SENA

CENTRO DE GESTIÓN INDUSTRIAL
TECNOLOGÍA QUIMICA APLICADA A LA INDUSTRIA
BOGOTA D.C.
2019
 CONTENIDO

CONTENIDO 3
INTRODUCCIÓN 10
1. OBJETIVOS 11
1.1 OBJETIVOS GENERAL 11
1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS 11
2. MARCO TEORICO 11
3. PROCEDIMIENTO 11
3.1 AGAR NUTRITIVO 11
3.2 AGA YGC
12
3.3 AGAR MACCONKEY 11
3.4 SIEMBRA MICROBIOLOGICA
11
3.5 TINCION DE GRAM
12
3.5 CARACTERISTICAS MACRO - MICROBIOLOGICAS
13
4. RESULTADOS 11
4.1 TABLA DE MICROORGANISMOS 11
4.2 TABLA DE CARACTERISTICAS MACRO - MICROBIOLOGICAS 11
5. ANALISIS DE RESULTADOS 11
6. CONCLUSIONES 13
7.BIBLIOGRAFÍA 14
 INTRODUCCIÓN

La empresa XocoTech S.A.S. realiza la actividad de obtención de subproductos

a partir del Cacao Criollo (Theobroma Cacao), puntualmente polifenoles, a
partir de la realización de procesos de transformación desde el grano comprado
a proveedores selectos en Colombia, que permiten obtener dichos fitoquimicos
para su posterior procesamiento.

Actualmente en el mercado nacional no hay casos puntuales de la obtención de

polifenoles a partir del (Theobroma Cacao), ni tampoco del uso de los mismos
para la realización de productos, por ende, existe una gran posibilidad de
producir estos compuestos fitoquimicos para la demanda industrial-
farmacéutica o para la transformación de los mismos en productos beneficiosos
para el ser humano.

Las soluciones planteadas por los procesos productivos, analíticos y

fitoquimicos de los integrantes de la empresa XocoTech S.A.S. permiten la
realización de muestreos a la materia prima y análisis fitoquimicos cuantitativos
al (Theobroma Cacao) con fines de lograr extraer de forma eficiente y
estandarizada la mayor cantidad de polifenoles , y así mismo plantear una
aplicación puntual para los mismos ya sea como subproducto demandado por
la industria o la realización de productos diseñados y demandados por
mercados puntuales. Esto permite aportar no solo al crecimiento de la industria
nacional y la empresa propia, sino al desarrollo de cadenas productivas en el
sector agropecuario que generen una transformación social productiva en
varias regiones del país.
 1. OBJETIVOS

1.1 OBJETIVOS GENERAL

Diseñar un plan de muestreo para el grano de (Theobroma cacao) que

todos los procesos y procedimientos que permitan caracterizar múltiples
muestras del grano en mención para posteriormente someterlas a un
análisis fitoquímico por parte de XocoTech SAS y así determinar cuál de
las muestras es la más abundante en presencia de Polifenoles para su
posterior explotación industrial.

1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

● Determinar la cantidad de polifenoles presente en varias muestras del

grano de Theobroma Cacao.
● Realizar procesos y procedimientos para estandarizar la toma de
muestras a analizar tanto de forma experimental, como al momento de
industrializar la muestra.
● Establecer condiciones, personal idóneo, materiales y equipos
requeridos para garantizar un proceso de muestreo confiable.
● Establecer parámetros de almacenamiento, análisis y disposición de
muestras.
● Identificar cantidad de polifenoles existentes en cada muestra realizada
● Determinar la calidad las muestras de la misma en materia de volumen
de polifenoles obtenidos.
 2. DIAGNÓSTICO

2.1 UBICACIÓN DE LA EMPRESA

La empresa XocoTech SAS., Estará Ubicada en el parque Industrial

Gran Sabana en la zona Franca de Tocancipá. Bodega 6969.
Puntualmente la ubicación geográfica X362+4P La Diana, Tocancipá,
Cundinamarca.
2.2 DIAGRAMA DEL PROCESO PRODUCTIVO
DIAGRAMA DE FLUJO PARA REALIZACION DE PRUEBA PARA VERIFICAR LA EXISTENCIA DE TERPENOIDES,
ESTEROIDES, FLAVONOIDES, NAFTOQUINONAS, ANTROQUINONAS, TANINOS Y SAPONINAS
2.3 TIPO DE MATERIA PRIMA

Materia Prima: (Theobroma cacao)

El cacao se viene utilizando con fines curativos desde la antigüedad.
Actualmente, son muchos los estudios que vienen a aportar pruebas científicas
a los beneficios que aportan cacao y chocolate a la salud. Una parte importante
de los mismos puede atribuirse a los compuestos denominados flavonoides,
que están presentes en grandes cantidades en los granos de cacao.
Estos compuestos naturales, se encuentran también en plantas y en alimentos
de origen vegetal (leguminosas, algunas frutas como manzanas y uvas, el
cacao, etc.), tienen un papel funcional, ayudando a la planta a reparar daños y
protegiéndola de enfermedades. Existen múltiples evidencias científicas que
demuestran que el consumo regular de frutas y verduras que tengan gran
cantidad de flavonoides reducen el riesgo de sufrir enfermedades cardíacas y
degenerativas.  
El origen de esta planta es probablemente la región amazónica (cuenca alta del
rio amazonas) y comprende países como Colombia, ecuador, Perú, Bolivia y
Brasil, en esta región es donde se presenta la mayor variación de la especie,
se extendió desde Suramérica hasta México, pero no se sabe si su dispersión
ocurrió naturalmente o con ayuda del hombre. Sigue siendo un misterio el
cómo llego a centro américa, en donde por lo menos se ha cultivado 3.000
años. El cacao se llevó de Brasil a la colonia portuguesa de príncipe en 1822 y
de ahí a sao tome en 1830, ambas en el golfo de guinea. Ghana obtiene el
cacao en 1879 y por el año 1951 el oeste de áfrica es el responsable del 60%
de la producción mundial. El género (Theobroma cacao), se encuentra en
estado natural en los pisos inferiores de las selvas húmedas de América
tropical y prospera entre los 18 °N y los 15 S° del ecuador en una altitud inferior
a 1,250 m.
Crece en topografía plana u ondulada. Llega a crecer en terrenos que
sobrepasan el 50 % de pendiente, en cañadas, a orilla de arroyos. Exige
temperaturas medias anuales elevadas con fluctuaciones pequeñas, una gran
humedad y una cubierta que le proteja de la insolación directa y de la
evaporación. La precipitación debe ser de 1,300 a 2,800 mm por año con una
estación seca corta, menor de 2 meses y medio. El clima debe ser
constantemente húmedo, con temperatura media diaria entre 20 y 30 ºC, con
una mínima de 16 ºC. Para su pleno desarrollo exige suelos profundos (1 m
como mínimo), fértiles y bien drenados. Deben evitarse suelos arcillosos,
arenosos, mal drenados o muy superficiales con presencia de rocas y un nivel
freático poco profundo. Suelos: negro rocoso, café-rojizo barroso, aluvial.

Follaje: Perennifolio.
Floración: Florece durante casi todo el año (principalmente verano y otoño).
Fructificación: Los frutos maduran mayormente en la primavera y el verano.
Polinización: Polinización natural: entomófila. El principal agente polinizador
es una activa y pequeña "mosquita" (Forcipomya spp., Ceratopogonidae), que
se ha encontrado en todas las áreas donde se cultiva el cacao. Las mosquitas
pueden volar de un árbol a otro hasta una distancia de 60 m y tienen actividad
durante el día después de las 8:00 am. Se ha informado que los áfidos y varias
especies de hormigas (Crematogaster sp. y Ectatomma tuberculatum) también
efectúan la polinización. El polen puede mantenerse viable por tres días. Las
flores están receptivas desde las primeras horas de la mañana. La flor del
cacao comienza a abrirse gradualmente por la tarde, y continúa por la noche
hasta que está completamente abierta justo antes del amanecer. Unas
porciones muy grandes de flores no son polinizadas y caen al cabo de 48
horas. Se ha desarrollado la protógina para prevenir la autopolinización. Las
flores funcionalmente son hembras primero y después machos. Existe cuando
menos un sistema de incompatibilidad que opera y que favorece la fecundación
cruzada (manteniendo la heterozigocidad) pero que no excluye por completo la
autofecundación. Las poblaciones de cacao silvestre en el corazón de su
distribución natural en las colinas de los Andes en Ecuador, Perú y Colombia
son auto incompatibles. En contraste, poblaciones cercanas a la periferia son
auto-compatibles. El cacao es una planta altamente alógama, pues se estima
que la polinización cruzada es aproximadamente del 95 %. En cultivo se T
practica la polinización artificial (manual): con unas pinzas se toma un estambre
con las anteras abiertas de una flor del progenitor masculino. Las anteras se
frotan sobre toda la longitud del pistilo.

Semilla

Almacenamiento y Conservación: Se han investigado métodos de

almacenamiento para mantener las semillas viables fuera de la mazorca. La
mejor respuesta de almacenamiento registrada es: 24 % de viabilidad después
de 8 meses almacenando las semillas a 20 ºC y 98 % de humedad relativa
(40.6 % de contenido de humedad) en la presencia de un fungicida. Bajo estas
mismas condiciones a los 0032 meses se tiene una viabilidad de 77 % y un
contenido de humedad de 41.4 %. La pérdida de viabilidad ocurrida durante los
8 meses de almacenamiento es inaceptable si se piensa en términos de
conservación genética. Existen bancos de genes ex situ en forma de
plantaciones de árboles de todas las variedades provenientes de semillas o
multiplicados vegetativamente (clones). Existen unas 10 colecciones de
germoplasma para el cacao (África, Brasil, Costa Rica, Ecuador, Puerto Rico,
Florida, Costa de Marfil, Ecuador y Malasia), entre las que sobresalen por su
número de clones son las siguientes: Cocoa Research Institute, en Tafo,
Ghana, con 6,000 clones e International Cocoa Genebank, en Trinidad, con
1,872. Dispersión. Entre los agentes de dispersión se encuentran los monos,
ardillas, murciélagos, loros y las corrientes de agua. Los monos ocupan un
lugar preponderante. Los cotiledones ricos en grasas y aceites son un blanco
atractivo para ellos. Acarrean las semillas, cual racimo de uvas, de un lugar a
otro en la selva consumiendo la pulpa que las rodea y dejándolas caer al suelo
forestal. Las mazorcas al madurar permanecen en el árbol, de ahí que
dependan de animales arborícolas como dispersores primarios. Germinación.
Tipo: epígea. Las semillas, una vez retiradas del fruto, germinan rápidamente, a
los 4 ó 6 días después de la siembra (DDS). Emergen primero la raíz y el
hipocótilo, lo que ocasiona que los cotiledones se eleven por encima del nivel
del suelo (10 a 15 DDS). Desarrollo de la semilla y el fruto: el cigoto comienza a
dividirse de 40 a 50 días después de la polinización. La mazorca joven crece
junto con los óvulos lentamente en un principio los primeros 40 DDP, después
crece más rápido y alcanza su máximo alrededor de los 75 días. Un segundo
período de crecimiento comienza más o menos a los 85 DDP, que es cuando la
mazorca y el óvulo disminuyen su crecimiento a expensas del crecimiento del
embrión, el óvulo se encuentra ahora lleno de un endospermo gelatinosos que
es consumido por el embrión aproximadamente 140 DDP. La tasa de
crecimiento cesa entonces hasta la madurez. Los frutos maduran y pueden
cosecharse a los 5 ó 7 meses. Número de semillas por kilogramo: 440.
Recolección / Extracción. Se recolectan los frutos maduros directamente del
árbol y se remueven las semillas 6 días después de la cosecha. Por tratarse de
semillas recalcitrantes no deben secarse o congelarse porque se mata al
embrión. El rango crítico entre la germinación y el daño por desecación puede
ser muy estrecho. Viabilidad / Latencia / Longevidad. No presenta latencia. La
semilla permanece viable en la mazorca madura por un máximo de tres
semanas. Si la mazorca se mantiene en una solución aireada de acetato de
fenil mercurio puede conservar su viabilidad por 8 semanas. Tipo de semilla.
Recalcitrante.

Cultivo

Aspectos del cultivo. Entre los factores críticos para el desarrollo del cultivo
están la temperatura y la lluvia. Demanda baja tecnología y pocos insumos.
Requiere de árboles que le proporcionen sombra para su mejor desarrollo. Los
árboles de sombra más comúnmente utilizados son: (Erythrina spp., Gliricidia
sepium, Diphysa robinioides, Colubrina arborescens, Cedrela odorata y
Tabebuia rosea). La poda y la regulación de sombra son las prácticas más
importantes. Se mantiene una sombra regularmente densa en las primeras
etapas de la plantación, decreciendo en intensidad hasta lograr una sombra
ligera en las etapas posteriores. Podar al final de la época seca o al inicio de
las lluvias. El trasplante de las plántulas se hace a los 4 ó 5 meses (50 a 60 cm
de altura), con follaje sano. El espaciamiento tradicional entre plantas es de 3.6
x 3.6 m (748 plantas por hectárea) con una producción promedio de 430 kg/ha.
Se han probado con éxito 2 espaciamientos más cercanos para mejorar la
producción: 1) intermedio de 1.8 x 3.6 m (1,495 individuos/ha) con una
producción media de 573 kg/ha y 2) cercano de 1.8 x 1.8 m (2,990
individuos/ha) con una producción de 762 kg/ha. Es importante tener en cuenta
los caracteres de auto compatibilidad e intercompatibilidad cuando se vayan a
establecer plantaciones clonales.

Desventajas

Sensible y Susceptible a:
 Heladas.
 Sequía.
 Daño por insectos (tallo, madera, flor). Los insectos más comunes son
el monalonion, los trips (insectos chupadores), el Xyleborus (pasador),
la hormiga arriera, la gallina ciega (larvas de escarabajos), los
escarabajos Colaspis y Monolepta que se comen las flores.
 Daño por virus: Virus del hinchamiento de los brotes.
  Daño por el viento. Es muy sensible al viento. En zonas expuestas a
frecuentes brisas no crece con vigor sin la ayuda de una cortina rompe
vientos. Los fuertes vientos (velocidad >4 m/s) pueden causar
defoliación o caída prematura de las hojas (por daño mecánico o
desecación).
 Daño por hongos (semilla, fruto, tronco, raíz, hoja). La "mazorca negra"
(Phytophthora palmivora, P. megakarya, P. capsici, P. citrophthora), la
"moniliasis" (Moniliophthora rorei), el "mal del machete" (Ceratocystis
fimbriata), la "escoba de bruja" (Crinipellis perniciosa). El hongo
Phytophthora ataca a las mazorcas (pudrición negra), los tallos (cáncer
de la corteza) y a las raíces causando pérdidas entre 10 y 30 % de la
producción mundial de cacao.
 Daño por epífitas/parásitos. 8. Daño por termitas. El comején (termitas)
establece sus nidos en el tronco y cubre partes importantes del área
productiva.

FENOLES

(Theobroma cacao L. (cacao), familia Sterculiaceae, es una planta rica en

fenoles, los cuales en las plantas son de especial interés por su potente
actividad antioxidante, dada esencialmente por sus propiedades redox, que
pueden desempeñar un papel importante en la absorción y neutralización de
los radicales libres.

se encontró mayor contenido de fenoles en semillas de UF-654. Con

estaminoides y pétalos se obtuvo mayor crecimiento de callos y menor
fenolización. Menores concentraciones de malondialdehído y otros aldehídos
se hallaron en extractos de ramas. Los extractos de callos de estaminoides,
pétalos y nucelas mostraron similares valores de malondialdehído, mientras
que en el caso de otros aldehídos los menores valores se encontraron en los
extractos de callos de nucelas. Todos los extractos mostraron actividad
antioxidante, que reducen el 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl. Se halló menor
actividad en los extractos de ramas, callos de estaminoides y nucelas.
● TAXONOMÍA: Familia: Esterculiáceas.
● Especie: (Theobroma cacao).

● Datos relevantes acerca de la producción en Colombia: En los últimos 4

años ecuador y Perú han aumentado su producción de manera sostenida.
En el 2015, Ecuador logró superar las 223.000 toneladas (según reporte de
Anecacao) y Perú 92.000 toneladas (según Min Agricultura). Mientras que
Fedecacao reporta un incremento de 2.000 toneladas en el 2016 para un
total de 56.785 toneladas.

Revisemos cómo ha sido la inversión en Colombia, solo en el lapso 2014

2016 y la realidad del tal “alcance histórico” que corresponde a un aumento
de 9.053 toneladas de cacao en ese periodo de tiempo. Supongamos
entonces, que para alcanzar esta cifra se renovaron 9.053 hectáreas con
1.000 árboles cada una y por lo tanto estas hectáreas ya tecnificadas
producen 1 tonelada cada una. Renovar 1 hectárea cuesta en promedio $12
millones (este valor varía según cada zona).

 Quiere decir que se necesitarían invertir, en promedio $108,636 millones

para obtener este “logro”. Sin embargo, el país ha invertido más de
$388.000 millones en cacao tan solo en los últimos 3 años, sin contar otros
recursos que se destinan al fomento como son los parafiscales, la inversión
de otras entidades como gobernaciones y alcaldías difícil de estimar, pero
está cifra fácilmente supera los $10.000 millones; pero asumamos que este
es el valor, solo por efectos del ejercicio.
 Colombia produce cacaos comunes y de calidad Premium, ambos son finos
de sabor y aroma, y pertenecen al tercer grupo de productos con mayor
ventaja comparativa en el país, respecto de sus competidores
internacionales, dadas las condiciones agroecológicas en términos de clima
y humedad y su asociación con otros cultivos. Según FEDECACAO, desde
el punto de vista de la botánica, en Colombia existen tres tipos de cacao:
criollo, forastero y el híbrido o trinitario. El cacao criollo es el más fino,
caracterizado por su agradable sabor y su exquisito aroma. El Cacao
forastero es el de menor calidad, frente al sabor y aroma que confiere el
grano al chocolate elaborado con este. Sin embargo, presenta otras
condiciones de calidad para la industria como lo puede ser su rendimiento
en contenido de grasa. Este cacao también se denomina amazónico dado
que su origen se encuentra en la región amazónica de América del Sur.
Dentro de este tipo de cacao se encuentran los producidos en Trinidad y
Tobago, Ecuador, 9 Ibídem. 10 Federación Nacional de Cacaoteros. África
Occidental, Asia, y Brasil. Es el cacao que domina el mercado mundial. El
híbrido o trinitario, es el cacao descendiente del cruce genético entre criollos
y forasteros o amazónicos. Actualmente, en Colombia las siembras se están
llevando a cabo con materiales conocidos como clones, que corresponden a
la combinación de cacao criollo y trinitario realizada por programas de
investigación. Dichos clones son multiplicados vegetativamente mediante la
técnica del injerto, lo que garantiza la homogeneidad de las características
genéticas dentro de la plantación.

● CONDICIONES DE CULTIVO:
○ EXIGENCIAS EN CLIMA Y SUELO:
■ Temperatura: Siendo su límite medio anual de temperatura los 21 ºC. La
temperatura determina la formación de flores. Cuando ésta es menor de
21 ºC la floración es menor que a 25 ºC, donde la floración es normal y
abundante. Esto provoca que en determinadas zonas la producción de
mazorcas sea estacional y durante algunas semanas no haya cosecha,
cuando las temperaturas sean inferiores a 22 ºC.
■ AGUA: El cacao es una planta sensible a la escasez de agua, pero
también al encharcamiento por lo que se precisarán de suelos provistos
de un buen drenaje. Un anegamiento o estancamiento puede provocar la
asfixia de las raíces y su muerte en muy poco tiempo. Las necesidades
de agua oscilan entre 1500 y 2500 mm en las zonas bajas más cálidas y
entre 1200 y 1500 mm en las zonas más frescas o los valles altos.
■ VIENTO: Vientos continuos pueden provocar un desecamiento, muerte y
caída de las hojas.
■ SOMBREAMIENTO: El cacao es un cultivo típicamente umbrófilo. El
objetivo del sombreamiento al inicio de la plantación es reducir la
cantidad de radiación que llega al cultivo para reducir la actividad de la
planta y proteger al cultivo de los vientos que la puedan perjudicar.
 Cuando el cultivo se halla establecido se podrá reducir el porcentaje de
sombreo hasta un 25 o 30 %. La luminosidad deberá estar comprendida
más o menos al 50 % durante los primeros 4 años de vida de las plantas,
para que estas alcancen un buen desarrollo y limiten el crecimiento de
las malas hierbas.
El cacao requiere suelos muy ricos en materia orgánica, profundos,
franco arcillosos, con pH que oscilan entre 4,0 y 7,0. Se puede decir que
el cacao es una planta que prospera en una amplia diversidad de tipos
de suelo.
■ ELIMINACIÓN DE MALAS HIERBAS: La eliminación de malas hierbas
en cacao se realiza fundamentalmente mediante escarda química. Las
plantas que salen del vivero son muy susceptibles al daño de los
herbicidas por lo que deben aplicarse con precaución. Los productos más
empleados son el diuron, el dalapon y el gesapax.
■ PODA: Es una técnica que consiste en eliminar todos lo chupones y
ramas innecesarias, así como las partes enfermas y muertas del árbol.
La poda ejerce un efecto directo sobre el crecimiento y producción del
cacaotero ya que se limita la altura de los árboles y se disminuye la
incidencia de plagas y enfermedades. Hay varios tipos de poda: Poda de
formación. Poda de mantenimiento. Poda fitosanitaria. Poda de
rehabilitación. Poda de sombra.

■ PROPAGACIÓN: Propagación Vegetativa. El injerto del cacao debe

realizarse en patrones vigorosos y sanos obtenidos de semilla,
desarrollados en recipientes o en el campo. Los árboles más viejos se
pueden injertar, siempre que los injertos se hagan en varetas jóvenes ya
presentes o en brotes que se producen después de que las plantas han
sido podadas hasta una altura de 30 a 50 cm. Injerto por aproximación.
Injerto con yemas. Empleo de estacas. Propagación por semilla.

■ RECOLECCIÓN: El cacao comienza a producir a partir del tercer año, en

el sexto produce económicamente, el 12 a 14 año llega a la plenitud, se
dice que el cacao tiene la vida del hombre, a los 60 a 70 empieza a
decaer, puede vivir hasta los 100 años. Los árboles de cacao florecen
dos veces al año, siendo el principal periodo de floración en junio y julio.
En los meses de septiembre y octubre tiene lugar una segunda floración,
pero más pequeña. La recolección es una de las fases más importantes,
se debe hacer la identificación de las mazorcas maduras. Este estado se
conoce por los cambios de coloración externa, que varía dependiendo del
tipo o variedad. Este cambio de color puede ser muy ligero y se corre con
el riesgo de no cosechar a tiempo mazorcas que han alcanzado su plena
madurez. Ante este importante detalle, muchos recolectores cosechan
las mazorcas que se encuentran en las partes bajas del árbol, basados
en el sonido que emiten estas cuando son golpeadas con los dedos. El
punto óptimo de recolección se produce cuando las variedades de fruto
rojo han tomado un color anaranjado-bermellón y los de fruta amarilla un
color amarillo-verdoso.
■ MARCOS DE PLANTACIÓN: Las variedades de cacao dulce se plantan
de 3,5 a 4,5 m de distancia. Las variedades de cacao amargo y los
híbridos, al ser más vigorosos, generalmente se plantan a una distancia
de 5 a 6 m. La tendencia actual de las nuevas plantaciones es colocar
todas las variedades a intervalos de 3,5 hasta 3,75 m. Los marcos
seguidos normalmente son cuadrangulares de 3,6 x 3,6 m, aunque
existen sistemas rectangulares, triangulares y hexagonales o en
contorno. Se recomienda colocar las plantas a la mitad de las
separaciones normales para luego realizar un aclareo gradual de la
plantación en función de la producción buscada y de las marras que
puedan aparecer. Las marras se pueden sustituir por injertos de
parentesco selecto.

■ RIEGO: Al tratarse de zonas tropicales y con elevada pluviometría el

aporte de agua procedente de la lluvia es suficiente para satisfacer las
demandas hídricas del cultivo. Como se ha explicado anteriormente, en
zonas donde exista exceso de agua es preciso una evacuación adecuada
de la misma para evitar el anegamiento del cultivo. En zonas de menor
pluviometría se utilizarán los porcentajes de sombreo adecuados para
evitar una pérdida excesiva de humedad en el suelo.

■ FERTILIZACIÓN: En el trasplante se debe poner abono orgánico o

fertilizante en el fondo. Seguidamente a los 3 meses de la siembra es
conveniente abonar con un kilogramo de abono orgánico o bioabono. 100
gramos de un fertilizante como 20-10-6-5- alrededor de cada plantita, en
un diámetro de 80 cm aproximadamente. Durante el primer y segundo
año las necesidades por planta son de 60 gramos de nitrógeno, 30 g de
P205, 24 g de K20 y 82 g de S O4. Del tercer año en adelante, el
abonado se debe hacer basándose en un análisis del suelo. En general
se aconseja aplicar los fertilizantes en tres o cuatro aplicaciones, con la
finalidad de evitar pérdidas de elementos por evaporación o
escurrimiento, facilitándose así a la planta los elementos nutritivos en las
épocas más adecuadas para un mejor aprovechamiento., en sacos, en
cajas, el método Rohan y el empleo de tendales.

■ LAVADO: Los granos se lavan al final de la fermentación en ciertos

países para eliminar las partículas de la fruta y quede una limpieza
exacta.

■ SECADO: El secado del cacao es el proceso durante el cual las

almendras terminan de perder el exceso de humedad que contienen y
están listas para ser vendidas y en el caso del cacao fermentado
completan este proceso.

■ SELECCIÓN, CLASIFICACIÓN, ALMACENADO Y ENCOSTALADO: Los

 granos secos se deben seleccionar para eliminar la tierra, las partículas
sueltas de la cáscara de la semilla y los granos quebrados, para ello se
emplean una serie de mallas dispuestas en serie y los granos pasan a
través de ellas, unas corrientes de aire caliente eliminan las impurezas.
Existen normas que se aplican a los granos de cacao o almendras para
tipificarlos según su calidad, para esto se toma una muestra de cacao al
azar y se cortan los granos longitudinalmente. Los factores que
determinan la calidad del cacao pueden agruparse en factores de la
herencia, del ambiente y del beneficio (fermentación y secado). En el
cacao fermentado y otro que no lo esté pueden establecerse las
siguientes características:

● Aplicaciones industriales

A partir de las semillas del cacao se obtiene el cacao en grano, los cuatros
productos intermedios (licor de cacao, manteca de cacao, pasta de cacao y
cacao en polvo) y el chocolate.

● Producto - Usos del cacao y sus derivados

Manteca de cacao: Elaboración de chocolate y confitería, y también puede ser
usado en la industria cosmética (cremas humectantes y jabones), y la industria
farmacéutica.
Pulpa de cacao: Producción de bebidas alcohólicas y no alcohólicas
Cáscara: Puede ser utilizado como comida para animales
Cenizas de cáscara de cacao: Puede ser usado para elaborar jabón y como
fertilizante de cacao: vegetales y otros cultivos
Jugo de cacao: Elaboración de jaleas y mermeladas
Polvo de Cacao: Puede ser usado como ingrediente en casi cualquier
alimento: bebidas chocolatadas, postres de chocolate como helados y mousse,
salsas, tortas y galletas
Pasta o licor de Cacao: Se utiliza para elaborar chocolate

● Caracterización física:
Los frutos son de tamaño, color y formas variables, pero generalmente tienen
forma de baya, de 30 cm de largo y 10 cm de diámetro, siendo lisos o
acostillados, de forma elíptica y de color rojo, amarillo, morado o café. La pared
del fruto es gruesa, dura o suave y de consistencia como de cuero. Los frutos
se dividen interiormente en cinco celdas. La pulpa es blanca, rosada o café, de
sabor ácido a dulce y aromática. El contenido de semillas por baya es de 20 a
40 y son planas o redondeadas, de color blanco, café o morado, de sabor dulce
o amargo. Comienza a producir fruto a los 3 0 4 años de haberse plantado, y se
calcula que durante 30 puede producir buen cacao.

● Caracterización química:
Las evaluaciones bromatológicas de las muestras se realizan en laboratorio
químico del centro de gestión industrial se evalúan componente de
composición química tales como analizar el pH (método del potenciómetro), el
porcentaje de grasa (método Soxhlet), porcentaje de fibra(método
gravimétrico), porcentaje proteína(método de kjeldahl) y valor calórico.

3. MUESTREO

3.1 LOCALIZACIÓN PUNTOS DE MUESTREO

PLAZA CENTRAL DE PALOQUEMAO

Coordenadas:

Dirección: Avenida
Cl. 19 N° 25-04

Limites Polideportivo
Paloquemao, Centro
comercial Calima

Longitud: 4.616255,
-74.083859

Actividad: Mercadeo
y distribución de
productos

Datos de
 distribuidor:

Imagen tomada de diario de campo - pagina web https://medium.com/trabajo-de-campo-en-las-plazas-de-

mercado/diario-de-campo-de-paloquemado-26f0f691057e

3.2 TIPO DE MUESTRA

Ya que la materia prima se encuentra en un local de la plaza de paloquemao,

se realizará un muestreo simple ya que será tomado en ese lugar específico y
a una hora concretada.

La toma de muestras de semillas de cacao debe realizarse al azar, aunque, a

veces, para descubrir la presencia de una variedad diferente o de una anomalía
de cualquier tipo, debe efectuarse un muestreo selectivo y no al azar. Por lo
tanto, antes de empezar el muestreo, debe establecerse qué características
son las que van a examinar. En este caso se efectuará un tipo de muestreo
simple ya que se considera que se tomará una cantidad representativa en un
sitio y en una hora determinada.

3.3 TIPO DE MUESTREO

Para este caso se empleará un método de muestreo aleatorio simple el cual

consiste en que todas las muestras tienen la misma probabilidad de ser
 seleccionada y en el que la unidad obtenida a lo largo de muestreo se dé
vuelven a la población, es decir que en punto de recolección de la muestra se
escogerá el durazno al azar en diferentes canastillas y sin tener el riesgo al
final del análisis de deteriorar el durazno o contaminarlo.

3.4 MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

1. Calibrador Vernier
2. Documentación acerca de la semilla del cacao
3. Hojas de registro
4. Instrumento fotográfico
5. Hojas de apuntes
6. Lapiceros
7. Reloj
8. Bolsas de empaque de cierre hermético
9. Marcador sharpie negro
10. Etiquetas
11. Guantes de nitrilo.
12. Calculadora

3.5 PROCEDIMIENTO PARA EJECUCIÓN DEL MUESTREO

#de Punto de Recipiente Tipo de Tiempo de Lavado de

muestra muestreo muestra preservació envase
n
 3.6 REGISTROS DEL MUESTREO

Un buen diagnóstico depende mucho de la estrategia de muestreo, preparación

y análisis del material recolectado. Tal y como sucede con los diagnósticos de
fertilidad del suelo, de igual manera en este caso el análisis de semilla de
cacao no puede ser mejor que la muestra, esto claramente da a entender que
un muestreo adecuado y representativo es crucial si se pretende llevar un
manejo robusto de la semilla y lograr un alto potencial de rendimiento.

3.6.1 Protocolo de análisis

1.OBJETIVO:
Determinar la composición fisicoquímica de la materia prima utilizando como
parámetros de análisis (Temperatura, humedad, cenizas, determinación de
nitrógeno, carbohidratos).

2.ALCANCE:
Este documento tiene como finalidad establecer los parámetros necesarios
para los análisis fisicoquímicos (Temperatura, humedad, cenizas,
determinación de nitrógeno, carbohidratos), en la materia prima.

3.NORMATIVA:

NTC TITULO

NTC 3806 CEREALES Y PRODUCTOS DE CEREALES

MOLIDOS.
DETERMINACIÓN DE LA CENIZA TOTAL

NTC 259 CEREALES Y PRODUCTOS CEREALES.

DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE
HUMEDAD

NTC 4657 DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE

NITRÓGENO Y CÁLCULO DEL CONTENIDO
DE PROTEÍNA CRUDA. MÉTODO
KJELDAHL

4.PARAMETROS DE ANALISIS

● DETERMINACIÓN DE CENIZAS
Marco Teórico

Se entiende por cenizas como el residuo inorgánico que queda tras

eliminar totalmente los compuestos orgánicos existentes en la
muestra, si bien hay que tener en cuenta que en él no se encuentran
los mismos elementos que en la muestra intacta, ya que hay pérdidas
por volatilización y por conversión e interacción entre los
constituyentes químicos. A pesar de estas limitaciones, el sistema es
útil para concretar la calidad de algunos alimentos cuyo contenido en
cenizas totales, o sus determinaciones derivadas, que son cenizas
solubles en agua y cenizas insolubles en ácido, está bien definido.
Facilita en parte, su identificación o permite clasificar el alimento
examinado en función de su contenido en cenizas.

4. PROCEDIMIENTO
DETERMINACION DE CARBOHIDRATOS
MARCO TEORICO

Los carbohidratos son moléculas formadas por carbono, hidrogeno y oxígeno.

Todos los carbohidratos son azucares pequeños, solubles en agua (glucosa y
fructosa, por ejemplo, o bien cadenas, como el almidón y la celulosa, que se
elaboran enlazando subunidades de azúcar. (En la naturaleza los carbohidratos
se presentan como monosacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. Los
monosacáridos se clasifican en aldosas si tienen un grupo aldehído y cetosas
si tienen un grupo cetona. Todos los monosacáridos, aldosa o cetosas y la
mayoría de los disacáridos son azucares reductores (excepto la sacarosa)
porque uno de sus dos carbonos anoméricos no está formando enlace
glucosídico. El método es una técnica colorimétrica que emplea un
procedimiento que se basa en una reacción redox que ocurre entre el) y los
azucares reductores presentes en la muestra, seguido de la determinación
espectrofotométrica a 540nm de los azucares reductores. Esta técnica sirve
para cuantificar los azucares reductores producidos durante una fermentación o
para cuantificar los productos de una reacción enzimática. Este método ha
sufrido varias modificaciones a través de los años para adecuarse al análisis de
diferentes materiales y su principal ventaja radica en su alta sensibilidad y
productividad debido a que es un método espectrofotométrico.

Entre los distintos componentes de los alimentos, después del agua, los
carbohidratos son las sustancias más abundantes y más ampliamente
distribuidas en la naturaleza; siendo la celulosa la biomolécula que se
encuentra en mayor cantidad en la biosfera, y el almidón, la fuente energética
alimentaria más empleada en el mundo. En todos los seres vivos se
encuentran presentes los carbohidratos ya que la ribosa y la desoxirribosa son
parte de su material genético. De la misma forma, en las frutas y hortalizas los
carbohidratos cumplen funciones estructurales y energéticas, constituyendo
algunos la estructura rígida o mecánica de los tejidos vegetales; en tanto que
en las semillas, raíces y tubérculos funcionan básicamente como reservas
energéticas. Por otro lado, en algunos animales estos compuestos son parte de
sus reservas energéticas (glucógeno) o constituyen un componente esencial de
su estructura externa (quitina). Además de ser componentes naturales de
muchos alimentos, la industria alimentaria emplea los carbohidratos en función
de sus propiedades funcionales, usándolos como ingredientes para mejorar la
aceptabilidad, palatabilidad y vida útil de diversos alimentos. Desde el punto de
vista químico, los carbohidratos pueden definirse como polihidroxialdehidos y
polihidroxicetonas y sus derivados. Según la anterior definición, la
denominación de carbohidrato agrupa a una gran cantidad de compuestos.
PROCESO FERMENTACIÓN

Es el paso fundamental en el beneficio del cacao puesto que en este proceso

se desarrollan las cualidades del grano, agradables al gusto y al olfato. Por el
contrario, una mala fermentación o la ausencia de ésta pueden demeritar el
producto de manera notable.
El proceso de fermentación tiene por objetivo los siguientes aspectos:
 Desprender los granos del mucílago que los rodea para facilitar su
conservación.
 Provocar la muerte del embrión e impedir la germinación.
 Originar la cadena de reacciones bioquímicas en el interior de los granos
que generan un aumento de su volumen y el cambio de color hasta alcanzar
el tono chocolate característico del grano de cacao.
El proceso fermentativo se convierte en el principal proceso del beneficio pues
los cambios que se originan son Fundamentales para que aparezcan los
agentes precursores del aroma y sabor típicos del cacao de calidad.
Los granos extraídos de la mazorca deben depositarse en cajones de madera,
con orificios en el fondo y los lados para la salida de la "baba" o líquidos que se
des- prenden del mucílago. Estos cajones deben colocarse unos 10 o 15
centímetros por encima del suelo para el fácil drenaje de estos líquidos.

Los cajones deben estar colocados en sitios cubiertos para que la temperatura
sea constante y la fermentación sea completa y pareja. El tamaño y número de
los cajones varía de acuerdo con la cosecha de la finca.

En términos generales, estos cajones pueden tener estas dimensiones y

capacidad (ver cuadro).

KILOS
METROS METROS METROS
LARGO ANCHO ALTO

1. 0.40 0.60 378 14 1

0
0

1. 0.80 0.60 648 246

5
0

2. 0.80 0.60 756 288

0
0
Además de los ya mencionados cajones fermentadores, también se utilizan
cajones en escalera, barriles fermentadores o camillas. En algunas regiones se
usan pozuelos o canoas y hasta canastos. En cualquier caso, es importante
que los recipientes fermentadores tengan orificios para la salida de los jugos.
Es necesario voltear la masa de cacao a partir de las primeras 36 horas y
después cada 24 horas para airearla y lograr una fermentación uniforme,
mediante la distribución pareja de la temperatura la cual debe permanecer por
lo menos 3 días a 50°C, para lo cual la masa de granos debe taparse con
costales, hojas o Fibras vegetales y estar en un cuarto o lugar abrigado.

Fermentación Cajones tipo escalera o

Fermentación en cajón doble

Fermentador tipo barril Barril fermentador y

secador tipo Elba
El tiempo de fermentación debe durar entre 5 a 6 días (120 a 144 horas).
Nunca se deben mezclar en el fermentador granos cosechados en diferentes
días, por esto es importante organizar la recolección de mazorcas para obtener
los volúmenes requeridos. La mezcla no permite uniformidad en los niveles de
fermentación.
DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO POR EL MÉTODO KJELDAH

El método Kjeldahl se utiliza para la determinación del contenido de nitrógeno

en muestras orgánicas e inorgánicas. Desde hace más de 100 años se está
utilizando el método Kjeldahl para la determinación del nitrógeno en una amplia
gama de muestras. La determinación del nitrógeno Kjeldahl se realiza en
alimentos y bebidas, carne, piensos, cereales y forrajes para el cálculo del
contenido en proteína. También se utiliza el método Kjeldahl para la
determinación de nitrógeno en aguas residuales, suelos y otras muestras.
El método Kjeldahl consta de tres etapas:

DIGESTIÓN

El objetivo del procedimiento de digestión es romper todos los enlaces de

nitrógeno de la muestra y convertir todo el nitrógeno unido orgánicamente en
iones amonio (NH4+). El carbono orgánico y el hidrógeno forman dióxido de
carbono y agua. En este proceso la materia orgánica se carboniza dando lugar
a la formación de una espuma negra. Durante la digestión, la espuma se
descompone y finalmente se convierte en un líquido claro que indica que la
reacción química ha terminado. Para ello, la muestra se mezcla con ácido
sulfúrico a temperaturas entre 350 y 380 ºC. Cuánto más alta sea la
temperatura, más rápido será el proceso de digestión. La digestión también se
puede acelerar con la adición de sales y catalizadores. Se añade sulfato de
potasio para aumentar el punto de ebullición del ácido sulfúrico y se añaden
catalizadores para aumentar la velocidad y la eficiencia del procedimiento de
digestión. También se pueden añadir agentes oxidantes para mejorar aún más
la velocidad.
Una vez la digestión ha finalizado, se deja enfriar la muestra a temperatura
ambiente, se diluye con agua y se trasvasa a la unidad de destilación.

DESTILACIÓN:

Durante el proceso de destilación los iones amonio (NH4+) se convierten en

amoniaco (NH3) mediante la adición de un álcali (NaOH). El amoniaco (NH3)
es arrastrado al vaso receptor por medio de una corriente de vapor de agua.

El vaso receptor para el destilado se llena con una solución absorbente para
capturar el gas amoniaco disuelto.
• La solución absorbente más común es el ácido bórico [B(OH)3] en solución
acuosa al 2-4%. El amoniaco es capturado cuantitativamente por la solución
de ácido bórico formando iones amonio solventados.

• También pueden utilizarse otros ácidos, dosificados con precisión, como el

ácido sulfúrico o clorhídrico para capturar el amoniaco en forma de iones
amonio solventados.

VALORACION:

La concentración de los iones amonio capturado puede determinarse por medio

de dos tipos de valoración:
• Cuando se utiliza el ácido bórico como solución absorbente, posteriormente
se lleva a cabo una valoración ácido-base utilizando una solución
estandarizada de ácido sulfúrico o clorhídrico y una mezcla de indicadores. El
rango de concentración de la solución utilizada varía entre 0,01N a 0,5N
dependiendo de la cantidad de iones amonio presentes. El punto final de la
valoración también se puede determinar potenciométricamente con un
electrodo de pH. Esta valoración se llama valoración directa.
• Cuando se utiliza una solución valorada de ácido sulfúrico como solución
absorbente, el ácido sulfúrico residual (es decir, el exceso que no reacciona
con NH3) se valora con una solución estandarizada de hidróxido sódico y
la cantidad de amoniaco se calcula por diferencia. Esta valoración se llama
valoración indirecta o por retroceso.

CALCULOS

Los cálculos para él % de nitrógeno o de proteína deben tener en cuenta qué

tipo de solución receptora se utilizó y qué factores de dilución se usaron
durante el proceso de destilación. En las fórmulas siguientes, “N” representa la
normalidad. “ml blanco” se refiere a los mililitros de álcali consumidos en la
valoración por retroceso de un blanco, si la solución receptora es ácido
clorhídrico o ácido sulfúrico estandarizados, o se refiere a mililitros de solución
valorada de ácido para titular un blanco si la solución receptora es ácido bórico.
• Cuando se utiliza ácido bórico como solución receptora, la fórmula es:

• Cuando se utiliza solución valorada de ácido como solución receptora, la

fórmula es:

Si se desea determinar el % de proteína en lugar de nitrógeno, el % de N

calculado se multiplica por un factor que depende de la matriz de la muestra.
Se han desarrollado muchos factores de proteínas para usar con varios tipos
de muestras. A continuación, se encuentra el factor a utilizar según el tipo de
alimento.
4.1.1 Etiquetas
4.1.2 Sellos
4.1.3 Formato de Cadena de Custodia

Para XocoTech S.A.S es importante asegurar la calidad desde el momento de

la toma hasta el envío del informe final. XocoTech S.A.S, a partir de su Sistema
de gestión integral, incorpora en los procedimientos de toma de muestras un
formato de cadena de custodia el cual garantizara información a cerca del
control de la trayectoria de la muestra en cada una de sus etapas.
4.1.4 Acta de inicio
4.1.5 Informe de resultados
 CONCLUSIONES

Deben ser redactadas respondiendo al marco lógico así:

1. ¿Qué se Hizo?
2. ¿Qué resultados arrojó?
3. Con base en dichos resultados ¿Qué puedo Determinar? (Análisis).
 RECOMENDACIONES

Son sugerencias, proyecciones o alternativas que se presentan para modificar,

cambiar o incidir sobre una situación específica o una problemática encontrada.
 BIBLIOGRAFÍA

M. F. Moura; M. C. Picanço; R. N. Conventional sampling plan for the Journal of

C. Guedes; E. C. Barros; M. green leafhopper Empoasca kraemeri Applied
Chediak; E. G. F. Morais in common beans Entomology
DOI: 10.1111/j.1439- volume 131,
0418.2006.01113.x issue 3
(2007)

Romy Hertz- Looking into individual coffee beans during the roasting Analytical
Schünemann, process: direct micro-probe sampling on-line photo- and
Thorsten ionisation mass spectrometric analysis of coffee roasting Bioanalytica
Streibel… gases l Chemistry
DOI: 10.1007/s00216-013-7006-y volume 405,
issue 22
(2013)

Collins-Thompson, Sampling Plans and Guidelines for Canadian Institute

D.L.; Weiss, K.F.; Domestic and Imported Cocoa from a of Food Science and
Riedel, G.W.; Canadian National Microbiological Technology Journal
Charbonneau, S. Survey
volume 11, issue 4
DOI: 10.1016/S0315-5463(78)73267-0 (1978)

Norgrove, Neither dark nor light but shades in-between: cocoa Global Change
Lindsey merits a finer sampling Biology
DOI: 10.1111/gcb.14012 volume 24, issue 2
(2018)

Bekele, Frances; A Sampling of the Phenetic Diversity of Cacao in the Crop Science
Bekele, Isaac International Cocoa Gene Bank of Trinidad
volume 36,
DOI: 10.2135/cropsci1996.0011183X003600010010x issue 1 (1996)

Barbara Zippel; Helgard Sampling Method for the Determination of CLEAN –

Tittel; Wolf von Total Inorganic Carbon (TIC) in Strongly Acidic Soil, Air,
 Tümpling jr. Waters Water
DOI: 10.1002/1521- volume 29,
401x(200112)29:5<309::aid-aheh309>3.0.co;2- issue 5
j (2001)

Barbara Zippel; Helgard Sampling Method for the Determination of CLEAN –

Tittel; Wolf von Total Inorganic Carbon (TIC) in Strongly Acidic Soil, Air,
Tümpling jr. Waters Water
DOI: 10.1002/1521- volume 29,
401x(200112)29:5<309::aid-aheh309>3.0.co;2- issue 5
j (2001)

P.R. Pehrsson; D.B. Haytowitz; USDA's National Food and Journal of Food
J.M. Holden; C.R. Perry; D.G. Nutrient Analysis Program: Food Composition and
Beckler Sampling Analysis
DOI: 10.1006/jfca.1999.0867 volume 13, issue 4
(2000)

L.F. Russell; Larry W. Preparation of sampling plans for Journal of Food

Douglass; Joseph T. B2 vitamers in fast food hamburgers Composition and
Vanderslice Analysis
DOI: 10.1016/0889-1575(92)90041-
h volume 5, issue 3
(1992)

Roberts, Diane; Practical Food Microbiology || Indications for Sampling and

Greenwood, Melody Interpretation of Results
DOI: 10.1002/9780470757512.ch1

Huma, Zill-E.; Jayasena, Vijay; Process optimization of polyphenol Journal of

Nasar-Abbas, Syed M.; Imran, extraction from carob ( Ceratonia Food
Muhammad; Khan, Muhammad siliqua ) kibbles using microwave- Processing
Kamran assisted technique and
Preservation
DOI: 10.1111/jfpp.13450
(2017)
Rodríguez Chanfrau, Jorge Enrique, & López Armas, Marilyn. (2014). Ultrasound assisted extraction of
polyphenols from Punica granatum (Grenada) fruit. Revista Cubana de Farmacia, 48(3), 469-476.
Recuperado en 12 de mayo de 2019, de http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-
75152014000300012&lng=es&tlng=en.

Cheynier, Recent advances in polyphenol research. Volume 6 Wiley- 201

Véronique; 9781119427933, 9781119427896, 1119427894, 9781119427940, 1119427940 Blackwe 9
Halbwirth, Heidi; ll
Quideau, Stéphane;
Stich, Karl
Extraído de https://www.fertilab.com.mx/Sitio/Vista/la-importancia-de-un-
muestreo-adecuado.php, - Esta información es propiedad intelectual de
Fertilidad de Suelos S. de R.L, FERTILAB se reserva el derecho de su
publicación y reproducción, Total o Parcial

Extraído de
https://www.itwreagents.com/download_file/brochures/A173/es/A173_es.pdf -
Esta información es propiedad intelectual de Pan Reac AppliChem itwreagents
se reserva el derecho de su publicación y reproducción, Total o Parcial
 CIBERGRAFÍA

Leer Norma NTC 4490:1998

 ANEXOS

Anexo A. _(Nombre del Anexo)_

Anexo B. _(Nombre del Anexo)_

Se enumeran de acuerdo al número total de anexos en el documento así: por

Letras si existen entre 1 a 26 anexos en total así: A, B, C, etc., en su defecto
superan el rango anterior, se acaban las letras se deben numerar por números
arábigos 1, 2, 3, 4 etc.